首页 > 文献资料
-
宁波地区金黄色葡萄球菌临床株肠毒素基因与多位点序列分型研究
目的 了解宁波地区金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)临床株肠毒素基因分布和多位点序列分型特征.方法 收集宁波市各医院分离的金黄色葡萄球菌临床株,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测金黄色葡萄球菌肠毒素A(sea)、金黄色葡萄球菌肠毒素B(seb)、金黄色葡萄球菌肠毒素C(sec)和金黄色葡萄球菌肠毒素D基因(sed),对肠毒素基因阳性菌株利用多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)进行分子分型.结果 2006、2008和2011-2013年共收集临床株155株,其中肠毒素基因阳性株为45株,阳性率为29.03％;4种基因阳性率依次为16.77％、5.81％、11.61％和3.87％;形成8种基因组合,以sea(14株)、sec(9株)和sea+ sec(8株)三种组合为主.45株菌株可分为15个ST(sequence type,ST),ST1有14株,占31.11％;ST5有6株,占13.33％;ST1121和ST15的菌株均为4株,各占8.89％.与全国其他地区比较,在宁波地区临床株中发现ST12、ST573和ST1121三种新的ST.45株菌株在系统进化树上形成7个主要分支.在ST1克隆群中,sea阳性率为72.73％(16株),sec阳性率为54.55％(12株),以sea+ sec组合为主(8株).结论 宁波地区金黄色葡萄球菌临床株肠毒素基因阳性率较高,以携带sea和sec为主,形成8种基因组合.有15种ST型,发现ST12、ST573和ST1121三种新的ST.ST1克隆群为流行优势菌株,其次为ST5克隆群.ST1克隆群以携带sea和sec为主.
-
北京市顺义区食源性金黄色葡萄球菌肠毒素分型方法研究
目的 研究北京市顺义区食源性金黄色葡萄球菌肠毒素的分布状况,比较食物中毒和食品监测来源菌株的肠毒素型别差异.方法 对顺义区2013-2014年分离的34株食源性金黄色葡萄球菌进行增菌,应用PCR方法鉴定肠毒素sea-see、seg-sej基因,同时采用ELISA方法检测肠毒素SEA-SEE.结果 34株金黄色葡萄球菌中有19株携带肠毒素,阳性率是55.9％;检出的肠毒素类型有SEA(23.5％)、SEB(29.4％)、SEC(20.6％)、SED(26.5％)、SEE(23.5％)、SEH(3.2％)、SEG(9.7％).中毒样本与监测样本菌株的毒素检出率分别为72.7％、47.8％,但两者差异无统计学意义(x2=1.87,P＞0.05).结论 顺义区食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因携带率高,有SEA、SEB、SEC、SED、SEE、SEH、SEG多种类型.
-
金黄色葡萄球菌食品分离株肠毒素基因分布及分型研究
目的 对2006-2009年上海市Staphylococcus aureus(S.aureus)食品分离株进行肠毒素基因检测和基因分型研究,以了解肠毒素基因的分布规律及S.aureus的流行特点.方法 利用PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因,包括5种传统肠毒素基因(SEA-SEE)和4种新型肠毒素基因(SEG-SEJ)；利用脉冲场凝胶电泳法对49株食品分离株进行基因分型.结果 本研究发现49株食品分离株中有19株含有肠毒素基因,16株含有传统肠毒素SEA和SEC,且SEC占93.8％,并检测到新型肠毒素SEG、SEI、SEJ和SEH.PFGE法基因分型显示5株菌不能被分型,其余44株可分为28个基因型,表现为基因型的多样性,且分离自不同时间的菌株具有相同的带型.结论 应加强食品中S.aureus的监测分析,为其引起的食物中毒的预防和控制提供科学依据.
-
2005-2012年宁波市食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因和多位点序列分型研究
目的 了解宁波市食源性金黄色葡萄球菌(S.aureus)肠毒素基因分布和分子分型特征.方法 收集2005-2012年宁波市食品中金黄色葡萄球菌菌株,利用聚合酶链式反应(PCR)检测肠毒素A、B、C和D基因(sea,seb,sec和sed),对肠毒素基因阳性菌株利用多位点序列分型(MLST)进行分子分型.结果 2005-2012年共分离菌株190株,肠毒素基因阳性菌株为41株,阳性率为21.58％.4种肠毒素基因阳性率分别为7.37％(14/190)、5.26％(10/190)、8.95％(17/190)和5.79％(11/190),其中13株菌株具有两个及两个以上肠毒素基因.41株菌株可分为12个序列型(ST),以ST5、ST6、ST188和ST1为主,共占75.61％ (31/41),在进化树上主要形成4个分支.结论 2005-2012年宁波市食品中金黄色葡萄球菌携带肠毒素基因频率较高,需加强监测.肠毒素基因阳性菌株与中国其他地区食品株在分子分型上存在较大差异.
-
温州市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及分子流行病学特征研究
目的 了解温州市食品中金黄色葡萄球菌的污染状况,分析分离的金黄色葡萄球菌的耐药性、毒力基因分布及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征.方法 依据GB 4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行菌株分离鉴定,采用纸片法进行药敏试验,mini-VIDAS法和聚合酶链式反应(PCR)法分别进行肠毒素及其基因的检测,PFGE法进行分子分型.结果 4类食品388份样品中有16份样品检出金黄色葡萄球菌,检出率为4.12％,其中生畜肉和生禽肉检出率较高,分别为13.89％(5/36)和11.11％ (4/36).所有菌株均有不同程度的耐药,对青霉素耐药率高(100.00％,16/16),其次为红霉素(56.25％,9/16),多重耐药率为18.75％(3/16),未检出对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌.金黄色葡萄球菌肠毒素及其基因检测阳性率均为56.25％(9/16),其中seb、seg基因检出率较高,均为37.50％(6/16).PFGE图谱分为12种PFGE带型.结论 金黄色葡萄球菌在温州市食品中存在一定的污染率,且具有分子多态性、产肠毒素率及毒素基因携带率较高的特征,提示存在潜在的食品安全隐患.
-
广州市白云口岸航空食品中金黄色葡萄球菌凝固酶基因分型及肠毒素基因研究
目的 对2013-2015年从广州市白云口岸航空食品中分离的金黄色葡萄球菌进行基因分型研究,为食源性金黄色葡萄球菌分子溯源提供基础数据.方法 以血浆凝固酶和肠毒素为目标基因,采用聚合酶链式反应(PCR)方法对9株金黄色葡萄球菌进行基因分型,其中6株为航空食品分离株,1株为配餐车间大门手拭分离株,2株为标准菌株.肠毒素基因检测包括5种传统肠毒素基因(sea、seb、sec、sed、see)和6种新型肠毒素基因(ser、seg、seh、sei、sej、sep).结果 6株航空食品分离株的血浆凝固酶基因扩增分型结果为2个PCR型,酶切后得3种亚型;肠毒素基因检测结果显示有2株航空食品分离株含有肠毒素基因,检出率为33.3％ (2/6),检出的基因为2种传统肠毒素基因(sec、sed)和4种新型肠毒素基因(ser、seg、sei、sej),均同时携带2种以上肠毒素基因.结论 血浆凝固酶基因扩增分型结果显示,不同时间、不同采集地点存在相同的基因型,提示金黄色葡萄球菌存在交叉污染的可能性;航空食品分离株共检出6种肠毒素基因,提示金黄色葡萄球菌基因型多样性,应加强其他新型肠毒素基因检测.
-
霍乱弧菌的耐热肠毒素基因及侧翼序列特征分析
霍乱弧菌sto基因编码的热稳定肠毒素(ST)被认为是导致部分霍乱弧菌和拟态弧菌引起腹泻的重要原因[1].霍乱弧菌及拟态弧菌中sto基因的全序列已经被报道,但是对于基因、侧翼序列特征以及在基因组中位点缺乏后继的报道,而这些分析对于探索霍乱弧菌的致病分子机制是十分必要的.
-
腹泻儿童沙门菌的耐药性研究及肠毒素基因与临床关系分析
目的 研究近年来本地区沙门菌肠炎患儿的临床特征、耐药状况及肠毒素与临床特征的关系,为临床病情的判断与治疗提供依据.方法 我院2004年4月至2009年12月从儿童腹泻患者粪便中分离的沙门菌80株,采用血清学凝集试验确定沙门菌血清型,再采用Kerby-Bauer纸片扩散法检测其对抗菌药物的敏感性;同时对肠毒素基因(spvA、spvB、rck)进行PCR检测,分析沙门菌肠炎患儿的临床特征与肠毒素的关系.结果 发热、腹泻为本病的主要临床表现.鼠伤寒沙门菌是小儿沙门菌肠炎的主要血清型(70/80,87.5%),其他血清型的沙门菌呈散发.80株沙门菌均对亚胺培南、美罗培南敏感,但对其他抗生素均有不同程度的耐药.66株沙门菌为多重耐药菌株,17株为可疑产β-内酰胺酶(ESBLs)菌株,8株为可疑产头孢菌素水解酶(AMPC)菌株,鼠伤寒沙门菌的多重耐药率明显高于其他血清型的沙门菌(X2=30.921,P=0.001).所有沙门菌均含有spvA基因,少数沙门菌含有spvB及rck基因,spvB阳性者高热的比率较spvB阴性者高(X2=7.544,P=0.006),spvB阳性者排黏液血便的比率较spvB阴性者高(X2=6.163,P=0.013).结论 沙门菌肠炎患儿以发热、腹泻为主要临床表现,鼠伤寒沙门菌是其主要病原菌,鼠伤寒沙门菌的多重耐药率明显高于其他血清型的沙门菌,spvB阳性菌株临床上更易表现为高热及排黏液血便,临床上需根据药敏结果合理使用抗生素.
-
应用增强化学发光法分型检测肠毒素大肠埃希菌
肠毒素大肠埃希菌(ETEC)是引起人畜急性感染性腹泻的重要病原体.与人类腹泻密切相关的是不耐热肠毒素h(LTh)、耐热肠毒素Ⅰb(STⅠb)及耐热肠毒素Ⅰa(STⅠa)三种肠毒素菌株.我们利用一种新型的核酸探针标记和检测技术,建立了用辣根过氧化物酶(HRP)标记ETEC三种基因探针及通过增强化学发光法检测三种肠毒素基因并分型的方法,取得较好结果.
-
食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR快速检测法
目的 建立食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR快速检测方法.方法 根据公布的金黄色葡萄球菌肠毒素基因A～D型序列,分别设计引物并验证引物的特异性,建立多重PCR方法,检测食品风险监测和食物中毒事件中分离得到的165株金黄色葡萄球菌肠毒素基因A～D型.结果 165株金黄色葡萄球菌有95株携带肠毒素基因,毒素基因携带率为57.6％(95/165),携带一种基因型的占42.4％(72/165),同时携带两种以上毒素基因的占13.9％(23/165).结论 该方法具有简便快速、灵敏度高、特异性强等特点,适用于食源性金黄色葡萄球菌和食物中毒中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测.
-
聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因型的研究
金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)广泛分布于自然界中,据日本的调查结果表明:各种食品中有32.5%食品存在金葡菌.金葡菌能分泌20余种毒性蛋白质,其中主要的是葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal Enterotoxin,SE),它可引起严重的食物中毒.在我国发生的食物中毒事件中,由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占细菌性的第二位.同样,在加拿大也占三分之二,台湾为85.3%.为对食品安全性进行确切的评价,必须检查分离到的金黄色葡萄球菌是否产生肠毒素.
-
PCR-ELISA检测葡萄球菌肠毒素A
葡萄球菌肠毒素(SE)是引起食物中毒和医院感染的重要病原.金葡菌肠毒素分为7个血清型.近年来,国外学者又发现了新的血清型即SEH[1]、SEG、SEI[2].近来发现[3],造成医院感染的耐青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA),80%以上产生肠毒素,个别医院分离株几乎100%产生肠毒素.肠毒素的检测有生物学方法、免疫学方法、分子生物学方法等,近年来又发展基因探针的检测方法,由于放射性同位素标记探针的半衰期及放射污染特点,限制了该技术的推广应用,聚合酶链反应(PCR)在临床应用时,遇到了一些问题,比如灵敏度的特异性问题、污染问题,因为存在TapDNA聚合酶抑制物质而致假阳性结果[4].虽然可以通过斑点技术,Southern杂交法提高PCR的灵敏度和特异性,但是,这些方法多存在费时、繁琐、易污染等问题,不适合大量标本的检测,在参考国内外文献的基础上,本文建立了PCR-ELISA法检测金葡菌肠毒素基因的方法.结果报告如下.
-
浙江省台州市儿童腹泻132例沙门菌耐药性检测及肠毒素基因的相关分析
目的 分析浙江省台州市儿童腹泻沙门菌的耐药性及相关肠毒素基因型.方法 将因发热、腹泻等症状就诊且经粪便培养证实为沙门菌感染的儿童132例,检测沙门菌血清分型并对菌株进行10种抗生素耐药性分析,同时检测菌株肠毒素基因(spvA、spvB、rck).结果 分离出的132例沙门菌经血清学鉴定,共有10种血清型,其中以鼠伤寒沙门菌以及肠炎沙门菌为多见;分离出的132株沙门菌对氨苄西林(51.82％)以及氨苄西林/舒巴坦(51.52％)的耐药性高,而对亚胺培南、厄他培南无耐药,在132株沙门菌中,其中单耐药菌株27株(20.45％),其余均对两种及以上药物耐药;在分离出的132株沙门菌中,132株均呈spvA阳性(阳性率100.00％),38例呈spvB阳性(阳性率28.79％),45例呈rck阳性(阳性率34.09％);spvB检出阳性儿童其发热率、便血率以及脱水发生率均显著高于spvB检出阴性儿童(χ2分别为6.022、6.661、6.978,均P<0.05),rck检出阳性儿童其发热率、便血率显著高于rck检出阴性儿童(χ2分别为9.134、12.673,均P<0.05).结论 浙江省台州市沙门菌感染腹泻儿童主要以鼠伤寒沙门菌以及肠炎沙门菌感染为主,菌株耐药率较高,菌株肠毒素spvB基因与沙门菌感染儿童发热、便血以及脱水发生率明显相关,而rck基因与沙门菌感染儿童发热、便血明显相关.
-
食品中金黄色葡萄球菌污染状况及其肠毒素基因分析
目的 了解南平市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及该菌携带肠毒素的基因分型,为食源性疾病的防控提供依据.方法 共采集8大类食物样品共454份,依据GB 4789.10-2010对样品进行金黄色葡萄球菌培养、分离和鉴定,用Real-time PCR法检测菌株携带肠毒素SEA-SEE情况.结果 454份样品中检出金黄色葡萄球菌38株(8.4％),其中肉与肉制品和速冻米面制品的检出率13.3％,其次是餐饮食品(9.3％)、自制饮料和食用冰(8.8％)、冷冻饮品(3.3％),婴幼儿食品、乳及乳制品和膨化食品均未检出.38株金黄色葡萄球菌中,产肠毒素阳性8株(21.1％),主要携带SEA、SEB和SED.结论 南平市部分食品受一定程度金黄色葡萄球菌的污染,肉与肉制品和速冻米面制品的污染情况较严重,控制生肉制品类的污染,特别应防止其交叉污染,可有效控制该菌引起食物中毒的发生,但更应重视的直接入口食品的污染.
-
伤寒沙门氏菌肠毒素基因突变株的构建
目的为探讨伤寒沙门氏菌肠毒素的致病机理.方法根据已知的鼠伤寒沙门氏菌的肠毒素基因序列,设计 PCR 引物,扩增并克隆了伤寒沙门氏菌的肠毒素结构基因.双酶切造成部分序列缺失,亚克隆于自杀质粒后,通过电穿孔转化,同源重组替换野生型肠毒素基因.结果 PCR 及序列分析证实,缺失突变株的肠毒素基因缺失403个碱基.经血清学鉴定,该突变株保持母系菌株的 Vi 抗原表型. 结论该突变株的构建为研究肠毒素基因在至于致病机制中的作用奠定了基础.
-
金黄色葡萄球菌食物中毒的多重PCR快速检测及产肠毒素耐药分析
目的 对一起疑似金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒事件进行实验室检测和鉴定.方法 采集7份环境涂抹物, 4份食品和1份病例样本, 提取样品总DNA进行14种食源性致病菌的多重PCR检测, 对样品进行葡萄球菌肠毒素的ELISA检测.同时按照《食品安全国家标准食品卫生微生物学检验》进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定, 分离得到菌株进行耐药分析和肠毒素基因分型 (SEA-SEE).结果 多重PCR和ELISA检测台面涂抹物和病例样本中金黄色葡萄球菌和肠毒素均为阳性.分离出3株和10株金黄色葡萄球菌, 分别携带肠毒素基因sea和seb.其中台面涂抹物和病例样本都有携带sea毒素基因的分离株, 携带同种肠毒素基因的菌株耐药结果一致, 所有分离株对氨苄西林和青霉素耐药.结论 该起食物中毒由金黄色葡萄球菌肠毒素引起, 并存在耐药现象, 相关部门应加强对小型饭馆的卫生监督管理.
-
一起金黄色葡萄球菌食物中毒检测与分析
目的 查明食物中毒致病菌,分析菌株间的亲缘关系与毒力,为食物中毒诊断提供依据.方法 致病菌分离采用国家标准和文献方法;金黄色葡萄球菌鉴定采用仪器法;同源性分析采用脉冲肠凝胶电泳法;肠毒素检测采用PCR法;药敏试验采用VITEK 2 Compact法.结果 从22份标本中检出12株金黄色葡萄球菌,阳性检出率为54.55％;检出SEa、SEb、SEd、SEe传统肠毒素基因4种和SEh、SEj新型肠毒素基因2种;食品株与患者株金黄色葡萄球菌的脉冲肠凝胶电泳带型一致,具有高度同源性;菌株对大多数常用抗生素敏感.结论 本起食物中毒由金黄色葡萄球菌及其肠毒素污染鸡肉卷所致;菌株携带多种肠毒素基因,致病性较强;鸡肉卷与患者检出的金黄色葡萄球菌脉冲肠凝胶电泳显示其来源为同一克隆群,从分子生物学上证明了食物中毒病原菌的相关性.
-
基因分型技术在食物中毒调查中的溯源应用
目的:运用基因分型技术分析金黄色葡萄球菌的分子特征,为流行病学溯源提供有效手段.方法:对一起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒进行常规鉴定后,用荧光定量PCR检测特异耐热核酸酶基因(nuc)和5种常见肠毒素基因(sea,seb,sec,sed,see),并应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分型和聚类分析.结果:23株分离菌的nuc基因检测均为阳性,其中22株检测出sea肠毒素基因,21株细菌属于同一个PFGE型别.结论:此次食物中毒由同一株金黄色葡萄球菌引起,基因分型技术可以显示食物中毒诊断证据链,为流行病学调查和溯源提供可靠依据.
-
金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测和耐药性分析
目的 了解金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA) 临床分离株的肠毒素基因携带情况和耐药现状.方法 PCR扩增SA肠毒素编码基因sea、seb、sec、sed、see和sef,电泳检测扩增结果.K-B法检测SA临床菌株对药物敏感性,头孢西丁法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).结果 89株临床菌株中,68株肠毒素基因阳性,阳性率为76.4％,sea、seb、sec、sed、see和sef检出率分别为58.4％ 、5.6％ 、43.8％ 、3.4％ 、2.2％和14.6％,36株(40.4％ ) 同时检测到2种或2种以上肠毒素基因.MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA) 分别占42.7％ (38/89) 和57.3％ (51/89),MRSA肠毒素基因携带率(92.1％,35/38)明显高于MSSA的携带率(64.7％,33/51),差异有统计学意义(P<0.05).金黄色葡萄球菌除对万古霉素、利奈唑胺和呋喃妥因敏感外,对青霉素、苯唑西林等9种抗菌药物均有耐药性,且MRSA的耐药性比MSSA的强.结论 应重视对金黄色葡萄球菌肠毒素和 MRSA 的检测,合理使用抗菌药物,以利于医院MRSA感染的控制.
关键词： 金黄色葡萄球菌 肠毒素基因 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 耐药性 -
温州市食源性金黄色葡萄球菌耐药分析及肠毒素、毒素基因研究
目的 了解温州市食源性金黄色葡萄球菌的耐药趋势、肠毒素及其基因分布情况,为金黄色葡萄球菌食源性疾病的预防控制提供参考.方法 采用纸片法进行药敏试验,用mini-VIDAS法和PCR法分别进行肠毒素及其基因的检测.结果 100株金黄色葡萄球菌,其中97株(97.00％)均有不同程度的耐药,对青霉素耐药率高(92.00％),其次为甲氧苄啶(42.00％)、红霉素(34.00％),多重耐药率达29.90％;43株(43.00％)肠毒素阳性,奶粉及餐食阳性率较高;40株检出肠毒素基因,总检出率为40.00％,其中seb基因检出率高.形成16种基因组合,以seb基因型为主(10.00％),同时检出2种及以上肠毒素基因的菌株占20.00％.结论 温州市食源性金黄色葡萄球菌具有较强耐药性,且其产肠毒素率及毒素基因携带率较高,存在潜在的食品安全隐患.
