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巨细胞病毒microRNA研究进展
MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码的小RNA.miRNAs存在于大多数真核生物与某病毒之中,可通过转录后抑制作用来调控基因的表达.巨细胞病毒是一种广泛存在于自然界的机会致病性病毒.由CMV编码的miRNAs在调控病毒基因自身表达以及病毒与宿主相互作用方面起着重要的作用.本文对CMV miRNAs新研究进展做一综述.
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032 热应激蛋白70用于环境监测的研究现状
热应激蛋白(HSP)是一组有核细胞内高度保守的由热应激基因编码的产物.其中以热应激蛋白70(HSP70)家族为突出,该家族在正常细胞中含量较低,当机体受到外界化学或物理刺激时,其合成量反而增加.本文就HSP70表达与重金属、杀虫剂、二硫化碳、多环芳烃、磁场、职业噪声及激光等环境有害因素的关系进行综述,为环境有害因素的监测及暴露人群的保护提供依据.
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小鼠着床前胚胎miRNA表达的实验研究
目的 研究微小RNA(miRNA)在小鼠着床前胚胎各发育阶段的表达谱,探讨miRNA在着床前胚胎发育中的作用和意义. 方法 建立小鼠超排卵、交配和胚胎收集系统,采用miRNA扩增、miRNA芯片和荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法研究小鼠着床前胚胎miRNA表达. 结果 小鼠卵母细胞、2细胞胚胎、4～8细胞胚胎和囊胚分别表达55、53、62和72个miRNA;四个发育阶段共筛查到表达94个miRNA, 32个在各发育阶段均表达,62个在不同发育阶段特异性表达.实时荧光定量PCR方法验证mmu-miR-721在小鼠着床前胚胎中表达. 结论 小鼠着床前胚胎表达大量的miRNA,其可能对胚胎发育和胚胎细胞的分化起重要调控作用.
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长链非编码RNA转录动作在表观遗传调控中的作用
人类基因组中编码蛋白质的基因(protein-coding gene,pcG)占比不足2％,其余大多转录生成非编码蛋白质RNA,在人类基因中已经确定的LncRNAs约有10 000种[1].LncRNAs由RNA聚合酶Ⅱ(RNAPII)转录生成,长度超过200 nt,超过microRNAs、piRNAs、snoRNAs、siRNA等,其制备及捕获方法也异于微小RNA.
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长链非编码RNA作为胃癌标志物的研究进展
随着医学界对癌症认识的加深,发现长链非编码RNA (lncRNA)与癌症各阶段的发展密切相关.而lncRNAs是一段由200个碱基对组成的,与胃癌基因调控有关,在胃癌的发展历程中参与胃癌细胞的转移和表达.该文就lncRNAs作为胃癌标记物当前已有的研究成果进行论述.
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五子衍宗丸和金匮肾气丸促进小鼠生精能力恢复基因表达谱的研究
目的:对五子衍宗丸和金匮肾气丸促进无精子症模型小鼠生精能力恢复的睾丸全基因表达谱进行比较分析,获得2中药改善生精能力的差异表达基因.方法:白消安致小鼠无精子症模型灌胃给予五子衍宗丸(生药0.048g/日/只)和金匮肾气丸(生药0.04g/日/只)78天(2个生精周期),以正常动物为对照,通过基因芯片技术进行数据分析.结果:在检测的31 722个基因中,给药小鼠与正常对照组比较,有32个共同上调的基因,12个共同下调的基因；五子衍宗丸组均表现为以基因下调为主,金匮肾气丸组均表现为以基因上调为主.利用KEGG进行Pathway分析五子衍宗丸和金匮肾气丸基因表达谱的数据,差异表达基因主要分布于脂肪细胞因子信号通路、细胞周期、MAPK信号通路、Wnt信号通路、Notch信号通路、Ecm受体作用、Jak - Stat信号通路、细胞因子-细胞因子受体作用等8个信号通路.结论:两种经典补肾中药均具有较强的、明确的促进生精功能恢复的作用,但对睾丸生精能力的恢复作用明显不同.五子衍宗丸可能通过刺激小鼠的免疫功能,促进生精能力的恢复,而金匮肾气丸通过影响细胞增殖相关的多个信号通路刺激生精细胞的再生.
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动脉粥样硬化的生物化学与临床
本文综合了近几年来有关动脉粥样硬化研究进展的文献,综述了动脉粥样硬化时脂类代谢、炎症免役、基因调控等三方面改变及相关干预措施.对了解动脉粥样硬化的发病机理,心脑血管疾病的诊断、治疗、预防有一定的意义.
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蛋白质组学(proteomics)
蛋白质组(proteomics)系一个基因组、一种生物或一种细胞组织所表达的全套蛋白质.对蛋白质组织相关问题的研究即为蛋白质组学.由于蛋白质是体现生物功能的分子,蛋白质分子由基因所编码,故蛋白质组学研究是基因组学(特别是功能基因组学)研究的深入和延伸.蛋白质组学研究的内容大致包括以下方面:①蛋白质组作用、成分鉴定、数据库构建、新型蛋白质的发现、同源蛋白质比较、蛋白质加工和修饰分析;②基因产物识别、基因功能鉴定、基因调控机制分析;③重要生命活动的分子机制(如细胞周期、分化与发育、肿瘤发生发展、环境反应与调节等);④医药靶分子的寻找和分析(包括新药靶分子、肿瘤分子标记、人体病理介导分子、病原菌毒性成分等).
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试论药用植物有效成分基因调控的研究进展
本文综述了药用植物有效成分基因调控的研究进展.
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生髓育麟汤对Caspase-3以及Bcl-2/Bax在实验性少、弱精子大鼠生精细胞中表达的干预
目的：探讨生髓育麟汤治疗少、弱精子症的作用机理。方法将60只大鼠按照常规方法饲养，1周后随机抽出10只编入正常对照组，另外50只予雷公藤多苷片20 mg/（ kg·d）灌胃26 d。造模完毕后随机抽取10只编入造模组处死，剩下40只按照体重随机分为4组：生髓育麟汤高、低剂量组、五子衍宗丸组以及不给予任何药物，只给予正常食物和水的观察对照组，每组各10只。实验结束后获取大鼠附睾精子进行分析，了解大鼠精子质量、生精细胞凋亡率、Caspase-3以及Bcl-2/Bax表达水平。结果生髓育麟汤各组的精子密度、前向运动精子比例、精子活动率明显增加；生髓育麟汤各组生精细胞凋亡率下降，Caspase-3以及Bax表达减少而Bcl-2表达增加，并且随着浓度的增加，效果更显著。结论生髓育麟汤可调节生精细胞基因表达，抑制细胞的凋亡，从而改善大鼠的精液质量。
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MicroRNA基因调控在膝骨关节炎发生发展作用中的研究进展
MicroRNA (miRMA)是一种从哺乳动物细胞内发现的非编码小分子RNA,在基因的表达调控中起到了非常重要的作用,特别是转录后调节机制方面.近年来,miRNA在疾病发生发展过程中的作用已经成为研究热点.膝骨关节炎是一种常见的老年性疾病,其病因及发病机制至今尚未完全明确,目前细胞因子通过调节炎症反应,成骨破骨细胞增值、凋零、分化在膝骨关节炎发病机制中的作用越来越受到关注.而新的研究表明,炎性介质、成骨破骨细胞增殖分化及各种细胞因子的转录表达都与miRNA有着密切的关联,这提示miRNA在膝骨关节炎的发生发展中起重要作用.由此可以想到,通过改变相关miRNA的表达可能会从更高的调节水平改变膝骨关节炎的表达,从而起到了治疗的目的.本文正是基于MicroRNA基因调控,探讨膝骨关节炎的发病机制,为临床提供更多的治疗思路.
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金匮肾气丸对小鼠生精恢复的基因表达谱研究
目的:研究金匮肾气丸对无精子症模型小鼠生精能力恢复作用的睾丸全基因表达谱.方法:12周龄NIH雄性小鼠按照40 mg· kg -单次ip 2％白消安药液制备无精子症小鼠动物模型,观察42 d后,给予金匮肾气丸中药1 g·kg-1,ig给药78 d(2个生精周期),以造模后模型组(自然恢复)、溶媒和正常动物为3种对照,通过基因芯片技术检测服用金匮肾气丸的无精子小鼠与正常对照小鼠之间睾丸中差异表达的基因,对这些基因按照表达差异程度、功能注释和Pathway进行分析.结果:动物实验结果显示:无精子症模型小鼠经过78 d的金匮肾气丸ig给药后,在动物体质量、生殖器官组织质量和指数、附睾精子质量(活动率、活动力、浓度)等与生殖能力相关的指标上与模型组比较有明显的改善.基因表达谱芯片结果显示:服用金匮肾气丸的无精子小鼠与正常组相比,睾丸中差异表达2倍以上的基因804个(占2.53％),其中上调517个,低于正常表达1/2的287个,差异表达4倍以上的基因134个(占0.42％)其中上调127个,低于正常表达1/4的7个,提示以正向促进/上调作用为主,以负向抑制/下调作用为辅；主要通过对细胞周期、细胞因子-细胞因子受体作用、Ecm受体作用、Jak-Stat信号通路、Mapk信号通路、Notch信号通路、Toll样受体信号通路和Wnt信号通路等8个信号通路系统的调节实现生精能力的提高.结论:金匮肾气丸有助于促进无精子小鼠生精能力的恢复.通过基因芯片检测后与正常小鼠相比,这种促进作用可能是通过多途径对生精于细胞中与细胞增殖分裂相关基因的正向调节实现的.
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环加氧酶-2转录抑制元件的关键位点鉴定及细胞特异性研究
目的:鉴定RINm5F细胞中环加氧酶-2(COX-2)启动子区-649/-638转录抑制元件的关键位点及细胞特异性.方法:在RINm5F细胞中,利用荧光素酶报告载体,检测特定位点(-649/-646、-645/-642、-641/-638)突变后启动子活性的改变;通过电泳迁移率转变实验,观察上述位点突变后与细胞核蛋白结合能力的改变.在另外两种细胞系(INS-1、CHO细胞)中,利用荧光素酶报告载体,检测野生型和突变型(-649/-638突变)COX-2的启动子活性.结果:RINm5F中,抑制元件位点-649/-646、-645/-642突变使启动子活性显著上升,与核蛋白结合能力降低.INS-1、CHO细胞中,野生型和突变型启动子活性无显著差异.结论:转录抑制元件的关键位点为-649/-642,此元件具有细胞特异性,可为中医药干预COX-2异常疾病提供明确的作用靶标.
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地黄植株体内miRNAs与其连作障碍关系的研究进展
MicroRNAs是一类内源性小分子的非编码RNA,它通过对其靶基 因的降解或抑制翻译来调控基因表达,进而调控植物的生理活动.植物在遇到逆境胁迫时,miRNAs 会作用于与逆境相关的基因,启动体内的抗逆机制抵抗不利因素.地黄的连作障碍也是一种胁迫,从miRNAs水平上研究,有利于解读地黄连作障碍的分子机制.该文对地黄体内miRNAs的功能及调控 机制进行了综述,并对miRNAs在地黄的研究中进行了展望.
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HCV LNAzyme对病毒5'非编码区基因调控的特异性抑制作用
目的 探讨针对丙肝病毒5 '非编码区内源性核糖体进入位点的锁核酸核酶(LNAzyme)对病毒基因复制与表达的特异性抑制作用.方法 设计合成能切割HCV-5'-NCR-IRES位点的DNAzyme、硫代DNAzyme和LNAzyme.实验设对照组和实验组.对照组包括空白对照组、脂质体对照组和无关LNAzyme对照组.实验组包括DNAzyme、硫代DNAzyme组和LNAzyme组.以阳离子脂质体介导转染hepG2.9706细胞,用荧光定量PCR和化学发光技术分别监测24、48和96 h细胞培养上清液中HCV RNA含量及荧光素酶基因表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法监测细胞活性.结果 加入核酶后,LNAzyme对HCV RNA复制和荧光素酶基因表达的抑制作用强(P＜0.05),平均抑制率分别为48.02％和53.05％,且随用药时间延长,抑制率呈增高趋势,96 h后,平均抑制率分别为81.21％和84.25％.LNAzyme对细胞活性无影响.结论 LNAzyme能特异性抑制丙型肝炎病毒5 '非编码区的基因调控,且优于硫代修饰的DNAzyme.
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四环素基因调控系统的研究进展
四环素基因调控系统(Tet系统)是迄今为止基因治疗研究中使用广泛的系统,该系统通过改变培养基、体内四环素或其衍生物(如强力霉素)的浓度,诱导或抑制目标基因的表达.
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环状RNA在肿瘤中的研究进展
环状RNA是一种自然发生的具有广泛性和多样性的内源性非编码RNA.它们通常是稳定、丰富及保守的RNA分子,并表现出组织的特异性表达.环状RNA通常起到microRNA海绵、RNA结合蛋白隔离剂和转录调节因子的作用.大量证据表明环状RNA可参与关键基因的转录和翻译等过程从而调控肿瘤的发生、进展和预后.而在唾液、外泌体和临床标准血样中检测出特异性环状RNA,将使它们成为肿瘤的潜在诊断或预测生物标志物.
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心脏发育过程中常见的相关基因与先天性心脏病
人体心脏发育是一个复杂的过程,包括细胞决定、迁移和分化、心管的形成、环化、房室腔形成等一系列变化.GATA家族基因、NKX家族基因、TBX家族基因、NODAL、NOTCH、WNT、BMP信号通路以及ISLI、ACFCI、DNAH及JAG等基因都与心脏发育密切相关.
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17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白介导的多药耐药机制
目的 探讨17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白(BCRP)介导的非典型多药耐药的机制.方法 分别通过药物诱导和转基因的方法建立由BCRP和巨细胞病毒(CMV)启动子启动表达BCRP的两种耐药细胞系MCF-7/MX20和MCF-7/BCRP,将耐药细胞培养在含有17β-雌二醇的培养基中,通过细胞毒性实验,外排实验以及定量PCR观察对不同耐药细胞系的逆转作用.结果 培养基中加入17β-雌二醇48 h后,MCF-7/BCRP细胞中的米托蒽醌的强度明显低于MCF-7/MX20,MCF-7/BCRP细胞中BCRP mRNA的含量明显高于MCF-7/MX20.17β-雌二醇可以抑制细胞中BCRP的表达和功能,但是不能抑制MCF-7/BCRP细胞中BCRP的表达和功能.结论 17β-雌二醇不是作为BCRP的底物而抑制BCRP功能的,而可能是通过调控BCRP基因的启动子发挥作用.
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Tet-on慢病毒调控系统的构建及其调控作用
目的 构建四环素诱导基因表达的3代慢病毒系统,为慢病毒介导的基因治疗提供实验依据.方法 将四环素调控的转录激活因子(rtTA和M2rtTA)分别克隆入带有新霉素(neo)筛选标记的慢病毒载体中,得到pELNS-rtTA-IRES-Neo和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo质粒,将四环素顺式应答作用元件(TETO和TREpitt)和绿色荧光蛋白(GFP)克隆入带有杀稻瘟素(blasticidin)筛选标记的慢病毒载体中,得到plenti6-TETO-GFP和plenti6-TREpitt-GFP质粒,将pELNS-rtTA-IRES-Neo与plenti6-TETO-GFP和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo与plenti6-TREpitt-GFP分别以10∶1共同转染293细胞,用四环素类似物强力霉素(Dox)诱导GFP基因表达,48h后检测GFP表达.结果 成功构建了1代四环素调控体系pELNS-rtTA-IRES-Neo和plenti6-TETO-GFP重组质粒.共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为90%,而未加Dox组细胞GFP阳性表达率约为30%.成功构建了2代四环素调控体系pELNS-M2rtTA-IRES-Neo和plenti6-TREpitt-GFP重组质粒.共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为95%,而未加Dox组细胞未见GFP表达.结论 2代四环素调控体系3代慢病毒系统可以高效诱导目的基因表达,且目的基因背景表达值低.
