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转基因的骨骼肌细胞及其在Ⅰ型糖尿病治疗中的应用
骨骼肌成肌细胞已经成为转基因治疗的一种重要的靶细胞,关于这方面的研究越来越多.在治疗Ⅰ型糖尿病方面,面临的问题包括:体外培养骨骼肌细胞的增殖、分化、融合,高效率的基因转染载体、转移基因长期可控性表达等.本文主要对前两部分问题作一简单综述.
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大鼠肝内门腔分子分流术的初步研究
门静脉高压症,常常发生于多种原因导致的肝硬变,因为其原发病肝硬变常不能逆转,目前尚无特效疗法.临床上的治疗手段主要是靠不同的外科手术来改善其血流动力学紊乱状态,主要手术有各种门腔分流术,门奇断流术以及近兴起的联合手术.但是,所有这些均属于对症治疗范畴,而不是对因的根本性治疗方法.只有设法增加肝窦毛细血管数量,加大肝内门腔分流,才能从根本上降低门静脉压力.基于此,我们设想通过VEGF转基因的方法,来增加肝脏血管数量以达到肝内门腔分流的目的.在此,将我们的大鼠肝内门腔分子分流术的初步研究报告如下.
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干细胞移植与转基因治疗建立生物起搏器的实验研究进展
近来的研究表明,基因治疗和干细胞移植修复可以治疗多种心脏疾患,其中包括重建心脏生物起搏器(biological pacemaker)[1].因此,基因与干细胞移植治疗技术可能为缓慢心律失常的治愈带来了希望.
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肌浆网钙ATP酶2a基因转导治疗心力衰竭的研究
心血管疾病和其他疾病造成的心力衰竭在世界各国影响数千万人.尽管近内外科治疗有较大的进展,但病情较重患者的5年生存率仍低于50%[1].转基因治疗作为防治心力衰竭的新思路之一,目前集中于3方面的研究:(1) 促进血管再生,改善心肌缺血,预防心力衰竭,其中与血管再生有关的生长因子VEGF和bFGF已应用于急性心肌梗死临床试验.
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066转基因治疗家族性腺瘤型息肉病中纤维性肿瘤的临床前期研究
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移植肝转基因的研究现状
自从1963年Starzl进行第一例肝脏移植以来,肝脏移植在临床广泛开展,已成为治疗终末期良、恶性肝胆疾病的主要手段[1].肝移植术后免疫排斥反应仍然是影响肝移植疗效的主要难题之一.20世纪80年代随着CsA、FK506等新型免疫抑制剂的问世,排斥反应虽然已不再是肝移植术后死亡的主要原因,但依然是移植肝原发性无功能(PNF)的主要因素之一[2].与此同时,基因治疗作为人类医学分子遗传学中的新领域迅速发展起来,1990年世界首例腺苷酸脱氨酶(ADA)缺乏症患者转基因治疗获得成功,并以一种崭新的治疗手段开始进入临床试验.90年代后,一些学者将转基因手段运用于肝移植动物实验中,尝试用转基因治疗手段来解决免疫排斥反应等问题.
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舌癌发生分子机制及转基因治疗
舌癌恶性度高,易发生早期转移,是口腔中危害性较大的一种恶性肿瘤,严重地影响着患者的生存质量.本研究从三个方面对舌癌发生分子机制及转基因治疗进行了研究.
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转染人热休克蛋白70对同种异体移植心脏移植物血管病的影响
目的 探讨经冠状动脉内灌注重组腺病毒载体介导HSP70(Ad.HSP70)转基因治疗对同种异体心脏移植物血管病的影响.方法 以套管技术建立颈部异位异种心脏移植模型.基因转移组在体外经冠状动脉缓慢灌注含3.8×1010 VP/ml Ad-HSP70 的4 ℃HTK液,持续45 min;空白载体组灌注含3.8×1010 VP/ml不携带基因腺病毒空白载体(Ad)的HTK液(B组);对照组仅灌注无病毒的HTK液(A组)持续同样时间.术后1个月收集移植物组织做检测.组织内目的基因表达产物通过免疫分析、RT-PCR进行半定量分析,免疫组化染色进行定性和定位分析.结果 RT-PCR证实,移植物内外源性HSP70基因转录,免疫组化检测证实Ad-HSP70转染的移植物(C组)HSP70成功转到血管周围的心肌细胞和冠状动脉微血管,HSP70表达水平明显高于其他两组(P<0.01).HSP70过量表达减少NF-κB的活化及VCAM-1的表达,HSP70过量表达的移植物内炎症细胞浸润数明显减少,巨噬细胞和NK细胞浸润减少,移植物血管内皮损伤轻.结论 经冠状动脉灌注重组腺病毒载体介导保护性自稳蛋白-人热休克蛋白70基因转移到心脏移植物是相当有效可行的,并可减轻移植物冠脉内皮损伤,预防移植物血管病.经冠状动脉灌注重组腺病毒载体介导基因转移在移植物内局部表达有潜力的治疗制剂,此方法具有广阔的临床应用前景.
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基因治疗1例下肢闭塞性动脉粥样硬化护理
基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞,纠正由于基因缺陷和基因异常而引起的疾病.从20世纪80年代后,由于分子生物学技术的快速发展,基因克隆、测序、基因表达及改变基因表达等方法日臻成熟,为转基因技术的产生奠定了基础,也为疼痛的转基因治疗开启了新时代.我科于2009年9月收治1例下肢闭塞性动脉粥样硬化患者,应用基因治疗患者半月,疼痛减轻,侧枝循环形成良好.两年随访效果满意,现报道如下.
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双特异性抗体治疗卵巢癌的研究进展
卵巢癌的生物治疗,包括细胞因子、单克隆抗体、转基因治疗等多种方式.基于单克隆抗体IgG的结晶片段(Fc)用于肿瘤的治疗中,除了和NK细胞、巨噬细胞结合外,因其同时和非细胞毒作用的细胞如血小板、B淋巴细胞、粒细胞等带有Fc受体的细胞结合,在治疗中受到部分限制.近年来,多种类型的双特异性抗体(BsAb)用于肿瘤的实验及临床研究.早的BsAb出现在1961年,是将两种不同特异性的多克隆抗体的抗原结合片断(Fab)混合经过温和氧化而制备的,在体内和体外分别能与两种特异抗原结合产生生物学效应.现可通过化学偶联法、细胞工程法、基因工程法制备多种类型的BsAb,在肿瘤药物导向治疗、免疫学检测和介导细胞毒作用中广泛应用,在卵巢癌的生物治疗应用亦越来越普遍.
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转化生长因子-β与转基因治疗肝纤维化
肝纤维化形成的中心环节是肝星状细胞(HSC)转化成为肌成纤维母细胞(MFB),进而合成、分泌大量细胞外基质(ECM),导致ECM代谢失衡.转化生长因子(TGF)-β是HSC向MFB转化进程中重要的促进因子.
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重组TNF-α慢病毒感染的脐血间质干细胞对胃癌移植瘤生长的抑制作用
目的:以脐血间质干细胞(umbilical cord blood mesenchyme stem cell,UCBMSC)作为肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)载体,研究重组TNF-α慢病毒Lv-TNF-α感染的UCBMSC对胃癌移植瘤生长的抑制作用.方法:人胃癌细胞SGC-7901注射到裸鼠腹股沟皮下建立胃癌移植瘤裸鼠模型.将表达TNF-α的重组慢病毒Lv-TNF-α和对照慢病毒Lv-EGFP分别感染UCBMSC后获得Lv-TNF-α感染的UCBMSC(UCBMSC-TNF-α)以及Lv-EGFP感染的UCBMSC(UCBMSC-EGFP).荷瘤裸鼠随机分为3组:分别注射UCBMSC-TNF-α、UCBMSC-EGFP及生理盐水(NaCl),观察注射后瘤体生长情况,RT-PCR和ELISA方法分别测定各组胃癌组织中TNF-α mRNA和蛋白的表达;H-E染色观察瘤体的坏死情况.结果:成功建立SGC-7901胃癌细胞裸鼠移植瘤模型.治疗后三组荷瘤裸鼠肿瘤体积分别为(0.51±0.27)、(0,64 ±0.36)和(1.21±0.80)cm3,UCBMSC-TNF-α组肿瘤体积小(F=3.88,P<0.05);RT-PCR法检测结果显示,3组荷瘤裸鼠肿瘤组织TNF-α mRNA分别为(1.92±0.12)、(1.21±0.26)、(0.81 ±0.22),UCBMSC-TNF-α组TNF-α mRNA表达量大(F=54.82,P <0.01);ELISA法检测结果显示,3组荷瘤裸鼠肿瘤组织TNF-α蛋白表达分别为(148.29±3.76)、(78.22±6.24)、(42.80±3.02) pg/ml,MSC-TNF-α组表达量大(F=694.54,P<0.01);H-E染色病理切片显示,UCBMSC-TNF-α治疗组肿瘤坏死面积大.结论:TNF-α转基因UCBMSC可通过旁分泌TNF-α抑制胃癌的生长.
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人内皮抑素转基因治疗B16黑色素瘤的实验研究
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微血管增生及转基因治疗缺血性疾病
生理状态下体内并无微血管增生现象(月经周期中子宫内膜变化是仅有的例外),但在一些病理情况,如损伤愈合、炎症、类风湿性血管炎、糖尿病伴发的视网膜病变等,微血管增生是基本的病理过程.特别是在缺血性疾病及肿瘤发生过程中,微血管增生的意义提示,可能通过调节微血管增生来治疗这类疾病.早在70年代就提出了抑制微血管增生以治疗肿瘤的研究.对于缺血性疾病,首先采用了外源性促微血管增生活性因子,获得明显的治疗效果.但是嗣后的研究发现,系统给予外源性重组微血管增生因子,可能促发潜在肿瘤的生长,也可能造成意外的微血管增生而致大脑和视网膜不可逆病变,加之昂贵的费用,近几年来转而发展基因治疗方法促进微血管增生以治疗缺血性疾病.本文拟就基因治疗的发展现状作一论述,并探讨今后的研究方向.
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决定神经干细胞分化的内外因素
神经干细胞(NSC)的发现和培养成功是近十年来神经科学领域的重大突破,也是近年来研究的一大热点.神经干细胞是一类存在于中枢神经系统内的具有自我更新、持续分裂增殖、多向分化能力的细胞.在体外诱导条件下,它分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞,移植入动物体内它能分化成神经元和胶质细胞并能迁移、增殖,与宿主细胞形成突触联系.基于这些特点,神经干细胞成为移植入脑内进行细胞替代治疗和转基因治疗,从而达到神经修复的有前景的细胞来源之一[1~3].本文对近年来决定神经干细胞分化的外部条件及内在机制研究进展做一综述.
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TCR β链CDR3概况与感染性疾病的研究
外周血大部分T细胞膜表面抗原受体分子(TCR)由α/β多肽链构成,α/βTCR特异性识别抗原多肽与MHC分子复合物.分析克隆性增生TCR BV CDR3的基因谱型特征,可以了解机体T细胞增殖与功能状况,从而有助于T细胞相关疾病的诊断和治疗,通过直接移植特异性T细胞来治疗相关疾病,也能发展以特异性TCR基因为基础的转基因技术来治疗相应疾病.此文主要就TCR β链特点及其在感染性疾病的诊断与治疗上的应用作了阐述.
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神经干细胞基因转导治疗中枢神经系统损伤的研究进展
近10多年来,在神经干细胞方面的研究进展十分迅速,已经建立了从啮齿类动物到人等多个动物种系的神经干细胞系.现阶段神经干细胞的应用已深入到转基因治疗阶段,为中枢神经系统损伤的修复、神经退行性疾病、颅内肿瘤、中枢神经系统自体免疫性疾病、脑血管疾病的治疗提供了新的途径.本文就神经干细胞基因转导治疗中枢神经系统损伤的研究进展作简要综述,并对神经干细胞基因转导治疗现阶段存在的问题做一些概括.
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神经干细胞基因转导治疗中枢神经系统损伤的研究进展
近10多年来在神经干细胞方面的研究进展十分迅速,已经建立了从啮齿类动物到人等多个动物种系的神经干细胞系.现阶段神经干细胞的应用已深入到转基因治疗阶段,为中枢神经系统损伤的修复、神经退行性疾病、颅内肿瘤、中枢神经系统自体免疫性疾病、脑血管疾病的治疗提供了新的途径.
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白介素-12可预防肝癌动物模型手术后的肿瘤复发
Jarnagin WR…//Ann Surg 2000,231:762肝癌是一种常见的恶性肿瘤,手术是目前唯一有效的治疗手段.但手术后近2/3的患者将出现残肝肿瘤复发,仅1/3的患者手术后可获长期生存.据认为,造成这一现象的主要原因是体内的免疫抑制现象.提高患者的免疫能力,将有助于预防肿瘤复发乃至消灭手术后残留的微小肿瘤病灶.实验证实,细胞因子的转基因治疗在提高机体免疫状态的同时能抑制实体肿瘤的生长发展,其中以白介素-12(IL-12)的作用较为引人注目.(朱立新译耿小平校)
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携带人S100A1基因的重组腺相关病毒载体的构建及鉴定
目的:构建携带有人S100A1基因的重组腺相关病毒(Adeno-associated viru,AAV)载体,并对其进行鉴定.方法:用BamH I和EcoRI 将目的基因pUC57-Simple-S100A1和腺相关病毒骨架质粒pAAV-IRES-ZsGreen1行双酶切,回收酶切质粒的目的片段进行连接,产物转化感受态DH5a,获得重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-IRES-ZsGreen1-S100A1.酶切及测序鉴定后,将pAAV-IRES-ZsGreen1-S100A1、包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper三质粒共转染AAV-293,包装重组腺相关病毒rAAV-IRES-ZsGreen1-S100A1.收获重组病毒后感染HEK293细胞,荧光计数法测定病毒滴度,病毒基因组外源基因扩增鉴定重组病毒的包装是否成功.结果:重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-IRES-ZsGreen1-S100A1经双酶切和测序鉴定正确;荧光显微镜下观察转染AAV-293细胞72 h后,病毒包装效率达95%~100%,荧光计数法测定病毒感染滴度达(2~3)×107 TU/mL;提取重组病毒基因组成功扩增出外源目的基因S100A1片段.结论:成功构建携带有人S100A1的重组腺相关病毒载体rAAV-IRES-ZsGreen1-S100A1,收获的病毒具有较高滴度,为今后利用腺相关病毒载体进行S100A1基因转染治疗慢性心力衰竭的体外及体内研究提供了实验基础.