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DMSO增强原核表达TAT-EGFP(Apoptin)穿膜效应的研究
目的:构建pET15b-TAT-EGFP和pET15b-TAT-Apoptin,观察表达的融合蛋白TAT-EGFP在细胞内的定位及TAT-Apoptin的诱导Caski凋亡活性.方法:人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET15b后再连接EGFP和Apoptin基因,组成pET15b-TAT-EGFP(Apoptin)重组子.转化大肠杆菌,1 mM IPTG诱导TAT-EGFP(Apoptin)融合蛋白表达,His亲和层析柱纯化.培养的Caski细胞经过10%DMSO处理1h后,加入融合蛋白孵育1 h,观察TAT-EGFP进人细胞的情况.同时用TUNEL 检测TAT-Apoptin诱导Caski凋亡的情况.结果:成功地构建了高表达pET15b-TAT-EGFP(Apoptin)重组子,纯化了分子质量约为30 KD的融合蛋白TAT-EGFP和17 KD的TAT-Apoptin融合蛋白,并在体外培养的Caski细胞经10%DMSO处理后证实TAT-EGFP融合蛋白穿透生物膜的能力明显增强.结论:通过对TAT-EGFP融合蛋白的表达纯化及活性分析,证实了DMSO能够增强TAT的蛋白转导作用,为肽类及生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供了理论基础.
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2型重组腺相关病毒体外转导培养细胞的研究
为揭示2型重组腺相关病毒感染哺乳动物细胞的一些转导特征,构建并制备了一种携带萤火虫荧光素酶基因的重组2型腺相关病毒rAAV2-Luc,研究了该重组病毒体外转导哺乳动物细胞的量效关系;肝素对转导的拮抗作用;rAAV2的竞争抑制作用;丁酸钠对表达水平的增强作用.结果显示,在一定范围内,随着rAAV2-Luc感染细胞的感染复数(MOI即每个细胞感染的病毒基因组数)值增高,荧光素酶的表达水平也增高;但更高的MOI(＞107)反而使荧光素酶的表达水平下降.肝素可特异性阻断rAAV2介导的荧光素酶表达.携带不同基因的2种rAAV2病毒相互具有明显的竞争抑制作用.丁酸钠可显著增强rAAV2介导的荧光素酶表达水平.本研究对rAAV2载体介导的基因转移研究具有一定的指导意义.
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重组腺相关病毒转导外源基因入EB病毒转化的B淋巴细胞获长期表达
目的采用重组腺相关病毒(AAV)载体pAGX(+),把6A8 α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞,以获得正义或反义6A8 DNA长期表达的B淋巴细胞株. 方法构建含正义或反义6A8 DNA片段的重组pAGX(+)质粒.经包装后转导淋巴细胞,经G418筛选,用有限稀释法克隆转导成功的淋巴细胞.Northern杂交和RT-PCR检测转导基因的mRNA表达水平.Con A结合试验检测细胞在转导基因后6A8 α-甘露糖苷酶活性的改变. 结果 pAGX-反义6A8 DNA及pAGX-正义6A8 DNA经包装获得了高复制滴度的重组AAV(rAAV)颗粒,藉助rAAV成功地把6A8基因转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB.Northern杂交结果显示,转导的正义或反义6A8 DNA获得表达.经1年余传代培养,RT-PCR检测见BJAB和SKW6细胞中转导的正义或反义6A8 DNA的mRNA表达增加,新霉素抗性基因(neoR)也获得表达,表明转导基因获得了长期表达.Con A结合强度在转导反义6A8 DNA的细胞升高,提示转导反义6A8 DNA可影响6A8 α-甘露糖苷酶的表达. 结论用AAV载体成功地把6A8 α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB,转导的基因获得长期表达,并干扰6A8 α-甘露糖苷酶的表达.
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胰腺癌正反义K-ras基因片段的分离和定向克隆
目的分离及克隆胰腺癌基因组中K-ras基因片段,构建重组正反义K-ras基因逆转录病毒载体并探讨其临床意义.方法设计两对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamH1和EcoR1位点,以胰腺癌细胞基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子4B及侧翼序列,并采用重组DNA技术将目的基因分别定向插入逆转录病毒载体LZRSpBMN-Z中.重组克隆通过菌液PCR和重组质粒限制性内切酶酶切鉴定.结果正反义K-ras基因外显子4B及侧翼序列成功地克隆入LZRSpBMN-Z中.结论LZRSpBMN-Z是胰腺癌反义基因治疗中新型候选载体之一.应用PCR方法获取反义K-ras基因方便可行,可用于重组反义K-ras基因逆转录病毒载体的构建.
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前药转换酶/前药体系的研究进展
前药转换酶/前药体系是自杀基因疗法的核心,关系到自杀基因疗法的成败,近年来得到深入研究.就前药转换酶/前药体系的种类、作用机制和体外、体内实验结果等进行一综述.
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机械通气肺损伤的发生机制
机械通气肺损伤(ventilator-induced lung ingjury,VILI)的发生机制目前还不十分清楚,国内外学者已在病理生理学、细胞生物学及分子生物学方面进行了广泛深入的研究,并取得了一定的进展.
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针刺对缺血性神经元凋亡信号转导的影响
缺血性脑血管病是目前严重危害人类健康的疾病.缺血中心区发生的神经元损伤主要表现为坏死形式,而边缘区或半暗带的神经元损伤则启动凋亡机制.神经元处于众多细胞构成的信号传递网络之中
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不同基因载体转导人骨髓间充质干细胞比较
目的 比较腺病毒载体、腺相关病毒载体、杆状病毒载体和质粒载体对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)的转导效率.方法 体外原代培养hBMSCs,进行腺病毒载体、腺相关病毒载体、杆状病毒载体和质粒载体转染实验.采用倒置荧光显微镜及流式细胞仪检测经基因载体转染后的hBMSCs胞内目的 蛋白表达情况.结果 倒置荧光显微镜观察结果显示,基因载体转染后的部分hBMSCs胞内有GFP表达而发绿色荧光,其中杆状病毒转导的hBMSCs荧光强度较强.流式细胞仪检测结果表明,腺病毒载体、腺相关病毒载体及质粒载体的转导效率和绿色荧光蛋白阳性细胞平均荧光强度分别是42%,37%,22%和158,115,77,均明显低于杆状病毒的70%(P＜0.01)和212(P＜0.05).结论 杆状病毒载体对hBMSCs的转导效率高于腺病毒载体、腺相关病毒载体和质粒载体,有望成为人体基因治疗研究中更为理想的基因载体.
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利用腺病毒提高腺相关病毒对肿瘤细胞的转导效率
目的 探讨小量腺病毒作为辅助病毒能否增强腺相关病毒(AAV)对肿瘤细胞和裸鼠肿瘤模型的转导效率并对增强的机理进行初步探讨.方法 采用绿色荧光蛋白(EGFP)标记的AAV2联合不同滴度的非复制型腺病毒(Ad-null)感染人非小细胞肺癌细胞系(AAV2+Ad-null组),并以相同剂量的AAV2单独感染(AAV2组)作为对照.用荧光显微镜观察EGFP阳性细胞,流式细胞仪检测EGFP阳性细胞的百分率和单个细胞平均荧光强度,Western印迹检测EGFP蛋白表达的变化以比较各组病毒转导效率.换用萤光素酶(Luc)标记的AAV2,通过Luc检测系统检测两组对体外肿瘤细胞及裸鼠肿瘤模型的转导效率.荧光定量PCR检测感染后肿瘤细胞DNA及mRNA的EGFP相对拷贝数,观察Ad-null对AAV2复制及转录的影响.结果 随着Ad-null滴度的增加,AAV2+Ad-null组的肿瘤细胞EGFP阳性细胞数明显增加.流式细胞仪计数的EGFP阳性细胞率按0.01、0.1、1、10 MOI Ad-null滴度依次为10.9%,18.0%,36.2%,55.2%,明显高于AAV2组(6.4%).AAV2+10 MOI Ad-null组单个细胞的荧光强度约为AAV2组的1.32倍.各AAV2+Ad-null组EGFP在细胞中的蛋白表达水平也均高于AAV2组.体外、体内Luc检测均显示Ad-null显著增强AAV2对肿瘤的转导效率,荧光素信号分别为AAV2单独感染的28和4.5倍.Ad-null可提高肿瘤细胞内AAV2的mRNA水平,当Ad-null滴度为1、10 MOI时AAV2+Ad-null组的EGFP拷贝数明显高于AAV2组,而Ad-null对细胞内AAV2的DNA影响不大,AAV2+Ad-null组与AAV2组的EGFP拷贝数差别不大.结论 联合使用少量腺病毒可明显提高AAV对肿瘤细胞的转导效率,可能与其提高AAV转录水平有关,为今后应用AAV作为肿瘤基因治疗的载体提供了实验证据.
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间充质干细胞介导"酶-前药基因"CYP1A2靶向抗肿瘤效应研究
目的 将人细胞色素P450 1A2(CYP1A2)基因转染骨髓间充质干细胞(BMSC),检测转基因BMSC协同化疗前药达卡巴嗪(DTIC)对人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞的靶向促凋亡作用,为以间充质干细胞为载体的"基因介导的酶-前药双靶向抗肿瘤策略"提供体外实验依据.方法 从人肝细胞中克隆CYP1A2基因,构建真核表达载体,分离、鉴定并培养BMSC,脂质体法将CYP1A2基因导入BMSC和Raji细胞中,RT-PCR和Westem blot法检测CYP1A2基因的表达,Transwell法检测BMSC的肿瘤靶向性,MTT法检测转基因Raji细胞对DTIC敏感性的改变,Annexin V/PI染色标记法检测转基因BMSC联合DTIC诱导Raji细胞凋亡的作用.结果 成功克隆CYP1A2基因并将构建的真核表达载体转染BMSC和Raji细胞,流式细胞术检测体外诱导分化结果符合BMSC特性,RT-PCR和Westernblot检测到转基因细胞中CYP1A2表达,Transwell迁移实验证实BMSC有肿瘤趋向性,MTT法检测显示DTIC呈剂量依赖性抑制转CYP1A2基因的Raji细胞生长,而转CYP1A2基因的BMSC细胞对DTIC相对耐受(IC50值分别为1.67 mmol/L和7.53 mmol/L,P＜0.01).Armexin V/PI染色法显示CYP1A2能够使细胞在体外代谢DTIC,产生细胞毒效应使肿瘤细胞凋亡,而且具有旁观者效应.结论 CYP1A2可使细胞在体外代谢DTIC产生细胞毒效应.以BMSC为载体的CYP1A2-DTIC酶-前药系统可发挥双靶向抗肿瘤作用,在体外诱导人恶性淋巴瘤细胞凋亡.
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TGF-β信号转导与肿瘤
转化生长因子β(transforming growth factors-β,TGF-β)是一类多功能的多肽类生长因子,主要包括TGF-βs、激活素(activin)/抑制素(inhibins)、骨形态形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)等三大类40多个成员,其中研究较多的是TGF-βs,包括TGF-βl至TGF-β5.近年来,大量文献报道TGF-β信号传导通路的异常与肿瘤的发生、发展、转移等密切相关,现就TGF-β信号传导通路中主要成分与肿瘤的关系做如下综述.
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血红素加氧酶-1蛋白转导对脓毒症大鼠急性肺损伤的影响
目的 评价血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白转导对脓毒症大鼠急性肺损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠18只,7～9周龄,体重210～260 g,采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)和融合蛋白PEP-1-HO-1转导组(HO组).Sep组和HO组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型.HO组于术前1h和术后5h分别经左侧髂静脉注射PEP-1-HO-1融合蛋白0.6 mg;Sham组和Sep组于相应时点给予等容量生理盐水.于术后12h时,右侧颈总动脉采集血样,采用ELISA法测定血清TNF-α和IL-6的浓度;然后处死大鼠取肺组织,光镜下观察病理学结果,测定肺组织湿重/干重(W/D)比值,采用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量.结果 与Sham组比较,Sep组和HO组肺组织W/D比值和MDA含量升高,血清TNF-α和IL-6的浓度升高(P＜0.05),肺组织病理学损伤加重;与Sep组比较,HO组肺组织W/D比值和MDA含量降低,血清TNF-α和IL-6的浓度降低(P＜0.05),肺组织病理学损伤减轻.结论 HO-1蛋白转导可减轻脓毒症大鼠急性肺损伤,其机制可能与抑制肺组织脂质过氧化反应和全身炎性反应有关.
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白细胞介素3基因cDNA克隆与转导及其在脐血CD34+细胞中的表达
背景:单份脐血难以满足成人造血干细胞移植的要求,需对其进行体外扩增,这不仅需要较长的时间和较高的培养条件,而且容易导致干细胞自身分化,从而影响移植效果.目的:克隆人白细胞介素3基因cDNA,构建其真核表达载体并转导脐血CD34+细胞,观察白细胞介素3的表达情况.设计、时间及地点:细胞一基因组学体外实验,于2008年在承德医学院完成.材料:健康成人外周血由承德市中心血站提供,脐血由承德市妇幼保健院提供,提供者对实验均知情同意.方法:采集健康成人外周血,应用Ficoll密度梯度法分离单个核细胞,免疫磁珠法分离脐血CD34+细胞.提取白细胞介素3 mRNA,应用RT-PCT扩增白细胞介素3 cDNA,构建真核表达载体pcDNA3/IL-3.设立2组:实验组利用基因枪技术将pcDNA3/IL-3导入脐血CD34+细胞中,对照组未行转染.主要观察指标:采用人白细胞介素3 ELISA试剂盒检测脐血CD34+细胞上清液中白细胞介素3水平.结果:扩增的白细胞介素3基因cDNA理论上应为616 bp,实际PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,紫外线下可见预期大小的条带,反转录合成的cDNA完整.BamH Ⅰ和XbaⅠ双酶切后,电泳可见616 bp的插入片段,与白细胞介素3基因序列相同.转染第1～7天,实验组脐血CD34+细胞上清液中白细胞介素3水平明显高于未转染对照组(t=3.46,P<0.05).结论:白细胞介素3基因cDNA克隆成功,并成功构建了真核表达质粒pcDNA3/IL-3,pcDNA3/IL-3能在脐血CD34+细胞中短期有效表达.
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慢性心力衰竭大鼠心功能与心肌肌浆网Ca2+-ATP酶基因转导的关系
目的:研究腺相关病毒为载体的心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(sarcoplasmic reticulum Ca2+ATPase,SERCA2a)基因转导能否改善慢性心力衰竭大鼠的心脏功能.方法:本实验选用SD大鼠100只,将100只大鼠按随机数字法分为2组:对照组20只和心力衰竭组80只.心力衰竭组大鼠行腹主动脉缩窄术,术后存活心力衰竭大鼠59只,按随机数字法分为:心力衰竭10 d组9只,心力衰竭+绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)10 d组10只,心力衰竭+肌浆网钙ATP酶(sarcoplasmic reticulum calcum-ATPase,SERCA2a)10 d组10只;心力衰竭30d组10只,心力衰竭+EGFP 30 d组10只,心力衰竭+SERCA2a 30 d组10只.这些心力衰竭大鼠均接受经腹心包腔内注射术.采用经腹心包腔内注射术分别将生理盐水、携带EGFP基因的重组腺相关病毒和携带SERCA2a基因重组腺相关病毒导入心力衰竭组、心力衰竭+EGFP组和心力衰竭+SERCA2a组大鼠心包腔内.基因导入后10 d和30 d比较各组的血流动力学指标.结果:心力衰竭+SERCA2a 10 d组(n=10)大鼠基因转导后血流动力学指标明显优于心力衰竭10 d组(n=9)(P<0.05);但左室舒张末压和左室内压大上升速率未达到对照10 d组大鼠心功能水平(P<0.05).SERCA2a基因转导30 d心脏功能进一步改善(P<0.05),血流动力学各项指标和对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05).在荧光显微镜下,心力衰竭+EGFP组大鼠心肌冷冻切片见弥漫绿色荧光.结论:以腺相关病毒为载体,SERCA2a基因转导能够改善慢性心力衰竭大鼠的心脏收缩和舒张功能;经腹心包腔内注射法是一种简单、安全、经济、有效的基因转导方法.
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携带人胰岛素样生长因子Ⅰ基因的重组腺病毒体外转导培养关节软骨细胞
目的:胰岛素样生长因子Ⅰ通常被认为是软骨生长和稳定中关键的生长因子之一,可以促进软骨细胞合成Ⅱ型胶原和蛋白多糖.应用携带人胰岛素样生长因子Ⅰ基因的重组腺病毒(Adenovirus-human insulin like growth factor-Ⅰ transgene construct,Ad-hIGF-Ⅰ)体外转导培养关节软骨细胞,探讨其在体外促进软骨细胞外基质成分生成的能力.方法:实验于2005-01/2007-04在大连医科大学附属四院骨科实验室完成.分离培养3周龄兔膝关节及股骨头软骨细胞,将受测细胞随机分为转导组与未转导组,以500感染复数的Ad-hlGF-I转导第1代软骨细胞,转导组中的第1,3,5,7代细胞分别为转导后48 h,3周,7周和9周的软骨细胞.采用样本碱水解法、阿利新蓝法和酶联免疫吸附方法检测转导组和未转导组的第1,3,5,7代细胞羟脯氨酸、糖胺多糖、胰岛素样生长因子I蛋白浓度.结果:①倒置显微镜观察,转导组兔关节软骨细胞生长增殖稳定,至第7代仍旧以三角形、梭形及纺锤形细胞为主,偶见长梭形和树根形细胞,且轮廓清晰,透亮度大,折光性强;而末转导组细胞培养至第4代时即己出现长梭形细胞,自第5代细胞形态几乎全部变成长梭形.②随着培养时间延长和传代次数增加,软骨细胞上清液中胰岛素样生长因子I蛋白、羟脯氨酸和糖胺多糖浓度的逐渐降低,转导组软骨细胞均高于同代未转导组细胞(P<0.05).结论:携带人胰岛素样生长因子I基因的重组腺病毒体外转导的关节软骨细胞,可以稳定产生内源性的胰岛素样生长因子I,并进而促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原和蛋白多糖.
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慢病毒载体的构建及优化
目的:针对慢病毒载体的基因组装、转导及基因表达的优化论述,及不同种属的慢病毒载体的低活性加以说明,同时对慢病毒遗传体系的产生、转导效率和生物安全性进行总结.资料来源:应用计算机检索Pubmed以及美国SCI和Medline数据库2000-01/2004-12有关慢病毒载体的论文,检索词"lentivirus vectors,immunodeficiency",并限定文章语言种类为English.同时应用计算机检索中国期刊网数据库1995-01/2005-12有关慢病毒载体构建的文章,限定文章语言种类为汉语,检索词"慢病毒载体".资料选择:对检索到的相关信息及文章进行整理,选取针对性强的文章.纳入标准:①临床研究性文章.②基础研究文章.排除标准:①其他病毒载体的结构文献以及重复性资料.②诸多病毒实验应用性文献.③重复同一研究.资料提炼:共收集到198篇关于慢病毒结构原理的相关文献,其中包括英文文献150篇,中文文献48篇,有21篇符合纳入标准.资料综合:介绍不同源慢病毒载体的构建和慢病毒的基因位点.影响基因转移的一个主要因素是细胞的基因表达.人类转基因载体的一个重要特点是可以调节转基因的表达.调节转基因信号的另一个途径是运用可切割的前病毒产物.转基因载体是建立在逆转录病毒之上,主要包括肿瘤逆转录病毒和慢病毒,这些病毒载体系统是哺乳动物细胞外源基因传递、整合和表达的有效途径.结论:蛋白酶、rev.慢病毒蛋白和VSV/G糖蛋白均具有细胞毒性和抑制细胞的作用,当连续表达时要求使用诱导表达系统.
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基因芯片技术分析骨髓间充质干细胞神经分化中Wnt信号通路的激活
背景：通过对骨髓间充质干细胞诱导向神经元样分化的 Wnt 信号调控机制进行研究，为骨髓间充质干细胞在脊髓损伤及组织工程中的应用打下基础。
目的：应用基因芯片技术测试人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化过程中相关基因的表达变化。方法：分离和纯化人骨髓间充质干细胞，选取第5代细胞，基于GatewayTM载体构建技术构建慢病毒载体，将Wnt-1转导至人骨髓间充质干细胞。设置3个实验组，分别为对照组、未转导组以及转导组，诱导人骨髓间充质干细胞神经分化，扫描电镜下观察细胞形态，应用基因芯片检测 Wnt 信号通路基因的调控变化及差异表达。
结果与结论：①扫描电镜下发现：转导 Wnt-1并诱导分化的细胞具有神经元样细胞的形态。②基因芯片杂交技术检测发现：3287个基因上调，4215个基因下调，与神经系统发育和分化相关基因有上调和下调的变化。③从中挑选了相关基因验证，表明转导Wnt-1后细胞内Wnt通路激活，下游基因转录，促进人骨髓间充质干细胞的神经分化。 -
无瘢痕愈合中核糖体蛋白s29基因表达产物对皮肤成纤维细胞增生的作用
目的:探讨核糖体蛋白s29基因(RPs29 gene)表达产物对皮肤成纤维细胞增生的作用.方法:采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)方法筛选并克隆鼠胚皮肤特异表达的RPs29基因cDNA片段.应用PCR技术扩增RPs29基因ORF全长,构建真核重组表达载体pcDNA3.1/Rps29,体外转染成鼠皮肤成纤维细胞,观察细胞形态结构改变,免疫组织化学方法、RT-PCR分析外源基因表达情况.结果:RPs29基因在成纤维细胞中表达,细胞增生能力降低,凋亡加剧.结论:核糖体蛋白s29基因表达产物能抑制成纤维细胞增生,促进细胞凋亡,为无瘢痕愈合的研究提供实验材料及实验依据.
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骨髓基质细胞条件培养液通过p38信号转导通路诱导中脑神经干细胞分化
目的:骨髓基质细胞条件培养液能够诱导中脑神经干细胞分化为高比例神经元,但具体机制尚不十分清楚.选择p38信号转导通路作为观察切入点,剖析其在诱导分化途径中所扮演的角色.方法:实验于2006-04/2007-03在河北省脑老化与认知神经科学实验室完成.①实验方法:将SD大鼠麻醉后处死,分离股骨和胫骨,冲洗骨髓腔,将洗出的细胞悬液离心,悬浮后接种,培养48 h后弃去末贴壁细胞,更换新的培养基,6 d左右可进行传代,约铺满85%瓶底后弃去培养液,更换为含2%B27的Neurobasal培养液,24 h后经过离心的上清液即为骨髓基质细胞条件培养液.取新生SD大鼠中脑,机械分散成单细胞后离心弃上清,加入培养液分散过滤,接种时加入含2%B27的DMEM/F12培养基和20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子,7 d左右的单个神经干细胞便可增殖形成球体.将第2～3代神经干细胞球种植于预先包被多聚赖氨酸的培养皿中,贴壁后更换培养液.设立对照组和抑制剂组,均加入骨髓基质细胞条件培养液,此外抑制剂组还加入p38信号转导通路抑制剂SB203580至终浓度4 μmol/L.②实验评估:第7天进行免疫细胞化学染色,检测表达微管相关蛋白2的神经元与表达胶质原纤维酸性蛋白的星形胶质细胞在分化细胞中所占的比例.结果:①神经干细胞分化过程中的形态学变化及p38信号转导通路抑制剂的影响:加入抑制剂后24 h,光镜下可见神经干细胞长出的细胞有两种类型:一类细胞体积较小,边缘整齐,立体感强,周围有光晕并在两极有突起,免疫荧光染色显示这类细胞微管相关蛋白2呈阳性表达,即为神经元;另一类细胞突起较粗大,不规则,多聚集在神经干细胞球的中央,呈放射状排列,免疫荧光染色表明这类细胞为胶质原纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞.②神经元及星形胶质细胞在分化细胞中所占的比例:p38信号转导通路抑制剂作用于神经干细胞7 d时,从神经干细胞分化成神经元的比例明显低于对照组(P＜0.01),分化成星形胶质细胞的比例明显高于对照组(P＜0.05).结论:骨髓基质细胞条件培养液在促进神经干细胞分化为神经元的同时,能够抑制其分化为星形胶质细胞,提示骨髓基质细胞分泌的可溶性分子可能是通过p38信号转导通路起作用的.
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检测整合素αvβ3评估瘤细胞对腺病毒载体的易感性
目的:通过检测肿瘤细胞整合素αvβ3的表达,评估对腺病毒的易感性.方法:应用免疫组织化学法及原位杂交法,检测肿瘤细胞整合素αvβ3的表达.同时用携带LacZ的腺病毒载体(AdCMVLacZ)感染这些肿瘤细胞,通过X-gal染色,计算其转导率.结果:不同的细胞系中腺病毒的转导率不同.整合素αvβ3及其mRNA在A549 及M21细胞内表达较多,在Hela及M21-L细胞无表达.整合素αvβ3表达高的瘤细胞,其腺病毒转导率也高.结论:瘤细胞的整合素αvβ3水平与腺病毒转导率有关,可用于评估肿瘤细胞对腺病毒载体的易感性.
