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关于ELISA若干问题的分析
简要分析了在ELISA榆测技术应用中遇到的空白对照的设立方法、阴性对照的标准、酶标反应板的差异及孵育以及酶标仪的调零与比色、cut-off值的确定、阳性与阴性灰带率、ELISA检测试剂的标准化等一些新问题,重点探讨了ELISA检测技术中传统计算cut-off值的方式所存在的缺陷与形成原因,并提出了适宜的计算cut-off值的方式.
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硒和维生素A梭曼诱导大鼠过氧化损伤的影响
自由基诱发脂质过氧化损伤是导致许多病理改变的重要机制之一,而目前尚未检索到有关硒和维生素A抑制So-man的过氧化损伤报道.目的本文主要探讨Soman对大鼠急性中毒的自由基损伤作用及硒、维生素A的抗氧化作用,并进一步探讨硒和维生素A的抗氧化作用机制.方法雄性大鼠60只,按体重随机分为阴性对照水组(正常对照水组W-)、阳性对照水组(损伤对照水组W+)、阴性对照油组(正常对照油组0-)、阳性对照油组(损伤对照油组0+)、硒组(加Se保护组)和维生素A组(加维生素A保护组).每组10只,实验期10 d.测定指标有血清、大脑、肝脏的维生素E(VE)、总抗氧化力(T-AOC)和一氧化氮合成酶(NOS).
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人工蛇胆致突变性研究
目的研究华中科技大学同济医学院药学系专利产品人工蛇胆的突变性.方法按中华人民共和国卫生部药政局1993年7月公布的<新药(西药)临床前研究指导原则>汇编的要求,参照中华人民共和国国家标准GB15670-1995<农药登记毒理学试验方法>,实验菌株为TA97、TA98、TA100和TA102,由美国Ames实验室提供,经6项性状鉴定合格后投入使用,实验动物系昆明种小鼠,由同济医学院医学实验动物中心提供.Ames试验:以敌克松(Dexon)和2-氨基芴(2-AF)为阳性对照物,以蒸馏水为阴性对照物.由于受试物浓度高于100μg/皿,对试验菌株有抑菌作用,故采用浓度系列为100、50、2.5、和0.5 μg/皿.采用标准平板法,在加S9和不加S9及37℃条件下培养48h,观察结果.
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1-22 室内挥发性有机物对小鼠精子畸形的试验
目的通过小鼠精子畸形试验,探讨室内挥发性有机物对生殖能力的影响,为室内挥发性有机物的特殊毒性提供理论基础.方法空气采样,提取空气中有机物,作为剂量组.清洁级昆明种雄性小白鼠随机分成6组:3个剂量组、阴性对照双蒸水组、阳性对照环磷酰胺组、溶剂对照二甲基亚砜组,进行染毒,5周后检查小鼠精子形态,计算畸形率.结果异常精子形态包括无钩、香蕉形、胖头、无定形.环磷酰胺组小鼠精子畸形率为8.30%、二甲基亚砜组为4.81%、1.01mg/m3剂量组为4.91%、10.1 mg/m3剂量组5.14%、101 mg/m3剂量组5.58%,其中,环磷酰胺组小鼠精子畸形率高于其余各组(P<0.05),其余各组间差异无显著性(P>0.05).结论该浓度的室内挥发性有机物对小鼠精子形态无明显影响.
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1-12 盐酸西替利嗪对鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验
目的检测盐酸西替利嗪对鼠伤寒沙门氏菌的诱变性.方法用鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验标准平皿掺入法,采用TA97、TA98、TA100和TA102组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌,菌株经鉴定合格,在±S9mix条件下测试.盐酸西替利嗪5 000.0μg/皿浓度抑菌,因此,高浓度为1 000.0μg/皿.结果阳性对照敌克松在-S9mix,二氨基芴、1,8-二羟蒽醌在+S9mix条件下,能明显增加测试菌株的回变菌落数,均高于阴性对照的2倍以上,说明测试系统可靠.盐酸西替利嗪0.1、1.0、10.0、100.0和1 000.0μg/皿各浓度对4株测试菌株回变菌落数均未超过阴性对照组2倍.结论盐酸西替利嗪在0.1~1 000.0μg/皿浓度范围内对鼠伤寒沙门氏菌无诱变性.
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盐酸特拉唑嗪对仓鼠肺细胞染色体畸变试验
目的检测抗高血压药盐酸特拉唑嗪的致突变性.方法采用中国仓鼠肺(CHL)细胞体外染色体畸变试验.盐酸特拉唑嗪的大浓度为CHL细胞50%抑制浓度,再依次递减共设4个给药浓度.同时设溶剂、S9混合液阴性对照及阳性对照(丝裂霉素C).试验在±S9混合液条件下,于24及48 h,分别收获细胞做染色体畸变分析.每一试验浓度在油镜下分析100个中期分裂相细胞.结果无论是24及48 h收获细胞,溶剂、S9混合液阴性对照染色体畸变率为0~4%(正常CHL细胞染色体畸变率<5%),盐酸特拉唑嗪17.5、35.0、70.0、140.0μg/ml浓度染色体畸变率为0~3%,与阴性对照比较,差异无显著性(P>0.05).阳性对照染色体畸变率显著增高为81%和82%,与溶剂对照比较,差异有显著性(P<0.01).环磷酰胺无S9混合液染色体畸变率在正常范围(0~2)%,有S9混合液染色体畸变率显著增高为73%和84%,与S9混合液对照比较,差异有显著性(P<0.01),表明本试验系统可靠.结论在本试验系统条件下,盐酸特拉唑嗪在17.5~140.0μg/ml浓度范围内未见诱发CHL细胞染色体畸变率增高.
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2所医院物品与人员手HBsAg及HBV-DNA污染检测
于1998年、1999年的3~5月,对福州地区2所医院口腔门诊物品与人员手进行了HBsAg与HBV-DNA检测.检测时,以浸有磷酸盐缓冲液的无菌棉拭,对物品表面与人员手往返涂抹采样.随后,将棉拭头剪入2 ml磷酸盐缓冲液中.在旋涡混匀器中充分震荡后,离心(4000 r/min)5 min.取离心液,用ELISA法检测HBsAg抗原性.以样液OD值(S)与阴性对照OD值(N)的比值(S/N)>2.1,为HBsAg阳性.以上海医科大学预防医学研究所提供的非放射性分子杂交法检测HBV-DNA,当测定孔位呈现蓝紫色斑点时为HBV-DNA阳性.
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韶关市医疗机构医护人员手微生物污染检测
1998年,对韶关市27所医疗机构医护人员手微生物污染进行了检测.采样时,五指并拢,用浸有采样液的棉拭在手指曲面从指根到指端来回涂擦两次,采样面积约25 cm2.将采样后棉拭头剪入10 ml采样液内.两手分别用2支棉拭采样,一采样液为生理盐水,用于检测细菌总数、沙门菌;另一采样液为含1%小牛血清磷酸盐缓冲液,用ELISA法检测HBsAg抗原性.检测结果,以细菌总数≤5 cfu/cm2(Ⅰ、Ⅱ类场所人员)或≤10 cfu/cm2(Ⅲ类场所者)或≤15 cfu/cm2(Ⅳ类场所者)为合格.沙门菌不得检出.以样本OD值(S)与阴性对照OD值(N)比值(S/N)<2.1,为HBsAg阴性.
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手术前备皮用具H B sAg污染的调查
目前,临床备皮仍常用剃毛法.对其用具HBsAg污染进行了调查.调查时,对刀片、刀架(刀柄)与应用中的肥皂,用沾有采样液(0.01 mol/L磷酸盐缓冲液)的棉拭涂抹采样,对毛刷,在盛有采样液的玻璃平皿中揉搓采样,对应用中的滑石粉,取1 g投入盛有采样液的试管内.用ELISA法检测上述采样液中HBsAg抗原性,以样本检测OD值(S)与阴性对照OD值(N)值的比值(S/N)≥2.1为HBsAg阳性.
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口腔诊疗器械丙型肝炎病毒污染及其消毒效果调查
丙型肝炎主要通过血液传播,而口腔治疗器械常有微量血污染,为此于1997年11~12月用ELISA法对口腔科诊疗器械进行了抗-HCV检测,并对3种消毒方法的效果进行了观察.采样时,用含 1%小牛血清的0.85%氯化钠溶液(BSAS)将棉拭浸湿后,对器械涂抹采样.将采样后棉拭头置于盛有0.5 mlBSAS的试管内,放4℃冰箱待检.ELISA法试剂由上海实业科华生物技术有限公司提供.检测的结果,阴性对照<0.050时按0.050计,阴性对照值×4为边界值(C0),样本检测值(S)与C0的比值(S/C0)≥1.0为抗-HCV阳性.
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广西壮族自治区吸毒人群血清抗-HIV阳性及其与ABO血型关系分析
ABO血型反映不同个体不同内在遗传特性,可影响某些疾病的易感性.为探索抗-HIV与ABO血型分布关系,对2005年广西壮族自治区(广西区)某2所劳教所广西籍在押吸毒人员进行了相关调查.2所劳教所广西籍吸毒人员抗-HIV阳性273例,男性225例,女性48例.血清抗-HIV阴性对照人群与血清抗-HIV阳性者源于同一人群.血检证实抗-HIV阴性共1841人,其中男性1104人,女性737人.抗-HIV检测为ELISA法,初筛阳性送广西区疾病预防控制中心HIV确证实验室确证.ABO血型常规鉴定.
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金标法与酶联免疫法测定抗-HIV的比较
艾滋病成为21世纪重大疾病之一,如何快速及时地筛检出艾滋病毒(HIV)携带者,已成为当务之急.笔者将抗-HIV快速诊断试剂金标法(斑点胶体免疫金层析试验 DIGCA)与酶联免疫(ELISA)法作了对比实验.结果发现,在灵敏度上金标法稍优,在特异性方面,金标法大大优于ELISA.1.材料与方法:抗-HIV ELISA试剂盒(上海科华公司出品,批号2000706;北京金豪有限公司出品,批号20000523);HIV金标试剂条(北京金豪有限公司出品,批号000101).卫生部全国血站系统免疫检验2000年检验室间质量评价质控血清15份(0051~0055,0061~0065,0071~0075);卫生部不定量临床检验中心定值参比血清2份,每毫升2个临检中心单位(2 NCU/ml),每毫升4个临检中心单位(4 NCU/ml),批号分别为006和002;献血员筛选过程中ELISA检测试剂为阳性,经West-Blot确诊为阴性的标本8份.即25份标本中阳性标本12份,阴性标本13份.每份标本均同时采用2种方法检测.金标法取金标试纸条加样区浸于血液中约10 s,肉眼观察,记录阳性出现时间.结果判断以测试条上呈现两条红色线条为阳性,仅呈现1条红色(阴性对照线)为阴性,阴性标本延长观察至30 min.ELISA法按说明书操作,酶标仪双波长检测(检测波长450 nm,参考波长630 nm)A值,以样本吸光度/阳性判断值(S/co)≥1为阳性,S/co<1为阴性[1].
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周氏扶正抗癌合剂对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响(二)
(接上期)2 结果2.1 对正常人胚肾细胞HEK-293的影响由图4、5、6明显可见白英组的细胞南增殖速度比阴性对照略缓,而用扶正合剂刺激的细胞,其增殖速度远远低于阴性对照.
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人眼球后和其它部位成纤维细胞的差异
研究表明,眼球后成纤维细胞活性增强在Graves眼病(Graves ophthalmopathy,GO)的发生中起重要作用。但是成纤维细胞具有多相性,不同部位成纤维细胞在相应部位疾病的发病中所起的作用不同。本文选用人眼球后和腹部皮肤成纤维细胞进行这方面的研究,初步探讨两种成纤维细胞在结构和功能方面的某些差异。 1 材料与方法 眼外肌(部分)及周围结缔组织取自一位22岁因眼外斜视手术的男性病人;腹部皮肤组织块取自一位9岁因脂肪瘤手术的男性儿童,患者均无自身免疫性疾病史。按照Bahn方法,进行原代和传代细胞培养。实验中为防止传代细胞某些功能发生较大变化,仅选用3~10代的细胞。在培养的两种成纤维细胞内(球后和皮肤成纤维细胞浓度各为6×104和4×104个cell/mL),分别加入不同药物,同时设不加药物的阴性对照,每个浓度设3或4个复孔。适时加入3H-TdR,后测定每分钟计数值。
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福辛普利逆转自发性高血压大鼠心肌间质重塑
已证明:血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)家族中多种制剂均可逆转高血压左室肥厚(LVH),其中卡托普利、依那普利、西那普利、培多普利在逆转心肌间质纤维化方面有较好疗效,但未见文献报道Fosinolpril(福辛普利)对高血压心肌间质胶原有逆转作用.为此我们以自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象,依那普利为阳性对照、生理盐水(NS)为阴性对照,观察新药Fosinopril对SHR心脏、血管不良重构及间质胶原的影响.
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影响免疫组化染色结果的几点体会
近年来,国外一些公司推出了即用型抗体,使免疫组化染色变得非常方便和简单.但是,免疫组化染色成功与否,抗原决定簇的暴露是其中一个关键环节,目前常用的抗原修复法有微波、高压和酶消化等方法.用不同的修复方法所导致的结果亦不相同,考虑到抗原修复时内源性生物素对实验结果的影响建议在抗原修复时做阴性对照以排除假阳性结果,否则易影响诊断结果.现将我们的体会报道如下:
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免疫组织化学质量控制(二)
1.6 内部阳性和阴性对照除了要检测阴性对照片和多幺且织蜡块对照片之外,还要注意到待测病例组织理论上为阳性的部分(内部阳性对照)和理论不与-抗反应的部分(内部阴性对照).内部对照所包含的目标抗原不仅位于着重观察的组织上,如肿瘤组织,也存在于周围正常组织成分中.
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nm23-H1、p53蛋白在卵巢良性、交界性及恶性上皮性肿瘤中的表达及临床意义
1 材料与方法收集我院1988~1998年间,临床资料完整、病理诊断明确的卵巢上皮性肿瘤61例(良性35例、交界性5例、恶性2l例).免疫组化采用LSAB法.p53、nm23-H1单克隆抗体及SP试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司(为Santa Cruz公司产品).设立阳性和阴性对照.统计学处理采用x2检验.
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消化道恶性肿瘤患者外周血人类斯钙素1基因表达的检测
一、材料与方法1.材料:69例消化道恶性肿瘤患者均为东南大学附属中大医院普外科和胸心外科2002年9月~2003年7月住院病人,所有病例均经病理确诊.取术前外周血.以消化道恶性肿瘤组织标本为阳性对照,以非肿瘤患者(14例消化道炎症疾病人群)及健康捐献者(15例健康人群和5例妊娠期妇女)外周血为阴性对照.Trizon试剂为加拿大Sangon公司产品;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒及Taq酶等为日本TAKARA公司产品.
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徐州地区乙型肝炎病毒基因型分布及其意义
选择我院门诊和住院病例HBV DNA阳性者共150例,其中无症状携带者、急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化和肝癌各30例.其诊断均符合2000年第十次全国传染病与寄生虫病学会和肝病学分会联合修订的病毒型肝炎防治方案.150例采取静脉血,分离血清,-20℃保存.HBV DNA定量检查用Roche Lightcycler荧光定量扩增仪,试剂由深圳匹基公司提供,以104copy/ml为阳性;HBV-M用上海荣盛公司ELISA试剂;ALT的检验用英国朗道试剂.HBV基因分型方法采用微板核酸杂交-ELISA技术,由广州蓝星公司提供,其所用引物为:prime 1:3′-CCC TTC TTC GTC TGG GGT TCC-5′和prime 2:3′-ACC AAT TTA TGC CTA CAG CCTC-5′.结果判断:P/N≥3.0为阳性,P/N<3.0为阴性(阴性对照A值小于0.05,按0.05计算).P/N值=标本A值/阴性对照A值.质量控制:选择对乙肝病毒DNA的S区序列分析所确定的B、C、D和B+C、C+D基因型病人血清作为阳性对照物,并做重复试验以证实该方法的可靠性和准确性.150例各类HBV DNA阳性乙型肝炎病人基因分型结果见表1.