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抑癌基因p27Kip1及其Ser10突变体对HepG2细胞周期和增生的影响
目的:p27kip1氨基端第10号位置的丝氨酸(Ser10)磷酸化位点是该蛋白分子中重要的磷酸化位点,探讨人工诱变该位点丝氨酸为丙氨酸(S10A)后对肝癌细胞株HepG2细胞周期以及细胞增生的影响.同时比较野生型p27kip1和Ser10突变型p27kip1基因转染对肝癌细胞株HepG2细胞周期和增生的影响.方法:应用脂质体转染法将含人野生型和突变型p27kip1质粒DNA瞬时转染HepG2细胞,免疫细胞化学检测p27kip1蛋白的表达和细胞内分布,流式细胞计数仪分析细胞周期变化.结果:野生型和突变p27kip1蛋白转基因后HepG2细胞均可以G0期阻滞,且突变型的阻滞作用强于野生型(P<0.05),细胞生长受到抑制.无血清培养96 h同步化于G0期,野生型和突变型p27kip1均分布于细胞核;而在20 mL/L血清继续培养8 h后野生型向细胞质转运而主要分布于细胞质,突变型仍然滞留于细胞核.结论:p27kip1的过度表达可明显抑制HepG2细胞的增生,p27kip1 Ser10酸化可能介导其细胞核外转运的重要分子机制.
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免疫学与儿科临床第四讲T细胞亚群的临床意义
经过胸腺上皮细胞及其分泌的胸腺素诱导成熟的T淋巴细胞,在其表面表达CD3分子.T淋巴细胞在外周血淋巴细胞中约占80%左右,因此CD+3细胞也相应为80%.由于技术原因,检测的T淋巴细胞常达不到外周血淋巴细胞的总数.采用单克隆抗体(moAb)玫瑰花结实验的阳性率低,为50%~60%;moAb荧光显微镜法可达到65%左右,流式细胞计数仪的敏感性高,可达到70%左右.T淋巴细胞因其CD3分子以外的其它表面标记物,以及生物学功能不同,而分为许多亚群,各具不同的临床意义.本文简述T淋巴细胞亚群及其在临床中的价值.
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利用酶联免疫吸附技术检测细胞表面标志的初步探讨
目的:建立酶联免疫吸附法检测细胞表面标志的方法.方法:取40份自愿献血者的抗凝静脉血同时用酶联免疫吸附法和流式细胞计数仪检测细胞表面标志CD3,CD4和CD8.结果:两种方法测定结果在统计学上没有相关性(CD3:r=0.098,P>0.05;CD4:r=0.085,P>0.05);CD8:r=0.251,P>0.05).结论:细胞酶联免疫吸附法测定细胞表面标志总量与流式细胞计数仪测定的表达某表面标志细胞百分率具有不同的意义.
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UF-50全自动尿沉渣分析仪及优利特-200尿液干化学分析仪测定尿液隐血的结果分析
当前,在尿液红细胞的检查中,通常采用显微镜计数与干化学法相结合检查.但在显微镜检查中,因受诸如涂片厚薄、离心情况、检验者主观判断等因素影响较多,难以得到规范统一的检查结果,UF-50尿液流式细胞计数仪的使用较好的解决了这一问题.而面对此两种方法检查结果出现差异时的临床意义的分析,一方面,须结合测定原理进行分析,针对各检查方法的影响因素采取校正措施,在排除影响因素后,检查结果的差异在疾病的定位中有参考意义;另外,在尿隐血的检查中,须结合显微镜观察.
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利用显微摄像系统进行网织红细胞计数
随着科学技术的进步,具有网织红细胞计数功能的流式细胞分析仪出现及应用,使临床网织红细胞计数的准确性提高,但由于此分析仪价格昂贵,在基层医院还没有普及.根据我国的国情,现多采用网织红细胞计数仍以手工操作为主.从2000年以来我科引进了骨髓细胞分析仪,在此基础上利用显微摄像系统进行网织红细胞计数,现介绍如下.