中国新药杂志
Chinese Journal of New Drugs 중국신약잡지
- 主管单位： 国家食品药品监督管理局
- 主办单位： 中国医药科技出版社 中国医药集团总公司 中国药学会
- 影响因子： 1.03
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1003-3734
- 国内刊号： 11-2850/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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SYBR-Green实时定量PCR用于Vero宿主细胞DNA残留量的检测
目的:建立基于SYBR-Green荧光染料实时定量PCR检测Vero宿主细胞DNA残留量的方法.方法:提取Vero细胞基因组DNA,设计细胞基因组高度重复顺序AGMr( HindⅢ)-1基因片段的特异性引物,通过PCR扩增AGMr( HindⅢ)-1序列中一段特异性cDNA片段,克隆至pGEM-T Vector,重组质粒经酶切及测序鉴定合格后命名为pGEM-T/AGMr( Hind Ⅲ)-1-S.结果:使用重组质粒和细胞基因组DNA分别作为检测标准品,均取得了良好的结果,其检测灵敏度分别达到了0.03 fg·μL-1和0.03 pg· μL-1.结论:SYBR-Green实时定量PCR可用于Vero宿主细胞DNA残留量的准确定量.
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荧光灶试验和TCID50-ELISA方法在Ⅲ价轮状病毒重配疫苗感染滴度测定中的对比研究
目的:对比荧光灶试验和TCID50-ELISA方法测定Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗感染滴度的精确性,重复性和可行性.方法:同时采用TCID50-ELISA方法和荧光灶试验方法测定Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的感染滴度,对测定结果进行比较分析.结果与结论:在Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗的感染滴度测定中,荧光灶试验方法和TCID50-ELISA方法各有其特点,荧光灶试验方法更加精确和快速,相对于TCID50-ELISA方法,具有更低的变异性,即其重复性较高；而TCID50-ELISA方法受主观因素的影响较低.
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1型肺炎球菌多糖竞争ELISA检测方法的建立
目的:建立竞争酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),测定1型肺炎球菌多糖浓度.方法:以1型肺炎球菌多糖为包被抗原,待测多糖为竞争抗原,与优化的抗1型肺炎球菌多糖抗体反应,建立标准曲线,并验证该方法的特异性、准确性和精密度.结果:优化后的1型肺炎球菌多糖包被浓度为1500 ng·mL-1,抗多糖血清稀释度为1:100K.检测线性范围23～1 500 ng· mL-1,低检测限为12 ng·mL-1,回归方程为B/B0=-0.31 lg[PS1] +1.30,线性相关系数为R2=0.99.批内和批间精密度分别为6.5％和8.8％,测定培养基中标准1型多糖的回收率为98.2％.结论:本研究建立的竞争ELISA方法,特异性、准确型和精密性均较好,可以特异性地检测1型肺炎球菌多糖浓度.
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水痘疫苗生产环境细菌分离鉴定及消毒剂消毒效果验证
目的:验证目前使用的消毒剂对环境分离细菌的消毒效果,保证生产顺利进行.方法:采用沉降菌及浮游菌检测获得生产环境细菌,通过细菌鉴定仪进行鉴定；对消毒剂消毒效果进行验证.结果:环境分离细菌均为人体携带菌及自然环境菌,对75％乙醇敏感性较差,而来苏儿、新洁尔灭消毒效果较理想.结论:75％乙醇消毒效果较差,应对其进行更换.
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影响轮状病毒半数细胞感染剂量法滴定的因素分析
目的:确定影响轮状病毒感染增殖过程的因素,以提高滴度检测结果的重复性和可靠性.方法:采用半数细胞感染剂量法( CCID50)结合ELISA( CCID50-ELISA)判断病毒在细胞上有无复制来检测病毒滴度.结果:不同细胞代次、接种浓度、培养时间、培养液种类和接种细胞孔数均会对病毒滴定结果造成显著影响.结论:轮状病毒滴度检测的线性和准确性与细胞状态与培养环境相关.CCID50-ELISA法检测轮状病毒滴度有良好的重复性和耐用性.
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23价肺炎球菌多糖疫苗的规模化生产及质量控制
目的:扩大肺炎球菌发酵的培养规模,增加肺炎球菌多糖的收量,降低成品疫苗内毒素的含量,以提高肺炎球菌多糖疫苗的产能和质量；制备和标定企业用肺炎多糖参考品,及定性定量检测23价肺炎球菌多糖疫苗用的血清.方法:调整肺炎球菌培养参数及培养过程中糖、碱的补料方式、补料时间,放大肺炎球菌的发酵培养规模；在分段乙醇沉淀过程中添加速度和温度控制、调整乙醇浓度,在酚提过程中调控各种技术参数等,提高精制多糖的收量；控制加入生产过程中主要原辅材料的内毒素含量,并规范操作人员的行为习惯,降低肺炎球菌多糖疫苗成品的内毒素含量.标定自制多糖参考品以及用多糖免疫兔、鼠制备血清参考品.结果:肺炎球菌的发酵体积从500 L提高到1000 L;精制多糖平均收量提高15％以上；内毒素平均含量控制在20 EU·mL-1以内；制备出23种型别的符合23价肺炎球菌多糖疫苗质量标准的多糖；获得3个型单抗和6个型的多抗.结论:23价肺炎球菌多糖疫苗的产量增加,疫苗质量得到了提升,自主化标准参考品研究进展迅速.
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23价肺炎球菌多糖疫苗定量检定质量趋势分析
目的:统计分析2006 -2011年生产的140批23价肺炎球菌多糖疫苗的5项定量检定指标,为疫苗的质量评价和质量监督提供依据.方法:对2006 - 2011年生产的140批23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖含量、苯酚含量、氯化钠含量、pH值、细菌内毒素检查等5项指标的检定结果进行统计分析；对各单型多糖的含量进行移动标准偏差分析；对苯酚含量、氯化钠含量、pH值测定、细菌内毒素检查指标进行移动平均值总体趋势分析.结果:6年来,23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖含量批间差异逐渐缩小；苯酚含量、氯化钠含量、细菌内毒素检查均值逐渐下降并趋于稳定；pH值一直较为稳定.结论:2006 -2011年生产的23价肺炎球菌多糖疫苗质量逐步提高并保持稳定.
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水痘减毒活疫苗的稳定性研究
目的:考察水痘减毒活疫苗的稳定性.方法:疫苗在2～8℃放置30 - 36个月,检测病毒滴度、水分、牛血清蛋白残留量、无菌、外观等主要技术指标,并进行25℃6个月加速试验和37℃4周热稳定性试验.结果:各项检测结果均符合《中华人民共和国药典》及《水痘减毒活疫苗注册标准》要求.结论:本品质量稳定,可将有效期延长至2-8℃贮存24个月.
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TaqMan(R)实时定量RT-PCR检测G3型轮状病毒VP7基因方法的建立
目的:建立一种检测G3型轮状病毒VP7基因的TaqMan(R)实时定量RT-PCR方法.方法:设计轮状病毒VP7基因型特异性引物和探针,采用体外转录RNA为标准品,建立TaqMan(R)实时定量RT-PCR方法.结果与结论:本检测方法快速、灵敏且重复性好,可以对107～101 copies·μL-1轮状病毒VP7基因进行有效检测,为G3型轮状病毒的检测和定量提供了有用的工具.
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水痘减毒活疫苗生产工艺研究
目的:比较细胞工厂和方瓶两种培养方式所生产水痘疫苗的产量及质量.方法:使用细胞工厂和方瓶培养2BS细胞,长成致密单层后接种水痘-带状疱疹病毒OKa株,待细胞病变达70％以上时,用EDTA消化、洗涤离心收集病变细胞,加入保护剂-65℃以下保存,检定合格后进行超声、澄清制备原液和半成品,转分装冻干制成.结果:使用细胞工厂和方瓶获得的水痘疫苗原液及成品的各项检定结果均符合本企业《水痘减毒活疫苗注册标准》的要求.结论:细胞工厂大大减少了厂房占用面积,提高了疫苗产量,保证了疫苗生产过程的质量可控性和稳定性,适用于水痘疫苗的规模化生产.
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14型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合物中游离多糖的测定方法
目的:建立一种简单有效的测定肺炎球菌英膜多糖-破伤风类毒素结合物中游离多糖的方法.方法:根据脱氧胆酸(DOC)在酸性条件下可快速将蛋白质沉淀的原理,采用不同pH值的1％ DOC溶液分别对14型肺炎球菌荚膜多糖(Ps14)、破伤风类毒素(TT)及Ps14-TT结合物进行处理,观察不同pH值1％DOC溶液对它们的影响,来确定佳反应pH值.随后采用精密度试验和准确度试验对该方法进行验证.结果:Ps14-TT结合物经1％ DOC处理后,在酸性条件下(1 mol·L-1 HC1),结合物及蛋白质被完全沉淀,而未结合的Ps14存在于上清液中,采用蒽酮法测定结合物当中的游离多糖含量.结论:该方法重复性,稳定性,精密度,准确度均达到检测要求,适用于检测Ps14-TT结合物中游离多糖的测定.
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19F型肺炎球菌荚膜多糖与载体蛋白P64K结合物的制备及免疫原性
目的:采用改良胺化还原法,重组B群脑膜炎球菌外膜蛋白(rP64K)作为载体蛋白,制备19F型肺炎球菌荚膜多糖(PN19F)结合物.方法:在胺化还原法的基础上,以1,6-己二酰肼(ADH)为分子臂,在碳二亚胺( EDAC)作用下衍化rP64K,蛋白衍化后再与多糖上的醛基反应,形成共轭结合.采用HPLC、电泳、免疫印迹等方法分析结合物,并将获得的结合物免疫NIH小鼠,用ELISA方法检测多糖IgG水平.结果:电泳和免疫印迹证明了结合物制备成功.动物免疫产生了高滴度的抗PN19F的抗体,并有免疫记忆发生.结论:新的结合方法和新的载体蛋白能有效提高结合效率,以本工艺制备PN19F蛋白结合疫苗是可行的.
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23价肺炎球菌多糖疫苗稳定性考察
目的:考察23价肺炎球菌多糖疫苗在2～8℃条件存放24,27个月的稳定性,以及在(37±2)℃和(25±2)℃条件下存放的加速稳定性.方法:选取2008年生产的3批23价肺炎球菌多糖疫苗在2～8℃存放24,27个月后进行外观检查、鉴别试验、多糖含量、pH值、苯酚含量、氯化钠含量、无菌检查、热原检查、异常毒性检查；选取2011年生产的3批23价肺炎球菌多糖疫苗在( 37±2)℃条件分别存放1,2,3,4周和在(25±2)℃条件分别存放1,2,3个月后进行鉴别试验和多糖含量测定、外观检查、pH值和苯酚含量测定.结果:疫苗2-8℃存放24,27个月,检定结果均符合质量标准的要求；疫苗(37±2)℃和(25±2)℃存放分别从第3周和第2个月开始,个别型别的多糖含量低于质量标准要求,其余各项检测指标均符合质量标准的要求.结论:23价肺炎球菌多糖疫苗在2-8℃条件存放至24个月的有效期质量是稳定的；在(37±2)℃和(25±2)℃条件存放的加速稳定性表明合格的疫苗分别多能存放2周和1个月.
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有限稀释法筛选轮状病毒LD9株纯化方法的建立及应用
目的:建立有限稀释法克隆纯化轮状病毒的试验方法,筛选出感染性强、遗传特性稳定的轮状病毒基因重配株LD9.方法:梯度稀释LD9毒种,用5个稀释度(10-4～10-8)的病毒感染铺满单层Vero细胞的96孔板细胞,培养6d,- 20℃冻融,培养物传代至24孔板继续培养6d,显微镜下观察细胞病变(CPE),- 20℃冻融后检测.以相同方法重复克隆纯化3次,筛选获得病毒滴度稳定、具有稳定遗传特性的纯化病毒,由T25、T75到2,4,10层细胞工厂逐级放大培养.结果:筛选出适用于疫苗生产用的遗传特性稳定、感染性强的LD9疫苗候选株.结论:建立了适用于轮状病毒克隆纯化的筛选方法.
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9V型精制多糖在肺炎球菌多糖含量检测中的应用
目的:挑选特定的9V型肺炎球菌精制多糖应用于9V型肺炎球菌多糖含量检测,探讨其作为标准多糖使用的可行性.方法:对选定批次的9V型肺炎球菌精制多糖进行单型多糖质量指标成分测定,并以其作为标准多糖进行准确度、精密度和线性研究.结果:批号为STD1213的9V型肺炎球菌精制多糖在半年内物理性状无变化,各质量指标均合格、良好、稳定.使用该多糖进行定量检测是准确的、精密的,线性良好.结论:此批精制多糖质量和稳定性均良好,具有作为9V型标准多糖使用的可能性.应用9V型标准多糖进行定量检测为进一步完善肺炎球菌多糖含量检测体系奠定了基础.
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口服轮状病毒活疫苗罗特威研究进展
轮状病毒是引起婴幼儿重症腹泻的主要病原体,是全球范围内导致婴幼儿发病和死亡的主要病因之一.我国5岁以下婴幼儿轮状病毒腹泻发病人数每年超过1 000万,每年导致大约3～4万名婴幼儿死亡.接种安全有效的疫苗是预防轮状病毒腹泻的主要手段.口服轮状病毒活疫苗罗特威于2001年获准上市,累计接种已超过3 000万剂,安全有效,可有效降低轮状病毒腹泻的发病率.
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人A组轮状病毒疫苗研究进展
A组轮状病毒是导致全球婴幼儿重症腹泻的主要病因,其疾病负担巨大.已有研究证实,卫生状况的改善对轮状病毒腹泻的控制效果甚微,疫苗则是控制轮状病毒腹泻有效的公共卫生干预措施.目前3种轮状病毒疫苗已在全球100多个国家及地区投入使用,并纳入部分国家的儿童计划免疫程序.本文简要综述人A组轮状病毒疫苗的研究进展,以期对我国轮状病毒疫苗的使用和推广提供借鉴.
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带状疱疹疫苗的研究现状及发展趋势
水痘-带状疱疹病毒原发感染为水痘,再度被激活则引起带状疱疹(HZ).近年来,随着国内人口结构的老龄化趋势日益加重,HZ的发病率有明显上升的趋势,且引起的后遗神经痛使用抗病毒药物治疗无明显疗效.HZ的防治现已成为重要的公共卫生问题.采用疫苗预防HZ已经越来越被社会所接受.本文就该病原体及其疫苗方面的研究现状及进展作一综述.
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23价肺炎球菌多糖疫苗研究进展
肺炎球菌是导致成人和儿童罹患肺炎疾病住院甚至死亡的重要原因.肺炎球菌的91个血清型中有20种血清型与各年龄组超过85％的侵袭性肺炎球菌感染有关.根据23种引起85％ - 90％的引起肺炎球菌感染疾病的血清型研制而成的23价肺炎球菌多糖疫苗,具有很好的安全性,成人和＞2岁儿童接种后会产生可靠的免疫力,在人群中保护率达50％～80％,具有较好的成本效益比,是儿童和成人预防肺炎球菌感染的有效措施,推荐用于60岁以上老年人和2岁以上体弱儿童和慢性疾病患者.本文主要对23价肺炎球菌多糖疫苗的安全性、免疫反应、保护率及成本效益、对特殊健康状况人群的保护效果和免疫策略作一综述.
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冻干水痘减毒活疫苗发展现状及趋势
水痘是儿童期常见的一种传染病,该病由水痘-带状疱疹病毒引起,初次感染表现为水痘,并继续潜伏于脊髓神经节中,当机体处于某种病理状态或免疫机能下降,则产生带状疱疹.冻干水痘减毒活疫苗是由水痘-带状疱疹病毒传代毒株制备而成,是预防水痘感染的惟一手段.本文对冻干水痘减毒活疫苗国内外发展现状及未来发展趋势进行了综述.
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腺病毒载体HIV疫苗在C57BL/6小鼠体内的生物分布评价
目的:建立腺病毒载体HIV疫苗检测的实时荧光定量PCR方法,并评价疫苗在C57 BL/6小鼠体内的生物分布.方法:以gag基因片段为检测对象,建立绝对定量PCR方法.C57BL/6小鼠单次肌内注射5×109 vp HIV疫苗,给药后d3,15,30,60,85收集组织脏器,用建立的荧光定量PCR方法定量检测HIV疫苗.结果:检测方法线性范围为1×102～1×107 copies·μL-1,特异性强,重复性较好.HIV疫苗主要分布在注射位点,淋巴结、脾脏和肝脏也有少量分布；疫苗的量随时间延长逐渐减少.结论:肌内注射HIV疫苗后导致广泛的分布,分布的量呈时间依赖性减少,没有生殖细胞转移的危险,HIV疫苗在小鼠体内是安全的.
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肺炎球菌无动物源性成分培养工艺及纯化新工艺探索
目的:比较无动物源性成分培养基和动物源性培养基培养肺炎球菌的差异；摸索不使用有机溶剂的肺炎球菌多糖纯化新工艺.方法:用无动物源性的原料替代肺炎发酵培养基中动物源性的成分,考察菌体密度和多糖收量的变化；采用柱层析纯化工艺收获肺炎球菌多糖,测定各阶段核酸、蛋白、多糖含量.结果:与疫苗生产所采用动物源性发酵培养基相比,无动物源性发酵培养基收获的1,7F,19A型菌体密度分别提高了1倍左右；发酵液中多糖含量分别提高了48％,50％和200％；多糖收量提高了30％～90％.纯化新工艺收获的17F,18C,19F精糖,核酸和蛋白的含量均远远低于企业的注册标准,HPLC检测多糖纯度分别为99.24％,98.92％和99.02％.结论:无动物源性成分发酵培养基适合于肺炎球菌生长,不仅增加了多糖产量,也提高疫苗的安全性；纯化新工艺能够收获合格的肺炎精制多糖.
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4价流感活疫苗FluMist(R)Quadrivalent
鼻用型4价流感活疫苗FluMist(R) Quadrivalent是在3价流感活疫苗FluMist基础上加入另一种乙型流感病毒株组合而成.2012年2月29日,美国FDA批准其用于预防2～49岁人群的季节性流行性感冒.文中对其非临床毒理学研究、药效学、临床研究、药物相互作用以及禁忌症等作一综述.
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刍议我国药品技术审评原则和程序的新变化
2011年初国家药品监督管理局审评中心进行了内部机构的重组,随后颁布了《药品技术审评原则和程序》及相关文件来指导药品审评中心的工作.本文通过初步分析机构改革和《药品技术审评原则和程序》及相关文件的新特点,研究其影响及意义,优点与不足.为CDE提出尚需完善的建议,希望对其发展有所帮助.
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国产23价肺炎球菌多糖疫苗上市后不良反应浅析
目的:评价国产23价肺炎球菌多糖疫苗上市后的安全性.方法:从日常收集、市场调查、文献资料3个方面收集23价肺炎球菌多糖疫苗上市后的不良反应,对其进行类型分析及不良反应发生率分析.结果:上市6年共销售1 074万人份国产23价肺炎球菌多糖疫苗,收集不良反应2 519例；不良反应以一般反应为主,局部反应和发热较多,严重不良反应数量极少.结论:国产23价肺炎球菌多糖疫苗上市后广泛使用是安全的.
