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白附子水提物抑制人骨髓神经母细胞瘤细胞增殖的实验研究
目的 探讨白附子水提物体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法 以白附子水提物处理人骨髓神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞24、48 h后,应用细胞增殖检测试剂Kit-8 (CCK-8)细胞增殖和毒性实验检测白附子水提物对SH-SY5Y细胞的增殖抑制作用,运用蛋白印记反应(AV/PI)对该细胞株生长抑制机理进行初步探讨.结果 白附子水提物对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用,与细胞作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为0.862 mg/mL,与细胞作用24 h的IC50为1.158 mg/ml.Western-blot法检测结果表明,白附子水提物可能通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡抑制其生长.结论 白附子水提物有抑制SH-SY5Y细胞增殖作用.
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超声联合载卡莫司汀脂质微泡诱导大鼠C6细胞凋亡
目的 探讨低频超声介导载卡莫司汀脂质微泡诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞凋亡的机制.方法 采用MTT法检测各实验组不同时间点的细胞抑制率,确定实验参数;流式细胞仪分析C6细胞的凋亡率及细胞周期;透射及扫描电镜观察C6细胞超微结构的变化.结果 超声+10%载卡莫司汀微泡组在6 h时段细胞抑制率、细胞凋亡率均高,与其他实验组及对照组相比差异均有显著统计学意义(P<0.01).超声破坏载药微泡使增殖期(S期)细胞比例减少,电镜观察超声联合载药微泡可使C6细胞出现凋亡.结论 低频超声介导载卡莫司汀脂质超声微泡能诱导C6细胞凋亡,可能成为胶质瘤治疗的一种新方法.
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塞莱西布体外对人类肝胃癌细胞生长的抑制作用
目的:研究塞莱西布在体外对人类肝癌7721细胞以及胃癌7901细胞的生长抑制作用.方法:两种肿瘤细胞用含不同浓度(0,20,40,80,160和320 pmol/L)的塞莱西布的培养液培养.应用MTT测定法来测定生长抑制率,电镜技术来观察细胞凋亡情况,免疫组化技术来检测细胞内Cox-2蛋白含量.结果:塞莱西布对两种肿瘤细胞均具有生长抑制作用(塞莱西布320 pmol/L时两种肿瘤细胞抑制率分别为49.1%和42.9%),并呈现量-效关系.电镜下可观察到凋亡细胞.免疫组化发现细胞内环氧化酶的含量在处理前后有明显变化.结论:在体外,塞莱西布抑制人类肝癌及胃癌细胞生长,诱导他们产生凋亡,并且该作用与细胞内环氧化酶含量有密切关系.
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胃泌素拮抗剂增加CD自杀基因对结直肠癌细胞的杀伤作用
目的:研究联合应用胃泌素拮抗剂和胞嘧啶脱氨酶(CD)的基因治疗对结肠癌细胞的杀伤作用.方法:脂质体法转染G1CEACDNa至LoVo细胞.用含1mmol/L5-FC或/和1×10-8mmol/L CI-988的100ml/L胎牛血清的RPMI1640培养基培养细胞,测生长曲线;MTT法测细胞杀伤率;透射电镜观察细胞的超微结构;流式细胞仪annexin V和PI双重染色行凋亡相关检查;Balb/c裸鼠背部皮下接种CD+LoVo细胞,5-FC(500mg/kg)腹腔注射或/和CI-988(10mg/kg)灌胃处理20 d,处死裸鼠后肿瘤称重,病理切片HE染色,瘤组织透射电镜检查.结果:用5-FC或/和CI-988处理6 d后CD+LoVo细胞抑制率分别为90%和50%,二者合用于3 d和6 d抑制率分别为40%和97%;MTT法检测联合应用5-FC和CI-988较单用任何一种处理对CD+LoVo细胞杀伤作用更强,有统计学差异(0.53±0.05 vs 0.49±0.02,0.38±0.06,F=29.5536,n=5,P＜0.01);电镜和流式细胞仪分别显示CD/5-FC和CI-988结合处理72 h后细胞有凋亡现象;用5-FC(500 mg/kg)腹腔注射和CI-988(10 mg/kg)灌胃处理荷瘤裸鼠均可出现明显的抑瘤作用,抑瘤率分别为69.4%和495%,二者合用抑瘤较单用任一种处理更明显,有统计学意义(0.42±0.12 vs0.69±0.11,1.22±0.22,F=33.1709,n=5,P＜0.05),抑瘤率达81.5%,电镜下见瘤组织内有凋亡小体.结论:联合应用胃泌素拮抗剂CI-988可以提高CD/5-FC对结肠癌细胞的杀伤作用.凋亡相关过程可能是这种协同作用的原因.
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赤芍、白芍凉血作用比较研究(Ⅰ)-LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞的作用研究
目的 观察赤芍、白芍各醇提物对脂多糖(LPS)致大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)不同时间段活性的影响,比较赤芍、白芍各醇提物的凉血作用的异同.方法 采用四甲基偶氮唑盐比色 (MTT)法检测LPS(1μg/mL)对NR8383 细胞不同时间点的抑制率及赤芍、白芍(10μg/mL)对LPS 诱导NR8383 活性的调节作用.结果 1μg/mLLPS 刺激NR8383 6h 之前抑制率为负值之后逐渐转为正值,即先诱导其过度激活后促进其凋亡;观察到川赤芍、赤芍、白芍给药组能够在3h 时显著抑制NR8383 的过度活化,与LPS 对照组比较具有显著差异(P＜0.05);24h 时各药物组均能够显著抑制NR8383 的异常凋亡,与LPS 对照组比较具有显著差异(P＜0.05);24h 时川赤芍、赤芍组与白芍组之间有显著差异(P＜0.05).结论 赤芍、白芍是在共同具有凉血功效的前提下有所偏重.
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白英水提物抗肿瘤作用的初步研究
茄科植物白英Solanum lyratum Thunb.,又名白毛藤,多产于江苏、浙江、江西,性味苦、辛、微寒,归肝、胆经.常与他药伍用治疗肺癌、胃癌、肝癌等多种癌症,此外还用于治疗疟疾、黄疸、水肿等.日本大阪中医药研究所对800种中药进行抗癌药物筛选,发现只有白英对癌细胞抑制率为100%,且对正常细胞无任何影响.
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HSV-TK基因重组腺病毒旁杀伤效应机制初探
目的:探讨HSV-TK基因重组腺病毒(AdTK)旁杀伤效应的机制.方法:用MTT法计算细胞抑制率,数据采用单因素方差分析.结果:病毒感染过的肿瘤细胞和经AdTK/GCV系统处理的肿瘤细胞培养上清液与未感染的肿瘤细胞按不同比例混合均显示出对肿瘤细胞的抑制作用.前者的抑制率随感染AdTK细胞比例的增加而增高,后者随上清液浓度的增加而升高.结论:旁杀伤效应在TK自杀基因的治疗中起非常重要的作用.旁杀伤效应可能是基于多个环节的共同作用.
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细胞生长抑制率的估计
目的:建立药物作用下细胞生长抑制率区间估计的数学模型.方法:运用概率统计的原理.结果:分别就小样本、大样本推导出区间估计公式.结论:药物作用下细胞生长抑制率区间估计公式.
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蒲公英花提取物的体外抗肿瘤活性研究
目的 研究蒲公英花提取物的不同溶剂萃取部分的体外抗肿瘤作用.方法 设蒲公英花提取物的各萃取部位的不同浓度组、细胞对照组及空白对照组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法考察蒲公英花提取物的各萃取部位在不同时间内对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,并采用显微镜观察药物对上述细胞株细胞形态的影响.结果 蒲公英花提取物的各萃取部位在体外对肝癌细胞HepG2有比较显著的细胞增殖抑制作用,呈现明显的剂量-时间-效应关系;并且可使肿瘤细胞株的细胞形态发生显著变化,引起细胞株的凋亡或坏死.结论 蒲公英花提取物的各萃取部位能抑制肝癌细胞HepG的增殖,在体外有一定的抗肿瘤活性.
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独角莲体外抗肿瘤实验研究
为探讨独角莲的体外抗肿瘤作用,将独角莲根茎水提物分别处理人宫颈癌系细胞( HeLa)、人白血病细胞( HL60)、人肺腺癌细胞(SPC)、人骨髓神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y) 24、48h后,应用体外细胞培养技术、倒置相差显微镜观察、Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖和毒性实验检测独角莲根茎水提物对各肿瘤细胞的生长抑制作用并筛选出对独角莲根茎水提物敏感的肿瘤细胞株,运用AV/PI双染流式细胞术对该细胞株生长抑制机理进行初步探讨.结果表明:独角莲根茎水提物对HeLa、HL60、SPC、SH -SY5Y细胞的生长具有抑制作用,与细胞作用48h时的IC50分别为2 575、16 054、2 077、0.862mg·mL-1,与细胞作用24h时的IC50分别为4 303、21 674、3.114、1.158mg·mL-1；倒置相差显微镜观察和流式细胞仪检测结果表明独角莲根茎水提物可能是通过诱导肿瘤细胞发生凋亡来抑制其生长的.
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檞皮素抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的实验研究
目的 探讨中草药檞皮素抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖作用.方法 运用MTF法检测檞皮素对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术分析棵皮素对SMMC-7721细胞增殖周期的影响.结果 10-320μmoL/L 度的檞皮素均能抑制SMMC-7721细胞的生长,且呈明显的时间,剂量依赖性关系,细胞周期分析显示檞皮素组G1期细胞比例明显增多,呈量效关系.结论 檞皮素抑制SMMC-7721细胞增殖,可能通过使SMMC-7721细胞停滞在G1期而诱导其凋亡.
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檞皮素抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的实验研究
目的 探讨中草药檞皮素抑制人胶质瘤SHG-44细胞的增殖作用.方法 运用MTT法检测檞皮素对SHG-44细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪技术分析檞皮素对SHG-44细胞增殖周期的影响.结果 50～200 μmol/L浓度的檞皮素均能抑制SHG-44细胞的生长,且呈明显的时间,剂量依赖性关系,细胞周期分析显示檞皮素组G1期细胞比例明显增多,呈量效关系.结论 檞皮素抑制SHG-44细胞增殖,可能通过使SHG-44细胞停滞在G1期而诱导其凋亡.
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复尔康注射液抗白血病的实验研究
白血病是临床常见的恶性肿瘤之一,特别是青少年发病率较高.维甲酸、三氧化二砷单用或二者联合使用,是目前临床治疗白血病的首选药物[1].但均有耐药及复发率高,以及高白细胞症、维甲酸综合征、肝肾功能异常等毒副作用[2-4].为了寻求治疗白血病疗效好,副作用少的新制剂,我们研制了复尔康多相脂质体注射液,其主药由青蒿油、甘草酸盐组成.本文报道复尔康注射液抗白血病的实验研究.
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复尔康注射液及拆方制剂对SMMC-7721和NB4细胞株的抑制作用
目的:研究复尔康注射液(青篙油、甘草酸盐、维A酸等)及拆方制剂对不同肿瘤细胞株的抑制作用,了解该注射剂的抑瘤谱以及组方的合理性.方法:以相同药物浓度的复尔康注射液及拆方制剂作用于SMMC-7721及NB4细胞48 h,阿霉素为阳性对照药,采用MTT法检测复尔康注射液及拆方制剂对两种细胞株的生长抑制作用.结果:复尔康注射液及拆方1、2、3号制剂浓度为1.260 μg/mL时,对SMMC-7721细胞的抑制率分别为54.78%、55.49%、53.18%、53.79%,半抑制浓度IC_(50)依次为0.415 μg/mL、0.376 μg/mL、0.715 μg/mL、0.636 μg/mL;浓度为0.630 μg/mL时,对NB4细胞的抑制率分别为88.6%、82.5%、77.9%、76.9%,半抑制浓度IC_(50)依次为0.091 μg/mL、0.108 1 μg/mL、0.084 μg/mL、0.120 μg/mL.结论:复尔康注射液及拆方制剂对SMMC-7721和NB4细胞株均具有明显的抑制作用,各单味药在复方制剂中具有协同增效作用.
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正交实验法优选发酵蜈蚣粉中水溶性总蛋白提取工艺及其抗肿瘤效果
目的:优选中药发酵蜈蚣粉中水溶性总蛋白的佳提取工艺.方法:在对中药发酵蜈蚣粉中总蛋白提取条件进行单因素考察的基础上,采用L9(34)正交实验设计法,以发酵蜈蚣粉水溶性总蛋白含量为指标,考察提取时间、pH值、料液比三个因素对提取物中的水溶性总蛋白含量的影响,优选出佳提取工艺.结果:中药发酵蜈蚣粉水溶性总蛋白的佳提取工艺为:向发酵蜈蚣粉中加入20倍量的pH值为9的蒸馏水超声提取150 min.在佳工艺下提取发酵蜈蚣粉中总蛋白对乳腺癌MCF-7细胞具有很好的抑制效果.结论:实验中优选的发酵蜈蚣粉中总蛋白提取工艺简便、可行,能准确反映总蛋白含量和一定的抗肿瘤效果.
关键词： 发酵蜈蚣粉 总蛋白 MTT法 乳腺癌MCF-7细胞株 肺腺癌A549细胞株 细胞抑制率 -
腹腔镜中不同膨腹气体抑制肿瘤细胞生长的体外对比研究
本实验旨在研究CO2、He、N2O等不同膨腹气体在模拟气腹条件下，对肿瘤组织体外生长的影响，结果报道如下。 一、材料与方法 肿瘤细胞为人类肝癌细胞株SMMC7721(购于中国科学院细胞研究所)，体外培养于RPMI 164 0完全培养液(含体积分数为10%小牛血清及10万U/L青链霉素)中。传2～3代(至少1周以上)后，以台盼蓝染色后在荧光显微镜下记数，制成5×102个/L的单细胞悬液。悬液分别注入4个( 4组)无菌医用引流袋(带防漏阀)中，用自动气腹仪(Laproflator electronic 3509，WE STGmbH，Germany)自引流袋入口管分别注入CO2、He及N2O，对照组不附加任何气体。 3个实验组气体压力达15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)，于37 ℃孵育箱中维持模拟气腹状态45 min，对照组为大气压力，37 ℃孵育箱中孵育45 min。取出后的细胞悬液用台酚蓝染色后在荧光显微镜下记数4个组存活细胞的比值，同时4个组细胞悬液分别加入96 孔板内。每孔细胞数为5×104个，每组做12复孔，于模拟气腹后24、48、72 h分别用四唑蓝(MTT，美国Sigma公司，微量酶反应于分光光度计在波长为570 nm测定比色值以检测细胞抑制率。 统计学方法：各组间比色值用Student t检验。 二、结果 “气腹’后4个组细胞存活百分比差异无显著性(P＞0.05)，其中CO2组为(92.3±1.2)%，He组为(89.6±2.5)%， N2O组为(90.5±±3.1)%，对照组为(90.7±3. 1)%。在观察的72 h中，肿瘤细胞均生长。气腹后测定各组pH值结果: CO2组为6.6, He组为9.8, N2O为8.2, 对照组为7.3。以MTT法对细胞进行抑制率测定(图1), CO 2组在“气腹”后第24小时与He组、N2O组和对照组相比， MTT值(对照孔-用药孔 /对照孔×100)上升，差异有非常显著性(P＜0.01)； He组较 N2O组和空白组明显下降(P＜0.05)， N2O和对照组之间MTT值差异无显著性(P＞0.05)。第48小时CO2组与其他3个组相比，MTT值亦上升，其中较 H e组差异有非常显著性(P＜0.01)，较N2O和对照组差异有显著性(P＜0.05)，He组较N2O和对照组下降，差异有显著性(P＜0.05)，N2O和对照组之间差异无显著性(P＞0.05)。第72小时，各组MTT值差异均无显著性(P＞0.05)。
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龙葵生物碱体外抑制肿瘤细胞增殖作用的实验研究
目的:研究龙葵生物碱提取物对人肺癌A549细胞株增殖的抑制作用.方法:采用盐酸-乙醇混合溶剂加热回流法从龙葵中提取分离生物碱.以MTT法考察龙葵生物碱不同浓度对人肺癌A549细胞株增殖的抑制作用,采用倒置显微镜观察药物对肿瘤细胞株形态的影响.结果:龙葵生物碱提取物对人肺癌A549细胞株具有显著的细胞增殖抑制作用,且呈剂量依赖关系,并可使肿瘤细胞形态发生显著变化.结论:龙葵生物碱具有对肺癌细胞的抑制作用.
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蜈蚣粉酶解工艺佳用酶的初步筛选
目的 分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶对蜈蚣粉进行酶解并选取佳用酶来制备抗肿瘤多肽.方法 利用4种酶对蜈蚣粉进行酶解,采用MTT体外抗肿瘤实验方法,以蛋白质的水解度及酶解提取液对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率为指标,同时以蜈蚣粉的水溶性蛋白质含量为标准,评价4种酶对蜈蚣粉的酶解效果并筛选出佳用酶.结果 胃蛋白酶对蜈蚣粉的水解度为10.44％;胰蛋白酶对蜈蚣粉的水解度为28.29％,在0.125 mg·mL-及0.25 mg·mL-1的较小浓度下对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率低于对照组,但随浓度的增大抑制率逐渐增大,在0.5～2 mg·mL-浓度时,胰蛋白酶在4种酶中达到大抑瘤效果;胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶的水解度分别为50.45％、44.16％,当浓度＞0.5 mg·mL-时其对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率高于对照组,在浓度为0.5mg·mL-时抑制率分别为2.86％、36.37％,且随浓度增大抑制率增大.结论 蜈蚣粉酶解工艺佳用酶为胰蛋白酶,其次是胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶,而胃蛋白酶活性较低可以去除.
关键词： 蜈蚣粉 蛋白酶 水解度 乳腺癌MCF-7细胞株 细胞抑制率 -
瘤内注射用醋酸奥曲肽温敏凝胶的处方筛选
目的:筛选瘤内注射用醋酸奥曲肽温敏凝胶(OAG)的佳处方.方法:以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188为基质制备OAG,以胶凝温度(T)、黏度(η)及对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株HCA-F的抑制率(IR)为评价指标,考察泊洛沙姆的不同浓度、渗透压调节剂NaCl的加入及溶液pH等不同因素对OAG的影响,筛选主要处方组成并进行验证.结果:较佳处方组成为0.5％醋酸奥曲肽、18％泊洛沙姆407、12％泊洛沙姆188,0.9％ NaCl,溶液pH调至7.2.验证试验中所制OAG的7为37.1℃,7为4 750mPa·s,IR为57.6％,符合瘤内注射制剂的要求.结论:制备的OAG可满足瘤内注射给药和在体胶凝的要求,对肿瘤细胞的IR较高,具有较好的应用前景.
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复尔康注射液对人肺癌和白血病细胞株的生长抑制作用
目的:研究复尔康注射液抗肿瘤作用,为临床用药提供理论依据.方法:用复尔康注射液作用于A549与CEM-C7细胞株48h,以阿霉素为阳性对照药,采用MTT法检测复尔康注射液对两种细胞株的生长抑制作用.结果:0.75ìg穖l-1复尔康注射液对A549细胞的抑制率为96.48%,0.187ìg穖l-1对CEM-C7细胞的抑制率为97.30%;半抑制浓度IC50分别为0.164ìg穖l-1及0.024ìg穖l-1,重复3次,结果基本相似.结论:复尔康注射液对A549与CEM-C7细胞株的增殖生长有高度抑制作用.
