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热景生物:服务人类健康
黄曲霉毒素是人类食品安全的头号天敌,是食品安全问题的高发源头.它主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食物中;在水中的溶解范围为10mg/L～20mg/L,可大量溶解于氯仿、甲醇、二甲基亚砜等中等极性的有机溶剂中,不溶于己烷、石油醚和乙醚;易被碱或强氧化剂破坏;进入人体后主要经消化道吸收,大部分分布在肝脏、肾脏,少部分分布在血液、肌肉、脂肪组织中,目前医学界已经认定,它是肝癌等肝脏疾病的根源性原因.
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二甲基亚砜的急性毒性评价
二甲基亚砜( Dimethyl sulfoxide,DMSO)常温下为无色、无臭、呈微苦味的透明液体.其热稳定性好,易溶于水、醇、醚、酯,能溶解除烷烃以外的各种极性有机物气体、液体或聚合物,与水、苯有较强的分子缔合作用,是一种强极性的惰性溶剂,被誉为"万能溶剂"[1].
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1-22 室内挥发性有机物对小鼠精子畸形的试验
目的通过小鼠精子畸形试验,探讨室内挥发性有机物对生殖能力的影响,为室内挥发性有机物的特殊毒性提供理论基础.方法空气采样,提取空气中有机物,作为剂量组.清洁级昆明种雄性小白鼠随机分成6组:3个剂量组、阴性对照双蒸水组、阳性对照环磷酰胺组、溶剂对照二甲基亚砜组,进行染毒,5周后检查小鼠精子形态,计算畸形率.结果异常精子形态包括无钩、香蕉形、胖头、无定形.环磷酰胺组小鼠精子畸形率为8.30%、二甲基亚砜组为4.81%、1.01mg/m3剂量组为4.91%、10.1 mg/m3剂量组5.14%、101 mg/m3剂量组5.58%,其中,环磷酰胺组小鼠精子畸形率高于其余各组(P＜0.05),其余各组间差异无显著性(P＞0.05).结论该浓度的室内挥发性有机物对小鼠精子形态无明显影响.
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体外羟自由基测定条件的优化与应用
目的 确定分光光度法体外羟自由基测定的优化条件与实际应用的意义,为羟自由基的体外检测与抗氧化剂的筛选提供检测方法.方法 采用经典的硫酸亚铁(FeSO4)与过氧化氢(H2O2)Fenton反应,以二甲亚砜(DMSO)为羟自由基捕捉剂,对原有的实验方法作了改进;通过试验确定该检测体系的主要影响因素以及适宜的范围.结果 测定条件达大吸收峰,37℃水浴10min、10mmol/L HC1、3.6mmol/L硫酸亚铁、24mmol/L过氧化氢和60mmol/LDMSO,得到了较为合理的实验方案.结论 通过剂量-反应关系、稳定性、重复性和与已知的羟自由基清除剂作用的研究证明该方法具有可行性.
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-80℃冰箱非程控降温冻存脐血造血干细胞
目的:为脐血造血干细胞(CBHSC)的冻存建立简便、经济且有效的方法.方法:采用5%二甲基亚砜(DMSO)加6%羟乙基淀粉(HES)为冷冻保护剂,不用程控降温装置,直接置CBHSC于-80℃冰箱中冻存1-6个月.结果:冻存6月后,单个核细胞(MNC)、粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)和CD34+细胞的回收率及台盼兰拒染率分别为,(91.6±1.8)%、(83.1±15.6)%、(88.2±1.8)%,(77.7±2.0)%.结论:这种简便、经济的方法能很好地保存CBHSC的造血潜能,因此,能为脐血移植冻存CBHSC.
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DMSO增强原核表达TAT-EGFP(Apoptin)穿膜效应的研究
目的:构建pET15b-TAT-EGFP和pET15b-TAT-Apoptin,观察表达的融合蛋白TAT-EGFP在细胞内的定位及TAT-Apoptin的诱导Caski凋亡活性.方法:人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET15b后再连接EGFP和Apoptin基因,组成pET15b-TAT-EGFP(Apoptin)重组子.转化大肠杆菌,1 mM IPTG诱导TAT-EGFP(Apoptin)融合蛋白表达,His亲和层析柱纯化.培养的Caski细胞经过10%DMSO处理1h后,加入融合蛋白孵育1 h,观察TAT-EGFP进人细胞的情况.同时用TUNEL 检测TAT-Apoptin诱导Caski凋亡的情况.结果:成功地构建了高表达pET15b-TAT-EGFP(Apoptin)重组子,纯化了分子质量约为30 KD的融合蛋白TAT-EGFP和17 KD的TAT-Apoptin融合蛋白,并在体外培养的Caski细胞经10%DMSO处理后证实TAT-EGFP融合蛋白穿透生物膜的能力明显增强.结论:通过对TAT-EGFP融合蛋白的表达纯化及活性分析,证实了DMSO能够增强TAT的蛋白转导作用,为肽类及生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供了理论基础.
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二甲基亚砜通过激活caspase-3以及抑制PARP-1引起A549细胞凋亡
目的 检测肺上皮癌细胞A549经二甲基亚砜(DMSO)诱导发生凋亡后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)的活性是否受到抑制.方法 通过MTT法检测caspase-3的活性升高以及TUNEL等方法验证DMSO可引起A549细胞凋亡后,采用Western blot验证PARP-1是否被切割成两个片段.结果 DMSO可诱导A549细胞发生凋亡,凋亡过程中easpase-3的活性上调,其下游底物PARP-1被大量切割成小片段.结论 DMSO诱导的A549细胞凋亡受到caspase-3-PARP-1信号分子的调节.
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地高辛抑制豚鼠心室肌细胞Na+,K+-ATP酶和人胚肾上皮细胞系HERG钾通道电流
强心苷类药对Na+,K+-ATP酶的作用在低浓度时为兴奋、在高浓度时呈抑制作用[1].应用膜片钳技术观察地高辛(Digoxin)对豚鼠心室肌细胞Na+,K+-ATP酶电流(Ip)的作用还未见报道.此外,由于很多药物的心脏不良反应是通过抑制人ether-a-go-go-related基因(HERG)编码的快速激活的延迟整流钾通道(Ikr)而引起QT间期延长和尖端扭转性室速(TdP)[2].本研究初步探讨地高辛对豚鼠心室肌细胞Ip电流和对人胚肾上皮细胞系(human embryonic kidney cell line,HEK-293)上HERG/Iκr钾通道的影响及地高辛治疗心功能不全和引起心脏毒性反应的机制.1材料与方法1.1动物、细胞系、质粒来源及地高辛配制:普通级豚鼠,8～12周龄,体质量250 ～ 300 g,雌雄不拘,由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供[合格证号SCXK(鄂)2004-007].HEK-293细胞,中国科学院上海生科院细胞资源中心.编码Ikr的HERG基因的真核细胞表达载体pcgi-EGFPHERG(南京师范大学生命科学院张朝教授馈赠).地高辛(郑州大学药学院药物化学研究所提供)溶于二甲基亚砜中配制成10 mmol/L的母液.
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应用二甲基亚砜体外诱导P19细胞分化为心肌细胞
目的观察P19细胞经二甲基亚砜(DMSO)诱导及不同培养方法,培养形成细胞聚集体并向心肌分化的过程.方法将P19细胞接种于Petri塑料培养皿或铺有0.5%软琼脂的培养皿中,DMSO诱导悬浮培养7 d形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基黏附培养至19 d.观察细胞跳动情况,用α-sarcomeric actin、cardiac Troponin T(cTnT)抗体进行免疫组织化学染色,鉴定细胞分化.结果经DMSO诱导7d,将形成的细胞聚集体用生长培养基黏附培养至15 d,在聚集体周围的生长晕中出现自发性节律跳动的细胞团片,α-sarcomeric actin及cTnT染色阳性,至19d,阳性率分别可达26%和15%.结论 DMSO诱导结合聚集体形成培养方法可诱导P19细胞向心肌细胞分化,并出现自发性有节律跳动.
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二甲基亚砜诱导小鼠红白血病细胞分化的差异蛋白质组学
目的：利用二甲基亚砜（ DMSO）诱导小鼠红白血病（ MEL）细胞分化，系统地分析和鉴定诱导分化不同时间的差异蛋白质组学。方法 DMSO诱导MEL细胞分化，通过联苯胺染色、MTT比色法和Ter119免疫荧光等实验检测细胞分化的比率和细胞的活力，并利用双向电泳耦联质谱技术，结合生物信息学分析诱导MEL细胞分化过程中差异表达的蛋白质。结果1．2％DMSO诱导MEL细胞分化，分别培养0h、6h、12h、24h、36h、48h、72h、96h、120h，利用双向电泳和质谱分析，共鉴定出87种蛋白质。1．2％ DMSO作用MEL细胞120h后，细胞诱导分化率达到67％。MTT实验显示，1．0％、1．2％、1．4％的DMSO对MEL细胞的活力无明显的抑制作用。结论 DMSO对MEL细胞有诱导分化作用，但无明显地抑制细胞增殖。87种双向电泳差异蛋白质按功能可分为12类，比例大的前3类分别是：占41％的酶类蛋白、15％的结构蛋白、13％的调节蛋白。
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一种用于宽场荧光显微镜下成像的皮肤厚片免疫荧光染色方法
目的 通过改良免疫荧光染色方案,使皮肤厚切片能在宽场荧光显微镜下荧光成像.方法 选择成年雄性SD大鼠5只,经Zamboni固定液灌注固定后取后肢足底皮肤,冷冻切片,片厚40μm,行神经纤维标志物PGP9.5免疫荧光染色.首先比较染色后用梯度甘油溶液透明与不经甘油透明对皮肤厚片成像深度的影响;继之在染色后甘油透明的基础上,检测染色前二甲基亚砜(DMSO)处理不同时间(10min、15min和30min)对皮肤背景信号的影响.此外,采用体视显微镜检测梯度甘油透明对切片形态的影响.后,用上述DMSO-甘油改良染色法进一步对神经纤维其他标志物NF 200和外周蛋白分别进行染色.结果 经染色后甘油透明的切片其成像深度显著大于常规染色的切片(P＜0.01);在甘油透明的基础上,先用DMSO处理能有效降低皮肤背景着色,时间以15min为佳;梯度甘油处理并不会造成皮肤厚片的形态改变;DMSO-甘油改良染色法也能有效显示皮肤NF200和外周蛋白免疫反应阳性的神经纤维.结论 经本改良方法染色的皮肤厚片能在宽场荧光显微镜下良好成像.
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不同冷冻保护剂在羊卵巢整体冻存中的效果比较
目的 应用自制梯度浓度混合-程控降温器官灌注仪,灌注羊完整卵巢,并行程序化冷冻,探讨冻融羊完整卵巢的效果并筛选佳冷冻保护剂组合.方法 将收集的28个羊完整卵巢,随机分配到新鲜对照组(A组)、海藻糖组(B组)、甘油组(C组),二甲基亚砜(DMSO)组(D组).冻融后组织切片行HE染色及原位缺口末端转移酶标记技术(TUNEL)检测,并通过RT-PCR技术检测组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)及冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的mRNA表达.结果 B组正常卵泡形态比率与A组差异无显著性(P＞0.05),C组及D组正常形态卵泡比率显著低于A组,差异有统计学意义(P＜0.05).B、C、D3组冻存组基质细胞密度均低于A组,其中D组低,差异具有统计学意义(P＜0.05).冻存组中,B组TUNEL反应阳性的细胞数目显著少于C组及D组,差异具有统计学意义(P＜0.05),且均显著多于新鲜组.A组及B组bax基因mRNA的表达量明显低于C组及D组(P＜0.05);B组CIRP基因mRNA的表达量明显高于C组及D组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 羊卵巢整体冻存后可较好保存组织学形态,海藻糖组的冷冻保护剂在组织结构保存及抑制细胞凋亡方面优于甘油组及DMSO组.
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3种助溶剂对阿苯达唑和阿苯达唑亚砜体外抗包虫活性的影响
目的 评估二甲基亚砜(DMSO)、吐温80和二者混合溶液等3种助溶剂溶解阿苯达唑(ABZ)和阿苯达唑亚砜(ABZSX)对其体外抗细粒棘球绦虫幼虫作用的影响.方法 采用高效液相色谱法测定吐温80、DMSO及二者混合溶液对阿苯达唑的助溶作用,并比较抗包虫效果.分别将DMSO、吐温80及其混合溶液溶解的ABZ和ABZSX饱和浓度药物溶液加入RPMI 1640培养基中,使DMSO、吐温80及其混合溶液的浓度达到1.0％、0.1％和1.0％+0.1％.用上述含药培养液体外培养细粒棘球蚴原头节和囊泡,并设空白对照组以及适当浓度的助溶剂对照组,隔天观察原头蚴死亡率,周期为10 d；每5d观察囊泡的形态及塌陷率,周期为20 d.结果 各药物作用至第10d和20 d时,联用DMSO及吐温80溶解的ABZ组和ABZSX组原头蚴死亡率及囊泡塌陷率分别为(57.9±6.1)％、(49.32±8.5)％和(58.56±5.34)％、(80.74±1.58)％,均显著高于单用助溶剂组(P＜0.01)；空白对照组和助溶剂组原头蚴死亡率及囊泡塌陷率均低于9％.结论 当药物相同时,DMSO和吐温80混合助溶剂组的抗原头蚴及囊泡作用优于DMSO助溶剂组,DMSO助溶剂组优于吐温80助溶剂组；助溶剂一致时,抗原头蚴效果ABZ组优于ABZSX组,抗囊泡效果ABZSX组优于ABZ组.
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低温保存阴道毛滴虫的实验观察
利用5%、10%、15%、20%、25%、30%浓度的二甲基亚砜和甘油肝浸汤培养液对临床分离的阴道毛滴虫进行4℃保存观察.二甲基亚砜和甘油两实验组适保种浓度分别为15%和10%,50%虫体存活率天数分别为29和27 d,长保存天数分别为31和29 d;而空白对照组仅为5和7 d.结果表明,15%二甲基亚砜或10%甘油肝浸汤培养液4℃冷藏保存阴道毛滴虫可显著延长其保存期.
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二甲基亚砜联合羟乙基淀粉的非程控降温法冻存脐血造血干细胞研究
为了探索有效低温保存脐血造血干/祖细胞的冷冻保护剂和技术,进行了二种方法试验.第一种方法联合使用二甲基亚砜(DMSO)和羟乙基淀粉(HES)(分子量120 000)作为冷冻保护剂并用非程控降温冷冻技术;第二种方法只使用DMSO作为冷冻保护剂并用程控降温仪冷冻技术保存脐血.对二种方法的效果进行比较.结果表明:15份脐血冻存后细胞存活率、CFU-GM回收率,无论在使用非程控降温的第一种方法和使用程控降温仪的第二种方法均无显著性差异.183份脐血质量检测结果及21例临床移植结果也显示两种方法无显著性差异.结论:联合使用DMSO和HES作为冷冻保护剂并用非程控降温冷冻的方法对脐血造血干细胞有良好的保护作用,是一种简单易行、省时省力、适合于脐血造血干细胞库大批量冻存脐血的方法.
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肿瘤坏死因子α诱导胶质瘤细胞凋亡和p38丝裂素活化蛋白激酶表达
一、材料和方法1.材料:胶质瘤细胞C6购自本校全军神经外科研究所.重组人肿瘤坏死因子α(RhTNF-α)购自Sigma公司,按照所需浓度以PBS稀释.噻唑蓝(MTT)购自Amresco公司.二甲基亚砜(DMSO)购自Fluka公司.
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变性乙型肝炎病毒表面s抗原抗体的制备和应用
在新型乙型肝炎基因工程疫苗(s+pre s1,ss1)的研制中,对s抗原的免疫学鉴定至关重要,但我国现有的乙型肝炎病毒表面抗体不能有效地用于蛋白印迹法(Western blot)鉴定变性乙型肝炎病毒表面s抗原.常规的从SDS-PAGE凝胶上回收变性抗原多肽免疫动物,可诱导免疫应答,产生抗体,但从凝胶上回收的变性抗原量很少,无法用来大量制备抗血清;电泳结束后,切下含特异多肽的凝胶条,制成凝胶碎末,或凝胶转至硝基纤维素滤膜,剪下相应部分,溶于二甲基亚砜,再加佐剂免疫动物,整个方法操作步骤多、耗时长、切割相应多肽部位难以掌握精确[1].我们建立了一种新的抗变性乙型肝炎病毒(HBV)s抗原抗血清的制备方法,并把该方法制备的抗血清成功地应用于HBV s抗原的Western blot鉴定工作中.
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贫铀诱发细胞超微结构改变及DMSO的保护作用
目的观察贫铀(DU)对体外培养的人支气管上皮细胞超微结构的影响及二甲基亚砜(DMSO)的保护作用.方法DU作用人支气管上皮细胞(BEAS-2B)24 h后,用荧光染色法检测细胞存活率、坏死率和凋亡率,用透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构改变.结果荧光显微分析表明,DU作用后,存活细胞数明显减少,凋亡和坏死细胞数显著增高,而DMSO对DU诱发的细胞凋亡和坏死有明显的保护作用.TEM显示,正常细胞和DMSO对照细胞整体形态、核质比例、各种细胞器及细胞骨架均结构清晰;DU处理的细胞,无论细胞内、外有无贫铀颗粒,均见细胞不同程度的凋亡或坏死,正常细胞结构改变或消失,特别是细胞内或外有DU颗粒的细胞,膜性细胞器改变明显,其他细胞器也观察到结构不清或空泡化;DMSO+DU组,即使细胞内外有贫铀分布,各种细胞器结构的改变也明显减轻,观察到有些线粒体、内质网等膜性结构发生膨胀,但细胞整体结构仍较清晰.结论DU可诱发细胞凋亡和坏死,并导致细胞超微结构改变,DMSO对DU所致细胞损伤有明显的保护效果.
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改良外周血造血干细胞冷冻保存剂的临床应用
自体外周血造血干细胞移植近年来在国内外得到广泛应用，已成为治疗恶性血液病和多种实体瘤的有效方法。造血干细胞冻存技术的应用，使患者有充裕的时间选择佳预处理方案进行造血干细胞移植，体外保存过程中有效地保证造血干细胞的活力是移植成功的关键，冻存干细胞的效率高低直接影响移植成功率。经典外周血造血干细胞深低温冷冻保护剂多使用10%二甲基亚砜和人血白蛋白，但存在一定风险[1]，我们改良了细胞冻存保护剂对13例患者进行32次自体外周血造血干细胞采集后冷冻保存，取得较好的临床效果，现总结如下。
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二甲基亚砜对酵母多糖诱导大鼠肾损伤的保护作用
目的 研究二甲基亚砜(DMSO)对酵母多糖诱导的大鼠肾脏损伤的保护作用.方法 将清洁级SD大鼠分为4组:SS组、SD组、ZS组及ZD组,每组各30只.ZS组和ZD组大鼠于腹腔注射750 mg/kg酵母多糖以制备肾损伤模型,SS组和SD组大鼠仅予以假手术操作.而后SD组与ZD组大鼠于1h后皮下注射3ml/kg DMSO,SS组与ZS组予以等剂量生理盐水.于造模后4、8、24h分批处死大鼠,每批10只.采用激光多普勒血流仪测定各时间点肾血流量,并抽取腹主动脉血检测肌酐水平,取肾组织测定其含水率、丙二醛(MDA)及髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 造模后4、8、24 h,与SS组和SD组比较,ZS和ZD组肾血流量显著降低,肾组织含水率、MDA含量、MPO活性及血肌酐含量均显著升高(P均＜0.05).且与ZS组比较,ZD组造模后4、8、24 h肾血流量明显升高[(119±13) BPU vs.(156±22) BPU;(103土11)BPU vs.(121±12)BPU;(87土11) BPU vs.(108±11) BPU],肾MDA含量显著降低[(6.2±0.6) nmol/mgPro vs.(5.3±0.4) nmol/mgPro;(9.1±0.9) nmol/mgPro vs.(5.6±0.5) nmol/mgPro;(10.7土1.0) nmol/mgPro vs.(6.7±0.6) nmol/mgPro].而ZD组肾含水率仅在8、24 h时[(75.7土2.2)％vs.(72.4±2.7)％;(79.2±2.3)％vs.(74.9±2.2)％],血肌酐含量仅在24 h时[(61.4±8.6)U/L vs.(36.5±6.7)U/L]较ZS组显著降低(P均＜0.05).但两组大鼠肾MPO活性在各时间点比较,差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 DMSO对酵母多糖引起的肾缺血和氧自由基损伤有显著的保护作用.
