首页 > 文献资料
-
结核分枝杆菌抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的克隆表达及血清诊断学初步评价
目的 评价结核分枝杆菌蛋白抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的血清诊断价值和潜在应用前景.方法 以结核分枝杆菌H37Rv标准株全基因组DNA为模板扩增得到Rv2654c、Rv1985c和Rv3868基因的完整序列,并与表达载体pET-32a构建重组质粒.原核表达Rv2654c、Rv1985c和Rv3868蛋白,利用亲和层析的方法进行纯化.采用棋盘滴定的方法,确定各抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)佳反应条件,并应用190份血清进行血清IgG抗体检测,结合受试者工作特征曲线(ROC)对其诊断效能进行分析和评价.通过ROC计算各抗原组合的诊断效能,确定佳组合方案.结果 成功构建了重组蛋白,对重组后的片段进行测序,经BLAST比对与目的基因完全一致,且能够稳定表达.对经纯化后的3种蛋白进行ELISA检测,经统计学分析,Rv2654c、Rv1985c和Rv3868抗原的诊断效能分别达到73.16%、56.84%和71.05%.结合ROC得到佳的抗原组合方案为Rv2654c+ Rv3868,其敏感性、特异性和诊断效能分别达到78.95%、72.63%和75.79%.结论 结核分枝杆菌重组抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868具有作为结核病诊断抗原的潜力,可以作为结核病免疫学快速诊断的候选蛋白.抗原组合Rv2654c+ Rv3868具有较高的诊断效能,有较好的潜在应用价值.
-
血清CA125检测及其临床意义
血清CA125检测已经有20年历史,CA125测定肿瘤标志物的检测方法,完全不同于由绒毛分泌的绒毛促性腺激素(hCG),后者具有极高的特异性与敏感性.而肿瘤则没有特异性抗原,只有肿瘤相关性抗原,因之特异性差.所以需要了解CA125测定的原理才能很好的应用于临床.一、基本概念1981年Bast等以卵巢上皮癌细胞株OVCA433为抗原制备了单克隆抗体OC125,OC125所识别的抗原称为CA125.用放射性同位素131I标记OC125后可进行卵巢上皮癌的检测.并以OC125检测各种组织,发现CA125不但存在于卵巢浆液性上皮癌中,尚存在于下列组织:(1)间皮细胞组织,包括腹膜、胸膜及心包膜;(2)副中肾管上皮,包括卵巢上皮癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌及间皮细胞瘤等.
-
三种结核抗体快速测试方法临床应用的对比观察
近年来结核分支杆菌数种特异性抗原的发现与纯化,实验技术的不断发展,利用ELISA法或金标法测定患者血清中结核抗体用来诊断活动性肺结核已在临床应用,敏感性和特异性都在不断提高,但因所用的抗原及技术各不相同,各方法及试剂间仍有较大差异.本文对目前常用的斑点吸附免疫金标法、斑点渗漏免疫金标法及新推广的双向层析免疫金标法的临床应用效果作对比观察.
-
多发骨结核一例
患者,女,65岁,退休工人.因间断腰痛8个月、加重20 d,于2013年6月25日来我院就诊.患者8个月前无明显诱因出现腰痛,活动时加重,休息时可缓解,伴轻微盗汗、乏力,但患者未在意,未进一步诊治.2013年6月2日患者腰部疼痛加重,伴前胸部及背部疼痛.发病期间,患者神志清醒,精神欠佳,饮食良好,睡眠较差,大小便正常,体质量无明显变化.患者于2013年6月13日在外院行正电子发射体层摄影术(PET)-CT检查:显示左肺上叶舌段、左肺下叶后基底段陈旧性病灶,同时发现左侧锁骨、右侧肩胛骨、多个椎骨、多根肋骨、组成骨盆的诸骨均有骨破坏,葡萄糖代谢异常增高,考虑恶性肿瘤性病灶.2013年6月20日于郑州大学第一附属医院行右肩胛骨穿刺活检病理检查:报告为肉芽肿性炎,倾向于结核病.患者既往有高血压病史30年,血压高100/200mmHg(1mmHg=0.133 kPa);30年前因"子宫肌瘤"行子宫切除术.遂于2013年6月25日来我院就诊,在我院再次行病理检查诊断为上皮样结核(增殖型);行结核分枝杆菌感染T细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB),显示早期分泌性抗原靶6(early secreting antigenic target-6,ESAT-6):12个斑点形成细胞(SFCs)/106外周血单个核细胞(PBMC);结核分枝杆菌特异性抗原培养滤液蛋白10(culture filtrate protein 10,CFP10):35个SFCs/106 PBMC.
-
微卡治疗结核病的机制疗效及安全性
1免疫调节机制分枝杆菌有四类抗原:工型抗原为各种分枝杆菌的共有抗原,Ⅱ型抗原为慢生长分枝杆菌抗原,Ⅲ型抗原为多数快生长分枝杆菌抗原,Ⅳ型抗原为分枝杆菌的特异性抗原.工型抗原介导共同保护性免疫,Ⅳ抗原介导变态反应引起组织病理性损害.
-
HBV病毒样核心颗粒应用研究进展
病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)是一种模拟病毒的颗粒形态特点,将外源基因片断产物呈递到病毒颗粒表面而形成的嵌合颗粒.它有与病毒颗粒相同的外部形态,甚至还有某些病毒受体的天然配体,同时还可将其他病原的特异性抗原等呈递在自己的表面,因而在病原体的疫苗研究和基因治疗研究中发挥着重要的作用.
-
中国13个省份结核分枝杆菌5种特异性抗原人T细胞表位多态性分析
目的 分析我国结核分枝杆菌复合群(MTBC)临床分离株中GlnA1、Mpt70、LppX、GroES和LpqH 5种抗原编码基因多态性及其人T细胞表位的多态性.方法 选取13个省份临床分离的173株MTBC,采用PCR扩增5种抗原基因,并运用BioEdit软件进行序列比对,分析其人T细胞表位与非表位的变异情况.利用Mega 6.0软件分别计算同义突变率(dS)和非同义突变率(dN)及其比值.结果 173株菌的基因glnA1非表位区出现2个非同义突变位点;基因mpt70表位区出现1个非同义突变位点;基因lpqH表位区表现为1个非同义突变位点和1个同义突变位点;groES在整个基因中未发现任何突变;基因lppX表位区表现为5个非同义突变和1个同义突变位点,其中152位的氨基酸相同位点有9株菌发生了同义突变,表现较高的多态性.同时基因lppX的15个T细胞抗原表位中有7个表位发生了改变,其dN/dS值为0.19.结论 结核分枝杆菌抗原Mpt70、LppX和LpqH的人T细胞表位区具有多态性,反映了此抗原可能参与逃避宿主免疫的分化选择.GlnA1的非表位区的多态性,对该菌株的免疫反应影响较小.GroES序列相对保守,不具有明显的多态性,可能对结核分枝杆菌的鉴定、诊断及新型疫苗的研制具有重要作用.
-
医护同步集中式术前访视在前列腺癌手术患者中的效果
目的:探讨医护同步集中式术前访视在术前列腺癌手术患者中的效果.方法:将从2013~2016年在宁波市鄞州区第二医院接受前列腺癌手术的患者80例分为对照组和观察组,其中对照组40人,观察组40人.对照组采取常规的术前护理,观察组在常规术前护理的基础上进行医护同步集中式术前访视.由患者对常规术前护理和医护同步集中式术前访视进行评分,检测术前和术后观察组和对照组患者的特异性抗原含量.结果:患者对于医护同步集中式术前访视的满意度明显高于常规护理(P<0.05),在两组护理方式下,观察组的特异性抗原水平明显高于对照组(P<0.05).结论:医护同步集中式术前访视在前列腺癌手术患者中效果显著.
-
b型嗜血流行性感冒杆菌在急性下呼吸道感染病原学中的地位
流行性感冒(流感)嗜血杆菌(Haemophilus influenzae,Hi)是常见的致病菌,仅对人类致病.1931年,Pittman将Hi分为带荚膜菌株及不带荚膜菌株(不定型),荚膜菌株据荚膜多糖的特异性抗原不同分为6个血清型(a~f),其中b型(Hib)毒力大.Hib通过飞沫传播,是引起儿童侵袭性感染的重要致病菌,主要感染5岁以下儿童,是小儿败血症、脑膜炎、肺炎的主要致病菌.1968年,人们即认识到Hib发病率高,致死率高.近年来,人们发现,Hib对氨苄青霉素及其它一些抗生素的耐药率在增高.
-
发热与SARS
严重急性呼吸综合征(SARS)流行面广、病死率高,在WHO带领下,各国科学家奋力攻关,在病原确定、基因测序、蛋白质组、重症治疗、早期诊断实验技术、流行病学研究等方面均有了喜人的突破,但对新传染病的病原学特性尚未完全认识,免疫预防还没有疫苗,诸多的流行规律需要时间去摸索和研究,在SARS特异性抗原抗体系列诊断技术形成之前,探讨分析发热与SARS的关系很有必要.
-
DNA疫苗非病毒载体的研究进展
DNA疫苗(DNA vaccine)又称为核酸疫苗或基因疫苗,是将编码特异性抗原的基因构建在表达性质粒中,经某种方法导入体内后,利用宿主细胞表达系统合成相应的病原体蛋白,诱导机体产生免疫应答以达到预防和治疗疾病的目的.DNA疫苗自1990年发现以来,因具有良好的安全性及可诱导广泛的体液免疫和细胞免疫,已越来越受到人们的关注,是继减毒疫苗、基因工程疫苗之后的第三代疫苗,在人和动物的各种细菌性疾病、病毒性疾病、寄生虫病及肿瘤性疾病等领域发挥作用.
-
前列腺根治标本的处理方法
前列腺癌的新发病数较过去20年明显增高,主要归因于前列腺特异性抗原(PSA)在无症状男性中的普查和经超声活检而早期诊断[1].
-
酵母表达的重组戊型肝炎病毒ORF2蛋白在实验感染恒河猴血清抗体检测中的应用
诊断试剂的研制和开发亦是戊型肝炎研究的重要内容,以E.Coli及昆虫细胞表达的重组戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白作为抗原建立的免疫学检测方法已应用临床戊型肝炎的诊断、实验感染灵长类动物抗戊型肝炎病毒(HEV)抗体的检测以及HEV特异性抗原的检测.这些方法包括:Western blot,IFA,ELISA等.研究证实,重组HEV ORF2蛋白具有较好的抗原性[1-3].我们应用巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)成功表达了戊型肝炎结构区蛋白ORF2,制备了新型重组HEV ORF2[4],将其作为抗原建立ELISA应用于实验感染恒河猴血清抗-HEV抗体的检测,旨在研究酵母表达的重组HEV ORF2蛋白的抗原性,以进一步探讨该重组蛋白在戊型肝炎诊断上的价值.
-
肺炎衣原体Mr 53×103蛋白全基因克隆和表达
肺炎衣原体是1989年确立的衣原体属新种,相对分子质量(Mr)为53×103的蛋白是高度保守的肺炎衣原体主要的种特异性抗原〔1〕,位于病原体表面,其全基因含1*!482个碱基对,推测编码493个氨基酸。Mr 53×103蛋白与肺炎衣原体慢性感染有关,可能用作感染慢性化的标志〔2〕;抗Mr 53×103单抗能中和肺炎衣原体的感染〔3〕,表明Mr 53×103蛋白还是一个理想的预防肺炎衣原体感染的分子疫苗候选者。本实验克隆和表达了肺炎衣原体Mr 53×103蛋白的全长基因,为进一步研究该蛋白是否参与肺炎衣原体毒力因子的构成,以及其在肺炎衣原体感染检测上的意义和能否作为预防肺炎衣原体感染的分子疫苗等打下基础。
-
共刺激分子B7-H4与自身免疫病
T细胞激活需要两种信号途径:一种是通过T细胞表面受体(TCR)-人类主要组织相容性复合体(MHC)-肽复合物特异性抗原信号,第二种是通过抗原提呈细胞(APC)表面分子提供的共刺激信号.后者需要共刺激分子的参与,B7家族就是这一类分子,包括B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-DC和B7-H4.B7类分子主要与T细胞表面相应受体结合,在抗原特异性免疫应答过程中发挥正向或负向调控作用[1].
-
应用PCR-SBT方法检测CD36相关基因变异的研究
CD36为一种血小板上的特异性抗原,又称glycoprotein Ⅳ(GPⅣ),是血小板反应(thrombospondin)受体[1]。CD36基因变异会导致CD36抗原的缺失,此类人群若有输血、怀孕、造血干细胞移植等免疫因素就可能产生anti-CD36抗体[2-3],导致血小板输注无效,输血后紫斑,各种免疫性血小板减少等临床症状;另外也有研究指出CD36基因变异与高血脂症、感染疟疾及胰岛素耐受性有关联[4];近来在CD36基因剔除的小鼠中研究发现,血小板可经由CD36接受微颗粒(microparticles)的刺激而活化,CD36缺乏血小板被微颗粒活化的能力会降低,因而使止血时间延长[5]。
-
梅毒螺旋体抗原基因的克隆、表达及其在临床检验中的应用
目的 克隆、表达并纯化梅毒螺旋体相对分子质量为47×103抗原,并检测梅毒患者的血清标本.方法 应用基因扩增技术分离此蛋白的全长基因,采用基因工程的方法,应用融合表达载体pGEX-2T,重组、克隆得到带有梅毒螺旋体47×103特异性抗原基因的重组菌株,经大肠杆菌表达系统获得重组融合蛋白.再经亲和层析获得纯品,并联合应用ELISA检测梅毒患者的血清标本30份,同时检测非梅毒患者的血清标本30份.结果 纯化后获得了梅毒螺旋体相对分子质量为47×103的特异性抗原.ELISA检测梅毒患者血清结果均阳性.非梅毒患者血清均阴性,无非特异性交叉反应.结论 此项方法具有操作简便、准确的特点,为临床检测梅毒开辟了新的领域.
-
pMAGE-Al/EGFP转染的人树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤免疫效应的研究
树突状细胞(DC)是目前已知功能强的抗原提呈细胞,被广泛应用于研制各种肿瘤疫苗[1].肿瘤特异性抗原MAGE-Al在不同来源肿瘤组织中有较高表达[2],因而在肿瘤免疫治疗中一直备受重视.本实验中我们构建了重组真核表达载体pMAGE-Al/EGFP,体外电转染人人外周血单核细胞来源DC,并评价其体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力,以期为临床开展MAGE-Al为基础的免疫治疗提供有利的分子生物学工具.
-
卵巢癌细胞株来源的外来体的抗原性初步研究
外来体(Exosomes)是一种直径30~90nm的膜性囊泡,初在网织红细胞中被观察到并命名,后来发现多数细胞可分泌此囊泡,如血小板、B淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞、树突状细胞(DC)、肥大细胞和一些肿瘤细胞.本研究培养了5种卵巢癌细胞系,试图从培养上清液中分离出外来体,经过免疫电镜和Western blot鉴定其是否携带有肿瘤细胞的特异性抗原,为外来体用于卵巢癌主动免疫治疗提供理论基础.
-
局限性低危前列腺癌的主动监测
前列腺癌( prostate cancer )是男性泌尿系统常见的恶性肿瘤。世界范围内,前列腺癌发病率在男性所有恶性肿瘤中位居第二[1]。局限性低危前列腺癌的治疗方法现在仍然存在很大的争议。特别是随着前列腺癌特异性抗原( PSA )筛查的普及,越来越多的前列腺癌在临床早期得到诊断,其中相当一部分前列腺癌体积小、对生命威胁小,拥有较低的疾病相关死亡风险,很可能将终身罹患前列腺癌却死于其他原因[2]。全球范围内前列腺癌的发病率和生存率存在着广泛的差异,但有趣的是这种疾病的死亡率在各国各地之间的差异却相对小得多[3-4],在美国,尽管男性的前列腺癌患病率为17%,但是死于前列腺癌的却只有大概3%,这就表明了保守治疗对于大部分的早期低危前列腺癌患者来说更有价值[5-6]。因此,如何安全而有效地分辨出哪些前列腺癌患者即使不接受过度治疗也将不太可能因此死亡,避免过度治疗、提高患者生活质量,是目前国内外关注的热点。