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周氏扶正抗癌合剂对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响(三)
3 讨论周氏扶正抗癌合剂是周昌安教授几十年从事肿瘤防治研究的l临床经验方.全方由白英、仙鹤草、当归、黄芪、桑寄生共五味中药组成,用于肺癌术后、乳腺癌术后、胃癌术后等抗复发,增加机体免疫力,减轻放疗、化疗的毒副作用等方面疗效显著.针对癌症正虚血瘀、瘤毒内结的病机特点,方中重用白英、仙鹤草解毒抗癌,当归养血活血,配合黄芪、桑寄生扶正益气.全方共奏清热解毒抗癌,益肾健脾,养血活血之功.
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周氏扶正抗癌合剂对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响(二)
(接上期)2 结果2.1 对正常人胚肾细胞HEK-293的影响由图4、5、6明显可见白英组的细胞南增殖速度比阴性对照略缓,而用扶正合剂刺激的细胞,其增殖速度远远低于阴性对照.
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食欲素A促人胃癌SGC7901细胞凋亡
目的 观察食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长的影响,并初步探讨其机制.方法 常规培养胃癌SGC7901细胞,单独食欲素A处理及食欲素A受体拮抗剂SB408124干预后再用食欲素A作用,MTT法检测药物对SGC7901细胞抑制率;Hoechst33258荧光染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测BCL-2、BAX、Cyt c和活化caspase-3蛋白的表达.结果 食欲素A呈剂量-时间依赖性的抑制胃癌SGC7901细胞增殖,其中1.0 μmol/L食欲素A作用24h对胃癌细胞增殖的抑制作用强,抑制率为65.32％ ±2.51％ (P ＜0.01);食欲素A组可见较多凋亡细胞:胞核或胞质内可见浓染致密的蓝色荧光,有明显的核固缩,SB408124干预后,凋亡细胞数量明显减少(P＜0.05);食欲素A作用后,凋亡率为59.52％±1.38％,而SB408124干预后,凋亡率降至38.96％ ±1.82％(P＜0.05);食欲素A可上调凋亡相关蛋白BAX、Cyt c及活化caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白BCL-2的表达(P＜0.05),SB408124干预后,食欲素A作用减弱.结论 食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长具有明显的抑制增殖和促凋亡作用;食欲素A的作用是通过其选择性受体实现的.
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胃癌细胞SGC7901中STAT1,NF-κB p65和caspase 8的关系
目的:探讨信号转导子与转录活化因子1(STAT1)、核因子κB(NF-κB)p65和凋亡因子caspase 8在胃癌细胞SGC7901中的关系.方法:SGC7901细胞经IFN-γ及STAT1反义寡核苷酸(STAT1ASON)处理后,应用RT-PCR方法检测STAT1,NF-κB p65和caspase 8在mRNA水平的改变.结果:IFN-γ(1000 U)处理SGC7901细胞,在0.5,3和24 h,STAT1和NF-κB p65在mRNA水平出现先下降后上升的变化,二者呈正相关关系(r=0.403,P=0.009);使用不同浓度的STAT1ASON处理SGC7901细胞24 h,在mRNA水平,STAT1和NF-κB p65呈负相关关系(r=-0.556,P=0.015);IFN-γ和不同浓度的STAT1ASON联合作用处理SGC7901细胞24 h,在mRNA水平,STAT1和NF-κB p65呈负相关(r=-0.783,P=0.002),caspase 8呈上升趋势,与STAT1呈负相关关系(r=-0.667,P=0.002),与NF-κB p65呈正相关关系(r=0.594,P=0.021).结论:IFN-γ能促进STAT1,NF-κB和caspase 8的表达,STAT1和NF-κB p65在mRNA水平上呈负相关;caspase 8与STAT1呈负相关关系,与NF-κB p65呈正相关关系.
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莪术对SGC7901胃癌细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE2表达的影响
目的:观察莪术对人胃癌SGC7901细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE2的影响.方法:MTT法观察莪术对胃癌细胞的抑制作用,绘制其抑制率曲线,选取抑制率为25%时的药物浓度作为加药浓度,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞COX-1,COX-2基因及其蛋白表达的变化.用ELISA方法检测加药后培养基中VEGF和PGE2的表达情况.结果:莪术对胃癌细胞有一定的抑制作用,且随着浓度的增加,其抑制作用加强;将RT-PCR产物经电泳分析,证实胃癌细胞中有COX-1、COX-2基因的表达,对各条带进行灰度分析发现:中西药对COX-1和COX-2均有抑制作用,莪术对COX-2的抑制作用大于塞来昔布;Western blot曝光结果可见,COX-1各组在70 kDa处可见特异性的蛋白条带,COX-2各组在80 kDa处可见特异性的蛋白条带.对各条带进行灰度分析发现:各组中西药对COX-2均有明显的抑制作用,而对COX-1则无抑制作用,其中,莪术对COX-2的抑制作用要强于celecoxib;西药celecoxib及莪术组可明显降低人胃癌细胞VEGF的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(91.0±18.2,127.8±12.1 ng/L vs 162.0±15.1 ng/L,P＜0.01);西药celecoxib组PGE2表达低于细胞组,但其差别无统计学意义,莪术可明显降低人胃癌细胞PGE2的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(67.5±6.9 ng/L vs 78.7±5.6 ng/L,P＜0.01).结论:莪术可能是通过抑制COX-2及其下游PGE2表达,使VEGF表达下调而抑制肿瘤.
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乳酸杆菌对幽门螺旋杆菌脂多糖作用下的SGC-7901细胞p38MAPK磷酸化水平和凋亡率的影响
目的:探讨保加利亚乳酸杆菌(lactobacillus bulgaricus,LBG)对幽门螺旋杆菌悉尼株脂多糖(H pyloriSS1-LPS)作用下SGC-7901细胞的p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化水平和凋亡率的影响.方法:使用LBG(1×1013CFU/L)或p38MAPK通路阻滞剂SB203580(10 μmol/L)预处理SGC-7901细胞,1 h后分别加入2.5×103,2.5×104,2.5×105EU/L的H pyloriSS1-LPS,干预2 h后使用免疫细胞化学方法检测各组细胞磷酸化p38MAPK(P-p38MAPK)的水平,4,5,6 h后使用MTT法检测细胞活性,6 h后使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果:与对照组比较,H pyloriSS1-LPS直接干预后,SGC-7901细胞的活性明显下降(0.1 64±0.028 vs 0.622±0.068,P＜0.05),凋亡率(10.000%±0.510% vs 4.175%±0.206%,P＜0.05)和P-p38MAPK水平明显上升(79.771±1.424 vs 4.075±0.135,P＜0.01),呈剂量依赖性;LBG预处理各组的细胞凋亡率和P-p38MAPK水平无明显改变;SB203580预处理各组的细胞活性和细胞凋亡率无明显改变.结论:HpyloriSS1-LPS可诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制可能包括诱导生成P-p38MAPK;而LBG能对抗H pyloriSS1-LPS的促凋亡作用,其机制可能抑制H pyloriSS1-LPS诱导生成P-p38MAPK.
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切除修复交叉互补基因1表达与胃癌细胞株耐药关系的实验研究
切除修复交叉互补基因1 (excision repair cross complementing 1,ERCC1)是核苷酸切除修复途径的关键基因,其过度表达导致顺铂耐药[1].本研究通过检测不同胃癌细胞系中ERCC1的表达并观察其对顺铂的敏感性,了解ERCC1表达与顺铂耐药之间关系,并通过顺铂诱导胃癌SGC7901细胞后观察ERCC1表达的变化,为探讨胃癌耐药机制和指导临床的个性化治疗提供理论依据.
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胃癌细胞耐药相关蛋白质分子的差异展示
目的寻找新的胃癌细胞耐药相关蛋白质分子,阐明肿瘤耐药的新机制.方法以胃癌细胞.SGC7901和长春新碱诱导的耐药胃癌细胞SGC7901/VCR为研究对象,用固相化pH梯度等电聚焦的二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术展示并比较两种细胞表达的所有蛋白质,凝胶银染法显示耐药与非耐药细胞差异表达的蛋白质分子.结果在两张银染的凝胶蛋白质图谱上,均有680个可辨识的蛋白质点,绝大多数蛋白点在位置、形状和密度上是一致的.在耐药细胞蛋白质二维电泳图谱中,发现有30个明显差异的蛋白点,并初步确定了其等电点和分子量.其中3个蛋白点表达量很高,但在非耐药细胞中未出现;6个蛋白点丰度明显上调;19个蛋白点丰度明显下调;2个蛋白点在耐药细胞中未出现,但在非耐药细胞中高表达.结论胃癌耐药细胞中差异表达的蛋白质分子可能与其长春新碱耐药机制相关.
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有丝分裂阻滞缺陷蛋白2选择性剪接体MAD2β在胃癌细胞多药耐药机制中的作用
目的观察有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(mitotic arrest deficient protein 2, MAD2)基因的选择性剪接体MAD2β在人胃癌多药耐药性形成过程中的作用机制.方法从耐阿霉素人胃癌细胞系SGC7901/ADR中提取总RNA,通过RT-PCR获得MAD2β全长编码cDNA,并克隆至pUCm-T载体,正向亚克隆插入真核表达载体pcDNA3.1中.以脂质体介导pcDNA3.1/MAD2β真核表达载体转染胃腺癌细胞SGC7901.以体外药敏试验检测转染MAD2β的胃癌细胞及其对照组细胞对化疗药物的敏感性.通过流式细胞仪检测MAD2β基因转染组和对照组胃癌细胞在细胞周期中的分布和细胞内阿霉素的荧光强度.结果 RT-PCR扩增获得约0.53 kb片段,DNA序列测定证实为MAD2的一种选择性剪接形式,命名为MAD2β.重组正义真核表达载体pcDNA3.1/MAD2β瞬时转染SGC7901细胞,经MTT法证实,转染细胞SGC7901/MAD2β对化疗药物阿霉素、长春新碱和丝裂霉素的耐药性增强.与SGC7901/pcDNA3.1比较,阿霉素大剂量短期作用后,SGC7901/MAD2β细胞内的平均荧光强度比对照组低(P<0.05).结论 MAD2β基因在一定程度上增强了人亲本胃癌细胞SGC7901对化疗药物的耐受性,其可能的机制为肿瘤细胞在化疗药物作用下,有丝分裂出现异常,耐药细胞通过调控MAD2基因产生不同的选择性剪接形式, 降低MAD2的活性或改变其功能,以通过纺锤体检测点并继续存活.
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番荔枝内酯体外抑制人胃癌细胞活性研究
目的 探究番荔枝内酯对人胃癌细胞体外活性的影响.方法 分别采用MTT实验、黏附实验和划痕实验考察番荔枝内酯对4种人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901生长活性、黏附能力和迁移能力的影响.结果 番荔枝内酯抑制人胃癌细胞AGS、MKN45、BGC823和SGC7901的生长并呈剂量依赖性,其IC50值分别为5.32、6.25、5.46、4.43 μg/mL;抑制人胃癌细胞黏附能力并呈剂量依赖性;抑制人胃癌细胞的迁移能力并呈剂量依赖性.结论 番荔枝内酯体外可以有效抑制人胃癌细胞的活性,有望被开发成治疗胃癌的候选药物.
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异鼠李素抗肿瘤的作用及机制研究进展
异鼠李素(isorhamnetin)是一种已知的黄酮类化合物,有较好的抗心肌缺氧、缺血,缓解心绞痛,抗心律失常,清除氧自由基,降低血清胆固醇,促进血流通畅等多种生物学效应[1口].近年研究发现,异鼠李素可抑制多种肿瘤细胞的增殖和诱导凋亡,本研究就近年来国内外对异鼠李素抗肿瘤的基因调控、信号转导和逆转多药耐药等方面的分子机制研究综述如下.1 异鼠李素抑制肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用机制研究表明,异鼠李素能通过降低凋亡抑制基因bcl-2表达、增加促凋亡蛋白Bax的数量来发挥诱导凋亡作用.异鼠李素可明显抑制胃癌SGC7901细胞增殖、降低细胞端粒酶活性、诱导细胞凋亡,且呈浓度和时间依赖性.可能机制为阻滞细胞G0期向S期的进程,形成G0期阻滞,造成G0期细胞堆积阻滞并阻断细胞DNA合成和复制[2].
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NF-κB基因沉默对入胃癌SGC7901细胞增殖影响及机制探讨
目的:研究NF-κB基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖及TFF3、ERK表达的影响.方法:应用脂质体法将靶向NF-κB的干扰RNA(siRNA)转染入胃癌细胞株SGC7901中.采用MTT法和流式细胞术法检测NF-κB基因沉默对SGC7901细胞的增殖抑制率和细胞凋亡情况,运用Real time PCR和Western blot免疫蛋白印迹法检测SGC7901细胞内TFF3、ERK的表达.结果:MTT法显示NF-κB基因沉默组癌细胞抑制率大于空白载体组和对照组(P＜0.01);流式细胞术法表明NF-κB基因沉默组细胞凋亡比例达12.60％,明显高于空白载体组和对照组(P＜0.01):RT-PCR和Western Blot检测示,经NF-κB基因沉默后,细胞内NF-κB、TFF3、ERK mRNA及蛋白表达量下降明显.结论:NF-κB基因沉默可抑制胃癌细胞的增殖并促进其凋亡.NF-κB基因作为胃癌治疗的分子靶点可能具有重要意义.
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菟丝子醇提物对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响
目的 探讨菟丝子(CCL)醇提物诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用.方法 以CCL(10、50、100 mg/L)作用于人胃癌SGC7901细胞,同时设DMSO和培养液作为对照组.采用HE染色法观察细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳法分析SGC7901细胞的DNA片段化.结果 HE染色镜下可见较为典型的凋亡形态学变化:细胞变小,核皱缩,荧光强度增强,核仁消失,新月体样改变,凋亡小体形成等;琼脂糖电泳出现明显的"梯状"条带,并存在剂量依赖性,而对照组未出现梯状条带.结论 CCL能够诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡.
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金荞麦红车轴草黄酮对胃癌SGC7901细胞迁移的抑制作用及其机制
目的:观察金荞麦红车轴草黄酮(RCFGB)对人胃癌SGC7901细胞体外迁移能力的影响,并探讨其作用机制.方法:利用乙醇萃取法制备RCFGB.人胃癌SGC7901细胞分为实验组和对照组,分别加入不同浓度(5和10g·L-1)的RCFGB溶液及等量PBS液.通过划痕实验及TransweⅡ实验观察RCFGB对人胃癌SGC7901细胞迁移能力的影响,采用Western blotting法检测RCFGB对SGC7901细胞内白细胞介素6(IL-6)蛋白表达水平的影响.结果:与对照组比较,5和10 g· L-1RCFGB组SGC7901细胞的划痕愈合能力明显减弱(P＜0.05),穿膜细胞的数量显著减少(P＜0.05),同时细胞内IL-6蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05).结论:RCFGB能够抑制人胃癌SGC7901细胞的迁移能力,其作用与抑制人胃癌SGC7901细胞内的IL-6蛋白表达水平有关.
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MMP-2反义寡核苷酸对人胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌SGC7901细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 将不同浓度的硫代磷酸化修饰的MMP-2 ASODN转染人人中低分化胃腺癌SGC7901细胞株,RT-PCR法检测细胞MMP-2基因mRNA的转录水平;Transwell试验检测细胞体外迁移和侵袭能力变化;MTT法检测细胞的增殖活性.结果 转染MMP-2ASODN后,SGC7901细胞中MMP-2基因mRNA的转录水平显著降低,细胞的体外迁移和侵袭能力受到抑制,且抑制作用随ASODN浓度的增加而增强;而细胞的增殖活性无明显变化.结论 MMP-2 ASODN可抑制胃腺癌SGC7901细胞MMP-2基因mRNA的转录水平及细胞的体外迁移和侵袭能力,但与胃癌细胞的增殖活性无明显相关性.
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顺铂与白藜芦醇联合对胃癌细胞影响的研究
胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,并且容易发生转移,其中人胃癌MGC803 细胞对多种化疗药物敏感.虽然我国在胃癌综合治疗方面做了大量研究,并取得一定效果,但胃癌术后5年生存率仍不足40%[1-3].顺铂(Cisplatin,CDDP)具有独特的抗癌机理和神奇的抗癌功效,CDDP是近年来常用的抗肿瘤药物.本研究以人胃癌SGC7901细胞株为研究对象,观察了CDDP对胃癌细胞及正常人体细胞的作用,并进一步研究CDDP与常规化疗药物白藜芦醇(Resverat rol,RES)联合应用对胃癌细胞作用的影响.为指导临床治疗提出一些新的化疗方法.
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白藜芦醇诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的研究
典型的凋亡形态学变化:细胞变小,核皱缩,荧光强度增强,呈囊月或环状,核仁消失,新月体样改变,凋亡小体形成等;琼脂糖电泳出现明显的"梯状"条带,而对照组未出现梯状条带.结论:Res能抑制人胃癌SGC7901细胞的生长并诱导其凋亡.
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幽门螺杆菌依赖丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导SGC7901细胞表达分泌白细胞介素-8
背景:已知前炎症细胞因子白细胞介素(IL)-8在慢性活动性胃炎、消化性溃疡等幽门螺杆菌(H. pylori)感染相关疾病的发生、发展中起重要作用,但H.pylori诱导胃上皮细胞表达、分泌IL-8的分子机制尚不明确.目的:通过体外实验了解H.pylori对人胃癌细胞株SGC7901表达、分泌IL-8的影响,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在H.pylori诱导SGC7901细胞IL-8 mRNA表达和IL-8蛋白分泌中的作用.方法:SGC7901细胞经p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预作用2 h,再加入H.pylori标准菌株CCUG17874共培养.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-8 mRNA的表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-8蛋白的分泌,观察SB203580对H.pylori诱导SGC7901细胞表达、分泌IL-8的影响.结果:H.pylori能诱导SGC7901细胞表达、分泌IL-8.SB203580能以剂量依赖的方式抑制H.pylori诱导的SGC7901细胞IL-8蛋白分泌,经终浓度为03、1、3和10μmol/L的SB203580预作用2 h,SGC7901细胞的IL-8蛋白分泌与未经SB203580预作用组相比分别减少了26%、51%、64%和73%(P＜0.05):SB203580也能使H.pylori诱导的IL-8 mRNA表达显著减弱.结论:H.pylori能诱导胃上皮细胞表达、分泌IL-8,该作用在一定程度上依赖于MAPK信号通路.
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miR-133a-3p在胃癌组织和血浆中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响
目的:检测miR-133a-3p在胃癌组织及患者血浆中的表达水平及其对胃癌细胞增殖的影响,并探讨其与患者预后的关系.方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年5月胃癌手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本52例,每例组织标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织.采用实时荧光定量RT-PCR (RT-qPCR)法检测miR-133a-3p在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康体检者血浆(35例)的表达情况,分析miR-133a-3p的表达水平与胃癌患者中位DFS及临床病理特征的关系.CCK-8法检测过表达或沉默miR-133a-3p对胃癌SGC7901细胞增殖的影响.结果:miR-133a-3p在胃癌组织中的表达明显降低(P＜0.01),其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤侵润深度(T)、淋巴结转移(N)及脉管瘤栓相关(P＜0.01);在胃癌患者血浆中的表达明显升高(P＜0.01),其表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移(N)及脉管瘤栓相关(P＜0.05);与患者血清中CA199的表达水平正相关(P＜0.01).胃癌组织中miR-133a-3p高表达组患者中位DFS明显高于低表达组(20.8 vs 14.8个月,P＜0.05).血浆中miR-133a-3p的高表达组患者中位DFS明显低于低表达组(14.4 vs 20.3个月,P＜0.05).过表达miR-133a-3p可明显抑制SGC7901细胞的增殖能力,同样沉默其表达可明显促进SGC701细胞的增殖能力(均P＜0.05).结论:miR-133a-3p可明显抑制胃癌细胞SGC7901的增殖能力,在胃癌组织和血浆中存在明显异常表达,其表达与患者预后明显相关,可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物.
关键词： 胃癌 SGC7901细胞 miR-133a-3p 增殖 预后 -
黄芪对SGC7901胃癌细胞COX-1、COX-2、VEGF和PGE2表达的影响
目的:观察黄芪对人胃癌SGC7901细胞中COX-1、COX-2、VEGF和PGE2表达的影响.方法:采用MTT试验观察黄芪对胃癌细胞的抑制作用,用RT-PCR以及Western blot方法研究加药后人胃癌细胞COX-1、COX-2基因及其蛋白表达的变化.用ELISA方法检测培养基中VEGF、PGE2的表达情况.结果:黄芪能抑制人胃癌细胞生长,呈一定的量效特征;并能抑制人胃癌细胞COX-2、VEGF和PGE2的表达.结论:黄芪抗肿瘤的机制可能是通过抑制COX-2,进而抑制其下游产物PEG2的表达及使VEGF表达下调,从而抑制肿瘤的生长.
