类天然藤黄属桥环呫吨酮的结构优化研究进展

以生物活性天然产物为模板进行类天然产物的设计是新药发现的重要途径之一.藤黄酸是一种具有独特桥环呫吨酮骨架的藤黄属天然产物,其具有良好的体内外抗肿瘤活性.本文主要是对藤黄酸抗肿瘤药效骨架的确证以及在此基础上进行类天然桥环呫吨酮化合物的设计、结构优化及构效关系研究等方面进行综述和展望.

次黄嘌呤脱氢酶的基本功能及作为药物靶点的应用

次黄嘌呤脱氢酶(inosine 5’-monophosphate dehydrogenase,IMPDH)是GMP从头合成途径的限速酶,多种疾病会影响其活性与表达.以它为靶点的药物已广泛应用到抗病毒、免疫抑制、抗肿瘤等领域.IMPDH不仅充当核苷酸代谢酶的角色,它还具有多种其他生物学功能,在疾病及生理过程中发挥着重要作用.本文就IMPDH的基本功能、催化机制、生物学功能、抑制剂分类及其作为药物靶点的意义和研究进展作一综述,希望为进一步发现IMPDH的生物学功能与新型抑制剂提供参考.

微波辐射技术在药物制剂领域的应用

微波是一种可以穿透物质并在物质内部直接转化为热能的能源.微波对物质加热的程度依赖物质的介电性质,高介电损耗的物质更容易与微波电磁场达到共振,从而更高效地吸收微波.由于独特的加热机制,微波辐射技术可以诱导药物与聚合物的相互作用、改变药物的溶出特征,并且微波辐射技术具有提高产品质量、节能和节省时间等优势.本文总结了微波辐射技术的特点及微波辐射技术在制剂新技术、制剂过程中应用的研究进展,旨在为药物制剂领域加热干燥提供新思路.

大麻素受体2在油酰乙醇胺抗动脉粥样硬化中的作用

观察PPAR-α激动剂油酰乙醇胺(N-oleoylethanolamine,OEA)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)抗炎相关受体大麻素受体2(cannabinoid receptor 2,CB2)的作用.从新生儿脐带中提取HUVECs,给予不同剂量OEA,RT-PCR及Western blotting检测CB2基因和蛋白表达.采用PPAR-α阻断剂MK886或CB2阻断剂AM630分别阻断PPAR-α或CB2信号通路,给药组和阻断剂组给予OEA,用TNF-α诱导模型组、给药组和阻断剂组炎症产生,Western blotting法测定各组VCAM-1蛋白表达或进行THP-1黏附实验.结果表明,OEA(10和50 μmol·L-1)组的CB2表达上升,100 μmol·L-1 OEA组较空白组无明显变化；OEA抑制VCAM-1蛋白表达及THP-1细胞黏附；分别给予PPAR-α、CB2阻断剂MK886/AM630后,OEA对VCAM-1及单核细胞黏附的抑制作用明显降低.结果提示,OEA可能通过激活CB2通路起到抗动脉硬化的作用.

三种双特异性抗体对小鼠类风湿关节炎模型的治疗效果

为获得治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的先导药物,本研究比较了3种双特异性抗体(BsAB-1、BsAB-2和BsAB-3)对Ⅱ型胶原(CII)诱导的RA(CIA)模型小鼠的治疗效果.首先用ELISA法比较了3种二价抗体同时与两种抗原的结合能力,结果显示,3种抗体均能同时结合两种抗原,BsAB-1结合抗原的能力优于其他两种抗体(P＜0.01).用鸡CII建立CIA模型,用纯化的抗体对CIA模型小鼠进行治疗,每2天给药1次,治疗29天.治疗结束后与CIA模型对照组相比,各治疗组小鼠踝关节肿胀、皮肤紧绷、后足皮肤表面充血等临床症状明显减轻,其中BsAB-1治疗后足趾肿胀不明显,基本恢复正常.采用ELISA法检测了各组小鼠血清中CII抗体,real-time PCR法检测了脾脏中细胞因子IL-2、IL-1β、IL-17A和TNF-α的表达水平.与CIA模型对照组相比,所有抗体治疗组都能明显降低血清中CII抗体水平、脾脏中IL-2、IL-1β、IL-17A和TNF-α的表达量,且BsAB-1治疗效果佳,与另外两种抗体比较有显著差异(P＜0.01).因此,3种二价抗体对CIA模型小鼠都有治疗效果,BsAB-1的治疗效果要优于另外两种抗体,是优选的先导药物.

红杉醇对2型糖尿病大鼠主动脉NOX4及eNOS表达的影响

观察红杉醇(sequoyitol,Seq)对2型糖尿病大鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及NADPH氧化酶4 (NOX4)表达的影响.采用小剂量链脲佐菌素(STZ,35 mg·kg-1)加高脂高糖饮食诱导2型糖尿病动物模型,灌服Seq(12.5、25及50 mg·kg-1 ·d-1)治疗6周后,于末次给药后测定空腹血糖.使用离体主动脉环灌流法,观察主动脉环对乙酰胆碱和硝普钠的舒张反应,HE染色观察主动脉病理学变化,放射免疫法检测血清胰岛素水平；比色法测定主动脉总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量；real-time PCR、Westernblotting及免疫组化检测主动脉eNOS及NOX4 mRNA和蛋白表达.结果显示,红杉醇给药6周后能明显降低糖尿病大鼠空腹血糖,减轻胰岛素抵抗,改善主动脉内皮依赖性舒张功能,上调主动脉eNOS的表达,提高T-AOC及NO水平,降低NOX4的表达及MDA含量.上述结果表明,Seq可能通过下调NOX4表达、上调eNOS表达进而对糖尿病大鼠主动脉内皮功能损伤产生保护作用.

重组新城疫病毒rNDV-IL15在黑色素瘤治疗中的效果

为了提高重组新城疫病毒抑制肿瘤的效果,本实验拯救获得了重组新城疫病毒rNDV-IL 15.构建prNDV-IL15重组质粒,转染BHK21细胞后,拯救重组病毒rNDV-IL15,并测定病毒生长曲线；rNDV-IL15以0.1 MOI感染B16F10细胞,ELISA法检测细胞上清液中IL15的表达量；MTT法比较rNDV-IL 15和rNDV在体外抑制B16F10细胞的效果,并比较了两者在黑色素瘤肿瘤模型中对荷瘤小鼠的治疗效果.结果表明,rNDV-IL 15构建并成功拯救；病毒生长曲线表明,插入IL15后对病毒的生长无影响；IL15在细胞上清液中有较高的表达,达到(1044.3±27.7) ng·mE-1；rNDV-IL15和rNDV对B16F10细胞的抑制率呈时间依赖性,但两者的抑制率无显著差异；与rNDV相比,rNDV-IL15在体内能较明显地抑制肿瘤生长.结果提示,rNDV-IL15是一种更有效的抗肿瘤制剂.

黄芩苷-金属配合物的合成及其抗肿瘤活性研究

利用络合配位法合成黄芩苷-金属(Ni2+、Co2+、Cu2+)配合物(baicalin metal complexes,BMC),紫外光谱、红外光谱、质谱、热重分析、元素分析全表征BMC的组成和结构；MTT法检测BMC对SMMC-7721细胞增殖的影响,PI单染法和Annexin-V/FITC双染法检测BMC对SMMC-7721细胞周期和凋亡的影响,荧光定量RT-PCR法检测BMC对SMMC-7721细胞凋亡基因Bcl-2、Bax mRNA的表达,流式细胞仪分析BMC对SMMC-7721细胞凋亡Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表达,分析BMC的抗肿瘤活性及其作用机制.结果表明,成功制备了3种新型BMC(摩尔比2∶1),解析获得配合物的分子式为Na2Ni(C21H16O11)2·10H2O、Na2Co(C21H16O11)2·8H2O、Na2Cu(C21H16O11)2·8H2O;细胞周期和凋亡检测结果显示,BMC使细胞阻滞于G0/G1期,阻止进入S期和G2/M期；基因及蛋白检测结果显示,在设定浓度及时间条件下,BMC可使SMMC-7721细胞中Bcl-2基因表达下调,Bcl-2表达蛋白明显降低,同时Bax基因表达上调,Bax表达蛋白明显升高；说明BMC通过阻滞细胞周期、下调Bcl-2和上调Bax的表达来抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,3种配合物抗肿瘤活性:黄芩苷-铜(baicalin-copper,BC-Cu)＞黄芩苷-钴(baicalin-cobalt,BC-Co)＞黄芩苷-镍(baicalin-nickel,BC-Ni)＞黄芩苷(baicalin,BC),并呈现量-效关系.

取代乙酸己(庚)硫酯类化合物的合成与体外抗肿瘤活性

将天然产物apicidin分子中大环结构简化,并对锌离子结合区结构修饰,设计了两类取代乙酸己(庚)硫酯类化合物.所合成的26个化合物结构经1H NMR、IR、MS与HR-MS确证.采用MTT法与台盼蓝染色法对目标化合物进行了体外抗肿瘤活性筛选,药理结果显示,化合物Ⅱ-1、Ⅱ-3、Ⅱ-6、Ⅱ-13针对HL-60肿瘤细胞活性较好,IC50值达到微摩尔级,化合物Ⅱ-7、Ⅱ-8针对MCF-7肿瘤细胞的抑制作用优于阳性对照药伏立诺他,IC50值分别为3.19和6.29 μmol·L-1.

新型乙酰胆碱酯酶抑制剂的设计、合成与活性研究

本文设计、合成了一类全新结构类型的2-氨基-4-苯基噻唑类化合物,并考察了这些化合物对乙酰胆碱酯酶活性的抑制作用.以α-溴代苯乙酮为起始原料,经Hantzsch、酰化和取代反应合成了2-氨基-4-苯基噻唑类化合物,并利用Ellman分光光度法考察了它们对乙酰胆碱酯酶(AChE)的体外抑制活性.实验结果表明目标化合物均具有一定的AChE抑制活性,其中化合物8a抑制活性好,其IC50达到了3.54 μmol·L-1,优于对照药利斯的明.2-氨基-4-苯基噻唑类化合物对乙酰胆碱酯酶具有较好的抑制活性,需要进一步深入研究.

红豆蔻黄酮类化学成分研究

本文对红豆蔻中的黄酮类化学成分进行了研究.通过硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱和制备液相等多种色谱方法,从红豆蔻95％乙醇提取物中分离得到10个黄酮类化合物.根据理化性质和波谱数据分别鉴定为(2R,3S)-pinobaksin-3-cinnamate (1)、(2R,3R)-pinobaksin-3-cinnamate (2)、乔松素(pinocembrin,3)、短叶松素(pinobaksin,4)、3-O-乙酰基短叶松素(3-O-acetylpinobaksin,5)、高良姜素(galangin,6)、高良姜素-3-甲醚(galangin-3-methylether,7)、华良姜素(kumatakenin,8)、山柰酚-3-甲醚(3-methylkaempferol,9)和(2R,3R)-3,5-dihydroxy-7-methoxyflavanone (10).其中化合物1为新化合物,化合物2、5、10为首次从该属植物中分离得到,其余化合物皆为首次从该植物中分离得到.

基于多元回归分析干法制粒工艺参数与颗粒质量的相关性

本文以微晶纤维素WJ101为模型物料,通过单因素考察各个工艺参数对干法制粒后颗粒得率和脆碎度的影响,再综合考察工艺参数对颗粒得率和脆碎度的影响,建立工艺参数和颗粒质量的相关性.利用多元线性回归分析得到工艺参数与颗粒得率、脆碎度之间的回归方程,并得到工艺参数对颗粒得率和脆碎度影响大小的顺序:滚轮转速＞滚轮压力＞水平送料速度.颗粒得率与滚轮压力、水平送料速度呈正相关性,与滚轮转速呈负相关；颗粒的脆碎度与之相反.对比模型模拟结果和实际结果,两者无显著性差异(P＞0.05),说明模型具有较高的预测精度及可信度.

孕二烯酮储库型阴道环的制备及释药机制的研究

本文以孕二烯酮(gestodene,GEST)为模型药物研究储库型阴道环药物释放的影响因素.采用注塑成型法制备孕二烯酮储库型阴道环药芯,加热硫化法包裹控释膜,通过单一变量法,以21天的释放行为作为标准考察影响药物释放的因素.当改变外层控释膜的厚度时,随着控释膜厚度的增加,相对突释,即第一天的释药速率与平均日释药速率的比值逐渐趋于1.当膜厚为1.25 mm时,相对突释为1.04;在一定范围内,药物的平均释放速率(Q/t)与载药量(A)呈正比关系(r=0.992 2);实验考察了C6-165和Q7-4765两种膜材对药物释放的影响,结果发现药物溶解度高的C6-165膜更易实现对药物的控释；药物的形态影响其释放行为,结晶型粉末状态的药物更能有效地实现药物的控释；在相同载药量的前提下,对含1/1、1/2和1/4药芯的阴道环进行释放考察,结果显示三者的相对突释分别为1.93、1.87和1.76,1/4嵌段型阴道环更易实现控释.以上研究结果提示,孕二烯酮储库型阴道环可通过调整控释膜厚度、载药量、控释膜材料、药物分散状态、处方添加物组成及阴道环结构来控制药物释放行为,以达到理想的药物控释.

脂质包裹与环糊精包合的协同矫味研究

本文以对乙酰氨基酚为模型药物,研究脂质包裹与β-环糊精(β-CD)包合对难溶性苦味药物的协同矫味.通过建立动力学模型,计算药物在介质、脂质包裹微粒和分子包合等不同制剂单元中的分布,以控制产生苦味的游离药物浓度为目的,在制备、表征对乙酰氨基酚脂质微球基础上,确定β-CD用量,获得协同矫味给药体系,对其进行1H核磁共振(1H NMR)和分子模拟表征,并采用电子舌评价其矫味效果.结果脂质微球呈现一级释放,其速率常数为0.001 270 s-1,据此确定β-CD与对乙酰氨基酚的用量比为6.74∶1(w/w).协同矫味给药体系中对乙酰氨基酚1H NMR特征峰的化学位移值均增大,且酚羟基上的氧及亚胺基上的氮分别与β-CD中羟基上的氢形成分子间氢键.电子舌实验结合主成分分析(PCA)得到的苦味顺序为:协同矫味给药体系≈脂质微球＜-CD包合物＜对乙酰氨基酚原料药,确证了脂质包裹与β-CD分子包合的协同矫味效果.综上,脂质包裹微球以物理包裹方式阻滞药物释放,β-CD通过分子间氢键对游离对乙酰氨基酚进行包合,有效降低产生苦味的游离药物浓度,实现了协同矫味.

化合物TJ0711的抗心律失常作用

基于生物热动力学的注射剂无菌检查新方法研究

为弥补药典常规无菌检查方法周期长、灵敏度低、易误判等局限,尝试建立基于生物热动力学的注射剂无菌检测新方法.依据微生物生长代谢过程中存在热量变化的普遍现象,采用生物热动力学法,以微生物生长速率k≥0及热功率差值Pi-Po大于3倍基线噪音为评价指标,检测其热量变化规律以考察新建方法对无菌检查方法学要求菌株及注射剂实际样本中微生物的检测效力.结果显示,新建方法可在10 h内检出规定的革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌,且灵敏度均小于100 CFU·mL-1;同时在不同灭菌处理的注射剂实际样本中(复方茵陈注射液、注射用双黄连粉针、复方曲安奈德混悬型注射液)成功应用.研究提示,生物热动力学法用于注射剂无菌检查具有快速、灵敏等技术优势,有望为常规无菌检查方法带来有益的补充.

川芎嗪的肝微粒体代谢动力学及代谢表型研究

应用体外人和大鼠肝微粒体以及重组人源代谢酶孵育体系,研究了中药有效成分川芎嗪(TMPz)的肝代谢动力学特征和代谢酶表型.将TMPz与加入不同辅酶的人(HLM)和大鼠肝微粒体(RLM)孵育,应用LC-MS/MS法测定其剩余浓度,考察TMPz的肝微粒体代谢稳定性和酶动力学.在+NADPH和+NADPH+UDPGA的肝微粒体中,TMPz发生代谢转化.在同时加入NADPH和UDPGA的HLM和RLM中,TMPz的t1/2、Km和Vmax分别为(94.24±4.53)和(105.07±9.44) min、(22.74±1.89)和(33.09±2.74) μmol·L-1、以及(253.50±10.06)和(190.40±8.35) nmol·min-1·mg-1(protein).TMPz在HLM的代谢消除略快于RLM,其氧化生成活性产物2-羟甲基-3,5,6-三甲基吡嗪(HTMP)后可进一步与葡糖醛酸结合.应用重组人源CYP酶及特异化学抑制剂法确定CYPlA2、2C9和3A4是参与川芎嗪Ⅰ相代谢的CYP同工酶,并介导了HTMP的生成.经整体归一化法得到CYPl A2、2C9和3A4的贡献率分别是19.32％、27.79％和52.90％.应用LC-MS/MS峰面积相对定量法,观察到UGTlA1、1A4和1A6是介导HTMP葡糖醛酸结合反应的主要尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGT)亚型.上述结果表明,川芎嗪的肝脏代谢涉及多酶介导的Ⅰ相和Ⅱ相代谢.

四逆散抗肝损伤作用的大鼠血清UPLC-MS/MS代谢组学研究

采用基于超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)的代谢组学技术,并结合主成分分析(PCA)的方法,研究CC14诱导的急性肝损伤大鼠血清中内源性代谢物的变化,以及四逆散对其的干预作用,寻找抗肝损伤潜在的生物标志物,以阐明四逆散抗肝损伤的作用机制.结果显示,正常对照组、CCl4诱导的急性肝损伤模型组、阳性对照组、四逆散给药组血清代谢物谱得到明显分离,发现并鉴定了9个与肝损伤相关的潜在生物标志物.与正常对照组相比,模型组大鼠血清中苯丙氨酸、色氨酸、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)的水平均显著上调；6种溶血磷脂酰胆碱类物质LPC 16∶0、LPC 18∶0、LPC 18∶1、LPC 16∶1、LPC 20∶4、LPC 22∶6的水平均显著下调.这些发生显著变化的代谢物涉及到体内的氨基酸代谢、脂代谢、胆汁酸代谢以及氧化-抗氧化作用平衡,预示着肝损伤大鼠体内这些代谢途径发生了紊乱,而大鼠给予四逆散后可使上述标志物水平向正常状态转归,表明四逆散抗肝损伤的作用机制可能与调节这些代谢途径相关.

奥利司他中有关物质的UPLC-MS/MS研究

采用超高压液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS),研究国内部分厂家的奥利司他原料药中有关物质的结构,确定了奥利司他10种有关物质的结构式或相对分子质量.获得并比较了不同来源的奥利司他原料药中的有关物质结构信息,为其开发及质量监控提供有意义的实验数据和参考依据.

一种抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定

用两种方法即液质联用和紫外分光光度法对一种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比进行测定,为科学评价和有效控制药物抗体偶联比提供可靠方法.采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析,根据偶联不同数目药物分子的质量数增加判断偶联数目；采用紫外分光光度计在252及280 nm处进行吸收度测量,根据抗体和药物在不同波长处的吸收系数不同,由二元一次方程求导出药物抗体偶联比.两种方法测得的药物抗体偶联比分别为3.21及3.25,结果相似,都可用于此种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比分析.

珍稀濒危药用铁皮石斛HMGR基因的克隆和特征分析

3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme-A reductase,HMGR)是甲羟戊酸途径中的第一个限速酶,在植物细胞萜类物质合成代谢过程中发挥重要作用.但是,HMGR基因在珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛类萜生物合成途径中的作用尚不清楚.本研究利用RT-PCR和RACE技术,首次从铁皮石斛中克隆到一个HMGR基因,命名为DoHMGRl (GenBank注册号JX272632).DoHMGR1基因cDNA全长2 071bp,编码一条由562个氨基酸组成的多肽,分子量59.73kD,等电点6.18.DoHMGR1蛋白包含HMGR蛋白家族的4个保守结构域(63～561、147～551、268～383、124～541)和两个跨膜基序(42～64、85～107).DoHMGR1基因与多种植物HMGR基因相似性很高(67％～89％),与万代兰、水稻、玉米等单子叶植物亲缘关系较近.DoHMGR1基因具有组织表达特异性,其转录本在石斛根和茎中表达量较高,为叶中的2.13和1.98倍.DoHMGR1基因的分子鉴定为进一步解析该基因在铁皮石斛萜类物质合成代谢途径中的分子调控作用奠定基础.

基于片段和理性设计的阿格列汀

1 作用靶标胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)是一种主要由肠道L细胞产生的激素,属于一种肠促胰岛素(incretin).其生理作用是促进胰脏胰岛β-细胞的胰岛素分泌,抑制胰脏胰岛α-细胞分泌胰高血糖素,还可以通过中枢神经系统抑制食欲.所以GLP-1的生理作用有助于糖尿病的治疗,是控制血糖和与糖尿病密切相关的内源性物质.由于GLP-1在血液中容易被二肽基肽酶-4 (DPP-4)降解,半衰期只有数分钟.这样,研究DPP-4抑制剂以维持GLP-1血液中水平,成为治疗2型糖尿病的一个途径.