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应用涂片染色检测幽门螺杆菌
幽门螺杆菌(HP)与慢性胃炎和消化性溃疡的发生以及在发病过程中的作用已得到证实.胃粘膜活检切片Hp染色已成为一种常规检测项目,对胃病患者的诊断和治疗起到了一定的辅助作用.我们采用胃粘膜活检直接涂片-石碳酸品红染色,检测Hp获得较好效果,现介绍如下.
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机体免疫反应和CagA对幽门螺杆菌长期感染转归的影响
10年前在我院行胃镜、病理和Hp检测确诊为Hp阳性者63例,10年后到我院复查再次行上述检查,其中16例转阴,47例仍为阳性。采用细菌培养和Giemsa染色检测胃粘膜内Hp,用间接ELISA法检测了47例Hp持续感染10年患者血清抗Hp CagA-IgG和抗Hp IgE,并检测了这些患者10年前后胃镜和病理组织学变化。
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HBsAg携带者(ASC)免疫组织化学分析
从免疫组织化学(简称免疫组化)的角度,研究HBsAg携带者(ASC)肝内病毒抗原和复制指标的表达状况,探讨临床病理和免疫组化的相关性,旨在提供病理诊断和肝内病原学诊断依据.本文对24例ASC和2例HBcAb阳性者进行肝穿活检,应用常规HE染色,光镜检查病理形态,用SP法免疫组化染色检测肝内HBsAg和HBcAg两种抗原,加以对照分析.
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肥大细胞在胃嗜酸性肉芽肿发病中的作用
目的:探讨肥大细胞在胃嗜酸性肉芽肿发病中的作用.方法:应用免疫组化SP染色检测胃嗜酸性肉芽肿中的肥大细胞及微血管密度;HE染色计数嗜酸细胞;电镜观察肥大细胞J脱颗粒情况.结果:肥大细胞数量在胃溃疡和胃嗜酸性肉芽肿中差别无显著性(9.1±3.0 vs 8.9±3.0,P>0.05);脱颗粒肥大细胞数量及比例在胃嗜酸性肉芽肿组明显高于胃溃疡组(73±2.4vs 4.3±1.4、80.3±15.7%vs 48.4±15.7%,P<0.01);肥大细胞高计数组微血管密度高于肥大细胞低计数组(57.3±10.7 vs 32.4±7.2,P<0.01);脱颗粒肥大细胞与嗜酸细胞具有正相关性(r=0.931,P<0.01).结论:肥大细胞在胃嗜酸性肉芽肿中可促进嗜酸细胞浸润及血管新生,可能在胃嗜酸性肉芽肿发病中起重要的作用.
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核因子-κB在大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织的表达及其意义
目的:观察大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织核因子-κB(NF-kB)及TNF-α、ICAM-1的表达,探讨NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中的作用.方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠溃疡性结肠炎模型,设正常组、生理盐水组及轻、重模型组共4组.采用免疫组织化学染色检测肠组织NF-κB、TNF-α和ICAM-1表达,生化方法检测MPO含量,并分析NF-κB活性与肠道病理损伤指数、MPO含量、TNF-α及ICAM-1表达的关系.结果:溃疡性结肠炎大鼠肠组织中NF-κB活性,TNF-α、ICAM-1表达及MPO含量较正常组及生理盐水组显著增高(NF-κB:52.14±9.81、30.26±10.20,60.73±13.41、45.24±10.86 vs13.31±4.76、16.95±6.83,11.61±4.85、14.10±5.76;TNF-α:74.50±11.20、48.11±5.95,84.09±14.52、53.40±8.79vs16.99±5.48、20.04±6.76,10.13±1.79、16.03±6.21;ICAM-1:68.15±7.25、44.34±7.54,77.69±8.09、47.01±8.82vs15.34±4.03、17.50±6.95,10.33±2.38、13.41±4.91;MPO:1.69±0.11,0.71±0.06vs0.39±0.07,0.31±0.08;P<0.01),且在病情严重组增高尤为明显.NF-κB表达水平与TNF-α和ICAM-1阳性细胞密度、MPO含量、肠道病理损伤指数呈显著正相关关系(r分别为0.9 304,0.8 680,0.6 865,0.9 292,0.8 462;P<0.001或P<0.005).结论:NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中可能起重要作用.
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HGF和FGF4体外诱导人骨髓CD45-CD117-细胞向肝细胞分化的研究
目的:探讨在HGF、FGF4诱导下人骨髓CD45-CD117-细胞能否向肝细胞分化,并探讨两种生长因子在诱导分化中可能的作用机制.方法:骨髓来自4名4-40岁健康志愿者的胸骨或髂骨.用两步磁式分离法分离出CD45-CD 117-细胞,分别用含有FGF4,HGF,HGF+FGF4或不加生长因子的DMEM培养基进行培养,相应地分为A,B,C,D四组.分别于新分离时和培养7 d,14 d,21 d,28 d时留细胞.备作免疫细胞化学检测AFP,CK18,白蛋白,PAS染色检测糖原等肝系细胞的特征型标志,RT-PCR检测C、D组细胞c-met(HGF受体)和FGFR2(FGF4R)mRNA表达情况.结果:A,B,C三组加生长因子诱导培养后的细胞均可检测到肝系细胞的标志,D组细胞不加生长因子培养后没有检测到肝系细胞的标志.c-met和FGFR2mRNA在新分离的和D组培养7 d,14 d时的细胞均有较弱的表达,而在C组细胞诱导培养7 d,14 d时表达升高.结论:HGF和FGF4可诱导人骨髓CD45-CD117-细胞向肝细胞样细胞分化.生长因子诱导分化的作用可能通过与其受体之间的正反馈调节.
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COX-2抑制剂联合顺铂对胰腺癌细胞增生和凋亡的影响
目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂Celecoxib和顺铂联合应用对胰腺癌细胞增生、凋亡的影响.方法:用Celecoxib和顺铂处理胰腺癌BxPC-3细胞后,用噻唑蓝(MTT)检测细胞的相对存活率,RT-PCR检测COX-2 mRNA的表达,流式细胞术和Hoechst-33 258染色检测其对BxPC-3的凋亡诱导作用.结果:Celecoxib作用于BxPC-3细胞后,细胞的存活率呈剂量和时间依赖性,其中24 h的IC50值为100 nM,Celecoxib可明显降低BxPC-3细胞COX-2 mRNA的表达;Celecoxib和顺铂联合应用对胰腺癌细胞增生的抑制和凋亡的诱导作用更加明显,Hoechst-33 258染色可呈现凋亡的形态学改变.结论:COX-2抑制剂和顺铂联合应用对抑制胰腺癌细胞增生和诱导细胞凋亡的高效性,表明其在临床上具有潜在的应用价值.
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肝细胞、胰岛细胞与储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响
目的:探讨肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响.方法:采用改良胶原酶消化法分离获得大鼠肝细胞和储脂细胞,同时利用梯度离心分离胰岛细胞.分两组实验,肝细胞培养组(对照组),肝细胞用RPMI1640、胰岛素10-7mol/L、100 mL/L FBS及地塞米松10-8 mol/L配成细胞悬液,2 mL放入9 cm2培养瓶中连续培养15 d(37℃50mL/LCO2).肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养组(实验组):将1×107/L的储脂细胞2 mL先加入培养瓶中,培养条件及培养液同肝细胞培养组,培养48 h后弃上清后将肝细胞2×108/L 2 mL和胰岛细胞(100个)分别加入并观察肝细胞存活情况;全自动生化分析仪测定培养上清液中总蛋白及尿素氮的含量;两组细胞均在培养10 d行细胞组织学及组织化学检测,包括肝细胞HE染色、肝细胞内糖原PAS染色及葡萄糖-6-磷酸酶染色检测.结果:培养第7 d对照组部分肝细胞脱落,核固缩,胞质破碎分解.而实验组肝细胞粘壁生长好,肝细胞、储脂细胞和胰岛细胞相间形成团状和索形.培养10 d对照组肝细胞核完全固缩,胞质破碎分解,糖原、葡萄糖-6-磷酸酶的表达消失;实验组肝细胞呈片状,胞质饱满,糖原、葡萄糖-6磷酸酶的表达良好.培养5 d后实验组白蛋白及尿素氮的合成明显高于对照组(P<0.05).结论:肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养明显延长肝细胞存活期.
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幽门螺杆菌感染对胃癌及其癌前病变组织中胃泌素和CCK-B receptor表达的影响
目的:分析幽门螺杆菌(Hpylori)感染对胃黏膜癌变过程中胃泌素及受体CCK-BR基因转录和蛋白表达的影响,探讨Hpylor在胃癌发生中的作用.方法:采用快速尿素酶试验、Giemsa染色及Warthin-Starry银染色检测H pylori;应用免疫组织化学和RT-PCR技术检测萎缩性胃炎51例,18例肠上皮化生18例,异型增生15例和胃癌组织37例中的胃泌素及受体CCK-BR蛋白和mRNA表达情况.结果:胃泌素mRNA和蛋白在H pylori阳性的萎缩性胃炎中的表达显著低于Hpylori阴性的萎缩性胃炎(0.32±0.09 vs0.51±0.12,26.79±3.61vs32.80±2.24,P<0.01),CCK-BR mRNA在H pylori阳性的萎缩性胃炎、肠化生、异型增生及胃癌中的表达与H pylori阴性组比较无明显变化.结论:H pylori感染可以抑制萎缩性胃炎组织中的胃泌素mRNA和蛋白表达,这可能是H pylori感染导致慢性胃炎的重要机制之一.H pylori感染在胃癌发生过程中,主要作用于胃癌发生的早期阶段-萎缩性胃炎,可能起着启动因子的作用.
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根除幽门螺杆菌对慢性萎缩性胃炎组织中生长抑素及其受体的蛋白和mRNA表达的影响
目的:分析幽门螺杆菌(H pylori)感染及根除对慢性萎缩性胃炎(CAG)组织中的生长抑素及其受体蛋白和mRNA表达的影响,探讨H pylori的致病机制及其在胃癌发生中的作用.方法:采用快速尿素酶试验、Giemsa染色及Warthin-Starry银染色检测Hpylori;应用免疫组织化学SP法和RT-PCR技术检测56例萎缩性胃炎组织中的生长抑素(somatostatin,SS)及其受体hSSTR2、hSSTR5蛋白和mRNA表达情况,以及Hpylori根除前后慢性萎缩性胃炎组织中的生长抑素蛋白和mRNA表达的变化.结果:H pylori阳性组慢性萎缩性胃炎组织中的SS蛋白和mRNA表达均显著低于Hpylori阴性组(16.00±1.50 vs 21.38±1.38,0.30±0.05 vs 0.57±0.13,P<0.001),而H pylori 阳性组萎缩性胃炎组织中的hSSTR2 mRNA和hSSTR5mRNA表达与H pylori阴性组比较无明显变化.经三联治疗根除H pylori后,慢性萎缩性胃炎组织中的SS蛋白和mRNA表达较治疗前显著增加(23.16±2.74 vs 17.30±1.67,0.54±0.11 vs 0.31±0.09,P<0.001),而H pylori仍为阳性者,慢性萎缩性胃炎组织中的SS蛋白和mRNA表达与治疗前比较则无明显变化.结论:H pylori感染可以抑制慢性萎缩性胃炎组织中的生长抑素蛋白和mRNA表达,及早根除H pylori,可以纠正生长抑素基因的异常表达,这可能是Hpylori感染导致慢性胃炎的重要机制之一.
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反流性食管炎242例临床资料分析
目的:通过分析反流性食管炎(RE)的内镜表现、24hpH值监测及幽门螺杆菌(Hp)检测,探讨RE的内镜特点和致病因素.方法:RE按洛杉矶分型标准进行分级,并注意观察是否并存食管裂孔疝及Barrett's食管(BE)的内镜表现.60例RE患者进行24h pH值监测.156例RE进行快速尿素酶及病理银染色检测Hp感染.结果:A级98例,B级89例,C级33例,D级22例.A,B,C,D各级RE明显酸反流的发生率(64.7%,71.4%,62.5%,71.4%),均明显高于正常对照组(0%)(P<0.01);A,B,C,D各级RE合并食管裂孔疝者分别为:25.5%,30.7%、54.6%、60.9%,随RE病变加重合并食管裂孔疝者增多.合并BE者3例(1.2%),合并有不同程度的Barrett's上皮改变者59例(24.4%).合并Hp感染者39.7%,显著低于胃溃疡组(70.7%)和十二指肠球溃疡组(80.7%)(P<0.01).结论:食管裂孔疝可能是RE的致病因素之一,且可能与RE的严重程度有关.酸反流是RE的致病因素之一.RE患者中Barrett's现象并非罕见.Hp感染是否与RE的发病相关,有待更严格有效的流行病学调查的研究.
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肝细胞肝癌UPAR和VEGF表达与浸润转移的关系
目的:探讨尿型纤溶酶受体(UPAR)和血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞肝癌(HCC)的表达与其病理学特性和肿瘤浸润转移的关系.方法:采用抗受体抗体SABC免疫组织化学染色检测79例肝细胞肝癌标本中UPAR表达,以常规SABC免疫组化方法检测VEGF的表达.结果:在79例HCC中,UPAR的表达阳性率为51 9%(41/79),VEGF的表达阳性率为46.8%(37/79),二者表达与肝癌大小、分化程度无关,但与肿瘤的转移显著相关.结论:UPAR和VEGF的表达可作为HCC的侵袭表型,可作为估计预后的指标,肝细胞肝癌中VEGF的表达与UPAR表达具有较高的相关性.
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根除幽门螺杆菌对胃癌前病变组织中bax蛋白表达的影响
目的:研究Hp感染及根除治疗对胃癌前病变组织中促凋亡基因Bax蛋白表达的影响,探讨Hp的致病机制及其在胃癌发生中的作用.方法:采用快速尿素酶试验、Warthin-starry银染色检测Hp;采用免疫组织化学SP法检测72例胃癌前病变组织中Bax蛋白的表达情况,以及Hp阳性患者Hp根除前后胃癌前病变Bax蛋白表达的变化.结果:Bax蛋白在肠上皮化生及不典型增生组织中均有不同程度的表达,其阳性表达率为63.9%.Hp阳性胃癌前病变组Bax蛋白阳性表达率(72.3%)显著高于Hp阴性胃癌前病变组(48.0%,x2=4.191,P<0.05),Hp感染与Bax阳性表达及分级呈正相关(r=0.978,P<0.01).经三联治疗根除Hp后,Bax蛋白阳性表达率(70.3%)较治疗前显著降低(43.2%,x2=5.506,P<0.05),而Hp仍为阳性者Bax蛋白阳性表达率则无变化.结论:Hp感染可以促进促凋亡基因Bax蛋白的表达,这可能是Hp感染诱导胃黏膜上皮细胞凋亡的主要机制之一,从而导致细胞凋亡和增生的调节紊乱,使胃黏膜上皮不稳定性增加,使其具有较高的癌变易感性.根除Hp感染可纠正Bax基因表达的异常,对预防或减缓胃癌的发生可能具有重要意义.
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结肠肿瘤cFLIP基因表达与p53突变的关系
目的:检测cFLIPshort/long在结肠肿瘤和癌旁组织的表达状况及其与p53基因突变的关系,初步探讨cFLIP在结肠肿瘤发生发展中的意义及p53对其调控作用.方法:采用免疫组织化学法检测cFLIPshort/long在45例结肠腺癌、癌旁组织和42例结肠腺瘤组织中的表达,同时对以上45例结肠腺癌组织行免疫组化染色检测突变p53的表达状况.cFLIPshort/long在结肠腺癌、癌旁组织和腺瘤中的表达差异采用多个样本两两比较的秩和检验(Nemenyi法),cFLIPshort/long和突变p53的表达关系采用t检验分析.结果:cFLIPshort/long在结肠腺癌、癌旁组织和腺瘤中都有阳性表达,其染色记分均数分别为3.28±0.37、1.25±0.64和1.13±0.64.结肠腺癌组织的表达强度明显高于癌旁正常组织(3.28±0.37 vs 1.25±0.64,P<0.01)和腺瘤组织(3.28±0.37 vs 1.13±0.64,P<0.01).60%结肠腺癌突变型p53呈阳性表达,cFLIPshort/long在突变型p53阳性组结肠腺癌中的表达水平明显高于突变型p53阴性组(3.74±0.35 vs 2.58±0.59,P<0.01).结论:cFLIPshort/long特异性高表达于结肠腺癌组织且在结肠肿瘤转化过程中是一较晚期事件,可能与肿瘤的进展有关.P553突变可使结肠腺癌cFLIPshort/long表达水平升高,p53对cFLIP蛋白的促降解作用可能强于他对cFLIP基因的转录上调作用.
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直肠癌细胞系膜内淋巴结转移的解剖病理学研究
目的:研究直肠癌系膜淋巴结(LN)大小、分布、转移及微转移规律.方法:对全直肠系膜切除的直肠癌标本用LN显示液处理,切取的LN以常规病理结合免疫组化染色检测.结果:本组31例548枚LN,27例(87.1%)153枚(27.9%)LN发现转移.其中,直径小于0.5 cm LN 366枚(66.8%),转移91枚(59.5%).转移病例中,后壁直肠癌15例,78枚LN转移,75枚沿直肠上动脉分布.侧壁直肠癌12例,75枚LN转移,同侧直肠上动脉分支、直肠中动脉旁转移37和8枚,对侧分别为9和0枚.结论:直肠癌大部分转移LN直径小于0.5 cm,主要分布于直肠上动脉旁.LN转移与肿瘤方位有关,后壁癌可同时沿肿瘤两侧系膜扩散,侧壁癌以同侧LN受累为主.
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旁分泌机制在脂肪间充质干细胞移植治疗心肌梗死中的作用
目的:探讨旁分泌机制在脂肪间充质干细胞(ADSC)移植治疗心肌梗死中的作用。
方法:原代分离和培养人ADSC,将经鉴定的第3~5代的ADSC用于实验。①用8~10周龄(20~24 g)的雄性C57B/L小鼠,结扎左前降支建立心肌梗死(MI)损伤模型,实验分假手术组,MI+DMEM/F12组和MI+ADSC-CM(条件培养液)组(n=12)。在MI处理的小鼠心肌梗死边缘区分别注射DMEM/F12和ADSC-CM,观察动物生存率、TTC染色测量心肌梗死面积、超声评价心功能变化、TUNEL染色检测心肌细胞凋亡等方法评价心肌梗死的治疗效果。②用H2O2建立乳鼠心肌细胞(NRVM)体外损伤模型,观察ADSC-CM对心肌细胞的保护作用。实验分对照组,H2O2+DMEM/F12组和H2O2+ADSC-CM组(n=5)。分别用caspase-3蛋白定量和TUNEL染色检测心肌细胞凋亡。 -
溶血磷脂酸预处理对幼龄心脏再灌注损伤影响的研究
目的:探讨溶血磷脂酸(LPA)预处理通对幼龄心脏再灌注损伤后保护作用及机制。
方法:将H9C2心肌细胞分为对照组、氧化应激损伤组(200 mol/L过氧化氢处理4小时)、LPA预处理组(25μmol/L、10μmol/L、1μmol/l)和ki16425预处理组,应用MTT法和流式细胞仪检测细胞存活和凋亡。选择2周龄SD鼠建立Langendorff离体心脏缺血再灌注损伤模型,随机分为对照组(n=6)、再灌注损伤组(n=7)、LPA预处理组(n=7)和ki16425+LPA预处理组(n=7),记录缺左室收缩压(LVSP)、左室发展压(-dp/dt)、心率(HR)和冠脉流量(CF);实验结束后TTC染色检测再灌注损伤面积;取各组心尖部位检测caspase-3活性和TUNEL染色。 -
肝细胞生长因子对心肌梗死后心肌细胞凋亡及左室重塑的影响
目的观察外源性肝细胞生长因子(HGF)对心肌梗塞后心肌细胞凋亡及左室重塑的影响.方法56只新西兰兔随机分为4组:假手术组、假手术+HGF组、对照组和干预组.结扎左冠状动脉前降支复制急性心肌梗死模型.干预组静脉注射给予HGF2mg/kg/12h,4周后测心功能、左室重塑指标,取出心脏,梗死区重/缺血区比为梗死范围.TUNEL法染色检测细胞凋亡.
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外源性bFGF对深Ⅱ度烫伤大鼠创面MMP-2、MMP-7和TIMP-2的影响
目的:观察大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合过程中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-7与金属蛋白酶组织抑制因子-2(tissueinhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)的变化以及创面外用bFGF对两者的影响,认识基质金属蛋白酶与抑制因子对创面愈合的作用.方法:78只Wistar大鼠随机分为正常对照、单纯烫伤和bFGF治疗三组.利用大鼠30%深Ⅱ度烫伤模型,于伤后3h、6h、1d、3d、7d和14d采取创面皮肤标本,用免疫组织化学染色检测创面组织真皮内成纤维细胞MMP-2、MMP-7和TIMP-2的表达变化情况.结果:烫伤大鼠创面中细胞外基质活动影响皮肤的胶原沉积.伤后1d MMP-2/MMP-7表达增多,随后略有下降,7d时再次达到高峰.伤后TIMP-2的表达与前者的表达一致.局部外用bFGF后,创伤初期(3h~6h)组织中MMP-2/MMP-7的表达无显著变化,1d~14d,MMP-2/MMP-7和TIMP-2阳性表达强于对照组.结论:MMPs和TIMPs的表达变化是组织修复的重要步骤,bFGF加速创面愈合的过程与MMP-2/MMP-7和TIMP2的表达密切相关.
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SD大鼠脾内肝细胞移植的迁移与生存研究
肝细胞移植(hepatocyte transplantation, HT)是一项始于20世纪70年代末的新技术.众多研究方法中,脾内肝细胞移植为效果比较确切的方法之一.经脾植入的肝细胞可随血液循环迁移到许多器官,且在肝脏中难于和宿主肝细胞区别,他们的生存状况需采用示踪方法进行观察.近,国外文献介绍了使用荧光染料DiI标记肝细胞进行示踪研究的方法,国内肝细胞移植的示踪研究未见报道.本实验运用荧光染料DiI对SD大鼠进行脾内肝细胞移植示踪观察,加以EMA染色佐证,显示植入细胞迁移、生存形态;并用PAS、PCNA染色检测其功能、增殖.