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胆囊癌与良性病变组织survivin表达及临床意义
目的:1.比较Survivin在胆囊癌与癌前病变中表达差异是否具有统计学意义;2.比较Survivin在胆囊癌与癌前病变中的活性,进而探讨基因Survivin在胆囊癌发生及发展中的作用.方法:1.SP免疫组化法检测35例胆囊癌与60例癌前病变中Survivin的表达;2.PCR检测Survivin基因在癌前病变与胆囊癌中的表达.结果:Survivin基因在胆囊癌与癌前病变表达有显著性差异(P＜0.05);Survivin基因在胆囊癌活性表达大于其在胆囊癌前病变中的活性表达.结论:Survivin基因为那些可能发展为胆囊癌的癌前病变提供一个参考生物指标,进一步对不同程度病理组织学诊断为胆囊癌癌前病变的病例分组分析,根据实验获得的研究结果,深入认识胆囊癌癌前病变特点.
关键词： Survivin基因 胆囊癌与癌前病变 免疫组化法 PCR技术 -
Survivin及P16基因在非小细胞肺癌中的表达及相关性
目的:探讨Survivin基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与P16蛋白表达的相互关系.方法:应用免疫组织化学法检测120例非小细胞肺癌组织及20例肺良性病变组织中survivin、P16蛋白的表达情况.结果:Survivin蛋白在61.7%的NSCLC组织中有表达,在肺良性病变组织中不表达,且survivin的表达与肺癌患者的TNM分期有关;P16基因在肺良性病变组织中不表达,其阳性表达率在鳞癌中为17.65%,在腺癌中为53.85%,差异具有显著性(P＜0.05).结论:Survivin基因在非小细胞肺癌中表达上调,提示其对NSCLC的发生发展起重要作用,提示可作为判断病情及预后的指标.Survivin基因与抑癌基因P16的蛋白表达呈正相关,二者可能在肺癌中起协同作用.
关键词： 非小细胞肺癌 Survivin基因 p16基因 免疫组织化学 -
苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及Survivin基因表达的影响
目的:探讨苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制.方法:应用不同浓度的苦参碱作用于人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖；Annexin V FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期；RT-PCR和Western blotting分析Survivin基因表达.结果:苦参碱对Hela细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为2.60 g·L-1.经流式细胞仪检测表明,苦参碱能使Hela细胞G0-G1期逐渐增加,G2-M期和S期逐渐减少,并且随着剂量的增加,Hela细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).苦参碱对Hela细胞Survivin 基因表达有一定的抑制作用(P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论:苦参碱能有效抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Survivin基因的表达有关.
关键词： 苦参碱 宫颈癌 增殖 凋亡 Survivin基因 -
天花粉蛋白对子宫颈癌Hela田胞Survivi基因的影响
目的:研究天花粉蛋白(TCS)对子宫颈癌Hela细胞Survivin基因表达的影响,以探讨TCS诱导Hela细胞凋亡的机制.方法:MTT法检测TCS对Hela细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态；RT-PCR和Western blot 分析TCS对Hela细胞Survivin基因表达的影响；流式细胞仪分析TCS对Hela细胞周期的影响.结果:①TCS显著性抑制Hela细胞增殖；②rCS处理后Hela细胞Survivin mRNA水平无明显改变,但蛋白表达水平显著降低；③YCS降低Hela细胞周期中G2/M期细胞比率,但增加S期细胞的数量.结论:通过下调凋亡抑制因子Survivin的表达而诱发Hela细胞凋亡,可能是TCS抑制Hela细胞增殖的分子机制.
关键词： 天花粉蛋白 Survivin基因 子宫颈癌 -
三物白散对胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin基因表达的影响
目的 观察三物白散药物血清对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及survivin mRNA表达的影响.方法 选择人胃癌细胞株SGC-7901,分为空白对照组、阳性对照组及三物白散低、中、高剂量组.三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,采用荧光染色法检测胃癌细胞的凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA的表达.结果 不同剂量组的三物白散药物血清干预SGC-7901细胞后,与空白对照组比较,各组细胞的凋亡率升高,且细胞凋亡率随药物血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐升高;三物白散各剂量组survivin mRNA的表达均有不同程度的下降,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),且survivin mRNA表达随三物白散含药血清浓度的增大、干预时间的延长逐渐下降.结论 三物白散可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,抑制survivin mRNA的表达.
关键词： 三物白散 胃癌 SGC-7901细胞 Survivin基因 凋亡 -
银杏叶提取物对泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞增殖及Survivin,TIP30基因表达的影响
探讨银杏叶提取物(EGB)对泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞增殖、凋亡的影响,并从基因和蛋白水平上分析EGB对Survivin和TIP30基因表达的影响.不同浓度EGB处理体外培养的人泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞,应用MTT法检测细胞增殖;Annexin V/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR和Western blotting分析Survivin,TIP30基因和蛋白的表达.结果发现EGB对ACC-2细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为88 mg·L-1.经流式细胞仪检测表明,EGB能使ACC-2细胞Go/G1期逐渐增加,G2/M期和S期逐渐减少,并且随着剂量的增加,ACC-2细胞凋亡率明显增加(P＜0.05或P＜0.01).RT-PCR与Western杂交结果一致表明随着EGB浓度的升高,Survivin基因表达明显减少(P＜0.01),而TIP30基因表达则显著提高(P＜0.01).因此,EGB能有效抑制人泪腺腺样囊性癌ACC-2细胞Survivin基因表达,并促进TIP30的表达,诱导ACC-2细胞凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖.该研究为中药成分在肿瘤治疗中的应用提供了一定的理论和实验依据.
关键词： 银杏叶提取物 ACC-2细胞 Survivin基因 TIP30基因 -
Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡的相关性研究
目的 研究Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明癌细胞增殖和凋亡的相关性.方法 人肾癌细胞系786-0作为Survivin转染组,肾小管上皮细胞系HK-2作为阴性对照组,分别用Survivin模拟物转染;转染72 h后测定Survivin基因及蛋白表达;对比两组细胞吸光值、细胞数及凋亡细胞比值;对Survivin基因和蛋白表达水平与细胞吸光值、细胞数和凋亡细胞比值进行Pearson相关性分析.结果 转染后,Survivin转染组Survivin mRNA、Survivin蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P＜0.05);吸光值从第1d开始显著低于阴性对照组(P＜0.05);细胞数从第2d开始显著少于阴性对照组(P＜0.05).786-0细胞的凋亡比例从第1d开始显著低于阴性对照组(P＜0.05).Pearson相关性分析结果显示,Survivin基因和蛋白表达水平与吸光值和细胞数呈负相关,与凋亡细胞比值呈正相关.结论 Survivin基因和蛋白表达可以抑制786-0肾透明癌细胞增殖,促进细胞凋亡.
关键词： Survivin基因 Survivin蛋白 人786-0肾透明细胞癌 增殖 凋亡 -
全反式维甲酸对人结肠癌LoVo细胞化疗药物敏感性及Survivin基因表达的影响
目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌LoVo细胞化疗药物敏感性及Survivin表达的影响,为ATRA的临床应用提供理论依据.方法 应用流式细胞仪检测经不同浓度(10-5、10-6、10-7mol/L)的ATRA作用不同时间(24、48、72 h及第5、9、15天)后结肠癌LoVo细胞的周期变化.将细胞分为ATRA组(10-6mol/L)和对照组(RPMI1640培养液常规培养),每组中分设不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU,0、2、4、6 g/L)和丝裂霉素(MMC,0、200、400、600 mg/L)组,MTT法测定其活性,用以分析细胞对化疗药物敏感性变化,并利用交互效应分析药物之间的相互作用.应用吖啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)染色观察对照组(RPMI1640培养液)、ATRA组(10-6mol/L)、5-FU组(4 g/L)、MMC组(400 mg/L)及ATRA(10+mol/L)+5.FU(4 g/L)组、ATRA(10-6 mol/L)+MMC(400 mg/L)组的细胞凋亡情况.免疫荧光技术测定对照组(RPMI1640培养液)和ATRA组(10-6mol/L)细胞中Survivin基因的表达.结果 与对照组相比,不同浓度ATRA作用24 h后,Go-G1期细胞比例增加,48 h后达高值,其后逐渐下降,而S期+G2.M期细胞比例则下降,48 h后达低值,其后逐渐升高;在相同时间点,10-6mol/LATRA作用明显.与对照组相比,10-6mol/LATRA降低了细胞存活率(P＜0.05).对照组各浓度的5-FU细胞存活率明显高于ATRA组(均P＜0.05).而对照组加入不同浓度MMC后,在200 mg/L MMC浓度水平,细胞存活率低于ATRA组(0.72±0.02比1.03±0.13,P＜0.05),但在400、600 mg/L MMC浓度水平,两组差异无统计学意义(0.52±0.05比0.39±0.02,0.36±0.02比0.36±0.01,均P＞0.05).10-6西mol/L ATRA分别与5-FU(2、4、6 g/L)、MMC(200、400mg/L)存在正交互效应.与对照组、ATRA组、5-FU组、MMC组相比,荧光显微镜下ATRA+5-FU组、ATRA+MMC组的细胞出现明显的体积缩小,核固缩,染色质浓集并形成凋亡小体.与对照组相比,10-6mol/L ATRA作用48 h后细胞Survivin基因表达下降(33.33%比27.96%,P＜0.05).结论 ATRA增加了结肠癌LoVo细胞对5-FU及MMC的敏感性,并诱导了细胞的凋亡,作用机制可能与通过抑制Survivin基因的表达有关.
关键词： 维甲酸 结肠肿瘤 抗肿瘤药 药物敏感性 Survivin基因 -
用携有存活蛋白基因的重组腺病毒载体转染树突状细胞诱导细胞毒T细胞抗淋巴瘤免疫效应
本研究探讨转染survivin(SVV)基因的树突状细胞(DC)体外诱导特异性抗淋巴瘤的免疫效应.对人外周血DC进行诱导培养,以Ad-SVV转染DC,用Western blot鉴定Survivin的表达,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,用混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,以ELISA法检测上清中的细胞因子IL-12含量.结果表明:在MLR中,刺激应答比(S/R)为1:5、1:10、1:50和1:100时,转染Ad-SVV的DC有较强刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;转染Ad-SVV的DC组所诱发的CTL活性明显高于对照DC组;转染病毒后第2天,转染Ad-SVV的DC组的IL-12分泌水平高于对照DC组.结论:含存活蛋白基因的DC能够在体外诱导特异性CTL效应,对CA46细胞有明显的杀伤作用.
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原代白血病细胞存活蛋白(Survivin)基因表达与化疗敏感性
为了研究存活蛋白(survivin)基因表达的原代急性白血病(AL)细胞对不同化疗药物的敏感性差异,采用RT-PCR方法检测AL细胞survivin mRNA的表达,用MTT法检测AL细胞的杀伤率.结果表明:原代AL细胞体外与不同药物共同孵育15小时后,survivin mRNA(+)AL细胞对DNR、HHT、Acla、AraC、DA(DNR+AraC)、HA(HHT+AraC)的敏感性与survivin mRNA(-)AL细胞无明显差异;survivin mRNA(+)的AL细胞对AA(Acla+AraC)联合的敏感性显著高于survivin mRNA(-)者[(37.24±18.36)%vs(24.32±9.33)%,P=0.032].结论:survivin基因阳性表达的AL细胞可能对某些化疗药物(如Acla+AraC)敏感.
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Survivin基因在NB4细胞株细胞和急性早幼粒细胞白血病细胞表达及其抗凋亡作用与临床意义
为了检测survivin基因在APL细胞中的表达率并探讨其表达与临床的相关性,本研究采用RT-PCR方法检测PML/RARα和survivin mRNA表达.结果显示:NB4细胞经过ATRA处理后,survivin mRNA表达随着时间的延长而逐渐下降,在72小时几乎检测不到survivin mRNA表达.36例初发、复发APL患者骨髓单个核细胞均有PML/RARα融合基因表达,其中survivin mRNA阳性表达24例(占67%),阴性表达12例(占33%);22例缓解期APL患者骨髓单个核细胞PML/RARα融合基因表达均为阴性,其中survivin mRNA阳性表达8例(占36%),阴性表达14例(占64%);初发、复发组、PML/RARα基因长型阳性组与缓解组相比,survivin mRNA表达阳性率均明显增高(两者P值均＜0.05),而与急性白血病组相比survivin mRNA表达阳性率均明显减低(两者P值分别＜0.05,＜0.001).36例初发、复发APL患者,无论survivin mRNA表达阳性或阴性,用ATRA治疗都能达到完全缓解;临床上并发DIC和严重感染的4例APL患者的survivin mRNA表达皆为阳性(其中1例死亡),而survivin mRNA表达阴性患者临床症状均较轻,只有轻微的皮肤粘膜出血、发热和乏力等症状.2例APL患者经用ATRA治疗后外周血象以及骨髓象诱导分化症象不明显者,其survivin mRNA表达均为阳性.结论:APL患者骨髓单个核细胞survivin基因阳性表达率较其它类型急性白血病明显减低,survivin基因表达与临床有一定的相关性.
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小干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2Survivin基因表达的影响
目的 构建Survivin 基因特异性小干扰RNA(siRNA),检测siRNA-Survivin对Survivin基因表达的抑制,在人肝癌细胞株HepG2中研究 survivin和 survivin siRNA 对细胞凋亡的影响.方法 设计survivin siRNA序列,构建靶向 Survivin siRNA 真核载体.利用脂质体转染人肝癌HepG2细胞,通过相差显微镜下观察、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察转染后survivin的表达,以及HepG2细胞的凋亡.结果 成功构建了survivin siRNA表达载体,并且si-survivin对survivin有明显抑制效应,可显著抑制HepG2细胞的发生凋亡.转染Survivin-siRNA 细胞活性受到显著抑制(P<0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,DNA电泳出现典型的凋亡"梯状"带.RT-PCR 结果显示细胞转染24 h、48 h和72 h 后HepG2 Survivin mRNA 分别减少了56%、78%和50%,而siRNA 阴性对照与未转染细胞相比差异不显著.结论 转染的Survivin-siRNA 可特异性抑制肝癌细胞株HepG2凋亡抑制基因的表达,从而为肿瘤的基因治疗提供新的实验基础.
关键词： Survivin基因 HepG2细胞 小干扰RNA 基因表达 检测 -
沉默Survivin基因对人头颈鳞癌细胞周期以及细胞凋亡的影响
目的 采用基因沉默手段沉默人头颈鳞癌细胞中Survivin基因的表达,进而探讨Survivin基因沉默对人头颈鳞癌细胞凋亡的影响.方法 采集人头颈鳞癌PCI-37B细胞作为观察对象,根据细胞处理方式的差异将其分为观察组、阴性对照组、空白对照组.其中观察组采用基因沉默手段对PCI-37B细胞进行处理,将Sruvivin-SiRNA进行细胞转到入PCI-37B.阴性对照组选用FAM-SiRNA-Mate复合物.空白对照组则应用未进行转染处理的正常细胞.采用流式细胞仪检测PCI-37B细胞凋亡情况,观察细胞周期的变化,并与阴性对照组、空白对照组进行比较.结果 Survivin基因沉默处理后,人头颈鳞癌细胞PCI-37B细胞凋亡率明显升高,与阴性对照组、空白对照组比较差异存在显著,并且阴性对照组与空白对照组比较无显著差异(P>0.05);细胞周期变化观察结果显示,Survivin基因沉默能够对肿瘤细胞周期产生影响,降低鳞癌细胞在S期的比率,与阴性对照组、空白对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 应用基因沉默手段沉默Survivin基因的表达可有效诱导人头颈鳞癌细胞PCI-37B细胞的凋亡活动,对抑制肿瘤细胞的生长以及浸润具有重要作用,临床可以此作为切入点研究、制定人头颈鳞癌的靶向治疗方案.
关键词： 人头颈鳞癌 Survivin基因 基因沉默 细胞凋亡 影响 -
超声微泡造影剂联合survivin反义寡核苷酸对CHG-5细胞的阻断作用
目的 探讨超声微泡造影剂联合survivin反义寡核苷酸对人胶质瘤细胞系CHG-5的阻断作用.方法 针对survivin基因序列设计合成survivin反义寡核苷酸,将实验分为4组.A组:survivin反义寡核苷酸(ASOND)并超声微泡造影剂联合超声照射;B组:survivin反义寡核苷酸(ASOND)并脂质体转染联合超声照射;C组:survivin反义寡核苷酸(ASOND)并脂质体转染;D组:空白对照组.利用免疫细胞化学及Western blotting检测survivin蛋白的表达变化,MTT法检测细胞增殖的变化.结果 采用超声微泡造影剂联合超声照射介导的survivin反义寡核苷酸基因组,CHG-5细胞中survivin蛋白表达无论是免疫组化检测结果还是Western blotting检测结果都较其他组明显降低(P＜0.05),CHG-5细胞生长率也明显受到抑制(P＜0.05).结论 超声微泡造影剂介导的survivin反义寡核苷酸转染是一种无创、新型、高效的基因转染方法.
关键词： Survivin基因 反义寡核苷酸 造影剂 超声微泡 细胞转染 -
肺癌患者survivin基因及P-选择素表达及其相关性研究
目的:探讨survivin基因及P选择素的表达在肺癌发生、发展中的作用及其相互关系.方法:对38例肺癌和相应的癌旁组织,用RT-PCR技术检测肺癌组织及癌旁正常组织survivin的表达,用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(S-P法)检测P选择素表达.结果:38例肺癌组织中有24例(63.16%)survivin表达阳性,而38例癌旁组织均无survivin基因表达,两组比较,差异有极显著性(P＜0.01).TNM分期Ⅲ期病例中有survivin mRNA表达阳性率94.44%(17/18)高于I期十Ⅱ期病例的35%(7/20),差异有非常显著性(P＜0.01);P选择素的表达与survivin呈正相关.结论:survivin基因及P选择素的表达可能在肺癌发生、发展及预后中发挥着重要作用.
关键词： 肺癌 Survivin基因 P-选择素 表达 -
Survivin基因和热休克蛋白在膀胱癌中的表达以及相互关系临床分析
目的 探究Survivin基因和热休克蛋白在膀胱癌中的表达及其相互关系在临床上的应用分析.方法 采用免疫组织化学的方法检测我院150例膀胱移形细胞癌和12例正常膀胱组织中的Survivin基因和热休克蛋白的表达,检测两者在病理分级、临床分期和初发、复发中的表达.结果 膀胱癌患者中Survivin基因和热休克蛋白表达均为阳性70例,表达均为阴性的有19例,但在正常组织中Survivin基因和热休克蛋白几乎没有表达.结论 Survivin基因和热休克蛋白在膀胱癌患者的组织中的特异表达增加,会随着临床病理分级和肿瘤的复发的增加而增加,但在正常的组织中的基本没有表达,因此在膀胱癌患者中的表达具有正相关性.
关键词： Survivin基因 热休克蛋白 膀胱癌 -
胰腺癌特异性MR分子探针的构建及体外研究
目的 制备基于胰腺癌生存素(Survivin)基因靶的MR分子探针,研究其对人胰腺癌细胞株BxPC-3的转染以及MRI的可行性.材料与方法 将Survivin反义寡核苷酸标志于壳聚糖修饰的氧化铁磁性纳米颗粒(CS@MNPs)表面.培养人胰腺癌细胞株BxPC-3,实验组细胞孵育MR靶向探针Sur-MNPs,对照组细胞孵育未经壳聚糖修饰的纳米颗粒MNPs和经壳聚糖修饰的CS@MNPs,均以25 μg/ml与细胞共同孵育24 h.采用琼脂糖凝胶电泳检测耦联效果,采用普鲁士蓝染色观察人胰腺癌细胞对不同纳米颗粒的摄取情况,采用MTT法测定纳米颗粒对细胞的毒性作用.将标志的细胞用1％琼脂糖1 ml重悬后,使用1.5T MR进行扫描,测定T2值.结果 本实验成功制备了胰腺癌的特异性靶向探针.壳聚糖修饰磁性纳米粒后,透射电镜结果显示粒径大小均匀、核心粒径核心在20 nm左右；琼脂糖凝胶电泳显示大部分反义核苷酸已连接到纳米颗粒表面,得到磁性靶向核苷酸.细胞普鲁士蓝染色显示未转染纳米颗粒的细胞内未见蓝色铁颗粒,而经CS@MNPs和靶向探针转染的胰腺癌细胞胞质内见大量蓝色铁颗粒分布；细胞凋亡实验显示未转染纳米颗粒、经MNPs转染和转染CS@MNPs组的细胞总凋亡率分别为34.31％、67.73％、42.88％；MTT实验结果显示经MNPs、CS@MNPs转染的细胞活力分别为46.43％、63.68％;T2WI扫描结果显示水、标志MNPs的细胞、标志CS@MNPs的细胞、孵育靶向探针的细胞的T2值分别为(3315±183) ms、(219.5±21.8) ms、(218.0±173) ms、(171.7±32.5) ms;MRI显示标记了磁性纳米颗粒的细胞能引起T2信号下降.结论 本实验成功制备了靶向人胰腺癌Survivin基因的靶向探针,该探针细胞毒性小,转染率高,体外细胞转染后可被MR检查.
关键词： 胰腺肿瘤 磁共振成像 分子探针 Survivin基因 体外研究 -
Survivin对人胆管癌细胞凋亡相关信号通路的作用机制
目的:探讨Survivin基因对人胆管癌细胞凋亡信号通路的调节机制.方法:构建针对Survivin基因的siRNA和对照siRNA,分别转染QBC939人胆管癌细胞,Western blot检测siRNA对细胞Survivin的干扰效果.继而分别用流式细胞仪,激酶活性测定和Western blot检测不同Survivin表达状态下,QBC939细胞的凋亡状态,caspase-3的活性和caspase-3,caspase-9及procaspase-9凋亡信号分子的表达.结果:siRNA-Survivin显著抑制Survivin在QBC939细胞的表达(P＜0.05).Survivin表达抑制后,QBC939细胞凋亡明显增加(18.9％±2.3％,P＜0.05),caspase-3活性显著升高(0.83±0.15,P＜0.01),caspase-3和caspase-9表达明显上调(P＜0.05),而procaspase-9表达降低(P＜0.05).未转染和转染对照siRNA的QBC939细胞上述变化无显著性差异(P＞0.05).结论:Survivin基因通过促进procaspase-9的活化以阻止caspase-3和caspase-9的激活从而抑制胆管癌细胞的凋亡.
关键词： Survivin基因 凋亡 胆管癌细胞 -
维生素D3衍生物MART-10对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长及survivin mRNA、c-myc蛋白、P21蛋白表达的影响
目的:研究维生素D3衍生物MART-10对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长及survivin mRNA、c-myc蛋白、P21蛋白表达的影响,以期探讨其抑癌机制.方法:四甲基谷氮咪盐(methyl-thiazolyltetrazolium,MTT)比色法检测MART-10对BxPC-3细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞周期,观察细胞的生长情况;逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测BxPC-3细胞中survivin mRNA的表达;Western blot法检测BxPC-3细胞中c-myc蛋白和P21蛋白的表达.结果:MTT结果显示,MART-10可显著抑制人胰腺癌BxPC-3细胞的生长,其抑制50％细胞生长的给药浓度(IC50)为10-7 mmol/L;流式细胞术结果显示,癌细胞在MART-10的作用下,G0/G1期的细胞比例上升而S期的细胞比例则下降;RT-PCR及Western blot结果表明,随着MART-10作用时间的延长及给药浓度的增加,胰腺癌BxPC-3细胞中survivin mRNA和c-myc蛋白的表达量逐渐减低,而P21蛋白的表达量则逐渐增强.结论:维生素D3衍生物MART-10对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长具有显著抑制作用,其作用的机制可能与其调节survivin、c-myc及P21的表达有关.
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Genistein调节肝癌细胞PTEN和survivin蛋白表达的实验研究
目的 探讨genistein对肝癌HepG2细胞株PTEN和survivin蛋白表达的影响及在诱导凋亡中的作用.方法 以肝癌HepG2细胞培养72 h为对照组,实验各组以60μmol/L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,Western-blotting分析细胞PTEN和survivin蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 对照组IP3含量为(29.2±0.6)pmol/106cells,PTEN蛋白与内参Actin蛋白灰度和面积之积的比值V-PTEN/V-actin为0.12±0.001,survivin蛋白与内参actin蛋白灰度和面积之积的比值V-survivin/V-actin为0.63±0.06,细胞凋亡率为2.6%±0.1%.Genistein作用于肝癌Hep G2细胞12 h、24 h、48 h、72 h后IP3分别为(12.0±1.4)pmol/106cells、(7.5±0.8)pmol/106 cells、(5.6±0.5)pmol/106 cells、(3.3±0.6)pmol/106 cells;V-PTEN/V-actin分别为13.13±0.20、19.17±1.09、28.51±2.18、41.12±3.80;V-survivin/V-actin分别为0.36±0.13、0.33±0.03、0.23±0.04、0.18±0.04;细胞凋亡率分别为2.7%±0.2%、7.4%±0.5%、20.5%±2.0%、30.7%±1.6%.与对照组相比,genistein作用于肝癌Hep G2细胞12 h后各时相IP3和survivin蛋白显著降低,24 h后各时相细胞凋亡率显著增高.结论 Genistein能减少IP3生成,上调PTEN基因表达,下调survivin基因表达,诱导肝癌细胞凋亡.
关键词： 癌 肝细胞 细胞凋亡 基因表达 Survivin基因
