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水果的速冻加工技术分析
果品的速冻保藏属于食品冷冻保藏的一种，冷冻保藏在19世纪就已开始采用冰-盐系统进行冷冻保存。英国早在1842年就开始了鱼的冷冻保藏，美国在19世纪末发明的机械冷凝系统，为速冻业的发展打下了基础。目前，速冻食品的品种不断扩大，加工深度也逐步深化，产量逐年提高。而水果中含有各种维生素和矿物质，特点是维生素C和碱性矿物质。速冻保藏一些价格高或有特色风味的水果，可在淡季调节市场或争取外销，有较高的经济价值。此外，速冻水果可做果酱、果脯的原料和酸奶、派等的配料。
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Cryotop玻璃化冻融人类囊胚79例报告
目的 探讨玻璃化冷冻保存技术在人类囊胚冷冻复苏中的应用效果. 方法 将接受体外受精-胚胎移植患者第5天(D5)或第6天(D6)所获得的剩余囊胚进行Cryotop玻璃化冷冻保存,分析囊胚复苏后的复苏率、妊娠率及种植率等指标. 结果 玻璃化法冷冻囊胚共 224个周期、543个囊胚;玻璃化冷冻复苏 79个周期、142个囊胚、存活116个(81.7%);移植70个周期、116个囊胚,临床妊娠25个周期(35.7%),其中4例流产(16%),3例足月分娩3个正常新生儿,18例继续妊娠. 结论 Cryotop玻璃化冷冻法适于人类囊胚的冷冻保存,获得较理想的复苏率、妊娠率和种植率,流产率没有明显提高,在临床中值得应用和推广.
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冷冻环玻璃化法与程序冷冻法对人囊胚冷冻复苏效果的比较
目的比较冷冻环玻璃化法与程序冷冻法对人囊胚冷冻复苏的效果.方法将接受体外受精-胚胎移植患者的剩余胚胎进行培养,所获得的囊胚分别进行程序冷冻法或冷冻环玻璃化法冷冻,比较囊胚复苏后的复苏率、妊娠率等指标.结果玻璃化冷冻复苏39个周期,115个囊胚、存活104个(90.4%),移植38个周期、74个囊胚,临床妊娠28个周期(73.7%),其中2例流产,2例足月分娩2个正常新生儿,24例继续妊娠.程序冷冻21个复苏周期,87个囊胚、存活37个(42.5%),移植15个周期、28个囊胚,临床妊娠6例(40%),其中流产1例,2例足月分娩3个新生儿,3例继续妊娠.玻璃化冷冻后的囊胚复苏率显著高于程序冷冻,复苏周期移植取消率显著低于程序冷冻,而临床妊娠率则明显高于程序冷冻,均有统计学差异(P＜0.05).但两种方法的流产率没有显著差异.结论使用冷冻环玻璃化法适于人类囊胚的冷冻保存,其复苏率和妊娠率均显著高于传统的程序冷冻法,复苏周期移植取消率低于程序冷冻法.
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家畜卵母细胞冷冻保存技术研究进展
卵母细胞是胚胎工程技术研究中为重要的一种实验材料,随着动物胚胎工程技术的迅速发展,卵母细胞的需求量急剧增加.卵母细胞冷冻保存技术可充分利用各种卵母细胞资源,为细胞核移植、体外受精、转基因生产等提供丰富而方便的材料来源,使这些技术不受时间、地域限制,可以随时随地进行,从而为其走向实用化、商业化发展开辟道路.本文就卵母细胞的冷冻保存技术做一简要的论述.
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人卵子冷冻保存的研究进展
人卵冷冻保存技术在当前人类生殖工程方面具有重要的意义.本文综述了人卵冷冻保存的研究意义、影响因素、潜在危害及研究进展等情况,期望建立更完善的人卵冷冻保存方法.
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女性化疗患者的生育能力保护
化疗是治疗恶性肿瘤的重要措施,能够显著延长患者的生存期,改善预后.化疗药物会损伤女性的卵巢功能,可导致生育能力下降、卵巢早衰,其中烷化剂类造成的损伤严重.如何保护女性化疗患者的生育能力,是科研及临床的热点问题.目前常用的方法包括:(1)激素类药物:化疗前及化疗期间使用促性腺激素释放激素激动剂等可减少化疗药对卵巢的损伤；(2)冷冻技术:包括卵巢组织、卵母细胞、胚胎冷冻,化疗结束后移植回体内.至今卵巢组织的复苏移植已使16位女性妊娠；胚胎冷冻是发展为成熟的冷冻技术,妊娠率较高,但可能延误肿瘤治疗,并且受各种社会因素影响；卵母细胞冷冻则适用于无配偶及青春期前的女性患者.本文将就保护女性化疗患者生育能力各项技术的研究进展、效果及存在的问题进行综述.
关键词： 化疗 卵巢早衰 生育能力 促性腺激素释放激素类似物 冷冻保存 -
人未成熟卵母细胞冷冻技术进展
人成熟卵母细胞的纺锤体对低温敏感,在冷冻保存中极易受到伤害,加上成熟卵母细胞来源有限,人们开始研究人未成熟卵母细胞的冷冻保存.本文综述了人未成熟卵母细胞冷冻技术的意义、优势、影响因素以及目前存在的关键问题,期望能拓展配子冷冻领域.
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冷冻复苏对精子结构及表观遗传学影响
精子的冷冻保存已广泛用于男性生育力保存和辅助生殖技术.然而,精子冷冻、保存与复苏过程可能造成结构和功能的损伤,包括精子活力、存活率、形态学及受精能力等方面的损伤;存在较大争议的是,精子冷冻复苏是否引起DNA完整性改变及表观遗传损伤.至今,有很多文章报道辅助生殖技术可能导致早期胚胎发育异常,甚至子代表观遗传缺陷,但是有关冷冻是否导致表观遗传缺陷的文章很少.本文系统介绍冷冻复苏对精子细胞膜、线粒体膜、DNA完整性的影响,重点介绍其对表观遗传学中DNA甲基化、组蛋白乙酰化和非编码RNA调控的影响,简要介绍了引起争论的原因和修复机制,并探索佳冷冻方法及建立实验室规范与标准.
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精子冻存技术及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响
目的 通过对冷冻前后及精子处理前后精子DNA完整性的比较,探讨冷冻技术、冷冻时间及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响. 方法 (1)精液常规检测正常的患者30例,手淫法取精,精液液化混匀后分4份,分别用于精子染色质扩散(SCD)实验检测精子DNA完整性、上游法处理精液、以及两组冻存实验(不加保护剂直接冻存的为冻存1组;添加蛋黄葡萄糖保护剂冻存的为冻存2组);(2)上游法处理后的精液一部分用于检测精子动力和形态,一部分用于精子DNA完整性检测;(3)冻存1组分别于冻存第7天和第90天解冻,SCD实验检测精子DNA完整性;(4)冻存2组分别于第7天和第90天解冻,0.1 ml用于精子DNA完整性检测,剩余精液应用上游法处理,检测上游处理前后精子DNA的完整性.结果 (1)冻存1组中,冻存90d后解冻的精子DNA损伤率[(25.6±7.3)％]显著高于冻存7d者[(22.4±7.4)％](P＜0.05),且均显著高于新鲜精液的精子DNA损伤率[(20.6±7.3)％](P＜0.05);冻存2组中,冻存90d后精子DNA损伤率显著高于冻存7d者[(25.9±7.2)％vs.(23.6±7.8)％](P＜0.05),且均显著高于新鲜精液(P＜0.05);而冻存7d和90d后,两个冻存组间比较,精子DNA损伤率均无显著差异(P＞0.05).(2)新鲜精液经上游法处理后,精子DNA损伤率由处理前的(20.6±7.3)％降为(6.4±2.5)％(P＜0.05);冻存2组中精液冻存7d和90d后复苏上游法处理后,精子DNA损伤率较未经上游法处理者均显著降低[分别为(9.38±2.8)％ vs.(23.6±7.8)％和(9.7±2.6)％ vs.(25.9±7.2)％](P＜0.05). 结论 冻存对精子DNA有损伤,冻存时间对于精子DNA完整性有影响.不添加保护剂直接冻存和添加保护剂对精子DNA完整性的影响无显著差异.不论是新鲜精液还是冻存复苏精液,上游法处理并不会增加精子DNA的损伤,且有利于筛选出具有更好DNA完整性的精子.
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不同冷冻方法对人睾丸精子冷冻保存效果的研究
目的 比较不同冷冻保护剂和不同冷冻载体对人睾丸精子的冷冻保存效果. 方法 选取在兰州大学第一医院生殖医学专科医院进行诊断性睾丸穿刺获得成熟活动精子的患者,以及行睾丸精子ICSI术后的患者,在知情同意下将剩余睾丸组织冷冻保存,共46例.将每例睾丸组织分为4份,随机分成4组进行冷冻:1.8 ml冷冻管+甘油复合冷冻剂(A组,46例);1.8 ml冷冻管+Fasrun冷冻保护剂(B组,46例);0.25 ml麦管+Fasrun冷冻保护剂(C组,46例);超微量冷冻麦管+ Fasrun冷冻保护剂(D组,46例).冷冻标本经液氮熏蒸后投入液氮,比较各组复苏后精子活力和复苏率. 结果 冷冻前各组的活动睾丸精子能够满足ICSI操作所用精子量;冷冻复苏后,C组和D组能够容易找到正常活动精子(≥0.1/200倍视野)的例数显著高于A组、B组(P＜0.05);D组解冻后运动精子复苏率显著高于A组、B组(P＜0.05),C组解冻后运动精子复苏率显著高于A组(P＜0.05). 结论 应用改良的超微量冷冻麦管+ Fasrun冷冻保护剂能够提高睾丸精子的冷冻复苏率.
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玻璃化冻融小鼠囊胚的超微结构观察
目的 观察冻融小鼠囊胚的超微结构改变情况,研究冷冻对囊胚的冷冻损伤.方法 采用6组玻璃化溶液对小鼠囊胚进行冷冻保存,复苏后通过透射电镜观察超微结构改变情况.结果 各组小鼠囊胚均表现相似的超微结构损伤:线粒体肿胀、粗面内质网脱颗粒、高尔基复合体扩张、含有絮状物或膜性结构的小泡增多、微丝结晶的出现、细胞间紧密连接和桥粒减少.结论 冷冻对于小鼠囊胚的冷冻损伤主要是细胞膜性结构和细胞骨架系统的损伤.
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不同阶段小鼠囊胚玻璃化冷冻保存效果观察
目的 探讨合适玻璃化冷冻保存的小鼠囊胚发育阶段.方法 对575枚小鼠初级囊胚和577枚扩张囊胚分别采用六组玻璃化溶液进行玻璃化冷冻,比较不同阶段囊胚的冷冻保存效果.结果 各组初级囊胚存活率和孵出率均高于扩张囊胚.除ES35组外,各组初级囊胚存活率均显著高于扩张囊胚(P<0.05);EDS35、ESF20和EDSF20组的初级囊胚的孵出率均显著高于扩张囊胚(P<0.05).结论 初级囊胚较扩张囊胚更适合玻璃化冷冻保存.
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三种人类精液冷冻程序的比较性研究
冷冻方法直接影响到精子的复苏率,也是能否达到技术规范要求的重要指标之一.我们对精液的冷冻存储方法进行了研究分析,分别采用传统的缓慢冷冻储存法(缓冻法)、Planer程序降温仪(PLANER-KRYO10 Ⅲ,Planer,英国)随机冷冻程序(Planer随机程序)和Planer改进程序降温仪冷冻程序(Planer改进程序)3种方法行精液冷冻存储,复苏率均达到<人类精子库技术规范>的要求.
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使用冷冻环进行玻璃化法冷冻囊胚复苏后获临床妊娠一例
在体外受精周期中,为了提高妊娠率同时减少多胎的产生,许多生殖中心均开展了囊胚培养,但移植剩余的囊胚进行传统的程序冷冻后,复苏率不稳定,难以达到令人满意的水平,因而近年来,玻璃化冷冻开始应用于人类囊胚的冷冻,国外已有少数获临床妊娠的报道.玻璃化冷冻的载体种类较多,包括开放式麦管、电镜网、冷冻环[1]等,我中心自2004年开始采用冷冻环进行囊胚玻璃化冷冻,并已获一例临床妊娠,现报道如下.
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胚胎冷冻及复苏移植的质量管理
胚胎冷冻复苏移植的质量管理,是生殖中心实验室管理的重要组成部分.不同于新鲜周期,冻融胚胎移植周期的妊娠率与生殖中心实验室的关系更为密切,因此实验室负责人对冻融胚胎移植的结局负有更大的责任.
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吃完药后,别忘看包装上的保存提醒
药物是特殊商品,保存时必须执行规定要求.按照药品包装上注明的要求保存药,是经过验证的保证药品质量的重要措施,因为药物的化学结构会随温度发生变化,所以任何人不能随意更改保存方法.白蛋白,不能冷冻保存白蛋白是临床上的常用药,而常有人把白蛋白视为“补益品”,给家里老人每年用一次,或给肿瘤患者、手术患者使用.有人买多了,一次用不完,放在冰箱里冻起来,拿到医院输注遭到拒绝.笔者就曾遇见一例,患者家属将8瓶白蛋白冷冻保存,结果全部报废,患者再三询问,很希望解冻后再用,因为太贵了.
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冷冻技术的相关危险及应对措施
近年来,随着冷冻技术的不断发展和在生殖领域的广泛应用,其安全性也逐渐受到人们的关注.冷冻精子、卵子、胚胎以及卵巢或睾丸组织是辅助生殖领域的重要服务项目.这些标本如何得到安全、妥善的保存,如何应对与冷冻有关的危险均成为敏感而重要的问题.从标本的采集、处理、冷冻保存到标本的解冻和终使用,无论在实施冷冻技术的过程中还是冷冻设备本身都存在许多危险因素,如:对工作人员的伤害,标本的丢失或混淆,标本提前意外解冻,标本间的交叉污染等[1],这些危险事件的发生与许多因素有关.提供冷冻服务的医学中心必须要有相关的评估系统,即对冷冻过程中可能出现的意外情况进行预先的评估并制定相应的预防和应急措施.在许多国家(如英国、澳大利亚、新西兰等)都有量化的评价系统,可以指导人们采取有效措施,尽量减少和避免意外事件的发生.本文将重点讨论在实施冷冻技术时应该特别注意的问题.
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人胎儿卵巢组织异种移植的实验研究
目的:探讨人胎儿卵巢组织异种移植后的卵泡生长发育情况.方法:18只裸鼠行去势手术后分为2组:A组为对照组,B组为胎儿卵巢组织移植组,于移植1个月后开始隔天注射5U的孕马血清促性腺激素(PMSG)持续2个月,获取移植物36h前注射hCG.获取胎儿卵巢组织行光学显微镜观察并测血清雌二醇(E2)的浓度.结果:B组血清E2水平明显高于A组,差异有统计学意义(P＜0.01).移植后存活的卵巢组织中有40%～50%的原始卵泡丢失,均以原始卵泡为主,可见少量初级卵泡和次级卵泡,未见窦卵泡的生长.移植后人胎儿卵巢组织中初级卵泡和次级卵泡的比例较移植前显著增加(P＜0.01).结论:人胎儿卵巢组织移植于裸鼠的背部皮下能存活,卵泡处于良好的生长发育状态.
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以支持细胞为饲养层培养冻存后大鼠精原干细胞研究
目的:研究冻存的精原干细胞体外分离培养的生物学特性,为今后冻存精原干细胞的批量培养和长期利用提供依据.方法:取7～8d的SD雄性大鼠,分离睾丸组织,用两步酶消化法和差速时间贴壁法,分离精原干细胞和支持细胞.以二甲基亚砜(DMSO)作冷冻保护液,将分离到的精原干细胞放置于液氮中冻存;利用体外培养体系,进行支持细胞的培养和饲养层的制备;然后将复苏的精原干细胞接种到支持细胞饲养层上培养,并利用碱性磷酸酶鉴定精原干细胞.结果:用两步酶消化法和差速贴壁法能分离到纯度较高的精原干细胞和支持细胞,冻存的SSCs解冻后能在支持细胞饲养层上贴壁、生长、增殖,碱性磷酸酶活性鉴定呈阳性.结论:冻存后精原干细胞在体外支持细胞饲养层上呈集落样生长,并能长时间维持细胞集落形态及数目,可为体外研究药物或毒物干扰精原干细胞提供细胞模型.
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海藻糖对冷冻后人类精子活力的影响
目的 比较添加不同浓度海藻糖的冷冻保护剂对人类精子复苏后活动力的影响. 方法 选取2014年3月-2014年12月山西省人类精子库35名捐精志愿者的精液标本,分别采用基础配方、三种不同浓度海藻糖的改良配方的冷冻保护剂进行冷冻,其中基础配方作为对照组、三种不同浓度海藻糖的改良配方作为实验组,比较两组精子复苏后的活动力和精子运动参数. 结果 四种冷冻保护剂复苏后精子前向运动精子比例(PR)均达到40％,复苏率均高于60％.实验组中50mM组和100mM组复苏后PR分别为49.8％与54.1％,明显高于对照组43.6％,精子复苏率明显高于对照组,差异有统计学意义.其中实验组100mM组PR和复苏率明显高于其他三组,复苏后PR均值达到54.1％,复苏率达到86.0％,三个实验组精子的运动参数均高于对照组,其中以100 mM组运动参数有优势. 结论 在精子冷冻保护液中添加适当浓度的海藻糖有利于精子活力的保存.
