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粘多糖贮积症Ⅳ型(A亚型)1例
女,2.5岁.因近1年多来渐"驼背",走路困难,手腕向尺侧弯曲,于1996-03-15来我院就诊.患儿生后即手腕向尺侧弯曲,近1年渐加重,且渐"驼背",走路困难,患儿智力发育尚正常.食欲一般,其它方面未见明显异常.患儿为第1胎,足月剖腹产,生后无窒息及抽风.母乳喂养,生后1个月会、3个月认母、4个月握物、7个月会坐、13个月会走路,2岁会说一般话.父母非近亲结婚,家族中无类似患者.体检:身高79cm,体重12kg,神志清,营养状况中等,查体合作,全身皮肤粘膜无黄染,浅在淋巴结不肿大,头颅型正,眼、鼻、口、耳无异常,颈短,轻鸡胸、脊柱胸段后凸.心肺正常.腹平、肝脾未扪及,腕骨向尺侧弯曲,腕骨桡侧向外突出.下肢Ⅱ度"X"型,生理反射存在,病理反射未引出.实验室检查:尿中苯胺兰试验:阴性,白细胞中粘多糖颗粒:阴性:X光片:脊柱后凸,椎体呈扁平样,边缘不整.酶活性测定:β-半乳糖苷酶:36.33(正常40~100),半乳糖-6硫酸脂酶:0.20~0.36(正常2.0~7.0).
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糖尿病大鼠生长板软骨细胞的增殖与凋亡及褪黑素受体的表达
目的:探讨糖尿病大鼠生长板软骨细胞增殖分化情况以及褪黑素对软骨内成骨的影响.方法:建立速发型链脲佐菌素糖尿病大鼠模型,随机分为正常1月组、3月组、糖尿病1月组、3月组.采用H-E染色、增殖核抗原(PCNA)免疫组织化学显色观察软骨细胞的增殖情况.原位末端标记法(TUNEL)、衰老相关半乳糖苷试剂盒检测软骨细胞的衰老与凋亡.甲苯胺蓝染色显示软骨基质代谢,免疫组织化学显色检测褪黑素受体(MT1、MT2)的表达.结果:糖尿病1月组与正常组相比无变化.糖尿病3月组生长板软骨细胞柱密度均明显小于正常组;PCNA阳性表达在增殖层和肥大层降低,TUNEL阳性表达、半乳糖苷酶在增殖层明显增多,蛋白聚糖水平低于正常组.MT1、MT2在生长板及钙化区组织表达减弱.结论:糖尿病大鼠软骨细胞的增殖和凋亡水平同步提高,以增殖层为主的细胞凋亡在糖尿病软骨的生长发育中转为主导作用.细胞外基质降解,早期软骨细胞增殖活跃,晚期增殖能力下降.褪黑素能抑制生长板软骨细胞的增殖分化.
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β-D-半乳糖苷酶动力学测定方法探讨及初步临床应用
目的 建立β-D-半乳糖苷酶(GAL)自动化分析方法 .方法 用2-氯-4-硝基苯基-β-D-半乳糖苷(CNP-GAL)为底物,在pH值4.8柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系下,在405 nm处测定产物吸光度值的变化,得出GAL活性.用此方法 检测了58名正常体检者及88例患者(包括急性肾功能衰竭15例、尿毒症32例、糖尿病肾病18例、高血压肾病23例)的GAL水平.结果 本方法 适pH值为4.8,基质浓度为2.5 mmol/L.批内、批间平均变异系数(CV)分别为3.44%、5.17%.米氏常数(Km)为0.45 mmol/L.正常对照组GAL中位数(范围)为6.2(4.8~7.8) U/gCr,急性肾功能衰竭组为190(74.2~285.6) U/gCr,尿毒症组为39.6(8.9~161.0) U/gCr,糖尿病肾病组为11.3(5.5~67.0) U/gCr,高血压肾病组为16.1(4.1~137.5) U/gCr,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.001、P<0.05).结论 该法简便、快捷、精确,可用于自动化分析,并且留样方便,适宜临床常规应用.GAL可作为评价肾小管疾病及肾实质性疾病的一项指标.
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小儿肾小球疾病时尿酶测定及其临床意义
检测尿酶N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β-半乳糖苷酶(GAL)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)等尿系列酶的变化,作为评价小儿肾小球疾病时肾小管功能的指标,现报告如下.
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B33-17 用双歧杆菌来源的截短的β-半乳糖苷酶高效合成低聚糖
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异紫杉脂素的酶法糖基化
目的以异紫杉脂素为例,探索酶法糖基化的可行性,为其他具有重要生理活性的天然化合物提供可行的生物转化方法.方法利用半乳糖苷酶转糖基活性对异紫杉脂素进行了糖基化修饰.结果通过薄层层析、质谱、红外光谱、1HNMR、13CNMR数据显示产物即是异紫杉脂素半乳糖苷.结论 E.coli和脆壁酵母来源的β-半乳糖苷酶可以对异紫杉脂素进行糖基化修饰.
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Fabry病肾脏组织学检查1例报告
Fabry是一种X染色体连锁的先天性遗传缺陷,其α-半乳糖苷酶A缺乏,导致糖鞘酯在组织中沉积,表现为全身血管周围出现泡沫样细胞[1].多见于男性,女性罕见.我们遇到1例女性患者,现报道如下.
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尿酶谱的测定及其临床应用
目前肾病的实验室诊断多以尿蛋白和血清尿素、肌酐作为主要指标,虽然这些指标在已知肾病患者的病程进展和疗效观察中具有重要价值,但根据祖国医学"治未病"的观点,发现该类指标难以发现早期肾损伤,无法满足肾病早期诊断的需要.另外,肾组织学检查虽然比较灵敏,但必须做创伤性的肾活检,难以普遍推广.我们采用尿液酶学的改变试图早期发现肾脏损伤,观察指标有尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β-D-半乳糖苷酶(GAL)、谷氨酰转肽酶(r-GT)、尿肌酐(CRE).实验结果表明:该类酶学指标灵敏准确,是一种很好的无创伤性检测方法,对发现早期肾损伤具有较重要的临床应用价值.现报道如下.
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以血尿初诊的弥漫性体部血管角皮瘤1例
弥漫性体部血管角皮瘤又称Fabry病,是因α-半乳糖苷酶缺陷导致糖脂在组织内沉积而引起的一种代谢性疾病,门诊遇见1例报道如下.
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1例Fabry病的临床表现及电镜观察
Fabry病又名弥漫性躯体性血管角化瘤,属X染色体连锁的先天性遗传性缺陷,因α-半乳糖苷酶A缺乏,导致鞘脂糖在组织中进行性沉积,引发多器官损害.本病男性多见,女性非常罕见.笔者诊治1例女性Fabry病,现报道如下,并结合文献探讨其临床表现、治疗方法以及电镜在Fabry病诊断中的价值.
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外源性基因在新鲜同种带瓣大动脉中的表达
本实验旨在探讨新鲜同种带瓣大动脉转基因的可行性及植入后外源性基因表达时限和表达量的差异,为防止同种带瓣大动脉的退变进行转基因治疗奠定基础.一、材料与方法1.腺病毒载体:本组所用重组腺病毒(Ad5CMVLacZ)滴度为1×109 pfu/ml,携带有报告基因LacZ,能表达半乳糖苷酶,此酶可通过免疫组织化学染色进行鉴定.每个要转染重组腺病毒的同种带瓣血管须用半乳糖苷酶300 μl.
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细胞移植示踪技术的研究进展
细胞移植替代疗法已成为现代医学中发展为迅速的领域之一,移植细胞在宿主体内的存活、增殖、迁移和分布也自然受到人们的极大关注.目前移植细胞的示踪方法可归纳为5类:(1)利用荧光染料标记细胞,如Hoechst33342/33258、DAPI、PKH26和DiI等;(2)改变细胞基因,使其表达特异性的标志物,如绿色荧光蛋白、β-半乳糖苷酶等;(3)选用雄性供体和雌性宿主,利用Y染色体作为标志物;(4)用5-溴脱氧尿苷等胸腺嘧啶类似物来标记分裂细胞;(5)采用超顺磁氧化铁作为磁共振对比剂活体示踪移植细胞.近年来,上述细胞标记技术均有很大进展,特别是荧光染料、转基因标记、磁共振示踪三方面进展为迅速.
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EB病毒介导的鼻咽上皮细胞永生化早期阶段的生物学观察
目的:鼻咽癌是我国南方地区高发的恶性肿瘤之一,长期以来,对鼻咽癌发病分子机制未能彻底阐明,关键问题之一是缺乏一个良好的体外多阶段细胞模型.虽然利用EB病毒已建立了数个灵长类上皮细胞系,但是,EB病毒转化的人鼻咽上皮永生化细胞系尚为空白.目前认为,上皮细胞永生化呈多阶段,即上皮细胞增殖--逃避老化期(Senescence)--逃避危机期(Crisis)--进入永生化(Immortalization),其中,逃避Senescence可能是上皮细胞永生化的初阶段.方法:借助EB病毒和TPA的体外协同作用,采用相差显微摄影、间接免疫荧光、Senescence相关半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞生长曲线及群体倍增时间等检测方法,我们对12例EB病毒感染的原代人胚鼻咽上皮细胞生长过程进行了观察.结果:EB病毒感染的原代鼻咽上皮细胞表达EB病毒瘤基因产物LMP1,并随着培养时间的延长,对SA-β-Gal表达呈现从弱到强再到弱的趋势.在原代培养后期,SA-β-Gal表达阳性率降低,提示EB病毒促使部分鼻咽上皮细胞逃离了Senescence、进入永生化早期阶段.作进一步的生物学观察表明,处于该阶段的鼻咽上皮细胞具有部分转化特征,表现为细胞形态学发生改变,从原来扁平而紧密的镶嵌状排列,逐渐变成立体感增强,细胞体积变小,分裂相增多.原代培养后期可观察到明显的转化灶,细胞生长活跃,与正常培养的鼻咽上皮细胞呈现的老化形成明显的对照.经传代后,细胞呈岛状重叠生长,提示永生化早期阶段的鼻咽上皮细胞具有去接触抑制生长的特性.细胞生长曲线检测进一步表明,其群体倍增时间降低,提示EB病毒促使永生化早期阶段的鼻咽上皮细胞进一步生长.结论:EB病毒促使体外培养的鼻咽上皮细胞通过Senescence时期、进入永生化早期阶段,并初步具有体外转化特征,为进一步阐明上皮细胞永生化分子机制及建立人鼻咽上皮细胞永生化模型提供实验依据.
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法布里病一例及文献复习
法布里病又称Fabry 病、Anderson?Fabry 病或全身弥漫性体血管角化瘤,是一种罕见的遗传性溶酶体贮积症,因编码α?半乳糖苷酶A(alpha?galactosidase A,α?GalA)的基因GLA突变,酶活性部分或完全缺乏后导致细胞内过度的鞘糖脂蓄积,从而引起各系统器官病变[1]。现将我院收治的1例以肾脏损害为首发症状的Fabry病报告如下,并进行有关文献复习。
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Fabry病的肾脏表现及治疗进展
Fabry病属于溶酶体蓄积病,是一种罕见的X连锁遗传性疾病,系由于先天性溶酶体α-半乳糖苷酶A活性缺陷导致鞘糖脂代谢异常,进而在体内多系统包括肾脏、皮肤、角膜及心脏等部位的异常堆积致病.Fabry病属单基因遗传病,致病基因GLA基因位于Xq22,编码α-半乳糖苷酶A.以往调查显示在男性新生儿中发病率约为1/40 000.而Spada等[1]2006年的研究结果显示,筛查37 104例男性婴儿发病率高达1/4600~1/3100.其临床表现多样,经典型男性半合子患者可出现神经痛、血管角质瘤、少汗、进展性肾病和心脑血管等多系统受累表现;迟发型患者缺乏典型症状,临床漏诊、误诊率高.据调查,在欧洲发达国家,从Fabry病的首发症状出现到确诊的时间平均长达13.7~16.3年[1].肾脏是Fabry病患者尤其是男性半合子主要受累脏器之一,终末期肾病(ESRD)也是导致Fabry病患者死亡的主要原因之一.
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超声微泡促进肿瘤细胞报告基因转染
目的探讨超声破坏微泡造影剂后对β-半乳糖苷酶报告基因在人肝癌细胞(QGY)中转染的影响.方法将培养QGY细胞转于24孔培养板后,分为5组,分别为单纯加入质粒组(D);质粒+微泡组(D+M);质粒+超声组(D+U);质粒+超声+微泡组(D+U+M);脂质体+质粒组(L+D);进行β-半乳糖苷酶质粒DNA的转染.2d后,进行β-半乳糖苷酶染色,测定各组细胞转染率.结果单纯质粒组细胞转染率为4.92%;质粒+微泡组转染率为6.742%;质粒+超声组转染率为29.73%;质粒+超声+微泡组转染率为50.88%;脂质体+质粒组转染率为12.15%;结论超声破坏微泡造影剂可促进报告基因β-半乳糖苷酶质粒在QGY细胞的转染,为肿瘤基因治疗提供一种新型基因转移系统.
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利用pcDNA 3.0裸质粒探讨创伤愈合动物模型中转入基因的分布规律
目的通过在Wistar大鼠皮肤伤口局部应用含半乳糖苷酶(LacZ)报告基因的裸pcDNA 3.0重组质粒,建立创伤愈合转基因治疗动物模型并评价其应用价值.方法通过建立大鼠全层皮肤切割伤模型,采用自身对照,在治疗侧伤口周围局部注射重组转染裸pcDNA 3.0-LacZ质粒,通过β-gal原位染色检测注射3、30、100μg剂量后1、3、6、15天及愈合时的伤口组织标本中报告基因LacZ的表达,确定目标基因表达效率.结果报告基因LacZ主要表达于皮下成纤维细胞中,100μg剂量有较高表达,表达效率为10.3%,表达时间主要在注射后3~6天,15天时仍可检测到少量表达细胞,愈合时及对照侧各个时相点均未检测到表达.结论重组的裸pcDNA 3.0-LacZ质粒能成功转染伤口的成纤维细胞等修复细胞,表达效率及时间适用于动物创伤愈合的转基因治疗.
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乳糖酶的功能特性及其应用
乳糖酶(lactase)按国际酶学委员会的命名法,称为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactohydrolase.E.C.3.2.1.23),简称β-半乳糖苷酶(β-galactosidase).其广泛应用于食品行业,特别是乳品工业,现今乳糖酶的需求量以每年40%的增长率逐年增加,在国内属新兴的高科技生物制品行业,国内大量的乳糖酶的需求都基本须来自于进口,价格昂贵.由于低乳糖和低乳糖制品是我国食品工业"十五"发展规划中重点发展领域,因此乳糖酶的低成本生产迫在眉睫.本文仅对乳糖酶的来源、功能特性、研究现状及其应用作以介绍.
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15例(产前)血性羊水的临床观察
足月妊娠正常羊水略浑浊不透明,可见羊水内悬有小片状物(胎脂、胎儿脱落上皮细胞、毳毛、毛发、少量白细胞、白蛋白、尿酸盐等),羊水中含有大量激素(包括雌三醇、孕酮、皮质醇、前列腺素、HPL、HCG等)和酶(如:溶菌酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶、B-半乳糖苷酶、氨基己糖苷酶A等数十种).若羊水中混有血液,应迅速确诊处理,若处理不当可间接威胁母儿生命安全.正确选择终止妊娠的时机,可明显降低母儿产期死亡率.笔者就我院近年来产前血性羊水状况,妊娠结局报告如下: