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加热抗原修复对内源性抗生物素蛋白结合物的影响及其对策
目的深入研究加热抗原修复对内源性抗生物素蛋白结合物(EABA)的影响程度和范围,以及探讨消除EABA对免疫组织化学染色干扰的对策或方法.方法采用高效、快捷的组织芯片技术、微波加热处理法、免疫组织化学SP染色法及蛋清液封闭法,对甲醛固定石蜡包埋的76种(102份)人体正常组织和88种(577份)人体肿瘤组织以及4种(80份)大鼠正常组织标本进行系统性EABA检查,同时对9种(15份)人体冷冻组织进行EABA检查.结果 (1)冷冻组织中存在EABA;(2)经甲醛固定石蜡包埋后组织中的EABA被封闭;(3)加热抗原修复可造成EABA暴露;(4)EABA暴露的强度各不相同,强者可到强阳性;(5)EABA在组织中的分布形式,既有散在分布也有弥漫分布,主要以颗粒状形式存在于胞质中;(6)EABA广泛存在于上皮源性组织,特别是腺上皮组织(包括正常组织和肿瘤组织),亦存在于部分非上皮组织;(7)EABA暴露的强弱与修复液亦有关,EGTA(pH 9.0)的暴露能力较柠檬酸(pH 6.0)和乙二胺四乙酸二钠(pH 8.0)更强;(8)加热抗原修复暴露的EABA可以被20%蛋清液封闭.结论加热修复可使甲醛固定石蜡包埋组织中的EABA重新暴露,暴露的EABA可广泛见于人体正常和肿瘤组织细胞中,也见于大鼠正常肝、肾、肺、胰组织中,因而可能对正常免疫组织化学染色造成干扰;暴露的EABA可被蛋清液封闭,或采用非生物素检测系统,达到消除EABA对正常免疫组织化学染色干扰的目的.
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血清肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶ELISA检验方法的建立及临床应用
目的 应用抗人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)单克隆抗体(MeAb),建立其血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 ,并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断的应用价值.方法 通过McAb技术制备的抗DSA-GGT的McAb,采用蛋白G亲和层析柱色谱纯化;纯化的McAb经生物素标记后,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 .用建立的方法 对39例PHC患者和122例非PHC患者进行初步临床应用研究,用P-P概率图检验119例健康对照血清DSA-GGT分布状态,依据受试者工作曲线(ROC)确定DSA-GGT诊断PHC的cut-off值.结果 获取5株分泌McAb杂交瘤细胞制备的腹腔积液,经纯化后McAb蛋白总量在2.12~6.70 mg之间;McAb的生物素标记率为48.6%~72.2%.所构建的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 的低检出限为2μg/L;平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%.119份健康对照血清DSA-GGT水平呈正态分布,x±s为(1.50±0.51)μg/L;经ROC分析确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L.39例PHC患者26例DSA-GGT阳性,其诊断PHC敏感度为66.7%;122例非PHC患者10例DSA-GGT阳性,其诊断特异度为91.8%.结论 所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法 具有良好的重复性和可靠性.临床初步应用表明其诊断PHC的敏感度、特异度良好,且方法 操作简便,便于临床推广应用,为PHC实验室诊断提供了新方法 .
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干扰素α/β受体慢性乙型肝炎肝组织的免疫组化定位
目的:IFNα/βR在慢性乙型肝炎患者肝脏组织内的免疫组化定位及其对干扰素应答的预测作用.方法:应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法,对40例慢性乙型肝炎患者肝脏组织内IFNα/βR的分布特点进行了观察.结果:IFNα/βR在慢性乙型肝炎患者肝脏组织肝细胞膜和胞质内均有不同程度的表达,其中2例患者血管内也有分布.结论:慢性乙型肝炎患者肝肝组织内非溶性的IFNα/βR的表达量可能系IFNα干扰素应答率更为有效的预测指标.
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P34cdc2、Cyclin B1在大肠癌中的表达及意义
目的:研究p34cdc2、细胞周期素B1(cyclin B1)在大肠癌组织中的表达,并探讨其与大肠癌发生、发展的关系.方法:应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法检测p34cdc2、cyclin B1在64例大肠腺癌组织及10例正常对照大肠组织中的表达情况.结果:64例大肠癌组织中p34cdc2、cyclin B1表达阳性率分别为68.75%和82.81%,定位于细胞质中,呈棕黄色或棕褐色.10例正常对照大肠组织中p34cdc2、cyclin B1部分为弱阳性及中度阳性表达.病例组与对照组比较差异均有显著性(P<0.05).cyclin B1与p34cdc2的表达呈正相关,相关系数为0.586.p34cdc2和cyclinB1在大肠癌组织中的表达在有淋巴结和远隔器官转移组与没有淋巴结和远隔器官转移组间其差异有显著性(P<0.05);而在根据患者年龄、性别、肿瘤的原发部位、分化程度等进行分组的组间其表达的差异没有显著性.在大肠癌组织中pCNA阳性细胞呈弥漫分布,呈明显异质性,阳性率为73.44%.在正常大肠组织中见PCNA阴性或少量阳性表达.经统计学分析在大肠癌组织中PCNA的表达与p34cdc2和cyclin B1均没有相关性.结论:p34cdc2、cyclin B1在大肠癌中呈过表达,可作为反映大肠癌淋巴结转移和远隔器官转移的指标之一.
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凋亡抑制基因survivin在食管鳞癌中的表达及其与p53基因表达相关性研究
目的:探讨凋亡抑制基因survivin在食管鳞癌组织中的表达,及其与p53表达的相关性.方法:应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(S-P法),检测survivin和p53基因在12例正常食管组织及90例食管鳞癌组织中的表达.结果:Survivin基因在正常食管组织中不表达,90例食管鳞癌组织中,64例表达阳性,占71.1%.高分化组(Ⅰ-Ⅱ级)及临床早期(Ⅰ-Ⅱ期)病例食管癌的survivin基因表达阳性率为61.7%(37/60),低分化组(Ⅲ-Ⅳ级)及临床晚期(Ⅲ-Ⅳ期)病例为83.3%(25/30),二者比较,差异有显著性(P<0.05);食管鳞癌组织中p53蛋白表达阳性、阴性者中,survivin基因表达阳性率分别为75.9%(41/54)、22.2%(8/36),二者比较,差异有显著性(P<0.05);survivin基因表达阳性率与食管鳞癌的病理分级和临床分期呈正相关,与食管鳞癌组织中p53蛋白表达密切相关.结论:Survivin基因的异常表达而引起的细胞凋亡抑制,在食管鳞癌的发生中起重要作用,其表达与食管鳞癌组织中p53蛋白的异常表达密切相关.
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食管鳞癌FLIP表达与细胞凋亡相关
目的:探讨凋亡抑制蛋白FLIP在食管鳞癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系.方法:应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(S-P法),检测FLIP在10例正常食管组织及96例食管鳞癌组织中的表达,并应用TUNEL技术检测96例食管鳞癌的凋亡情况.结果:FLIP在96例食管鳞癌组织中有72例表达阳性,占75%.高分化组(Ⅰ-Ⅱ级)及临床早期(Ⅰ-Ⅱ期)病例食管癌的FLIP表达阳性率为64%(32/50),低分化组(Ⅲ-Ⅳ级)及临床晚期(Ⅲ-Ⅳ期)病例食管癌的FLIP表达阳性率为82.6%(38/46),二者比较,差异有显著性(P<0.05);FLIP表达阳性率与食管鳞癌的病理分级和临床分期呈正相关.FLIP在食管鳞癌组织中的表达水平与癌细胞凋亡指数(AI)有明显相关性(P<0.05).结论:FLIP的异常表达在食管鳞癌的发生发展中起重要作用,其表达与食管鳞癌细胞凋亡密切相关.
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卵巢上皮性癌组织中激肽释放酶14、15基因的表达及其意义
激肽释放酶(kallikrein,KLK)基因为一组高度保守的基因簇,在体内许多肿瘤组织中均有表达,KLK基因的生物学功能主要通过其表达产物发挥作用.目前,KLK基因已知的部分生物学功能有:释放激肽,降解胰岛素原与低密度脂蛋白、血管紧张素等,还可裂解精索原[1].KLK14、KLK15基因是KLK基因家族的新成员,参与体内许多生化过程,可能通过作用于细胞外基质,参与肿瘤细胞的生长、转移和浸润[2].本研究采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)连接法检测KLK14和KLK15蛋白在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达情况,并探讨其临床意义.
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转化生长因子α、β1体外诱导人卵泡膜细胞的凋亡及调控
近年来的研究表明,卵泡膜细胞中产生的转化生长因子β1(TGFβ1)对卵巢功能有重要的调节作用。同时,TGFβ1和TGFα的同时存在,可诱导体外无血清培养的大鼠卵泡膜细胞发生凋亡[1]。本研究旨在探讨TGFβ1和TGFα与人卵泡膜细胞凋亡的关系,以及细胞内抑制凋亡基因bcl-2表达的变化。 一、资料和方法 1.研究对象:本研究收集子宫内膜癌、子宫颈癌患者共10例,平均年龄35~50岁。将经腹部行广泛子宫切除时从切除的卵巢中切下肉眼可见的大卵泡(直径约为15 mm)26个,立即置于预冷的磷酸缓冲液中。术中切除组织冰冻切片病理检查报告,10例患者的双侧卵巢均无癌细胞转移及病理性改变。手术于月经周期的第9~14天进行。 2.试剂:TGFα、TGFβ1购自美国R&D公司;抗bcl-2多克隆抗体购自北京中山生物公司;链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组织化学(SP)染色试剂盒购自福州迈新公司。 3.卵泡膜/间质细胞的获取和培养:参照Lobb等[2]的方法进行。用胶原酶1和牛胰腺DNaseⅡ消化,于37℃、5%二氧化碳箱内培养。
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围绝经期功能失调性子宫出血患者子宫内膜bcl-2基因的表达
围绝经期功能失调性子宫出血(功血)是妇科常见病,由于卵巢逐渐不排卵,常导致子宫内膜过度增生,少数可发展为子宫内膜癌.本研究应用免疫组织化学(免疫组化)链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法和数字图象处理系统(CHAMPION)检测围绝经期功血患者子宫内膜组织bcl-2基因的表达,探讨bcl-2基因表达对子宫内膜病变的作用.
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上皮型钙粘附素在正常滋养细胞及妊娠滋养细胞肿瘤组织中的表达
浸润和转移是恶性肿瘤生物学行为本质的特征,涉及癌细胞与细胞外基质相互作用的一系列复杂过程,其中细胞粘附是一个重要环节.上皮型钙粘附素( epithelial cadherin, E-cd)作为钙粘附素家族中的一员,为钙依赖性跨膜糖蛋白,是介导细胞间联结重要的一类分子,与肿瘤的浸润和转移有着密切的关系[1].本研究采用免疫组织化学(组化)链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测E-cd在正常滋养细胞、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒毛膜癌(绒癌)组织中的表达,以探讨E-cd的表达与恶性滋养细胞肿瘤侵袭的关系.现报道如下.
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宫颈癌组织CD105表达与局部血管生成、癌细胞增殖及侵袭的关系
CD105(endoglin)相对分子质量为180 000,是一种存在于细胞表面的同源二聚体跨膜糖蛋白,能与多种转化生长因子(TGF)超家族成员如TGF-β结合,通过调节TGF-β与其受体结合,参与信号传导及血管生成[1].CD105基因定位于人9号染色体,是Ⅰ型遗传性出血性毛细血管扩张症的相关基因,可能与血管生成启动有关[2].本研究采用免疫组织化学(免疫组化)链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法,检测CD105蛋白在早期宫颈癌组织中的表达,探讨其与宫颈癌组织的血管生成、癌细胞增殖、侵袭的关系,现将结果报道如下.
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p16蛋白表达与卵巢浆液性乳头状囊腺癌预后的关系
卵巢浆液性乳头状囊腺癌(卵巢浆乳癌)中p16蛋白表达缺失率约为7%~24%[1,2],但其与肿瘤预后的关系尚不清楚.为此,本研究采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测卵巢浆乳癌石蜡包埋组织中p16蛋白的表达情况,分析其与肿瘤的病理分级、手术病理分期以及预后的关系,以探讨p16蛋白在卵巢浆乳癌发生、发展和预后中的作用,为卵巢浆乳癌的生物治疗提供依据.
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杀菌-通透性增强蛋白对大鼠中耳上皮细胞形态学的影响
目的研究杀菌-通透性增强蛋白(bactericidal/permeability increasing protein,BPI)中和脂多糖(Iipopolysaccha ride,LPS)的作用,从而抑制LPS导致的中耳上皮细胞形态的改变.方法将10只正常Wistar大鼠的中耳上皮细胞放置于24孔多聚赖氨酸培养板中培养7天后,分为3组:①未治疗组:在没有LPS和BPI的培养板中继续培养;②LPS组:将1 ng/ml LPS加入培养板中培养;③BPI治疗组:在1 ng/mI LPS加入培养板培养7天后再加入1 μg/ml BPI继续培养.生长4周后,应用光镜进行形态学观察.结果与未治疗组比较,LPS组在1周后表现为细胞肿胀、变大、数量增多;2周时细胞明显增大伴有细胞破裂现象,部分细胞死亡,同时纤毛细胞减少,分泌细胞增多;4周时细胞破裂增多,细胞死亡加剧.而BPI治疗组2周时肿胀的细胞数目及细胞破裂现象远不及LPS组2周时严重,4周后表现为细胞形态正常,仅少量细胞增大,偶有细胞破裂现象出现,同时纤毛细胞增多,分泌细胞减少.结论 BPI能够有效中和LPS,抑制因LPS导致的功能紊乱,恢复中耳黏膜的正常形态,减少分泌性中耳炎并发症、后遗症的发生.
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鸡蛋蛋清粉中抗生物素蛋白的分析
目的:了解经过一定温度处理的蛋清粉中抗生物素蛋白的活性.方法:蛋白质的分离、提纯、定性、定量分析.结果:在经过65℃和80℃处理的两种蛋清粉中均含有具一定比活性(分别为9.7 U/mg、6.8 U/mg)的抗生物素蛋白,其含量分别为3~6 mg/100g蛋清粉、1~3mg/100 g蛋清粉.结论:在这两种喷雾温度下,抗生物素蛋白并没有完全失活,仍具有结合生物素的能力.
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凋亡抑制蛋白Livin在肝癌组织中的表达及其临床意义
Livin蛋白是2001年由Kasof等报道的凋亡抑制蛋白(IAPs)家族的一个新成员,含有IAPs家族成员所特有的BIR和RING锌指结构域.本研究主要收集了48例原发性肝癌组织、20例肝硬化组织、12例外伤性肝破裂正常肝组织标本,采用免疫组织化学技术[链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)]和图像分析技术,检测Livin蛋白在肝癌组织中的表达情况,并探讨其表达与肝癌某些临床特征之间的关系.
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结肠癌p21、nm23基因表达联合检测的意义
目的研究ras癌基因产物p21和nm23转移抑制基因与结肠癌临床病理因素及预后的关系.方法免疫组织化学[sp]法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法).结果(1)p21阳性表达率为50.50%.与病理分期,组织分化、淋巴结转移,肿瘤大小及侵犯深度无相关性.(2)nm23阳性表达率为75.25%,与病理分期,组织分化、淋巴结转移,肿瘤大小及侵犯深度无显著相关性.(3)p21阴性表达病例三年、五年生存率为72.00%、62.00%;p21阳性表达病例三年、五年生存率为54.00%、32.00%,其差异具有显著性(P<0.05).nm23阳性表达病例三年、五年生存率为72.37%、50.00%;nm23阴性表达病例三年、五年生存率为44.00%、28.00%,其差异具有显著性(P<0.05).p21阴性nm23阳性表达病例三年、五年生存率为82.05%、69.23%;p21阳性nm23阴性表达病例三年、五年生存率为20.00%、13.33%,其差异具有极显著性(P<0.01).结论(1)p21和nm23在结肠癌中表达,与结肠癌发生发展有关.(2)p21阴性表达病例、nm23阳性表达病例预后好,可作为预后判定指标.p21和nm23联合表达判断结肠癌预后意义更大.
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p16和Rb蛋白在鼻咽癌中的表达及其意义
失去控制地增生是肿瘤的显著特征.肿瘤细胞所获得的基因的损伤或基因表达的异常直接参与了细胞增殖周期的调节.p16和Rb是两种重要的抑癌基因,直接参与了细胞增殖周期调控,与人类肿瘤的发生关系密切.为了探讨p16和Rb蛋白在鼻咽癌(NPC)发生中的临床意义,我们应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连结法(SP法)检测NPC和鼻咽部慢性粘膜炎(NP)组织中这两种蛋白的表达.
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人淋巴结的内源性抗生物素结合活性
目的论证人淋巴结为具有内源性抗生物素结合活性(EABA)的器官.方法以LSAB法、EnVision法、实时生物分子相互作用分析技术及椭偏成像生物显微技术,通过肝癌单克隆抗体 Hepama-1对人淋巴结的反应,进行实验论证.结果 LSAB法曾对人淋巴结呈强阳性,但EnVision法、实时生物分子相互作用分析技术及椭偏成像生物显微技术对人淋巴结呈阴性.结论人淋巴结具有内源性抗生物素结合活性.
关键词: 抗生物素蛋白 内源性抗生物素结合活性 淋巴结 椭偏成像生物显微技术 -
Connexin43蛋白在良恶性前列腺组织中的表达差异
间隙连接(GJ)是细胞膜上的连接通道结构,由整合膜蛋白-间隙连接蛋白(Cx)亚单位构成,它所介导的细胞间隙连接通讯(GJIC)在细胞间传递信号和能量,调控细胞的生长、增殖分化和形态发生等内环境的稳定.我们采用免疫组织化学链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测正常前列腺、良性前列腺增生和前列腺癌组织中Cx43表达规律,探讨Cx43的表达与良性前列腺增生、前列腺癌发生发展的关系.
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胃癌与雌激素-雌激素受体-雌激素调节蛋白信号传递系统的关系
本研究旨在应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)技术研究雌激素-雌激素受体- 雌激素调节蛋白(E-ER-EIP)信息传递通路在胃癌发生发展中的作用,与胃癌生物学行为的关系,用以指导新的治疗模式.