首页 > 文献资料
-
冻融液的温度对人未成熟卵母细胞玻璃化冻融效果的影响
目的 探讨冻融液的操作温度对未成熟人卵母细胞(GV、MI)玻璃化冻融效果的影响.方法 收集卵胞浆内单精子注射(ICSI)患者的GV、MI卵母细胞,根据冻融液操作温度的不同分为A、B、C组.冻融后存活及未冷冻对照组(D组)卵母细胞体外成熟(IVM)培养,成熟的MII卵母细胞固定后进行免疫荧光染色,然后用Nikon CISI激光扫描共聚焦显微镜观察纺锤体、染色体形态.结果 实验组GA、GB、GC 卵母细胞冻融后的存活率和体外成熟率分别为100%、81.3%、68.8%和33.3%、83.3%、72.7%,仅GC组的存活率与对照比较存在显著性的差异(P<0.05);实验组中只有GB组获得了纺锤体(20%)和染色体(10%)形态正常卵母细胞.实验组MA、MB、MC卵母细胞冻融后的存活率分别为71.4%、100%、83.3%,各实验组与对照组比较无显著性差异(P>0.05);MA组体外成熟率与对照组比较存在极显著性的差异(0%比57.1%,P<0.01),MB、MC与对照组的体外成熟率比较无显著性的差异(66.7%、80%比57.1%,P>0.05);仅MC获得1个正常纺锤体和染色体形态卵子.结论 冻融液的合适操作温度可以提高未成熟卵子的冻融效果.
-
注射人绒毛膜促性腺激素与否对体外受精周期中改行未成熟卵体外培养结局的影响
目的 探讨不育患者在常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中改行未成熟卵体外培养(IVM),取卵前注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)与否对其实验室及临床结局的影响.方法 回顾分析2008年1月至2010年11月在温州医学院附属第一医院生殖医学中心行常规IVF治疗的138个周期,在促排卵5～7d后,双侧卵泡数目≥20个,或用药8～13 d后,卵泡发育缓慢且两侧卵泡数目≥15个,大卵泡直径平均≤12 mm,根据患者意愿,停药改行IVM治疗,其中63个周期在取卵前12 h注射hCG(A组),75个周期未注射hCG(B组).比较两组的实验室及临床结局.结果 A组的卵成熟率(64.56%)显著高于B组(56.3%),但是平均获卵数(8.42±0.52)个低于B组(11.32±0.82)个,差异均有统计学意义(P<0.05).两组的受精率、卵裂率、移植率、临床妊娠率、流产率,多胎妊娠率比较均无统计学差异(P>0.05).结论 常规IVF周期改行IVM后可以获得良好的妊娠结局,取卵前注射hCG虽然可以提高卵子的成熟率,但并不能提高妊娠结局.
-
体外受精-胚胎移植周期未成熟卵体外成熟培养的临床价值
目的 探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期未成熟卵体外成熟培养(IVM)的临床价值. 方法 对106例不孕患者IVF/ICSI-ET治疗周期中357枚未成熟卵(MⅠ期,21 7枚;GV期,140枚)进行24 h和48 h体外培养,比较不同发育阶段未成熟卵的体外成熟率、受精率、卵裂率、优质胚胎率及囊胚形成率. 结果 MⅠ期卵24 h和48 h总成熟率均显著高于GV期卵(分别为59.91％ vs.24.29％和72.35％ vs.42.86％)(P＜0.05);体外成熟MⅡ卵平均每取卵周期可利用胚胎数只有(0.50±0.84)枚,且受精率、卵裂率和优胚率、可利用胚胎数均显著低于同一促排卵周期体内成熟MⅡ卵(P＜0.05).结论 IVF-ET周期中所获未成熟卵经IVM能发育成熟,并具备一定的受精和胚胎发育潜能,但相关指标明显低于体内成熟卵,临床应用价值有限.
-
卵母细胞体外成熟治疗多囊卵巢综合征不孕妇女
多囊卵巢综合征是常见的无排卵性不孕的原因.如果在常规诱导排卵的方法失败后,可采用辅助生育技术.而卵母细胞体外成熟是一种有效、经济、简便而且没有卵巢过度刺激综合征的好方法.
-
人未成熟卵母细胞冷冻技术进展
人成熟卵母细胞的纺锤体对低温敏感,在冷冻保存中极易受到伤害,加上成熟卵母细胞来源有限,人们开始研究人未成熟卵母细胞的冷冻保存.本文综述了人未成熟卵母细胞冷冻技术的意义、优势、影响因素以及目前存在的关键问题,期望能拓展配子冷冻领域.
-
未成熟卵母细胞冻存
随着人类辅助生殖技术的发展,人未成熟卵母细胞的冷冻技术因其特有优势得到了较多的关注,研究数据支持未成熟卵母细胞冻存是保存女性生育力的一种有临床应用前景的方式.冷冻和复融过程会对卵母细胞造成一系列形态结构、细胞代谢、生理生化及发育潜能的影响.作为一个较新的方向,未成熟卵母细胞的冷冻技术缺乏标准方案,很多相关研究成果尚存在争议.本文着重未成熟卵母细胞冷冻技术的意义、优势、影响因素等方面的新观点予以综述.
-
颗粒细胞复合体在卵母细胞体外成熟培养中作用的研究
目的 探讨颗粒细胞复合体应用于未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)中的作用. 方法 收集2015年1月至2017年6月在我院生殖医学科接受ICSI-ET治疗的156例不育患者促排卵周期中废弃的未成熟卵母细胞为研究对象.共收集MⅠ期和GV期未成熟卵母细胞305枚,以随机方式入组到对照组(C组,培养时不添加颗粒细胞复合体)和实验组(T组,培养时添加颗粒细胞复合体)进行培养,并按照MⅠ期和GV期未成熟卵母细胞的不同分为4个亚组:M Ⅰ-C组、M Ⅰ-T组和GV-C组、GV-T组.观察各组的体外成熟及受精后胚胎发育情况等. 结果 MⅠ-T组体外培养48 h后的总成熟率显著高于M Ⅰ-C组(88.42％ vs.73.62％,P＜0.01),体外培养24 h的成熟率(80.00％ vs.65.93％)、正常受精率(69.74％vs.53.33％)、受精率(75.00％ vs.55.00％)及优质胚胎率(35.56％ vs.12.00％)均显著高于M Ⅰ-C组(P＜0.05),且M Ⅰ-T组的卵母细胞利用率亦显著高于M Ⅰ-C组(21.05％ vs.5.00％,P＜0.01);M Ⅰ-T组获得4个囊胚,多于M Ⅰ-C组(1个囊胚).GV-T组体外培养48 h的总成熟率显著高于GV-C组(65.00％ vs.35.59％,P＜0.01);GV-T组培养24 h的各项指标与GV-C组比较均无显著性差异(P＞0.05);GV-T和GV-C两组均未获得囊胚. 结论 含有颗粒细胞复合体的共培养体系可以提高促排卵周期中不同来源未成熟卵母细胞的体外成熟率,改善MⅠ期成熟卵母细胞的发育潜能,但是否能改善GV期卵母细胞的发育潜能尚需进一步研究.
-
自然周期成熟卵和未成熟卵体外培养成熟获得的剩余胚胎经玻璃化冻融35例分析
1983年Wood等[1]通过冻融胚胎移植获得首例临床妊娠,1985年Cohen等[2]将首例冻融胚胎移植获得了健康婴儿,此后胚胎冷冻技术开始成为辅助生殖技术的一个重要组成部分.本院生殖中心自2005年4月,开展了自然周期体外受精(IVF)结合未成熟卵体外成熟(IVM)技术(IVF/M)治疗不育症,并将剩余胚胎经玻璃化冷冻保存,待机进行解冻胚胎移植,提高了体外受精/体外成熟-胚胎移植(IVF/M-ET)的移植机会和累积妊娠率.
-
冷冻平衡液及保护剂的不同组合对小鼠未成熟卵母细胞OPS法冷冻效果的影响
超低温冷冻保存小鼠卵母细胞的研究开始于20世纪50年代,此后研究者对各种动物的卵母细胞冷冻保存进行了探索,但其效果远不及胚胎冷冻水平.自从1998年Vajta等[1]发明了OPS法(open pulled straw, OPS)成功地冷冻保存了牛卵母细胞和囊胚以来,OPS法已成功地应用于小鼠成熟卵母细胞[2]、原核胚[3]、2-cell胚[4]等的冷冻保存,认为该冷冻方法是一种比较理想的玻璃化冷冻法.本实验采用改良的OPS法,以解冻后形态正常率和成熟率为判定指标,探讨冷冻溶液的不同组合、两种渗透性抗冻保护剂的配比对小鼠未成熟卵母细胞冻后生存性的影响,以期为人类卵母细胞玻璃化冷冻提供有效的动物模型试验.
-
多囊卵巢综合征患者卵丘形态与未成熟卵母细胞发育潜能关系
目的 研究多囊卵巢综合征患者无刺激周期取出的不同形态未成熟卵母细胞的发育潜能.方法 43例PCOS不孕患者进行了47个未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)周期.所有患者均未经促卵泡素刺激,予以HCG 36 h后取卵.根据取出的卵-冠-丘复合物形态将其分为3组:卵丘紧密组、卵丘松散组、无卵丘组.比较3组的体外成熟率、受精率和优质胚胎率.结果 47个IVM周期共收集未成熟卵母细胞874枚,体外成熟率61.19%,受精率71.07%,着床率13.13%.卵丘松散组的体外成熟率明显高于卵丘紧密组(72.26% vs 49.54%, P<0.05),受精率、优质胚胎率三组间无差异.结论 PCOS患者无刺激周期取出的未成熟卵母细胞中,卵丘松散、扩张的卵母细胞具有更好的体外成熟潜力.
-
未经促排卵获得的未成熟卵母细胞体外成熟培养后行卵母细胞质内单精子注射并胚胎移植后分娩一例报告
本研究对1例从未经促排卵刺激的多囊卵巢综合征(PCOS)患者的卵巢中获取未成熟卵母细胞,于体外成熟培养(IVM)后行卵母细胞质内单精子注射(ICSI),并胚胎移植成功,获临床妊娠并分娩一足月健康婴儿,系国内首例.现结合文献复习,分析如下.
-
体外成熟对卵母细胞纺锤体及染色体形态的影响
以往的研究发现,未成熟卵母细胞体外成熟培养及体外受精-胚胎移植后着床率低的原因之一,可能是体外成熟的卵母细胞纺锤体和染色体排列发生了异常,引起胚胎发育潜能降低[1].本研究通过观察未成熟卵母细胞体外成熟培养后,卵母细胞纺锤体与染色体的变化,探讨体外成熟培养对卵母细胞纺锤体与染色体的影响.
-
未成熟卵母细胞体外成熟技术及其在多囊卵巢综合征患者中的应用
卵母细胞(oocyte)体外成熟(in vitro maturation,IVM)是一项新的辅助生殖技术,具有能减少常规促排卵药物引起的不良反应、减少卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS)、降低治疗费用等优点,较传统的体外受精(IVF)技术容易被患者接受.早在1935年,人们就观察到兔未成熟卵母细胞在普通培养基中培养可自动成熟.由此提出卵母细胞可自发性核成熟这一观点.在小鼠、绵羊、猪、恒河猴和人的卵泡培养中,进一步证实了这一概念.1991年,Chian等才开始真正意义的IVM的临床应用研究.1994年,Trounson等证实了多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者的未成熟卵母细胞具有体外成熟及受精发育的能力.同年,卵母细胞IVM后行卵母细胞浆内单精子注射(ICSI)也获得成功.PCOS是引起不孕的常见原因,据统计在育龄妇女中的发病率为5%～10%.在PCOS患者的超排卵过程中,经常出现一种情况是对促排卵药物不敏感,如对低剂量促性腺激素长时间不反应,对氯米芬抵抗而导致卵泡得不到发育或生长时间过长与内膜不同步,不能妊娠;另一情况是在一定促性腺激素作用的情况下产生过激反应诱发OHSS,以致威胁患者的生命[1].卵母细胞IVM为人们解决这些问题提供了一条可供选择的途径,且研究证明,PCOS患者比正常卵巢者获得更多的未成熟卵.因此认为,卵母细胞IVM对PCOS患者治疗尤其适用.现就卵母细胞IVM及其在PCOS患者的应用现状做一综述.
-
卵丘细胞在未成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存中的作用
卵母细胞冷冻技术是生殖医学的一大热点,未成熟卵母细胞冻存是保存女性生育力的重要方法,具有广阔的临床应用前景.卵丘细胞与卵母细胞共处同一微环境,二者通过缝隙连接进行复杂的双相调控和物质交换,目前已知卵丘细胞在人类未成熟卵母细胞体外成熟过程中具有重要作用,但在冷冻过程中的作用尚无定论.随着玻璃化冷冻技术的发展,卵丘细胞对未成熟卵母细胞冷冻的影响有了较多的研究,卵丘细胞可减缓冷冻剂渗透速率,从而避免细胞渗透压的突变对未成熟卵母细胞的损伤,提高细胞冻融后存活率和受精率并支持未成熟卵母细胞的体外成熟.就卵丘细胞在人类未成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存中的作用进行综述,为癌症化疗、延迟生育年龄等需进行的未成熟卵母细胞冷冻提供重要的理论基础及可靠的实验依据.
-
细胞松弛素B在人类体外成熟卵子冷冻中的作用
目的:探讨细胞松弛索B在人类体外成熟卵子玻璃化冷冻中的作用.方法:收集常规胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)周期中未成熟卵母细胞234枚(包括生发泡期即GV期和第1次减数分裂中期即M I期),在体外培养24～48 h,181枚卵母细胞成熟(排出第2极体),随机分成3组并行玻璃化冷冻.A组(43枚)用细胞松弛素B(CB)预处理30 min后行玻璃化冷冻;B组(66枚)用CB预处理20 min后行玻璃化冷冻,C组(72枚)未用CB预处理直接行玻璃化冷冻.D组为对照组30枚体内成熟卵子未用CB处理直接玻璃化冷冻.各组卵子冷冻3周后解冻,复苏的卵子行ICSI辅助授精,观察各组成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果:冻融后的体外成熟卵子,其成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率均显著低于体内成熟卵子(P＜0.05).A组的成活率显著低于B、C两组(P＜0.05),A、B、C 3组间的受精率、卵裂率差异无统计学意义(P＞0.05),A、B两组未获囊胚,C组仅有1枚囊胚.结论:冻融体外成熟卵子,成活率、受精率、卵裂率均下降,囊胚形成率低,胚胎后期发育潜能显著降低.CB预处理未能提高卵子冷冻的成活率、受精率、卵裂率及胚胎的发育潜能.
-
未成熟卵母细胞体外培养成熟治疗多囊卵巢综合征不孕症
目的:观察应用卵母细胞体外成熟(IVM)技术治疗多囊卵巢综合征不孕症的效果.方法:在自然周期中取出未成熟卵母细胞进行体外培养成熟后行单精子胞浆注射,受精后取优质胚胎移植入宫腔.结果:7例患者进行细胞7个IVM治疗周期,共获得未成熟卵细胞51个,平均每个周期7.29个.共培养成熟37个卵子成熟率72.55%,受精率86.49%,卵裂率68.75%.7个移植周期,3例妊娠,总周期妊娠率42.86%,总种植率26.67%.2例已分娩,出生2个正常男婴.结论:在自然周期中获得未成熟卵母细胞体外培养成熟后治疗多囊卵巢综合征不孕症有效.
-
添加两种不同培养成分对人未成熟卵体外成熟培养的影响
目的:研究添加两种不同培养成分对人未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)的效果.方法:选择接受ICSI治疗的77名不孕患者共收集未成熟卵177枚,随机分A组(激素组)33例,添加0.075 IU/ml FSH及0.075 IU/ml LH至基础IVM培养液中;B组(成熟卵泡液组)44例,50％基础IVM培养液与50％人成熟卵泡液配成.将两组收集的未成熟卵母细胞放人不同培养液中培养48 h,每24 h倒置显微镜下观察卵母细胞的形态;对MII卵进行ICSI,ICSI操作后继续培养,ICSI后16～20 h进行受精观察,24及48 h分别进行卵裂观察及胚胎评分.结果:①B组未成熟卵母细胞48 h成熟率和MI期卵母细胞48 h成熟率显著高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05),两组培养液GV期卵母细胞24和48 h成熟率比较差异无统计学意义(P＞0.05).②B组2PN卵裂率显著高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05),两组2PN受精率及可利用胚胎率差异无统计学意义(P＞0.05).结论:人成熟卵泡液内可能含有一些未知的有利于卵母细胞成熟的因子,深入研究卵泡液的成分,进一步明确其促卵母细胞成熟机制对开发新的IVM培养液、改善IVM的临床结局有重要意义.
-
OPS法玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的效果观察
目的:探讨OPS(open pulled straw,开放式拉细麦管)法玻璃化冷冻技术冻存未成熟卵母细胞的效果.方法:小鼠GV期卵母细胞用OPS法玻璃化冷冻复苏后行体外成熟培养(in-vitro maturation,IVM)或直接行IVM,所获成熟卵行体外受精(IVF)和胚胎的体外培养(IVC).以体内成熟卵行IVF/IVC作为in-vivo对照组.结果:GV期卵冻融后65.11%存活,IVM后成熟率为52.86%,其成熟率显著低于IVM对照组.冻融卵成熟后受精、卵裂率(33.78%、76.00%)低于IVM对照组和in-vivo对照组,培养后未见囊胚形成.结论:OPS法玻璃化冷冻技术可有效冻存GV期卵母细胞,复苏后可发育成熟,但卵的受精和继续发育能力欠佳.
-
褪黑素对ICSI周期中人未成熟卵母细胞体外成熟结果的影响
目的 探讨褪黑素的应用对卵胞浆内单精子注射(ICSI)周期中人未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)、受精和胚胎发育的影响.方法 收集的人未成熟卵母细胞随机置于含褪黑素和不含褪黑素的IVM培养液中进行IVM培养,记录和分析未成熟卵IVM以及所获胚胎的发育情况.结果 用含褪黑素IVM培养液培养的未成熟卵母细胞为褪黑素组(n=94),IVM培养成熟78枚,ICSI后受精60枚,培养后卵裂59枚,发育至囊胚26枚,其14枚为优质囊胚,而非褪黑素组(n=73),IVM培养成熟60枚,ICSI后受精44枚,培养后卵裂42枚,随后11枚发育至囊胚,仅1枚优质囊胚.两组间成熟率、受精率、卵裂率及囊胚率差异无统计学意义(P＞0.05),但褪黑素组的优质囊胚率明显高于非褪黑素组(53.8％ vs9.1％),差异有统计学意义(P ＜0.05,X2=6.42).结论 褪黑素的应用改善了IVM效果,使人未成熟卵母细胞在IVM、ICSI及胚胎培养后发育更多的优质囊胚.
-
人类未成熟卵母细胞的体外成熟培养研究进展
随着人类生育年龄的推迟及二胎政策的全面放开，不孕症、卵巢早衰、卵巢储备功能不足等女性生殖疾病罹患率也呈逐年上升趋势。人类未成熟卵母细胞的体外成熟（in vitro maturation，IVM）培养一直是国内外生殖医学领域研究者关注的热点。体外培养卵泡生长状态受获取卵泡途径、培养环境、培养方案等多种因素影响。文章就人类未成熟卵母细胞 IVM 培养的临床适应证、培养方案及影响因素作一综述，为相关研究人员和临床工作者提供参考。
