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G145R突变后乙型肝炎病毒表面抗原在酵母系统的表达及其免疫学特性分析
为了研究乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原(HBsAg)发生G145R突变后的免疫学特性改变情况,首先利用Pichiapastoris酵母表达系统分泌表达G145R突变后的HBsAg的preS2+S(中蛋白),用重组表达产物免疫小鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot实验等研究其抗原性和免疫原性与野毒型HBsAg的异同.从150个阳性表达克隆中筛选出一株表达量高的克隆株MC23,Western blot检测显示,表达的HBsAg中蛋白单体主带分子量在34kD、37kD左右,表达量约为200μg/L.用不同的HBsAg检测试剂检测其抗原性发现,G145R突变后的HBsAg,用绝大多数试剂都不能很好地检出,检出能力只有野毒型HBsAg的50%或更低,但用美国雅培公司的试剂检出能力可达野毒的98%.G145R突变后的HBsAg中蛋白免疫小鼠后,血清中可检测到1:1 600的特异性表面抗体,该抗体与G145R突变后的HBsAg"a"决定簇合成肽P2-145R也能发生交叉反应,反应滴度为1:80.但该抗体和野毒型HBsAg蛋白以及野毒"a"决定簇合成肽P1-wt均不反应.上述结果表明,G145R突变后的HBsAg中蛋白在Pichia pastoris酵母系统得到了分泌表达,表达产物仍具有较好的免疫原性,但和野毒HBsAg相比,其抗原性和免疫原性发生了明显改变.
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新生兔骨髓基质细胞向成骨样细胞诱导分化
新研究表明骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)不仅是具有多向分化能和旺盛增殖活力的细胞,还具有特殊的免疫学特性,表达对异体宿主低免疫原性和免疫抑制作用[1].本实验分离培养的新生兔骨髓基质细胞,经成骨诱导可以为成年兔骨修复提供充足的骨组织工程种子细胞.
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猫过敏原Fel d1基因的克隆、表达及特性鉴定
猫过敏原是引起过敏性疾病(如哮喘、过敏性鼻炎)的常见吸入性过敏原之一,Fel d1是猫的主要过敏原之一.为此,我们对Fel d1Ⅰ链和Ⅱ链进行克隆,构建Fel d1Ⅱ链+Ⅰ链pET表达载体,表达重组蛋白并分析其免疫学特性.
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幽门螺杆菌空泡毒素基因克隆、表达及其重组蛋白免疫学特性的鉴定
已发现幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)疫苗具有预防和治疗Hp感染的效果[1].大多数Hp菌株均能产生空泡毒素(vacuolating cytotoxin, vacA),其前体蛋白在分泌过程中只有相对分子质量(Mr)约87×103的VacA被转运到细胞外,Mr为4×103氨基末端信号肽和50×103羧基末端多肽分别留于细菌内、外膜中[2].Hp感染者血清中可出现VacA抗体,重组VacA在Hp SS1株小鼠感染模型中有80%的保护率[3].我们构建了vacA原核表达系统,所表达的重组VacA可作为Hp基因工程疫苗的候选抗原.
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G145R突变后HBsAg"a"决定簇合成肽的免疫学特性分析
目的研究G145R突变后乙肝表面抗原(HBsAg)"a"决定簇合成肽的免疫学特性改变情况. 方法首先合成2条短肽P1-wt和P2-145R,分别代表野毒株和G145R突变后HBsAg"a"决定簇合成肽.然后用β-巯基乙醇(2-ME)变性试验以及用乙肝疫苗标准品制备的小鼠多抗血清研究2条合成肽的空间构象以及抗原性异同.后用等量合成肽免疫小鼠,用酶免疫法、竞争抑制试验和Western blot试验等研究G145R突变后"a"决定簇合成肽的免疫原性改变.结果合成肽P1-wt和P2-145R用2-ME温和变性后,PAGE结果表现为相对分子质量(Mr)为4×103左右的单一条带,而变性前2条合成肽均表现为Mr是从4×103到30×103的弥漫条带,主带位置在5×103和10×103,分别相当于二聚体和四聚体位置;用HBsAg的多克隆抗体(anti-HBs)检测合成肽的抗原性,结果在固定抗原量的前提下,在抗体1∶32 000稀释时仍可检测到P1-wt的阳性结果,而当同一抗体稀释到1∶8000时,P2-145R检测结果即为阴性.合成肽P2-145R免疫小鼠产生的抗体与P1-wt合成肽的反应滴度比与P2-145R合成肽本身的反应低4~8倍. 结论针对HBsAg"a"决定簇合成肽可自发形成一定的空间构象,G145R突变株的HBsAg"a"决定簇的抗原性和免疫原性与野毒株相比发生了明显改变,为正确评价G145R变异株的流行危害以及现行疫苗的保护效果提供了实验依据.
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HCV CE2融合蛋白在家蚕杆状病毒表达系统中的表达
HCV的E2蛋白能刺激机体产生具有中和活性的抗体,其C蛋白序列在不同的型和株间具有高度保守性,是细胞免疫的主要识别位点.本研究利用家蚕杆状病毒为载体,在家蚕培养细胞和幼虫中高效表达了具有生物活性的HCVCE2融合蛋白,为今后该蛋白免疫学特性及疫苗的研究、临床诊断试剂的开发提供了参考资料.
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沙眼衣原体pORF5质粒蛋白单克隆抗体2H4的纯化及其免疫学特性研究
目的 纯化抗沙眼衣原体pORF5单克隆抗体2H4并鉴定其免疫学特性.方法 大量培养pORF5单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株并收集培养上清,采用G蛋白免疫亲和层析法纯化2H4单克隆抗体;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定2H4效价及抗体亚类;Western blot鉴定其特异性;免疫荧光试验(IFA)检测2H4单克隆抗体的衣原体种属特异性.结果 纯化后2H4抗体的纯度高达93%;效价为1:1024,免疫球蛋白类型为IgG2a;2H4抗体不仅能特异性识别pORF5融合蛋白,而且能特异性识别Ct血清型A、D、L2、鼠农原体(MoPn)、鹦鹉热嗜农原体(6BC)质粒所编码的内源性pORF5蛋白,但不识别衣原体其他质粒蛋白和肺炎嗜衣原体(Cpn).结论 获得了高纯度的能特异识别pORF5质粒蛋白的单克隆抗体,为进一步研究pORF5蛋白结构和功能以及沙眼衣原体诊断试剂盒的研制奠定了良好的基础.
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脐血干细胞生物学特性及在脊髓损伤修复中的应用
自从1974 年Kandtzon 等发现人脐血中存在造血干细胞后,国内外学者对脐血干细胞的生物学、免疫学特性及临床应用进行了广泛的研究,证明脐血可以作为一种新的干细胞来源治疗恶性血液病、退行性疾病及修复神经损伤等.目前,人脐血干细胞移植治疗脊髓损伤是脊髓修复领域的研究热点,在动物实验中已取得满意效果,并有初步的临床研究.本文就近几年脐血干细胞的生物学特性及其在脊髓损伤修复中的应用进展做一综述.
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间充质干细胞的免疫学特性与系统性红斑狼疮的治疗
系统性红斑狼疮(SLE)是一种以多器官或多系统病变和血清中出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病.SLE传统的治疗方案,如糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗,虽能有效提高SLE患者的长期存活率,但部分患者仍然复发,部分患者治疗无效,这类SLE被称为难治性SLE,而糖皮质激素及免疫抑制药物不良反应大,骨髓抑制和感染的发生率高.SLE目前尚无特效的治疗方法,近10年来大量实验与临床证据显示干细胞包括间充质干细胞(MSC)、[脐带血MSC(UC-MSC)或其他来源的MSC]具有显著的组织与细胞修复、抗纤维化、免疫抑制与免疫调节功能.MSC在治疗SLE上取得了一定的疗效,而理论上MSC的生物学作用可用于治疗SLE.
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软叶针葵花粉肌动蛋白抑制蛋白基因的克隆表达与纯化及免疫学鉴定
花粉是主要的吸人性过敏原之一.软叶针葵是一种热带、亚热带常见植物,在授粉季节所产花粉量较大,具很大的过敏潜能.但目前国内外尚鲜见软叶针葵花粉过敏原研究的报道.本研究用简并性引物从软叶针葵花粉中获得1个肌动蛋白抑制蛋白(profilin)基因,并在大肠杆菌中进行表达,获得有活性的重组profilin,同时研究其免疫学特性,并为软叶针葵花粉过敏诊断及免疫学治疗奠定基础.
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幽门螺杆菌HspA与大肠杆菌LTB基因融合及表达
目的:构建和表达人幽门螺杆菌(Hpylori)热休克蛋白A亚单位(HspA)与E. coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的重组融合蛋白,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究.方法:采用PCR技术从人H pylori染色体DNA中扩增出354 bp的HspA基因,并克隆至pPLtB载体中与1tB基因融合,形成含有1tB-H spA融合基因的原核表达载体pPLH,并在工程菌E.coli JM109中诱导表达.结果:经序列分析,1tB-HspA融合基因由684个碱基组成,为编码228个氨基酸残基的多肽.SDS-PAGE和Westernblotting检测发现,融合蛋白的Mr 25×103,并与Hpylori感染的阳性血清发生抗原抗体反应,ELISA检测显示融合蛋白中存在LTB组分,并保持与LT受体-神经节苷脂GM1结合的活性.结论:LTB-HspA融合蛋白有可能用于Hpylori基因工程疫苗的研究.
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表达Ag85B-ESAT6的重组卡介苗在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力
超表达分泌蛋白Ag85B的重组卡介苗免疫豚鼠获得的保护效力超过卡介苗[1],这为研究新型结核病疫苗提供了思路.为了全面评估我们构建的融合表达Ag85B与ESAT6的重组卡介苗免疫学特性,我们进一步研究了该菌株在小鼠体内诱发的免疫应答水平及其对结核分枝杆菌毒株感染的保护力.
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结核中心结核分支杆菌Ag85A蛋白的克隆、表达及其血清学诊断价值的研究
10多年来国内、外学者一直从结核分支杆菌培养滤液中提纯蛋白质抗原进行多方面的研究,由于该方法制备蛋白抗原较烦琐、费时,因此,近年来许多研究者应用大肠杆菌来表达结核分支杆菌基因,简便地获得了大量结核分支杆菌单一的蛋白抗原.Ag85复合物是结核分支杆菌主要的分泌性蛋白,在结核分支杆菌H37Rv株中占分泌蛋白总量的30%,可从早期培养物中分离,是一种热不稳定的蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦分析可分为Ag85A、Ag85B和Ag85C三个组分[1].因此本研究通过基因工程技术构建结核分支杆菌Ag85A表达株,获得重组Ag85A(rAg85A)蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,为研制更有效的结核病免疫诊断试剂和新型的结核病疫苗奠定了基础.
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遗传性凝血因子Ⅴ缺乏症家系的临床研究
凝血因子V(FV)是凝血酶原活化所必需的凝血因子之一[1].我们在先天性出血性疾病的筛查中发现了一例重度FV缺乏症患者,为明确诊断并了解其家系遗传模式,对该家系成员FV生物学活性及免疫学特性进行了研究.
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间充质干细胞的表型、免疫学特性及归巢潜能
间充质干细胞是非造血系的多能干细胞,能从许多组织如脐带血、肝、脾、骨髓、脂肪组织、羊水、骨膜和胚胎等分离得到,在一定条件诱导下可分化为骨、软骨、肌肉、韧带、腱、肝、神经、血管内皮和脂肪等组织的细胞,能够表达多种表型包括黏附分子和趋化因子受体等,同时具有免疫耐受性,因此具有定向迁移运输到靶组织的潜能和免疫抑制特性,在心血管、神经、血液、外科损伤等多项领域的疾病中具有广泛应用前景,为组织修复工程和基因治疗开辟了新的途径.本文就间充质干细胞的表型、免疫学特性、归巢潜能等作简要的综述.
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间充质干细胞的免疫学特性研究及临床应用进展
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类具有高度自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,其本身具有低免疫原性和免疫调节功能.正是由于间充质干细胞所具备的这些免疫学特性,使其在免疫抑制、受损组织的修复重建、肿瘤治疗等临床应用方面具有广阔的潜能.本文就MSCs的免疫学特性及在临床应用方面的研究进展做一综述.
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强直性脊柱炎患者骨髓间充质干细胞的生物学及免疫学特性
目的:探讨强直性脊柱炎(AS)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)的生物学及免疫学特性,为进一步阐明AS的发病机制和寻找新的治疗靶点提供理论依据.方法:选取37例活动期AS患者(AS组),男34例,女3例,平均年龄(24.3±5.4)岁,HLA-B27均为阳性;49例健康志愿者作为对照组(HD组),男43例,女6例,平均年龄(25.7±4.9)岁;其中HLA-B27阴性44例(HD1组),HLA-B27阳性5例(HD2组).从每例受检者髂后上棘穿刺采集骨髓组织,分离BMSCs,培养扩增至第3代,以l×l04/ml的浓度接种于96孔板中,100μ,l/孔,从第1天开始每日取3 孔进行细胞计数,共计12d,绘制生长曲线;每日取3孔经MTT处理后测定吸光度值,绘制细胞活力曲线,观察BMSCs的生物学特性.使用流式细胞仪检测各受检者BMSCs的细胞表面表型.将第3代BMSCs细胞接种于U形底96孔板,培养4h后使用60Co照射30Gy;取健康志愿者外周血采用密度梯度法分离单个核细胞(PBMCs),加入细胞培养液,计数后按BMSCs:PBMCs 1∶20、1∶10、1∶5、1∶2、1∶1的比例接种于已接种BMSCs的96孔板,共培养5d,观察双向混合淋巴细胞反应情况;同样获取PBMCs,计数后同样以5个比例接种于96孔板,加入植物血凝素(PHA)4μg/m1,充分接触后共培养5d,观察淋巴细胞增殖反应情况.对组间进行统计学比较.结果:AS组、HD1和HD2组第3代BMSCs体外培养1~12d时的增殖能力、细胞活力无显著性差异(P>0.05);三组细胞表面表型均为高水平表达CD105、CD73和CD90,不表达CD45、CD34、CD14和HLA-DR.HD1组和HD2组BMSCs与不同比例PBMCs共培养的双向混合淋巴细胞反应和PHA刺激的淋巴细胞增殖反应均无显著性差异(P>0.05);AS组与HD组比较有显著性差异(P<0.05).结论:AS患者BMSCs的生物学特性无明显改变,但其免疫调节功能明显下降,其可能在AS的发病机制中扮演重要角色.
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CD4+CD25+调节性T细胞与妊娠关系的研究进展
妊娠是一种自然同种半异体移植现象,其成功有赖于母体妊娠免疫耐受,而母胎耐受的建立和维持涉及到多种机制的参与.比较经典的有母胎界面的机械作用:首先,绒毛中的血管壁、绒毛间隙、基底膜和绒毛上皮细胞共同构成母胎机械性屏障.另外,胎盘滋养细胞表面的唾液黏蛋白能遮盖滋养层细胞表面的组织相容性抗原,且这层黏多糖和免疫活性的淋巴细胞都带负电荷,互相排斥.还有就是多因素作用的免疫屏障,比如妊娠早期胎儿滋养层细胞Ⅰ类主要组织相容性复合体分子与母体子宫的自然杀伤细胞的相互作用,胎源性凋亡因子Fas通过与滋养层细胞表达的相关配体结合导致母体特异性T细胞大量表达Fas,从而启动凋亡途径,补体调节蛋白的表达等.而作为一个具有独立免疫调节功能的T细胞亚群,调节性T细胞(regulatory Tcells,Treg细胞)由Sakaguchi等[1]在对啮齿类动物的研究中首次发现,其免疫学特性主要表现在抑制自身反应性T细胞的活化,参与机体免疫耐受,在正常妊娠过程中扮演了一个相当重要的角色.
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人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化过程免疫特性的研究
目的 研究人脐带间充质干细胞(huMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)分化过程中的免疫学特性,为huMSCs作为胰岛细胞移植治疗1型糖尿病的细胞来源提供依据.方法 以流式细胞术检测huMSCs及huMSCs源性IPCs的免疫表型;RT-PCR法检测huMSCs及huMSCs源性IPCs的HLA-A、HLA-DR基因的表达;CCK8法测定细胞增殖率,观察huMSCs及huMSCs源性IPCs对外周血单个核细胞增殖的影响.结果 huMSCs在体外培养条件诱导下,具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能;huMSCs及huMSCs源性IPCs均不表达CD80、CD86、CD40、CD40L、HLA-DR,均表达HLA-A;huMSCs能够抑制PHA刺激的外周血单个核细胞的增殖,但huMSCs源性IPCs未见该作用.结论 huMSCs及huMSCs源性IPCs均具有低免疫原性,可作为胰岛细胞移植的细胞来源,huMSCs对免疫反应具有负调节作用,但huMSCs源性IPCs不具有该作用.
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EB病毒相关恶性肿瘤研究进展
EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)属疱疹病毒科γ亚科中惟一能引起人类感染的淋巴滤泡病毒,近50年来的研究证明EBV与淋巴瘤、白血病、移植后淋巴增生性疾病、鼻咽癌、胃癌等多种人类肿瘤发生有关.由于EBV对人类的普遍易感性,近年有关EBV的免疫学特性、逃避机体免疫应答的机制、EBV感染相关疾病的致瘤机制以及治疗方法等研究有了很大进展,本文就相关问题进行阐述.