黄芩苷脂质体、β-环糊精包合物及磷脂复合物鼻黏膜渗透性及毒性研究

为提高鼻腔给药后脑内药物浓度,本文探讨了以脂质体、β-环糊精包合物和磷脂复合物为黄芩苷载药体系的体外离体动物鼻黏膜渗透性及鼻腔毒性.采用猪、羊、兔鼻黏膜,以体外扩散池装置进行鼻黏膜渗透实验,HPLC法测定接受池中药物累积渗透量,以表观渗透系数为评价标准,考察脂质体、β-环糊精包合物及磷脂复合物载药系统对黄芩苷在离体动物鼻黏膜的透过性,从而筛选出黄芩苷经鼻给药佳载药形式:采用在体法考察黄芩苷及其磷脂复合物对蟾蜍上颚黏膜纤毛运动的影响和大鼠鼻黏膜长期毒性.3种黄芩苷载药体系的表观渗透系数均明显高于黄芩苷(P＜0.05),滞后时间也比黄芩苷短,提示3种载药载体均可提高黄芩苷的鼻黏膜渗透性,同时磷脂复合物的表观渗透系数明显高于脂质体和环糊精包合物,表明黄芩营磷脂复合物鼻黏膜渗透性明显优于另外两种载药体系(P＜0.05).黄芩苷磷脂复合物对纤毛运动无影响,对大鼠鼻黏膜也无明显刺激性.结果表明,磷脂复合物为黄芩苷经鼻给药佳载药形式,能明显提高其鼻黏膜渗透性,对鼻黏膜无毒性,可用于鼻腔给药.

7β-[2-(2-取代氨基噻唑-4-基)-(Z)-2-甲氧亚氨乙酰氨基]-3-季铵基甲基头孢菌素的合成及抗菌活性

为了寻找抗菌谱更广,抗菌活性更强的新型头孢菌素类化合物,本研究以2-(2-氨基噻唑-4-基)-(Z)-2-甲氧亚氨基乙酸乙酯(1)为原料,经酰化、取代、水解、活泼酯化、缩合、成盐得到目标化合物(N1-N9).所合成的9个新型第四代头孢菌素的结构经红外、核磁共振氢谱、质谱和元素分析确证.体外抗菌实验结果表明,所合成的化合物具有不同程度的抗菌活性,它们对革兰氏阳性菌的活性总体上相当于或优于硫酸头孢匹罗,特别是对金葡菌、表皮葡球菌表现出比硫酸头孢匹罗更好的活性.

川芎油自微乳化软胶囊大鼠在体肠吸收研究

为了考察川芎油剂型选择的合理性,进行了原料、包合物和自微乳化软胶囊的比较吸收实验;并进一步明确自乳化软胶囊的小肠吸收特点,进行了不同浓度、不同肠段、有无胆汁分泌的在体肠吸收实验.通过药液在肠腔内循环,以藁本内酯为川芎油的指标性成分测定不同时间回流液中蒿本内酯浓度变化,得到药物的吸收情况.结果表明,自微乳化软胶囊显著提高藁本内酯的吸收(P＜0.001),效果好.400 μg·mL-1藁本内酯的吸收显著高于200和100 μg·mL-1(P＜0.001),而后两个浓度的吸收无差异.胆管结扎与否不影响药物吸收.自乳化软胶囊可被大鼠全肠段吸收,其中十二指肠吸收好,各肠段Ka、Papp 是十二指肠＞空肠＞回肠=结肠.

压缩方程评价不同孔体积微丸的压缩特性

采用Kawakita压缩方程评价不同孔体积微丸的压缩特性,为微丸压片工艺的研究提供科学依据.采用不同体积比例的乙醇/水混合液作黏合剂,以微晶纤维素(MCC)、磷酸二氢钙(DCP)/MCC(4:1,w/w)、乳糖(Lac)/MCC(4:1)为填充剂,挤出.滚圆工艺分别制备不同孔体积微丸.以Kawakita压缩方程评价前述微丸的压缩特性,结果表明高孔体积MCC微丸可压性好,而3种孔体积的DCP/MCC(4:1)微丸和Lac/MCC(4:1)微丸没有显著差别,这与微丸压缩过程中发生的压缩机制有关,MCC微丸丰要发生了塑性变形,另外两类辅料制成的微丸则主要发生破碎,扫描电镜图直观说明了这一现象.研究结果提示微丸压片工艺发生的机制复杂,选用不同辅料制备微丸的压缩特性各异,而高孔体积MCC微丸和不同孔体积的DCP/MCC微丸和Lac/MCC微丸可作为微丸压片过程中的缓冲颗粒,以保护含药微丸使之在压片过程中保持原有的形态和释放行为.

系统指纹定量法评价牛黄解毒片质量

建立牛黄解毒片(Niuhuangjiedu tablets,NHJDT)HPLC指纹图谱,以系统指纹定量法评价其质量.采用RP-HPLC法,以黄芩苷为参照物峰,确定53个共有指纹峰,建立了NHJDT-HPLC指纹图谱.以宏定性相似度Sm和宏定量相似度Pm为参量对15批NHJDT进行聚类分析,确定用其中10批生成对照指纹图谱(RFP),以此RFP为标准用系统指纹定量法鉴别评价15批NHJDT质量.鉴别出9批质量合格,1批均化系数相对偏差明显偏高,5批含量明显偏低.系统指纹定量法是对系统化学指纹的整体定性分析和整体定量分析的密切整合,是评价中药质量的便捷有效方法.

非核苷类逆转录酶抑制剂耐药型HIV-1药理评价体系的建立

建立9种临床常见的对非核苷类逆转录酶抑制剂(non-nucleoside reverse-transcriptase inhibitors,NNRTIs)耐药型HIV-1重组病毒药理评价模型.应用重叠PCR定点突变技术将耐药突变位点引入HIV-1核心基因(pNL4-3.Luc.R-E-),以水泡性口膜炎病毒的外壳糖蛋白(vesicular stomatitis virus glycoprotein,VSV-G)包装含耐药突变位点的HIV-1核心,形成耐药型HIV-1重组假病毒颗粒,简称VSVG/HIV-mut(包括VSVG/HIV-wt、VSVG/HIV-K103N、VSVG/HIV-Y181C、VSVG/HIV-L100I,K103N、VSVG/HIV.Y188L、VSVG/HIV-K103N,181C、VSVG/HIV-K103N,P225H、VSVG/HIV-K103N,Y188L、VSVG/HIV-K103N,G109A和VSVG/HIV-K103N,V1081).经验证9种NNRTIs耐药型HIV-1重组病毒颗粒均具有高感染能力,对核苷类阳性药物不耐药,而对非核苷类阳性药物呈现不同程度的耐药性(17～10 000倍),且耐药倍数与报道的数据基本一致.所建立的耐药型模型是针对NNRTIs耐药的HIV-1复制环节的细胞水平药效学评价体系,野生型和9种耐药型HIV-1模型的联合应用,可为新型非核苷类逆转录酶抑制剂的研发提供更全面药效学评价的安全平台.

卡维地洛人体药动学与药效学结合模型研究

采用间接药效学模型和效应室模型两种药效学模型分别进行卡维地洛药动学与药效学关系研究.比较两种药效学模型的拟合程度.高效液相色谱法(荧光)测定20名健康志愿者单次口服20 mg卡维地洛片后卡维地洛经时血药浓度,以DAS 2.0实用药动学计算程序计算卡维地洛药动学参数.同时测定给药前后动脉收缩压和舒张压,计算降压效果.卡维地洛片丰要药动学参数t1/2为(4.56±2.56)h,Cmax 为(46.29±21.07)ng·mL-1,AUC0-∞为(173.76±87.36)ng·mL-1.h.间接药效模型主要参数Kin为(0.41±0.31)%h-1,Kout 为(0.40±0.26)h-1,IC50为(24.40±21.10)ng·mL-1,AUE为(3.82±1.46)%h.效应室模型主要参数KeO 为(0.35±0.27)h-1,EC50为(24.30±24.30)ng·mL-1,AUE为(5.65±2.54)%h.该方法可用于卡维地洛片人体药动学研究.由AIC值可知,效应室模型可更好的应用于卡维地洛药动学-药效学结合研究.

巴曲酶对实验性脑出血大鼠的神经保护作用

本文旨在观察巴曲酶对大鼠脑出血后神经损伤是否具有保护作用及其可能作用机制.将大鼠分为假手术组、模型组、巴曲酶(4、8及16 BU·kg-1)组及尼莫地平阳性对照组,在脑立体定向仪上,根据大鼠脑立体定位图谱定位脑部尾状核后,用微量注射器向尾状核注射Ⅶ型胶原酶,建立大鼠脑出血模型.术后进行大鼠神经行为学评分及电镜下观察脑组织病理形态学改变;干湿重法测定脑含水量;试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;荧光分光光度计法测定神经细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i).结果表明,巴曲酶可改善脑出血大鼠的神经行为学评分,减轻其脑组织细胞水肿和出血程度;使脑含水量、MDA含量及[Ca2+]i下降,SOD活力升高,提示巴曲酶对脑出血后神经损伤可能存在保护作用,其作用机制可能与减轻脑水肿、提高SOD活力和降低MDA含量及抑制钙超载有关.

藁本内酯在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学

研究体外大鼠肝微粒体藁本内酯代谢的酶动力学及选择性CYP450酶抑制剂对其代谢的影响.建立测定肝微粒体孵育液中藁本内酯含量的LC-MS法,以尼群地平为内标,二者的定量离子m/z分别选择173和315.考察确定佳温孵条件,进行藁本内酯代谢的酶促反应动力学研究,通过特异性抑制试验,探讨参与藁本内酯代谢的丰要同工酶.结果显示,酮康唑、甲氧苄啶、α-萘黄酮显著抑制藁本内酯的体外代谢,而奥美拉唑、4-甲基吡唑、奎尼丁对其体外代谢影响不大.可见CYP3A4、CYP2C9和CYP1A2是参与藁本内酯代谢的主要代谢酶,CYP2C19、CYP2E1和CYP2D6没有明显参与催化其代谢.

芒柄花素磺化物的合成、溶解性能及降脂保肝活性

以芒柄花素为先导化合物,利用磺化反应合成了具有降脂保肝活性的水溶性新化合物芒柄花素-3'-磺酸钠,通过IR、NMR、元素分析对其结构进行了表征.采用紫外分光光度法测定了芒柄花素-3'-磺酸钠的溶解度和正辛醇/水分配系数;采用高脂饮食诱导大鼠高脂模型,进行了降脂保肝的药理活性试验.实验结果表明芒柄花素-3'-磺酸钠不仅具有良好的水溶性,而且具有好的降脂保肝活性.

天山雪莲悬浮细胞培养物中紫丁香苷的分离及含量测定

紫丁香苷为天山雪莲的主要活性成分之一,本研究运用溶剂提取方法,结合各种色谱手段对天山雪莲组织细胞培养物中的紫丁香苷进行分离纯化,并根据现代谱学方法对其结构进行鉴定.同时采用高效液相色谱法建立了天山雪莲组织细胞培养物中紫丁香苷的含量测定方法,该方法简便,精密度、重现性良好,结果准确可靠.这些研究为通过天山雪莲细胞悬浮培养大规模生产活性成分紫丁香苷奠定了基础.

凝胶电泳法及荧光光度法测定siRNA阳离子脂质体的含量和包封率

建立siRNA含量测定方法,用于阳离子脂质体中siRNA的含量和包封率测定.利用荧光染料SYBRGold和Ribogreen与siRNA结合后能发出强烈荧光的原理,分别采用电泳法和荧光分光光度法测定脂质体中的siRNA含量,计算阳离子脂质体的包封率.SYBR Gold电泳法的检测线性范围为0.2～2.0μmol·L-1(R=0.9930),高、中、低3个浓度的回收率分别为96.35%、96.92%和100.74%(n=3);日内日间精密度的RSD均小于5%(n=5).Ribogreen荧光分光光度法的检测线性范围为10～50 nmol·L-1(R=0.9971),高、中、低3个浓度的回收率分别为98.22%、99.88%和99.64%(n=3);日内日间精密度的RSD均小于5%(n=5).利用这两种方法所测得3批阳离子脂质体中siRNA平均含量分别为98.52%和97.85%,平均包封率分别为99.20%和96.45%,经方差分析,两种方法无显著性差异.两种方法准确可靠、稳定性高和方便实用,均可用于阳离子脂质体中siRNA的含量和包封率测定.

整合素αvβ3受体拮抗剂药效团模型的研究

为构建可靠的整合素αvβ3受体选择性拮抗剂的药效团模型并根据模型设计小分子活性化合物,选择对αvβ3受体具有较高抑制活性(IC50＜110 nmol·L-1)的4个类型(分别以酰胺、哌嗪、哌啶、γ-戊内酰胺为中间连接基)的30个化合物为训练集,利用Catalyst软件构建整合素αvβ3受体选择性拮抗剂药效团模型,并在数据库中寻找具有活性的母体结构,对母体结构进行修饰和改造及类药性分析得到先导化合物.得到的药效团模型相关系数好、预测能力高,可较准确的预测相关化合物的活性.优化模型含1个芳环中心(RA)、1个可阴离子化部位(NI)和2个疏水作用基(HP),其相关系数与权重值分别为:RMS=0.73,Correl=0.90,Weight=1.17,Config=14.00,所设计的目标化合物预测活性强且结构简单,易于合成,噻唑类为未见报道的一类母体结构化合物.

Six compounds have been isolated from the leaves of Pyrenacantha staudtii,two of which are new compounds.The new compounds have been characterized as kaempherol 3-O-β-rhamnopyranosyl (1→6)β-D-glucopyranoside (1) and 4-β-glucopyranosyl-(2-furyl)-5-methy-1,2-glucopyranoside phenylmethanone (2).The known compounds are 3-pyridinecarboxylic acid (3),β-sitosterol (4),sitosterol 3-O-β-glucopyranoside (5) and taraxerol (6).Their structures were determined by spectroscopic and chemical evidences.The two new compounds together with 3-pyridinecarboxylic acid showed significant in vitro xanthine oxidase inhibitory activity.To the best of our knowledge,this is the first report of these compounds from this plant.

异硫氰酸苯己酯诱导Molt-4细胞p15基因去甲基化及机制研究

研究新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂异硫氰酸苯己酯(PHI)对急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞p15基因的去甲基化作用及诱导沉默基冈重新表达作用,并进一步探讨其作用机制.应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测PHI作用前后Molt-4细胞株p15基因甲基化状态的变化;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Molt-4细胞经过PHI处理后DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、p15基因的mRNA的表达变化;用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测Molt-4细胞经过PHI处理后的P15蛋白的表达.结果显示,PHI作用于Molt-4细胞5 d后,p15基因的甲基化程度减弱,p15基因的异常高甲基化现象被逆转,沉默的p15基因重新表达,p15 mRNA、P15蛋白表达增加,并呈浓度依赖性;PHI可下调DNMT1和DNMT3B的mRNA表达(P＜0.05),而对DNMT3A的mRNA表达作用不明显(P＞0.05).PHI可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT1和DNMT3B的活性,诱导p15基因产生去甲基化,或者(和)是通过改变p15基因附近组夤白的乙酰化水平,导致染色体空间结构发生变化,增加转录因子的进入,从而诱导p15基因重新表达.

丙泊酚对实验性脑出血大鼠的脑保护作用

为研究丙泊酚对实验性脑出血大鼠的脑保护作用,本研究采用左侧尾状核注射胶原酶0.5 U(1U·μL-1)诱导大鼠脑出血模型,并在胶原酶注射前10 min腹腔注射给予丙泊酚.观察丙泊酚对大鼠脑出血后神经行为学评分,脑含水量,脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及caspase-3表达的影响.结果显示,与脑出血组大鼠相比,丙泊酚(30和100 mg·kg-1)可不同程度地减小脑出血大鼠神经行为学评分(P＜0.05,P＜0.01),降低脑组织含水量(P＜0.05),提高腩组织SOD活性(P＜0.05),降低脑组织MDA含量(P＜0.01).丙泊酚(15,30及100 mg·kg-1)可呈剂量依赖性地抑制caspase-3的表达(r=0.877).提示丙泊酚对大鼠脑出血损伤具有一定的保护作用,其机制可能与丙泊酚的抗氧化特性有关.

MPP+抑制PC12细胞BDNF表达

研究Mpp+( 1-methyl-4-phenylpyridinium)对PC12细胞的毒性作用及机制,采用MTT法检测细胞存活率,Western blotting检测蛋白变化及双荧光素酶报告基因系统检测转录因子活性.结果表明,MPP+能够显著抑制细胞存活率,且呈剂量依赖性;而且MPP+能够降低PC12细胞神经营养因子BDNF(brain-derived neurotrophic factor)的蛋白水平,并能够抑制ERK(extracellular signal-regulatedproteininase)的磷酸化,而对CaMKⅡ活性无影响,同时能够显著抑制BDNF的转录因子CREB(cAMP response element binding protein)的磷酸化,并抑制其转录活性.因此Mpp+可能通过抑制ERK活性而抑制其下游转录因子CREB的活性,终导致BDNF的表达减弱.

芳烷基-4-哌啶醇衍生物的合成及非阿片类镇痛活性研究

以中枢兴奋性氨基酸NMDA受体多胺调节位点为靶点,设计合成芳烷基-4-哌啶醇类全新化合物并研究它们的镇痛活性.以Boc保护的4-哌啶酮或相应取代的4-哌啶酮为原料,在CeCl3/NaI体系的催化下,与相应的α-卤代芳酮进行亲核加成反应等步骤共制备30个未见文献报道的新化合物,经高分辨质谱及核磁共振氢谱确证结构.小鼠扭体法和热板法镇痛试验及阿片受体结合试验结果表明:该类化合物具有较好的镇痛作用,其中化合物8、13、22在两种镇痛模型上均显示很强的镇痛活性,与阿片μ、δ、κ受体无明显亲和力,具有作为非阿片类镇痛新药开发的潜在价值.

谷胱甘肽的肝脏转运及其在胆汁淤积中的作用

谷胱甘肽是一个由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成的三肽,具有抗氧化和解毒等功能,近年来研究发现谷胱甘肽的胆汁外排是生成非胆汁酸依赖型胆汁流的重要驱动力,谷胱甘肽的胆汁外排受阻可引起胆汁淤积.本文对谷胱甘肽的肝脏转运通路及其在胆汁淤积中的作用的研究进展进行综述.基于谷胱甘肽对胆汁流的驱动作用,增强谷胱甘肽的胆汁外排转运可望成为胆汁淤积防治的新靶点.

纳米粒给药系统逆转肿瘤多药耐药性的研究进展

多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因.对于大多数抗肿瘤药物,肿瘤细胞均会产生多药耐药现象,但其耐药机制,目前没有统一的看法.本文对纳米粒给药系统逆转肿瘤多药耐药性进行了综述,包括3种载药系统:非修饰的、配体修饰的和多功能纳米粒给药系统,并对纳米粒给药系统逆转肿瘤多药耐药性的机制进行探讨.纳米粒通过拮抗和抵消肿瘤细胞主动外排药物的作用,提高肿瘤细胞内的药物浓度,同时减小对正常细胞的毒副作用,逆转肿瘤的多药耐药性.这种新型的给药系统,结合了纳米技术及主动和被动靶向给药策略,在癌症治疗方面已显示出巨大的应用前景.

鼠尾草属药用植物抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B活性初探

蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)是一个重要的胞内调节蛋白,通过催化胰岛素受体及胰岛素受体底物酪氨酸残基的去磷酸化对胰岛素信号转导起重要的负调控作用,近年的研究提示了PTP1B可能成为抗2型糖尿病药物研究的一个新靶点[1].基因敲除研究表明,PTP1B缺失小鼠具有正常表型且表现出显著增强的胰岛素敏感性,此外,PTP1B缺失小鼠对高脂饮食诱导的肥胖和甘油三酯水平升高具有明显的抗性[2].