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"胰岛代理细胞"的构建:在HepG2细胞中获得胰岛素分泌
目的:利用转基因技术将HepG2细胞改建为具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞".方法:以携葡萄糖激酶(glucokinase,gk)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体(mutant proinsulin gene,mpin)的逆转录病毒共同感染肝母细胞瘤细胞系HepG2,G418选择培养基挑选抗性细胞集落,放免法、SDSPAGE、Western-blot及反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定HepG2细胞中两个目的基因的转录及表达;选取联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞进行葡萄糖反应性胰岛素分泌的检测,以单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞作对照.结果:在G418选择培养基中3 wk获阳性细胞克隆,采用放免法、SDS-PAGE、Western-blot从20个细胞克隆中挑选出联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞4株,其中1株2个目的基因表达均较强,命名为细胞克隆"β";经RT-PCR检测证实细胞"β"中已有两个目的基因的转录.在细胞"β"中,葡萄糖浓度为0.5 mmol/L和0.75 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P>0.05);葡萄糖浓度为2.0 mmol/L,3.0 mmol/L,4.0 mmol/L,5.0 mmol/L,及6.0 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P>0.05);其余葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌差异均有显著性意义(P<0.05).在单独表达胰岛素的HepG2细胞中,各葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌均无显著性差异(P>0.05).说明在细胞"β"中获得了葡萄糖反应性胰岛素分泌,葡萄糖浓度约1.75-2 mmol/L时出现胰岛素分泌高峰.结论:成功构建了具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"系.
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急性髓细胞白血病CD7、CD34、CD56、P170的表达对完全缓解率的影响
已有文献报道CD7、CD34、CD56、P170各自的表达与预后有关[1-5]。但此四种单抗联合表达对预后的影响报道较少。现将我院1995~1999年检测的213例初诊急性髓系白血病(AML)以上4种分化抗原的单表达和联合表达对完全缓解(CR)率的影响分析如下。
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乙酰肝素酶、MMP-9在胰腺癌中的联合表达及临床意义
胰腺癌恶性度高、病情隐匿及预后差,是危害人类健康为严重的恶性肿瘤[1].基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase9,MMP-9)是一类与肿瘤发生、侵袭和转移密切相关的蛋白水解酶.研究表明MMP-9在多种肿瘤组织中的表达增加[2].笔者采用免疫组织化学方法检测胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中的HPA和MMP-9的联合表达,以探讨二者在胰腺癌中的表达特点、相互关系及其临床意义.
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FasL在肝门部胆管癌免疫逃逸机制中作用的研究
FasL能触发表达细胞表面受体(Apo-1/CD95)的致敏淋巴细胞的凋亡[1].FasL介导的凋亡在耐受识别、T细胞活化诱导的细胞死亡及免疫反应终止等免疫系统的调节方面发挥重要的作用.而在眼和睾丸固有细胞中FasL的表达通过诱导浸润的前炎性免疫细胞的凋亡而介导了它们的免疫赦免.已证实在组织移植实验中FasL也可介导免疫赦免.在啮齿类动物实验中,表达FasL组织的同种移植及非免疫特赦细胞(胰岛细胞)联合表达FasL细胞共同进行的同种移植均获得成功的存活.稳定转染FasL基因的鼠肿瘤细胞的同种移植显示,FasL能导致局部的同种移植特异性的体液及细胞免疫反应的抑制.
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甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及病变中钠碘转运体mRNA和甲状腺过氧化物酶 mRNA的表达
甲状腺滤泡细胞的主要功能是合成、分泌甲状腺激素. 1996年"碘泵"-钠碘转运体(sodium/iodide symporter ,NIS)的确认,使得从甲状腺激素合成通路中寻找肿瘤标志物成为研究的热点.NIS和甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase,TPO)是甲状腺激素合成通路中的重要物质,在甲状腺疾病的联合表达尚不清楚,国内的相关报道较少见.本实验应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测NIS mRNA和TPO mRNA在滤泡源性甲状腺肿瘤及病变的表达.
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缺氧诱发因子1-α和血管内皮生长因子在Wilms'瘤中的联合表达/人前列腺癌细胞缺乏低密度脂蛋白受体及其调节剂SREBR2的反馈调节/聚乙二醇-水蛭素治疗慢性肾衰病人的药效学和药物动力学
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细胞免疫表型检测在急性白血病分型诊断中的应用价值
目的:探讨细胞免疫表型检测在急性白血病(AL)免疫分型和亚型诊断中的应用价值.方法:选择临床常用的12种单抗,应用流式细胞术(FCM)对形态学分型初诊的56例急性髓细胞白血病(AML)和28例急性淋巴细胞白血病(ALL)进行免疫表型检测与分析.结果:(1)有54例AML与免疫表型检测结果相符(符合率为96.4%),且各型均表达3种及以上髓系抗原,约90%以上AML不表达淋系抗原.(2)在2例与免疫表型检测结果不符的AML中,1例以巨核细胞抗原特异表达为主,被纠正为M7;另1例因同时表达2种髓系和淋系抗原而确诊为急性混合性白血病(HAL).(3)经免疫表型检测能将28例ALL精确区分为T-ALL、B-ALL和T/B-ALL 3型,除后者外,B系抗原与T系抗原均不互相表达,具有较强系列专一性表达特点;T/B-ALL同时表达T系与B系抗原.结论:细胞免疫表型检测能为AL分型和亚型诊断提供客观而精确的依据,弥补并纠正形态学分型的不足与误诊,并在AML与ALL鉴别、ALL亚型区分和发现HAL、M7等方面具有较高的特异性和独特的临床应用价值.
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结肠癌p21、nm23基因表达联合检测的意义
目的研究ras癌基因产物p21和nm23转移抑制基因与结肠癌临床病理因素及预后的关系.方法免疫组织化学[sp]法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法).结果(1)p21阳性表达率为50.50%.与病理分期,组织分化、淋巴结转移,肿瘤大小及侵犯深度无相关性.(2)nm23阳性表达率为75.25%,与病理分期,组织分化、淋巴结转移,肿瘤大小及侵犯深度无显著相关性.(3)p21阴性表达病例三年、五年生存率为72.00%、62.00%;p21阳性表达病例三年、五年生存率为54.00%、32.00%,其差异具有显著性(P<0.05).nm23阳性表达病例三年、五年生存率为72.37%、50.00%;nm23阴性表达病例三年、五年生存率为44.00%、28.00%,其差异具有显著性(P<0.05).p21阴性nm23阳性表达病例三年、五年生存率为82.05%、69.23%;p21阳性nm23阴性表达病例三年、五年生存率为20.00%、13.33%,其差异具有极显著性(P<0.01).结论(1)p21和nm23在结肠癌中表达,与结肠癌发生发展有关.(2)p21阴性表达病例、nm23阳性表达病例预后好,可作为预后判定指标.p21和nm23联合表达判断结肠癌预后意义更大.
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甲状腺转录因子在甲状腺器官生发中的作用
近年来甲状腺疾病的发生率逐年升高,甲状腺全切除或次全切除术易导致甲状腺功能减退;而非手术治疗方案中,利用放射性核素碘131治疗临床甲亢的大隐患是出现甲状腺功能减低症。不可逆性甲状腺功能减低的主要治疗方法是服用甲状腺素替代治疗,但部分患者存在依从性差、难以接受终身服用甲状腺素等问题。干细胞源性甲状腺细胞治疗甲状腺功能减退是新的研究方向,但诱导干细胞分化为甲状腺细胞的方法有待探讨。研究表明,甲状腺的发育受多种因素的影响,其中甲状腺转录因子的有序、联合表达在控制和维持甲状腺表型中至关重要。因此,通过控制甲状腺转录因子的表达诱导干细胞分化成甲状腺细胞是值得研究的方法。甲状腺转录因子从分子水平阐明甲状腺发生过程,是选取诱导分化因子的基础。现就甲状腺转录因子在甲状腺生发中的作用进行综述。
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猪带绦虫TSO45W-4BX与猪CD58分子在大肠埃希菌中的联合表达
目的 以猪CD58为分子佐剂,将CD58基因与猪带绦虫疫苗候选抗原基因TSO45W-4BX联合表达,寻找新型抗猪囊尾蚴疫苗.方法 分别以重组质粒pGEM-4B和pGEM-CD58为模板,PCR扩增猪带绦虫TSO45W-4BX基因和猪CD58基因,将TSO45W-4BX与酶切处理的pGEX-4T-1定向连接,转化大肠埃希菌JM109,重组质粒经鉴定正确后,在其下游酶切插入CD58基因,PCR扩增和测序证明阅读框正确后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE))和蛋白质印迹法(Western blotting)分析表达产物的免疫活性.结果 pGEX-4BX和pGEX-4BX/CD58分别表达Mr 41 000和Mr 69 000的融合蛋白,pGEX-4BX表达产物主要以可溶性形式存在,而pGEX-4BX/CD58却以包涵体形式存在,但两者都能被囊尾蚴病患者血清识别.结论 TSO45W-4BX与CD58基因联合表达,TSO45W-4BX仍具有免疫活性.
关键词: 猪带绦虫 TSO45W-4BX CD58 联合表达 -
bcl-2、p16和nm23基因在肺癌中的表达及其临床意义
目的研究bcl-2、p16和nm23基因在肺癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法检测bcl-2、p16和nm23基因在82例肺癌组织中的表达并结合肺癌的临床病理学特征及预后情况进行分析。结果肺癌中存在bcl-2基因超量表达和p16基因表达下调,bcl-2基因表达与肺癌的TNM分期有关,p16基因表达与肺癌的分化程度、TNM分期及预后有关,nm23基因表达与肺癌的转移和预后有关,bcl-2与p16基因、p16与nm23基因在肺癌中常联合表达。结论①bcl-2基因超量表达与p16基因表达下调在肺癌的发生、发展中起重要作用。②p16和nm23基因表达可作为判断肺癌预后的较强因子。③nm23基因表达水平是预测肺癌转移潜力的可靠指标。④多基因联合检测对判断肺癌的生物学行为和预后更有意义。主题词肺肿瘤;基因,bcl-2;免疫组织化学自由词 p16基因;nm23基因中图分类号 R734.2;R394.2
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大肠杆菌O157噬菌体中vt2基因A、B亚单位的克隆与序列分析
1982年美国亚特兰大疾病控制与预防中心首次报道了由一种罕见的大肠杆菌血清型即O157:H7引起的出血性肠炎,此后的20多年中由O157所致的疾病在全世界范围内都有散发和暴发,尤其以1996年在日本的暴发流行为大家熟知,我国也有从患者、畜禽及肉制品中分离到该菌的报道.已知Vero毒素(Verotoxin,VTs)为该菌的主要毒力因子之一,包括两类生物学特性相似而理化特性及免疫学特性有很大差异的VT1和VT2.流行病调查结果显示,绝大多数临床分离的高毒力O157:H7菌株都单独或联合表达VT2毒素,因此对大肠杆菌O157的vt2毒力基因的研究是尤为重要.据报道编码VT2毒素的基因可能位于温和噬菌体上(编码VT的噬菌体称为VT噬菌体),这些噬菌体具有毒力传递能力,感染宿主菌后能将噬菌体基因整合到细菌染色体上,使宿主菌获得产生相应毒素的能力.国外已有不少有关携带毒力基因噬菌体的研究,但目前国内对大肠杆菌O157的vt研究均集中在检测为主,而未涉及VT噬菌体.因此本文开展了大肠杆菌O157菌株诱导释放的噬菌体中vt基因的研究.
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猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因和流感病毒HA基因的联合表达及应用
参照已公布的流感病毒血凝素基因(HA基因)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列,设计并合成一对引物P1、P2,以RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF7片段(约410bp),其中含HA基因主要核苷酸序列(33bp).用BamH I、Xho I分别对扩增出的片段及pET32a质粒进行酶切,连接后构建了重组质粒pETHN并转化到BL21(DE3)宿主菌中诱导表达.用纯化后的表达产物与流感病毒血凝素单抗及乳胶建立了诊断猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的乳胶凝集试验.检测结果显示:该方法有良好的特异性及敏感性,与IDEXX公司ELISA检测试剂盒符合率达93.8%.
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细粒棘球蚴AgB亚单位基因的联合表达和血清学评价
目的 为进一步提高AgB抗原在诊断中的敏感性和特异性,将细粒棘球蚴AgB1和AgB2两个亚单位基因在同一载体中进行联合表达,并对联合表达的重组抗原和单基因表达的AgB1、AgB2在血清抗体检测中的差异进行比较研究.方法 在表达载体PET32a中构建AgB1+AgB2(AgBs)联合基因的重组质粒,用ELISA检测重组抗原与病人血清的反应性.结果 构建了AgBs重组质粒,经测序证实插入的联合基因片段序列正确.AgBs重组质粒表达的融合蛋白分子量为38 kDa,为不溶性蛋白.联合表达抗原AgBs对细粒棘球蚴病(CE)血清的敏感性为84.4%,特异性为80.5%;单基因表达的AgB1和AgB2的敏感性分别为75.6%和57.8%,特异性分别为72.6%和91.2%.结论 成功构建了AgB亚单位联合表达基因,联合表达的AgBs抗原对CE血清的诊断价值优于单基冈表达的AgB1或AgB2抗原.