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抑癌基因Pdcd4的表达对羟基喜树碱细胞毒活性的影响
目的:探讨抑癌基因Pdcd4的表达对羟基喜树碱细胞毒活性的影响及其机制.方法:采用脂质体转染法将带有全长Pdcd4cDNA的质粒转入BGC-823细胞,MTT法测定羟基喜树碱对Pdcd4cDNA转染BGC-823细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测羟基喜树碱作用前后细胞周期和凋亡率的变化,Western blot蛋白印迹法检测Pdcd4蛋白表达.结果:建立了稳定转染Pdcd4cDNA的BGC823细胞系:羟基喜树碱作用转染细胞24,72 h后,药物对Pdcd4cDNA转染组细胞的半数抑制浓度均低于两对照组(pCDNA3.1与pCDNA-Pdcd4-D418A)(74.48 μmol/L vs 87.67,102-30 μmol/L;14.30 μmol/L vs 40.59,29.54μmol/L,均P<0.05);流式细胞仪测定结果表明,80 μmol/L羟基喜树碱作用转染细胞24h,处于细胞周期G0/G1期的细胞比例下降,S期细胞比例升高,出现细胞周期S期阻滞,72h,细胞凋亡率显著升高(pCDNA3.1:45.40%vs 5.65%:pCDNA-Pdcd4-D418A:36.21%vs 3.07%;pCDNA-Pdcd4:46.17% vs 4.25%,P<0.05):Westem blot结果表明80 μmol/L羟基喜树碱作用转染细胞72 h,Pdcd4蛋白表达水平升高.结论:提高人胃腺癌细胞BGC-823中Pdcd4蛋白的表达能增强其对羟基喜树碱的敏感性:羟基喜树碱能引起BGC-823细胞s期阻滞,并能诱导细胞凋亡;羟基喜树碱本身也可上调BGC-823中Pdcd4的表达.
关键词: 程序性细胞凋亡因子4 羟基喜树碱 人胃腺癌 BGC-823细胞 -
丝裂霉素联合舒林酸对胃癌SGC7901细胞诱导凋亡的研究
目的:研究丝裂霉素与舒林酸合用对人胃腺癌SGC7901细胞的生长抑制、诱导凋亡及凋亡相关基因bcl-2和COX-2基因表达的影响.方法:SGC7901胃癌细胞被分为三个实验组,舒林酸组、丝裂霉素组和舒林酸与丝裂霉素联合组.应用光镜、激光共焦显微镜、MTT法、流式细胞仪和免疫组化技术研究三组药物作用后,胃癌细胞的形态学变化、生长抑制、诱导凋亡和对凋亡相关基因Bcl-2和COX-2表达的影响.结果:药物作用于细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡形态学变化:细胞核固缩,染色质凝集,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成等.药物干预24h,联合组和MMC组对胃癌SGC7901细胞诱导的凋亡率分别为12.0%和7.20%.对细胞的增生抑制以联合组强,MMC次之,舒林酸弱.经MMC作用24 h后,COX-2和Bcl-2蛋白表达增强,而联合组出现COX-2蛋白表达减弱,Bcl-2蛋白亦未出现明显升高.结论:人胃癌SGC7901细胞体外实验中,MMC联合舒林酸使用,可使增生抑制加强.MMC可能由于上调COX-2、Bcl-2蛋白,减弱了自身对SGC7901胃癌细胞的诱导凋亡,MMC联合舒林酸可抑制COX-2、Bcl-2表达,从而提高MMC的抗癌效果.
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乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃腺癌SGC7901细胞Fas和FasL表达的影响
目的:探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的相关基因Fas和FasL影响.方法:胃癌细胞株SGC7901细胞由山东医科院提供.采用脂质体介导乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染人胃癌细胞株SGC7901细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后乙酰肝素酶mRNA、Fas mRNA和FasL mRNA表达的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果:脂质体介导转染乙酰肝素酶反义寡核苷酸后,SGC7901胃癌细胞内乙酰肝素酶mRNA和FasL mRNA表达下降(分别为1.13±0.05vs0.36±0.22,t=8.37,P=0.0 001<0 01;1.11±0.24vs0.35±0.23,t=5.48,P=0.0 003<0.01),Fas mRNA表达上升(0.45±0.23vs1.02±0.02,t=6.05,P=0.0001<0 01),转染前后各组细胞凋亡率分别为4.04%,3.85%,3.38%,9.13%,16.00%,15.63%及13.32%.结论转染乙酰肝素酶反义寡核苷酸可以有效诱导胃癌细胞发生凋亡
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海胆肠提取物的抗肿瘤作用
目的:观察海胆肠提取物的抗肿瘤活性。方法:体外采用四唑盐(MTT)比色法测定药物对人胃腺癌SGC-7901细胞的生长抑制率。体内采用S180移植性实体瘤和腹腔积液瘤小鼠模型,分别腹腔注射不同剂量的海胆肠提取物,连续给药10天。计算抑瘤率和生命延长率。结果:MTT实验显示,海胆肠提取物对体外培养的SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用,且抑制程度与浓度呈正相关。200 mg·kg-1·d-1提取物腹腔注射给药,对小鼠肉瘤S180实体瘤的生长抑制率为为33.58%(与对照组相比差异有显著性,P<0.01);对腹腔积液瘤小鼠的生命延长率为76.94%(与对照组相比差异有显著性,P<0.01)。结论:海胆肠提取物在体内和体外都有明显的抗肿瘤作用。
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200茵陈蒿和人参中的酸性多糖抑制幽门螺杆菌对人胃腺癌上皮细胞的粘附
作者曾用血细胞凝集试验研究过人参和茵陈蒿的酸性多糖部位对幽门螺杆菌粘附于宿主细胞的抑制作用,但这种方法不能定量.
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幽门螺杆菌对胃上皮细胞凋亡及p27kipl表达的影响
凋亡是一种基因调控的程序性细胞死亡,正常情况下它与增殖一起维持人体细胞总数的相对恒定.细胞周期调控点是将细胞增殖和凋亡连在一起的枢纽,是控制细胞增殖与凋亡的双向开关.p27kipl(p27-kinase inhibition protein 1)基因是Polyka等[1]于1994年发现的新的CKI基因,具有限制性调节细胞周期进程的作用,这一作用主要通过抑制Cyclin E-CDK2和Cyclin D-CDK4等G1期激酶复合物,调控G1/S期的转换,使突变细胞不能通过G1期来实现的.当p27kipl表达下降或缺失时,G1/S期的转换出现紊乱,导致细胞异常增殖.本研究通过选用幽门螺杆菌(Hp)Ⅰ型菌株感染人胃腺癌上皮细胞株SGC-7901建立体外Hp感染细胞模型,检测感染细胞的凋亡率和细胞周期抑制因子p27kipl及其mRNA的表达,探讨不同浓度Hp对感染细胞凋亡及p27kipl表达的影响,为深入了解Hp相关性胃癌的发生发展提供实验依据.
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鸦胆子抗消化系肿瘤的研究
鸦胆子[Brucea javanica(L)merr]系苦木科植物的果实,19世纪末曾被广泛用于治疗阿米巴痢疾.1973年Kupchan首次报道从鸦胆子中分离得到对各种动物瘤株有生长抑制作用的成分鸦胆亭(brucantin),以后相继从该科30多种植物中分离出一系列具有抗癌活性的成分,并将其用于肿瘤、消化系溃疡和溃疡性结肠炎等疾病的临床治疗[1-5].近研究发现,鸦胆子具有逆转人胃腺癌多药耐药性的作用.本文就鸦胆子抗消化系肿瘤的基础及临床研究结果作一综述.
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人胃腺癌分化相关基因的克隆与鉴定
差异显示技术可用于研究多种组织中mRNA的表达差异.荧光差异显示技术(FDD)是在放射性差异显示技术基础上发展起来的一种新的识别基因差异表达的方法,我们使用此方法用来筛选与胃癌分化过程中相关表达的基因.材料与方法一、细胞系人胃腺癌MKN-28(高分化)细胞,MKN-45(低分化)细胞,购自日本Riken Cell Bank(RCB),RPMI 1640,10%FBS常规培养.
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人胃腺癌长春新碱耐药细胞系耐药机制的研究
化疗是胃癌主要疗法之一,尤其对已处于转移和播散期的胃癌患者,有效化疗是延长生存期必不可少的方法.然而肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性常会造成化疗失败,耐药原因又相当复杂.我们采用免疫细胞化学和RT-PCR法,从蛋白、分子水平对MKN28/VCR、MKN45/VCR进行耐药相关因素分析,阐明它们的耐药机制.
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野生型P53基因对人胃腺癌细胞间黏附分子-1表达的影响
P53基因是与人类相关性高的抑癌基因之一,其P53蛋白能抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡.细胞间黏附分子-1(intercellularadhesionmolecullar-1,ICAM-1)是淋巴细胞相关抗原-1(LFA-1)的配体,协助T细胞识别抗原呈递细胞所呈递的抗原,激活淋巴细胞和吞噬细胞,对靶细胞进行攻击.目前尚未见P53基因与细胞间黏附分子-1关系的研究报道.
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蓝莓花青素对人胃腺癌BGC-823细胞的体内外抑制作用
目的:观察蓝莓花青素对人胃腺癌BGC-823细胞及其裸鼠移植瘤的生长抑制作用,并探讨其诱导细胞凋亡的作用机制.方法:苯基溴化四氮唑蓝(MIT)法检测蓝莓花青素对体外BGC-823细胞的生长抑制作用,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率.建立裸鼠BGC823人胃腺癌移植瘤模型,随机分为空白对照组、蓝莓花青素低剂量组和高剂量组,分别腹腔注射等剂量生理盐水、50mg/kg和100mg/kg蓝莓花青素.20天后剥出瘤块称移植瘤重量,观察蓝莓花青素对皮下移植瘤生长的影响;免疫组化SABC法检测移植瘤Bcl-2和Bax蛋白的表达差异.结果:(1)蓝莓花青素具有体外抑制人胃腺癌BGC-823细胞增殖的作用,且与药物浓度和作用时间呈正相关.不同浓度蓝莓花青素作用24h后,TUNEL标记流式细胞仪检测BGC-823细胞凋亡率呈药物浓度依赖性增;(2)蓝莓花青素可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,50mg/kg蓝莓花青素组与100mg/kg蓝莓花青素组的抑瘤率分别为45.3%和66.4% (P <0.05).免疫组化检测结果提示蓝莓花青素可使裸鼠肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达增加.结论:蓝莓花青素可体外抑制BGC-823细胞增殖;体内抑制BGC-823细胞皮下移植瘤生长,其机制可能与诱发细胞凋亡和调节Bcl-2、Bax表达有关.
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蓝莓花青素经线粒体凋亡通路诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡
目的:研究蓝莓花青素(Blueberry Anthocyanin,BA)诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡过程中线粒体超微结构、线粒体膜电位及凋亡调节蛋白的改变.方法:采用倒置相差显微镜观察细胞形态;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;透射电镜法观察线粒体超微结构改变;原位末端标记/碘化吡啶(TUNEL/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123(Rhodamine 123,Rho123)荧光探针标记流式细胞仪检测和分析线粒体跨膜电位(MTP,△Ψm);蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡调节相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平.结果:蓝莓花青素呈剂量和时间依赖性的抑制人胃腺癌BGC-823细胞生长;100μg/ml蓝莓花青素作用4h后线粒体肿胀空泡化、内部结构消失,8h后细胞核染色质成块状边集,细胞凋亡;不同浓度蓝莓花青素作用24h后,流式细胞仪检测BGC-823细胞凋亡率呈浓度依赖性增加.不同浓度蓝莓花青素作用BGC-823细胞24h后,代表线粒体膜电位的Rho123荧光强度降低;经100μg/ml蓝莓花青素刺激BGC-823细胞4、12、24小时后促凋亡蛋白Bax表达升高,抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低.结论:蓝莓花青素对人胃腺癌BGC-823细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,诱导凋亡可能通过线粒体凋亡途径起作用.
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Survivin在人胃腺癌中的表达及其与临床病理的关系
目的:研究Survivin蛋白在人胃腺癌细胞系和组织中的表达及其临床意义.方法:用RT-PCR、Western Blot方法及免疫组织化学方法检测6株人胃腺癌细胞系,80例人胃腺癌及癌旁组织中Survivin基因的表达.结果:Survivin在6株人胃腺癌细胞系均有表达,胃腺癌组织中Survivin表达阳性率为60%,癌旁正常胃组织均无Survivin的表达;在胃腺癌中的表达与患者生存期和肿瘤的区域淋巴结转移(P<0.05)密切相关,与肿瘤分化程度无相关性(P>0.05).结论:Survivin的变化与胃腺癌的发生和预后密切相关,并可能成为一个有希望的肿瘤治疗靶点.
关键词: Survivin基因 人胃腺癌 RT-PCR 免疫组织化学 -
褪黑素对人胃腺癌SGC-7901细胞的抑制作用
目的研究褪黑素对人胃腺癌SGC-7901细胞的生长抑制作用及其作用机理.方法采用不同浓度的褪黑素通过体外细胞培养、MTT显色技术研究其抑制作用,通过流式细胞仪和透射电子显微镜技术观察,对其作用机理进行探讨.结果褪黑素对人胃腺癌SGC-7901细胞具有抑制作用,其IC30、IG50分别为0.83和1.70mmol*L-1.以IC30的褪黑素处理SGC-7901细胞,使其倍增时间由31.2h延长到38.4h.流式细胞仪观察到褪黑素导致SGC-7901细胞G0/G1期比例升高,S期比例降低.透射电镜可观察到以IC30的褪黑素处理的细胞,其超微结构发生了退行性改变.结论褪黑素对人胃腺癌SGC-7901细胞具有抑制作用,其作用机理可能是褪黑素导致细胞G0/G1阶段的推迟进行.