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不同价态锰对多巴胺能神经细胞凋亡作用的影响
为探讨不同价态锰对细胞凋亡的影响,选用多巴胺能神经细胞(SH-SY5Y细胞)作为锰神经毒作用的体外测试体系,研究二价锰(Mn2+)和三价锰(Mn3+)对SH-SY5Y 细胞凋亡的诱导作用以及对多巴胺(DA)含量的影响.结果显示:MTT法检测细胞损伤的程度,显示Mn2 +和Mn3+呈时间和剂量依赖性的损伤SH-SY5Y细胞;流式细胞技术证实Mn2+和Mn3+(0.5~2 mmol/L)与SH-SY 5Y细胞接触24~72h,可诱导细胞发生凋亡,透射电镜技术发现凋亡细胞出现核染色体凝集 . 用高效液相色谱仪测定发现DA含量降低.说明锰所致神经细胞死亡方式是以凋亡为主;不同价态锰可引起细胞自身合成的DA含量下降,但Mn3+的毒作用高于Mn2+的毒作用 .
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蝌蚪提取液诱导HL-60细胞凋亡及相关基因的表达
以往实验证明蝌蚪提取液(T871)具有抑制肿瘤细胞生长并诱导其分化的作用[1].为进一步探讨蝌蚪提取液的抗肿瘤作用,本实验观察了T871诱导人早幼粒白血病细胞系(HL-60)细胞凋亡作用及其凋亡过程中相关癌基因的变化.
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NET-1、PTEN蛋白在脑星形细胞肿瘤中的表达及意义
PTEN基因编码的蛋白具有抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡作用,NET-1基因编码的蛋白表达与细胞增殖有关,显著上调癌形成过程.本文就脑星形细胞肿瘤中NET-1和PTEN蛋白的表达及病理意义进行研究.
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HBV整合的致癌性研究
HBV的4个亚基因产物中,HBx具有反式激活、介导细胞凋亡作用,HBs具有反式激活因子的作用.肝细胞癌(HCC)的发生与HBV的整合及整合后染色体重排有关.为探讨HBV整合及HBx、HBs亚基因在HCC发生中的可能作用,我们制备了HBV亚基因探针,并以此对肝细胞癌中HBV整合及亚基因转录进行了研究,以期为阐明HBV感染后HCC发生机制提供一定的实验资料和依据.
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三氧化二砷对H22肝癌小鼠免疫功能的影响
三氧化二砷治疗急性粒细胞性白血病在临床上已取得了一定的功效,大量研究表明AS2O3对肿瘤细胞具有促进凋亡作用.目前有学者推测,AS2O3可能是通过增强机体免疫功能达到抗肿瘤效应.我们通过研究AS2O3对H22肝癌小鼠外周血的T细胞亚群及NK细胞活性的影响来探讨AS2O3的抗肿瘤作用.
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骨保护素的研究进展
骨保护素(osteoprotegerin,OPG)是1997年发现的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)受体家族的新成员,也称破骨细胞抑制因子(osteoclast inhibitory factor,OCIF)或称为树枝状细胞受体1(dendritic cell derived receptor-1,FD-CR-1),它是骨代谢一个重要的负调控因子.OPG是核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)、TNF相关凋亡诱导配体(TNF related apo-tosis inducing ligand,TRAIL)等TNF家族成员的假受体[1-2].OPG与RANKL的结合可阻断破骨细胞(osteoclast,OC)发生的RANK/RANKL信号通路,抑制OC对骨骼的破坏作用[1].而OPG与TRAIL的结合则抑制了后者特异性诱导的细胞凋亡作用[2].由于OPG对OC的抑制作用,使它有可能成为临床上治疗骨质疏松症、风湿性关节炎、骨癌等疾病的新药物而备受关注.
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丁酸钠联合穿琥宁对人大肠癌细胞HCT-8增生的影响
目的:探讨丁酸钠、穿琥宁体外联合应用对结肠癌细胞的影响.方法:应用生长曲线、MTT、流式细胞仪、电镜研究丁酸钠、穿琥宁对HCT-8的增生抑制及诱导凋亡作用.结果:丁酸钠对HCT-8细胞有明显抑制作用,48 h后各组抑制率分别为15.7%,20.3%,33.3%(P<0.01),呈现浓度、时间依赖性.电镜下观察可见成熟分化改变及凋亡细胞,流式细胞仪可检测到亚G1峰,细胞周期分析发现其主要阻滞在G1期.穿琥宁与其联合应用,混合组1在24 h,48h凋亡率为23.5%,48.6%,混合组2在2 4h,48 h凋亡率为30.8%,54.2%(P<0.01).结论:丁酸钠抑制HCT-8细胞增生,并诱导其成熟分化、凋亡.穿琥宁与其合用使凋亡率增加.
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甘氨鹅脱氧胆酸钠致阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中bcl-2 mRNA的表达意义
目的:探讨bcl-2基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的调控作用.方法:健康♂Wistar大鼠,进腹,游离出胆总管,于肝门部结扎胆总管并切断,远端再予以结扎.进腹后不结扎切断胆总管作为阴性对照.结扎后3,7,14,21 d处死大鼠,每组8只.采用胶原酶原位肝灌注法获取体外培养正常大鼠及阻塞性黄疸大鼠肝细胞.分别收取正常大鼠及胆总管结扎大鼠肝细胞1×109/L-1,用Trizol试剂盒一步法提取大鼠肝细胞总RNA,行RT-PCR扩增;用PCR扩增bcl-2和对照β-actin基因片段;分离的正常大鼠及胆总管结扎14 d大鼠的肝细胞行原代培养,培养板内置小飞片,使用100μamd.L-1甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用于两组肝细胞24h后,用FCM法分析肝细胞的凋亡比率,用TUNEL技术进行肝细胞凋亡的原位检测.结果:体外培养正常大鼠及结扎3 d大鼠肝细胞bel-2 mRNA的表达为阴性,仅见β-actin条带;胆总管结扎大鼠体外培养肝细胞在结扎后7 d即可见肝细胞内bel-2 mRNA的表达,其吸光度A值为O.13±0.15;结扎后14、2l d也可检测其表达,bcl-2 mRNA吸光度在结扎14 d达高峰,为O.56±0.21,且与结扎7、2l d相比,两者差异有显著性(P<0.05);100tanol@L-1的G,CDC作用正常大鼠肝细胞后,凋亡明显增加,凋亡率为34.9±2.9%;胆总管结扎14d大鼠的肝细胞凋亡比率为15.6±2.1%,100μanol@L-1的GCDC作用胆总管结扎14 d大鼠肝细胞后,凋亡率无明显增加,为17.3±1.1%,两者差异无显著性(P>0.05);GCDC作用的两组大鼠肝细胞凋亡率差异有显著性(P<0.05).结论:阻塞性黄疸大鼠肝细胞有bcl-2基因的表达,正常大鼠肝细胞则无表达;在阻塞性黄疸过程中,大鼠肝细胞通过表达bcl-2来抑制胆盐致肝细胞的凋亡作用.
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HBx对肝细胞凋亡的双向调控及机制
近年研究发现HBV基因组中的X基因及其产物X蛋白(HBx)能够对肝细胞的凋亡起双向调控作用,在HBV感染相关疾病的发生发展中起重要作用.一方面,HBx可通过调节Caspases家族成员活性,抑制p53的促凋亡活性,激活Rel家族成员,上调Survivin的表达等途径抑制肝细胞凋亡,导致HCC发生.另一方面,HBx可通过拮抗c-FLIP的抑凋亡作用,抑制p53的抗凋亡活性,调节Bcl-2家族蛋白的表达,上调c-myc及TGF-βl等的表达,直接或间接作用于Fas-FasL,TNF或线粒体死亡途径,增强死亡信号而促进细胞凋亡.总之,HBx可能是通过多途径,多环节和多因子参与的复杂机制对肝细胞的凋亡进行调节.
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5-FU和抗Fas单抗联合治疗结肠癌的体外实验研究
目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)和抗Fas单抗联合治疗结肠癌的效果及其机制.方法:分10 μg/mL 5-FU、抗Fas单抗(CHll)1 μg/mL、5 μg/mL 5-FU+0.5 μg/mL抗Fas单抗及空白对照四组,与SW480细胞共培养.MTT法检测SW480细胞的存活率,TUNEL法检测SW480细胞的凋亡率.免疫细胞化学法检测5-FU和抗Fas单抗处理前后,SW480细胞中Bcl-2的变化.结果:10 μg/mL 5-FU、1 μg/mL抗Fas单抗、5 μg/mL5-FU+0.5μg/mL抗Fas单抗均可抑制细胞生长,且均可诱导细胞凋亡,联合作用组诱导效果明显,其次是5-FU组,抗Fas单抗组诱导效果较差.抗Fas单抗、5-FU均可降低SW480细胞Bcl-2的表达,5-FU与抗Fas单抗对SW480细胞Bcl-2蛋白的表达有协同抑制作用.结论:5-FU和抗Fas单抗对结肠癌细胞具有协同的增生抑制和诱导凋亡作用,其机制可能是协同抑制Bcl-2蛋白的表达.
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莪术油微球释放莪术油对人肝癌SMMC-7721细胞的作用
目的:探讨莪术油微球(CAO-MS)释放出莪术油(CAO)对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用及机制.方法:用MTT法测定CAO及CAO-MS对体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721的生长抑制作用.用FCM测定CAO及CAO-MS对人肝癌细胞周期的影响.用DNA含量测定、Annexin V标记、电镜观察细胞形态检测CAO及CAO-MS对人肝癌细胞的诱导凋亡作用.用免疫细胞化学(ICC)及RT-PCR方法分别检测p21WAF1/CIP1蛋白与mRNA表达水平.结果:CAO与CAO-MS对肝癌细胞的生长抑制作用与药物浓度及作用时间呈一定的依赖关系(P<0.01).药物作用72 h时,CAO与CAO-MS对SMMC-7721的半数抑制浓度(IC50)分别约为50mg/L和100mg/L.50mg/LCAO和100mg/L CAO-MS作用于肝癌细胞72 h后,使G0+G1比例增加,S期及G2+M期比例相对下降,细胞周期阻滞于G0+G1期.DNA含量测定、Annexin V标记、形态学研究结果提示,CAO与CAO-MS均能诱导肝癌细胞的凋亡,CAO的作用优于CAO-MS.ICC和RT-PCR检测结果表明,50 mg/L CAO和100 mg/L CAO-MS作用于肝癌细胞72 h后,均能提高CAO-MS p21WAFI/CIP1蛋白及mRNA表达水平,相同剂量的CAO的作用优于CAO-MS.结论:CAO及CAO-MS对人肝癌细胞SMMC-7721均有显著的抑制增生作用,作用呈剂量依赖性;CAO及CAO-MS能诱导对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,并能使细胞周期阻滞于G0+G1期;CAO及CAO-MS抑制肝癌细胞增生及诱导其凋亡的机制可能与其上调p21WAFI/CIP1基因表达有关.
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三氧化二砷抑制肝癌细胞端粒酶表达及诱导细胞凋亡作用
目的:观察三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株细胞端粒酶表达和细胞生长抑制的影响及诱导细胞凋亡的作用,探讨三氧化二砷的抗肿瘤作用及机制.方法:采用噻唑蓝比色分析法(MTT法),流式细胞分析,原位杂交方法以及TUNEL原位末端标记法观察和检测了不同浓度的三氧化二砷对人肝癌细胞株(SMMC-7721)细胞的增生,细胞DNA含量的分布,细胞端粒酶表达的影响及细胞凋亡的诱导作用.结果:20,5,5 μmol/L三氧化二砷在24,48,72 h时抑制率分别为22.0%,25.7%,32.0%,均能明显抑制人肝癌细胞株细胞的增生(单侧置信区间为10.1,23.7,18.0,P<0.05).流式细胞分析显示加药组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞所占比例增高.随着药物浓度的增加细胞端粒酶的表达下降,而凋亡细胞数增加.结论:三氧化二砷能抑制人肝癌细胞增生,其抑制作用具有时间-计量效应关系,并能抑制肝癌细胞端粒酶的表达及诱导肝癌细胞凋亡.
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BAK基因过表达对胃癌细胞的诱导凋亡作用及其分子机制
目的:探讨转染外源性BAK基因及其过表达对胃癌细胞的诱导凋亡作用和分子机制.方法:构建携带有BAK基因的真核表达载体并转染胃癌MKN-45细胞1-5d后,RT-PCR和Western Blotting法检测BAK基因表达;细胞计数、MTT比色法检测癌细胞生长活性,流式细胞仪分析细胞周期时相改变,透射电镜、末端TdT酶标记技术检测癌细胞凋亡;比色法检测癌细胞内Caspase-3活性改变.结果:转染1-5 d后,癌细胞BAK mRNA和蛋白表达水平显著增强(P<0.01),癌细胞体外生长抑制11.6-35.3%(P<0.01),增生活性抑制10.2-32.4%(P<0.01),细胞周期出现G0/G1期阻滞,部分癌细胞出现胞体缩小、核固缩等凋亡形态学改变,凋亡率为21.4%(P<0.01);癌细胞Caspase-3活性增强4.45倍(P<0.01).结论:转染外源性BAK基因使其过表达能激活Caspase-3,显著诱导胃癌MKN-45细胞凋亡,有望成为胃癌治疗的新途径.
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三氧化二砷诱导人类大肠癌细胞凋亡的分子机制
目的:明确三氧化二砷(As2O3)注射液对人类大肠癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、AO/EB荧光染色法、透射电镜观察、DNA电泳、流式细胞术法及免疫组化等方法,系统地观察了As2O3注射液对体外培养的人类大肠癌细胞株LoVo和CoLo-320的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及其相关基因表达的影响.结果:用不同浓度(0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)As2O3作用LoVo和CoLo-320细胞不同时间(24,48,72 h),均能显著抑制其生长(P<0.05),用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡的形态学和生化学改变,癌细胞Bcl-2基因表达明显下降,Bax和Fas基因表达显著增强(P<0.01).结论:As2O3注射液对人类大肠癌细胞具有显著的诱导凋亡作用,这一作用受到多种基因的调控,即Bcl-2基因表达下调,Bax和Fas基因表达上调.
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GLP-1受体激动剂的昨天、今天和明天
关于GLP-1作用机制的探索减少高糖诱导的β细胞凋亡2015年发表在《天津医药》杂志的一项来自天津医科大学代谢病医院的研究探讨了胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂减少高糖诱导的β细胞凋亡作用的可能机制.研究指出,GLP-1受体激动剂能抑制糖尿病大鼠β细胞的凋亡,抑制NOX2来源的ROS产生可能是重要的潜在机制之一.
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全反式维甲酸诱导胰腺癌细胞凋亡过程中bcl-2/bax和p53表达的变化
目的胰腺癌细胞对一般化疗药物的诱导凋亡作用不敏感.维甲酸类药物对肿瘤的治疗和预防作用在于其可调节肿瘤细胞的生长、分化及凋亡.
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9-顺维A酸对人肺腺癌细胞PG株的细胞周期影响和诱导凋亡作用
已证实维A酸类化合物能调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动[1,2],近的研究表明维A酸类化合物通过与核维A酸受体(RARs)及核维A酸类X受体(RXRs)结合发挥其生物学效应,在已知的维A酸类化合物中,9-顺维A酸(9-cis RA)唯一能与这两类核受体结合 ,因为其生物学活性强于其他维A酸类化合物而倍受瞩目[1-3].本研究旨在观察9 -cis RA对肺癌细胞株PG细胞周期影响和诱导凋亡作用与全反式维A酸(ATRA)的比较,并初步探讨其作用机制,为9-cis RA临床治疗肺癌提供实验依据.
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4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人肺鳞癌细胞株分化和增殖的影响
4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯是人工合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物之一,ATfLA具有抑制多种类型肿瘤细胞的生长、分化及凋亡作用[1-3].本研究选用人肺鳞癌细胞株L78细胞为研究对象,观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人肺鳞癌细胞体外生长特性的影响.
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三氧化二砷对胶原诱导关节炎大鼠及滑膜细胞的作用
类风湿关节炎(RA)是常见的风湿病之一,有研究表明,促进RA的细胞凋亡可能是未来治疗RA的重要方法之一[1].我们意外地观察到,急性早幼粒白血病合并RA的患者应用三氧化二砷(ATO)治疗后,在白血病缓解的同时,RA的关节损害症状也明显减轻.为探索新的有效治疗RA的药物及其作用机制,本研究观察了ATO对胶原诱导关节炎(CIA)大鼠滑膜组织细胞的凋亡作用、细胞因子的改变及ATO体外诱导人RA成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)的凋亡作用及机制.
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三氧化二砷对膀胱癌细胞株BIU-87影响的研究
三氧化二砷(As2O3) 用于白血病的治疗疗效确定,目前亦有诱导实体肿瘤细胞凋亡的报道[1].我们采用免疫组化和流式细胞术观察As2O3对人膀胱癌细胞系BIU-87的诱导凋亡作用.现报告如下.