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二甲基亚砜诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的研究
目的:研究二甲基亚砜(DMSO)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用.方法:用不同浓度的DMSO处理体外培养的人肝癌细胞BEL-7402,应用普通光镜、荧光显微镜、MTT分析方法和流式细胞技术(FCM)检测肝癌细胞凋亡的形态学变化、细胞存活率、凋亡百分率和细胞周期分布的变化.结果:DMSO诱导BEL-7402细胞核DNA凝缩和核片段化,后形成凋亡小体;随着DMSO浓度的增加和处理时间的延长,细胞存活率明显下降,其IC50为1.9%;2%的DMSO处理细胞12 h,凋亡率达17.21%,同时S期细胞明显增加, G2-M期细胞明显下降.结论:DMSO可诱导人肝癌细胞凋亡,并使细胞受阻于S期而进入凋亡程序.
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二甲基亚砜和1,2-丙二醇对深低温保存兔颈总动脉平滑肌细胞的影响
①目的用二甲基亚砜(Me2SO)和1,2-丙二醇(PROH)深低温保存兔颈总动脉,评价两种保护剂对深低温保存复温后血管平滑肌细胞再生能力和超微结构的影响.②方法将兔颈总动脉用含有1.5 mol/L的Me2SO或1.5 mol/L PROH的低温保护剂深低温保存,并在冰袋中缓慢复温,新鲜血管作为对照.复温后和新鲜血管的平滑肌细胞进行体外培养,观察平滑肌细胞的再生能力;同时在透射电镜下观察平滑肌细胞的超微结构.③结果体外培养结果显示,新鲜血管的平滑肌细胞体外培养24 h后开始生长,PROH保存血管的平滑肌细胞在培养24～36 h后开始生长;Me2SO保存血管的平滑肌细胞体外培养36～48 h开始生长,而且再生细胞的数目显著少于前者,生长速度慢.透射电镜下,与新鲜血管的平滑肌细胞相比,PROH或Me2SO冷冻保存后血管的平滑肌细胞的线粒体等细胞器均无显著变化.但是Me2SO保存血管的平滑肌细胞核染色质的电子密度发生显著变化,异染色质的电子密度明显降低,与新鲜或PROH深低温保存血管平滑肌细胞核常染色质的低电子密度和异染色质的高电子密度明显不同.④结论 1.5 mol/L PROH能够有效地保持平滑肌细胞的活性,并且对细胞的再生能力没有明显的损伤作用.Me2SO损伤平滑肌细胞的再生能力,同时引起平滑肌细胞核染色质超微结构的变化.
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二甲亚砜与第二信使效应剂对深低温冻存血小板膜CD42b、CD62p表达的影响
①目的观察体积分数0.02二甲亚砜(DMSO)联合第二信使效应剂(ThromboSol,TS)在-196 ℃时对浓缩血小板膜CD42b、CD62p表达的影响,并了解体积分数0.02 DMSO+TS对浓缩血小板的长期(6个月)保存效果.②方法分别应用体积分数0.02 DMSO、体积分数0.06 DMSO、体积分数0.02 DMSO+TS作为冻存液-196 ℃冷冻保存浓缩血小板,并在冻存后1、3及6个月时分别取出复温,流式细胞仪检查血小板膜CD42b、CD62p表达水平.③结果冻存后1、3及6个月,体积分数0.02 DMSO+TS组与体积分数0.06 DMSO组血小板CD42b的表达水平差异无显著性(F=3.13～5.01,q=1.12～1.76,P＞0.05),两者均高于体积分数0.02 DMSO组(q=3.17～4.06,P＜0.05);但与新鲜组相比,3组冷冻保存血小板CD42b表达水平均有所下降(q=3.09～4.15,P＜0.05).体积分数0.02 DMSO+TS组CD62p的表达水平低于体积分数0.06 DMSO组和体积分数0.02 DMSO组,差异有显著性(F=5.75～9.77,q=3.20～4.34,P＜0.05),后两组差异无统计学意义(q=1.55～2.02,P＞0.05);与新鲜组相比,3组均明显升高,差异有显著性(q=4.85～7.35,P＜0.01).④结论第二信使效应剂的应用降低了DMSO的使用浓度,在抑制血小板的体外激活方面,体积分数0.02 DMSO+TS的效果优于体积分数0.06 DMSO,且长期(6个月)保存效果稳定.
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兔卵巢组织玻璃化冷冻过程中三种保护剂应用效果比较
目的 比较卵巢组织玻璃化冷冻再移植中三种保护剂的应用效果.方法 16只成年雌兔,随机分为A、B、C、D组,各4只.A组兔获取卵巢组织后立即行成年兔颈部皮下无血管吻合卵巢组织移植.B、C、D组大鼠获取卵巢组织后进行玻璃化冷冻,冻融后颈部皮下自体移植,分别用乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)和EG+ DMSO作为冷冻过程中的保护剂组.结果 A、B、C、D组移植后分别有4、3、3、3只进入发情期.四组兔血清E2水平均出现先抑后扬的动态变化,术后迅速下降,3～5周呈现出上升的趋势,其中,B组与D组在第4周开始上升,始终维持在较高水平.均可见移植物体积增大,内含有不同发育阶段的卵泡,卵泡结构正常,但C组移植物内卵泡数量略少于A组.结论 玻璃化冻存再移植中采用EG或EG+ DMSO作为冷冻保护剂效果较单用EG或DMSO佳.
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一种滤膜的致突变性研究
中空纤维超滤膜现已广泛用于国内净水机中,它主要由聚砜组成,既在分子主链中含有砜基及芳核的高分子化合物,有双酚A与氢氧化钠在二甲基亚砜溶液中反应,首先生成双酚A的钠盐,然后再和4.4二苯砜缩聚而得到的聚合物.它主要有过滤、除菌等作用.为了检测这种滤膜是否对人体健康有潜在的影响,我们对这种滤膜(过滤水)进行了毒性和致突变性研究.
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体外不同诱导条件下对大鼠胚胎肝干细胞分化影响的实验研究
目的 探讨和比较不同体外条件对大鼠胚胎肝干细胞分化成熟的影响. 方法 将取自孕14 d胎龄F344大鼠胚胎肝组织的肝干细胞分别接种至含10、20、40 ng/mL HGF,0.5%、1%、2%二甲基亚砜(DMSO),10 ng/mL HGF+0.5% DMSO、20 ng/mL HGF+1% DMSO、40 ng/mL HGF+2% DMSO以及空白的培养基中进行体外培养15 d;诱导15 d后,ELISA检测和比较不同组细胞内甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的浓度,实时定量PCR比较不同组细胞ALB、葡萄糖6-磷酸酶(G-6p)、角蛋白8、18(CK-8、CK-18)的mRNA的表达水平. 结果 与空白对照组相比,诱导15 d后各实验组肝干细胞ELISA检测AFP明显下降(P<0.01),ALB明显升高(P<0.01);实时定量PCR结果 表明各实验组ALB、G-6P、CK-8、CK-18 mRNA水平较对照组均明显升高,其中大鼠胎肝干细胞体外佳诱导条件为20 ng/mL HGF+1% DMSO(P<0.05).结论 HGF和DMSO均可在体外诱导大鼠肝干细胞分化,不同浓度HGF和DMSO 影响其分化成熟程度;HGF、DMSO对大鼠胚胎肝干细胞的分化具有协同效应.
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二甲基亚砜对大鼠颅脑损伤后Survivin基因表达的影响
目的 探讨二甲基亚砜(dimethy sulfoxide,DMSO)对颅脑损伤后伤侧脑组织核因子-κB(NF-κB)和Survivin表达的影响,探讨其脑保护机制.方法 选取78只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组(6只)、颅脑损伤对照组(36只)及DMSO治疗组(36只).采用自由落体撞击颅脑损伤模型,应用免疫组织化学SP法检测Survivin和NF-κB表达的变化.结果 与假手术组相比,颅脑损伤对照组的Survivin、NF-κB的表达水平明显升高(P＜0.01);与颅脑损伤对照组相比,DMSO治疗组在伤后1、2、3、5d的Survivin表达及伤后各时间点的NF-κB表达均明显升高(P＜0.05).结论 DMSO的应用可促进NF-κB及抗凋亡因子Survivin的表达而抑制脑损伤后所致的细胞凋亡,发挥脑保护作用.
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二甲基亚砜对培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响
目的探讨细胞分化诱导剂及端粒酶抑制剂二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用.方法本研究分实验组和对照组,对照组弃原培养液,加无血清培养液继续培养,实验组用不同浓度的DMSO 5、10、20、40mL·L-1分别作用于人RPE细胞24、48、72、96h,用MTT法检测DMSO对hRPE细胞生长的影响,流式细胞仪检测DMSO对hRPE细胞周期的影响.结果10mL·L-1DMSO处理的hRPE细胞从作用48h开始,OD值(0.537±0.010)小于对照组(0.647±0.022),有显著性差异(P＜0.001),细胞生长受到抑制,且随浓度增加及作用时间延长,抑制越显著.流式细胞仪检测20mL·L-1DMSO作用72h细胞周期发生明显变化,G1期细胞由41.31%增加至59.65%,S期由32.09%减至21.21%,G2期由26.65%减至19.14%,细胞生长被阻滞在G1期,生长受到抑制.结论DMSO能阻滞hRPE细胞于G1期,抑制hRPE细胞增殖且呈剂量依赖性.
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二甲基亚砜对体外培养眼组织细胞的毒性作用
背景 二甲基亚砜(DMSO)是常用的药物助溶剂,但DMSO体积分数较高时对细胞有毒性,可能影响对受试药物的正确评价,所以确定不同眼组织细胞对DMSO的敏感性十分重要. 目的 探讨DMSO对体外培养的多种眼组织细胞的小毒性体积分数,为眼部药物的体外筛选提供依据. 方法 采集青紫蓝兔的视网膜色素上皮(RPE)细胞进行培养,并利用免疫组织化学法进行鉴定.分别对人视网膜色素上皮细胞株(ARPE19)、巩膜成纤维细胞(S75-Fron)、Müller细胞(MIO-M1)、人晶状体上皮细胞(HLEC)、人眼葡萄膜黑色素瘤细胞(OCM-1)、人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)进行体外培养.取160μl DMSO溶液和9.84 ml含体积分数2％胎牛血清(FBS)的RPM I1640或DMEM/F12或DMEM培养液配制体积分数分别为1.6％、1.0％、0.8％、0.4％、0.2％和0.1％ DMSO的RPMI1640、DMEM/F12和DMEM培养液,在培养的各种细胞中分别加入不同体积分数的DMSO培养液作用96 h,采用MTS法检测各组细胞的吸光度(A)值. 结果 培养的兔原代RPE细胞对细胞角蛋白(CK)和HMB45呈黄绿色荧光,细胞质和细胞核内S100阳性反应呈红色荧光.随着DMSO体积分数的增加,各细胞活性(A值)逐渐降低,随着DMSO体积分数的增加,ARPE19、S75-Fron、HLEC、OCM-1、HUVEC和原代RPE细胞活性(A值)均明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05),当DMSO体积分数≥0.8％时,RPE细胞活性均明显低于空白对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),但MIO-M1细胞株活性的差异无统计学意义(F=0.830,P=0.547).DMSO对ARPE19、HUVEC、HELA、HLEC、MIO-M1、OCM-1、原代RPE细胞和S75-Fron细胞低有毒体积分数分别为0.8％、0.1％、0.8％、＞1.6％、＞1.6％、0.2％、0.2％和0.2％,HUVEC对DMSO的毒性敏感,在0.1％ DMSO情况下即显示出毒性(P=0.02),而MIO-M1细胞在1.6％ DMSO的情况下仍未显示出毒性作用(P=0.39).HUVEC和原代RPE细胞活性随DMSO体积分数的增加而下降,S75-Fron细胞活性在DMSO体积分数为0.1％时开始下降,之后虽然DMSO体积分数增加,但细胞活性保持平稳,当DMSO体积分数增至1.6％时,S75-Fron细胞活性进一步下降,MIO-M1细胞活性在不同体积分数的DMSO组无明显变化. 结论 DMSO在体外实验中的细胞毒性随体积分数的增大而增强,在达到助溶效果的情况下应选用小体积分数的DMSO,同时设与样品中DMSO相同体积分数的DMSO对照.
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二甲基亚砜抗菌作用研究进展
二甲基亚砜是一种医药研究中广泛应用的非水溶性药物有机溶剂,对假丝酵母菌属的芽管与浅表感染真菌的孢子萌发均有抑制作用,对金黄色葡萄球菌引起的感染有辅助治疗效果.二甲基亚砜发挥的抑菌作用主要与抑制真菌生长、芽管萌发、改变细胞色素P450结构和增加细胞膜通透性有关.
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二甲基亚砜的毒性作用进展
目的 二甲基亚砜作为“万能溶剂”被广泛应用于各个领域,但近年来诸多文献对二甲基亚砜的毒性作用研究有了新的认识.方法 通过查阅国内外文献资料进行复习,综述二甲基亚砜的毒性作用研究进展.结果 作为“万能溶剂”的二甲基亚砜在动物和人群研究中均存在一定的毒性作用.结论 应用广泛的二甲基亚砜虽属低毒物质,动物毒性作用方面存在吸人毒性、急性毒性、皮肤暴露毒性、细胞毒性、遗传毒性和生殖发育毒性等.人群毒性作用方面虽未见致畸作用,但大量接触会伴有头痛、眩晕、恶心等副反应,因此其毒性作用不容忽视.
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低浓度二甲基亚砜冻存外周血造血干细胞的效果
目的:观察外周血造血干细胞(PBSC)用低浓度二甲基亚砜(DMSO)和羟乙基淀粉(HES)在-80℃条件下冷冻保存的效果.方法:49例次患者的PBSC在冻存后3、6个月及1年进行复苏,分别取样进行有核细胞(NC)计数、锥虫蓝拒染率测定、CD34+细胞阳性率分析和粒-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)检测.结果:PBSC在-80℃冰箱中冻存3个月和6个月的NC、CD34+细胞、CFU-GM回收率的差异均无统计学意义(均P＞0.05),NC活细胞比率差异也无统计学意义(P＞0.05).PBSC冻存1年NC、CD34+细胞、CFU-GM集落回收率及活细胞比率均有显著性下降(均 P＜0.01).结论:应用低浓度DMSO在-80℃冻存PBSC 3个月和6个月的细胞能得到较好保存,1年后的冻存效果显著下降.
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二甲基亚砜和右旋糖酐对脐血造血细胞的低温保护作用
目的:探讨液氮保存中联合低温保护剂二甲基亚砜和右旋糖酐对造血细胞的保护作用和不同冻存时间对造血细胞活力的影响.方法:通过测定冻存前后总有核细胞数(TNC)、细胞活率、造血祖细胞集落生成情况,反映冻存后造血细胞损失情况及增殖能力.结果:40例脐血冻存后细胞活率平均为91.5%,TNC、粒-巨噬细胞集落形成单位、红系爆增式集落形成单位、混合集落生成单位平均回收率分别为95.0%、86.7%、81.8%、84.4%.不同保存时间细胞活率,TNC、祖细胞回收率差异均无显著性意义(P＞0.05).结论:联合保护剂对造血细胞有良好保护作用,适合于建立脐血库长期低温保存造血细胞.长期冻存造血细胞的效果与冻存时间无密切关系.
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温度波动引起冰冻血小板融化复苏后不可逆聚集
目的:查找冰冻血小板融化复苏后出现不可逆聚集原因.方法:收集2001年9月～2006年10月本站制备的789袋冰冻血小板的溶解情况,观察融化复苏后出现不可逆聚集与保存温度波动的关系.结果:3次集中出现融化复苏不可逆聚集均与保存温度的波动密切相关,其发生率为78.1%.结论:保存温度波动会造成冰冻血小板融化复苏后不可逆的出现.
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二甲基亚砜对体外大鼠结肠平滑肌收缩的影响
[目的]观察二甲基亚砜(DMsO)对体外大鼠结肠平滑肌收缩的影响,探讨其作为脂溶性中药成分助溶剂的可行浓度范围.[方法]制备SD大鼠结肠平滑肌肌条,以9 g/L NaCl空白对照(NS)组和乙酰胆碱对照(Ach)组,分别观察不同浓度DMSO对肌条自发收缩以及对Ach引起的肌条收缩的影响.[结果]DMSO在0.2%～1.4%浓度范围,对肌条自发收缩振幅和面积的影响与NS组比较均无统计学意义(P>0.05).与Ach组比较,在0.2%～1.8%浓度范围,DMSO对Ach引起的肌条收缩振幅和面积的影响均无统计学意义(P>0.05).[结论]DMSO在浓度≤1.4%时对体外大鼠结肠平滑肌的收缩无明显影响,作为脂溶性中药的助溶剂有运用价值.
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Ames试验在羟基磷灰石人工骨材料评价中的应用
目的 通过鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames 试验)探讨羟基磷灰石人工骨材料的遗传毒性特征,以评价该材料的潜在致突变性.方法 选择生理盐水(SC)和二甲基亚砜(DMSO)两种溶剂对试验样品浸提,采用平板掺入法,计数TA97、TA98、TA100和TA102 菌株在活化和非活化条件下的回变菌落数,以检测其致突变比值.结果 试验阴性对照和阳性对照结果有效,试验成立.采用SC 或DMSO浸提,浸提原液均未引起试验菌株回变菌落数超过阴性对照的2 倍,即致突变比值MR 均<2.结论 在本实验条件下,试验样品SC 浸提原液及DMSO 浸提原液对试验菌株无诱变性.
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β-TCP/HA双相骨修复材料的Ames试验研究
目的 通过鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)探讨组分比例分别为3∶7和7∶3的β磷酸三钙/羟基磷灰石(β-TCP/HA)双相骨修复材料的遗传毒性特征,以评价该材料的潜在致突变性.方法 采用生理盐水(SC)和二甲基亚砜(DMSO)两种介质对试验样品浸提,采用平板掺入法进行试验,计数TA97、TA98、TA100和TA102菌株在活化和非活化条件下的回变菌落数,以检测其致突变比值.结果 阴性对照和阳性对照结果成立.两种比例的材料采用SC或DMSO浸提,浸提液均未引起试验菌株回变菌落数超过阴性对照的2倍,即致突变比值MR均＜2.结论 在本实验条件下,β-TCP/HA样品SC浸提原液及DMSO浸提原液对标准试验菌株均无诱变性.
关键词： β磷酸三钙/羟基磷灰石 Ames试验 生理盐水 二甲基亚砜 -
海藻糖在同种瓣低温保存中的保护作用
目的 探讨非渗透性低温保护剂海藻糖联合应用二甲基亚砜,用于同种瓣的深低温储存,并与常规应用的二甲基亚砜的冻存效果进行比较.方法 分别以10%二甲基亚砜+0.1 mol/L海藻糖(实验组)和10%二甲基亚砜(对照组)作为冷冻保护剂,经程控梯度降温,液氮冻存大鼠的同种瓣6个月后复温,电镜、光镜观察、内皮细胞活力及葡萄糖代谢率测定,比较同种瓣的组织活性、代谢功能和结构变化.结果 实验组的葡萄糖代谢率为(20.570±1.789)g/L·d-1明显高于对照组(18.621±1.842)g/L·d-1(P＜0.01),内皮细胞活力(77.75±6.60)%也明显高于对照组(69.81±4.40)%(P＜0.01),并且其结构的破坏也较对照组轻(P＜0.05).结论 10%二甲基亚砜+0.1 mol/L海藻糖作为同种瓣的冷冻保护剂,其保护效果明显优于10%二甲基亚砜.
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三种分化诱导剂对人胆管癌细胞株QBC939的作用
目的观察二甲基亚砜(DMSO)、全反式维甲酸(ATRA)和9顺式维甲酸(9-cis RA)对人胆管癌细胞株QBC939的作用,筛选对它有效的分化诱导剂.方法以DMSO、ATRA和9-cisRA作用于培养的胆管癌细胞株,描绘生长曲线,观察细胞形态,双层软琼脂培养法观察细胞恶性度,流式细胞术(FCM)检测细胞周期动力学变化.结果 10-6mol/L 9-cis RA作用2 d后开始抑制QBC939细胞生长,抑制率为39.4%～80.7%(P<0.05).细胞软琼脂集落形成能力较对照组下降80.9%(P<0.01).细胞形态向正常细胞转化.9-cis RA作用1、3、5、7dGo/G1期细胞比例分别为55.56%、63.92%、73.38%、76.92%.ATRA对QBC939细胞无明显作用,DMSO主要引起细胞死亡.结论 9-cis RA可诱导QBC939细胞向良性表型分化,对该细胞株具有有诱导分化作用.
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液氮保存对人同种主动脉瓣形态结构的影响
本研究旨在探讨同种主动脉瓣瓣膜形态结构与冷冻保存时间的相关性,现将结果报道如下.一、材料与方法1.材料:选用18～35岁健康成年男性脑死亡30 min内取材的主动脉瓣20个.实验分为新鲜对照组(Ⅰ组)和冷冻保存组(Ⅱ～Ⅹ组),冷冻保存组依据在液氮(-196 ℃)中保存时间分为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ组,分别为冷冻保存1、3、6、9、12、15、18、21、24个月的瓣膜,每组2个瓣膜共6只瓣叶.2.冷冻保存及复温:修剪备用的带瓣主动脉管道浸入含二甲基亚砜(DMSO)的营养液中,无菌薄膜3层分别束扎,置入4 ℃冰箱中2 h,再置入液氮蒸汽中使瓣膜缓慢降温,后入液氮中保存,降温速率保持在1 ℃/min左右.定期添加液氮,使瓣膜始终保持在-196 ℃.取保存不同时间的带瓣管道在37 ℃水中快速复温5 min,然后掀去包裹薄膜,在37 ℃无菌生理盐水中快速复温.复温过程中不断轻柔翻动带瓣管道,使带瓣管道的各部位温度均匀上升.
