人参皂苷Rg_1及其代谢产物的药代动力学研究

研究静注和灌胃给予一定量人参皂苷Rg_1后,其原形和3种代谢产物的药代动力学.以Wistar大鼠为模型动物,以LC-MS/MS法测定血浆中人参皂苷Rg_1及其代谢产物的浓度,并计算药代动力学参数.灌胃给药后,在血浆中检测到人参皂苷Rg_1、Rh_1、F_1和原人参三醇4种物质.其Tmax分别为0.92、3.64、5.17和7.30 h,MRT分别为2.68、5.06、6.65和5.33 h,AUC0-t为2 363.5、4 185.5、3 774.3和396.2 ng·mL~(-1)·h.静注给药后,在血浆中检测到人参皂苷Rg1、Rh1和F_1 3种物质.其T_(1/2β)分别为3.12、5.87和6.87 h,MRT分别为1.92、5.99和7.13h,AUC_(0-t)分别为1 454.7、597.5和805.6ng·mL~(-1)·h.结果表明灌胃给药后,大鼠体内的人参皂苷Rg1代谢产物的量超过原形药,且代谢产物的吸收和消除速率相对缓慢.静注给药后,大鼠体内的人参皂苷Rg_1以原形为主,但仍有少量代谢产物存在,且代谢产物的吸收和消除速率相对缓慢.

珍稀铁皮石斛SSR标记的开发及种质纯度鉴定

本研究利用磁珠富集法开发了60对铁皮石斛的SSR引物,从中筛选出15对多态性位点丰富、带型清晰、重复性好的引物.利用筛选出的SSR引物对铁皮石斛野生居群材料进行了遗传分析,共鉴定出等位变异92个,平均每个SSR位点等位变异数为6.1个;表观杂合度(HO)范围是0.60～0.85,平均值为0.72;期望杂合度(HE)范围是0.49～0.85,平均值为0.74.平均每个SSR位点多态信息含量(PIC)为0.702,变化范围为0.437～0.829.利用15对SSR引物对20种石斛试验材料进行跨种扩增,检测出有13对SSR引物具有种间通用性.此外,还利用所筛选的4对SSR引物检测了集约化种植过程中的铁皮石斛组培苗的种质纯度,结果显示:所开发的SSR标记可用于铁皮石斛组培苗的品种纯度鉴别.

力达霉素辅基蛋白与人体乳腺癌结合作用的组织芯片研究

观察力达霉素辅基蛋白LDP与乳腺癌及乳腺正常组织的结合作用,并进一步研究与VEGF和HER2在乳腺癌中表达的相关性.采用免疫组织化学方法和结合组织芯片技术.研究LDP与乳腺癌组织及相应正常乳腺组织的结合:进而在多种病理类型乳腺癌组织芯片上,平行检测VEGF和HER2的表达,并与LDP和乳腺癌组织的结合进行比较,分析相关性.应用免疫细胞化学方法观察LDP与人乳腺癌MCF-7细胞的结合作用.结果显示,在乳腺癌及相应正常乳腺组织芯片上.LDP与乳腺癌组织结合的阳性率为73.2%(30/41),明显高于正常乳腺组织48.3%(15/31),两者有显著差异(χ~2=4.63,P<0.05).在多种病理类型乳腺癌组织芯片上,考察LDP与乳腺癌结合阳性的病例表明,VEGF表达阳性率为88.9%(48/54),两者呈正相关(P<0.001,r=0.389);HER2表达阳性率为84.0%(42/54),两者呈正相关(P<0.01,r=0.287).激光共聚焦显微镜检测表明,LDP可与人乳腺癌细胞MCF-7结合.上述结果表明,LDP可与乳腺癌组织结合,并与VEGF、HER2在乳腺癌组织中的表达有相关性.LDP与乳腺癌组织结合作用的研究,有可能为力达霉素与其他靶向药物的联合用药提供依据;也提示LDP作为肿瘤靶向药物导向载体的可能性.

五味子有效成分的大鼠在体单向灌流肠吸收

考察五味子提取物中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3种主要有效成分在大鼠的肠吸收性质.本文以酚红为标示物,运用在体单向肠灌流模型并采用HPLC法测定五味子提取物中3种主要有效成分在大鼠十二指肠、空肠、回肠及结肠灌流的浓度变化.结果发现,五味子提取物中3种有效成分的每种成分在不同浓度的吸收速率常数(K_a)和有效渗透系数(P_(eff))均有显著性差异(P<0.05).随着浓度的增加,其K_a、P_(eff)值均先升高而后下降,存在高浓度饱和现象,提示其在机体内的转运可能存在主动转运或促进扩散;3种有效成分在各肠段均有较好吸收,其中十二指肠吸收好,空肠与回肠的吸收相近无显著差异(P>0.05);3种有效成分之间在不同肠段的吸收均存在显著性差异(P<0.05),十二指肠中五味子甲素吸收好,其他肠段的K_a、P_(eff)大小顺序依次是五味子甲素>五味子乙素>五味子醇甲,且两两之间都存在显著性差异(P<0.05).

榼藤子含硫酰胺类化学成分的研究

为研究榼藤子[Entada phaseoloides(L.)Merr.]种仁的化学成分,利用正反相硅胶柱色谱、制备HPLC分离纯化,通过现代波谱学技术鉴定结构.从70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位分离得到4个含硫酰胺类化合物,分别为entadamide A-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranoside(1)、entadamide A(2)、entadamide A-β-D-glucopyranoside(3)和clinacoside C(4).化合物1为新化合物,化合物4为首次从该属中分离得到.

三种药物相互作用数学模型分析SAHA与三氧化二砷联合用药的细胞毒作用

为阐明不同药物相互作用数学模型分析结果的差异来源,观察了SAHA与三氧化二砷单独或联合用药对体外培养的人肿瘤细胞及正常细胞的杀伤作用.通过三种药物相互作用数学模型--Loewe相加模型、Bliss独立模型和周氏中效模型,分析了联合用药的实验结果并比较了这三种模型计算结果的区别.结果说明,在量效曲线拟合方法相同的前提下,这三种模型得到的结论是一致的;量效曲线拟合方法的差异,而非模型本身,是不同模型分析结论差异的主要来源.对不同的细胞两药联合的结果并不完全一致,在不同的剂量下联合作用的效果有一定差异.

内标法测定烟碱微透析回收率的可行性研究

研究利用内标法测定烟碱微透析回收率的可行性.通过测定磷酸可待因与烟碱在不同情况下的体外回收率(或释放率),考察它们之间的关系.考察探针周围烟碱浓度对两种物质的体外回收率(或释放率)及它们之间比值的影响.分别用内标法及反透析法测定烟碱大鼠体外血浆蛋白结合率.结果显示,磷酸可待因的释放率与烟碱的回收率之间的比例较稳定,磷酸可待因的释放率不因探针周围烟碱的浓度而改变.内标法及反透析法测得的血浆蛋白结合率相差不大.内标法可作为体内微透析研究中烟碱回收率的测定方法,磷酸可待因可作为该方法中的内标物.

聚乙烯亚胺-胆固醇结合脂质微泡介导的基因转染系统

本文研究了聚乙烯亚胺-胆固醇阳离子聚合物(PEI-Chol)基因载体的性能及其结合中性脂质、聚乙二醇修饰脂质微泡介导的基因传递系统(微泡/PEI-Chol/DNA)的体外细胞基因转染效率.采用胆固醇甲酰氯与聚乙烯亚胺(M_w 1 800)通过酰胺化制得PEI-Chol,并运用瓜、~1H NMR和MADI-TOF-MS(基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱)对其结构和分子量进行测定,平均相对分子质量约为2 000.采用反相挥发法制备DPPC、DSPE-PEG_(2000)和全氟丙烷构建的粒径为2～8 μm的脂质微泡,并运用自组装技术将PEI-Chol/DNA复合物与微泡融合,构建微泡/PEI-Chol/DNA(bubble/PEI-Chol/DNA)基因转染系统;以pEGFP-CI(enhanced green fluorescent protein,增强型绿色荧光蛋白)为报告基因,用凝胶滞留试验考察PEI-Chol的DNA压缩能力,同时在A549和MCF-7两种细胞中比较以PEI-Chol为核心构建的各种载体系统的细胞毒性、抗血清沉淀作用以及细胞转染效率.结果发现,当N/P比值为4以上时,PEI-Chol能有效压缩DNA;PEI-Chol和构建的微泡系统对A549和MCF-7两种细胞几乎没有毒性;本微泡介导基因转染系统,一方面降低PEI-Chol的毒性,提高抗血清蛋白沉淀作用,另一方面提高其基因转染效果.研究表明新型bubble/PEI-Chol/DNA是一种高效低毒的非病毒基因载体系统.

vWF促进intein剪接的BDD-FⅧ的分泌和活性

vWF是由巨核细胞和血管内皮细胞合成的糖蛋白,其主要功能之一为凝血Ⅷ因子(FⅧ)的载体,防止后者被血浆酶降解.作者近的工作证明intein可应用于双载体转移B结构域缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)基因,通过翻译后的蛋白质反式剪接形成完整的功能性BDD-FⅧ蛋白.为了研究vWF对于intein连接的BDD-FⅧ分泌和活性的影响,通过intein融合的BDD-FⅧ重、轻链基因和vWF基因共转染培养的293细胞,采用ELISA观察了分泌至培养上清液中的由intein剪接的全长BDD-FⅧ抗原量,并用Coatest检测了由其产生的活性.结果显示,vWF基因共转染细胞上清液中,全长BDD-FⅧ抗原量为(235±21)ng·mL-1,活性为(1.98±0.2)u·mL-1,明显高于未转染vWF的细胞[(110±18)ng·mL-1和(1.10±0.15)u·mL-1],也明显高于单独转染BDD-FⅧ基因的对照细胞[(131±25)ng·mL-1和(1.22±0.18)u·mL-1],表明vWF基因共转染可显著改善双载体转BDD-FⅧ基因后intein剪接的BDD-FⅧ蛋白的分泌和生物活性.为基于蛋白质剪接的断裂BDD-FⅧ基因转移的甲型血友病基因治疗研究中,应用vWF基因共转移以提高治疗的功效提供了依据.

低聚葡萄籽原花青素对异丙肾上腺素诱导大鼠心室重构的影响

研究低聚葡萄籽原花青素(oligomeric grape seed proanthocyanidins,GSP)对异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)致大鼠心室重构的保护作用并初步探讨其机制.采用皮下注射ISO致大鼠心室重构模型,以GSP(50,100及150 mg·kg-1)灌胃给药,PowerLab监测大鼠心功能,计算大鼠全心重量指数(HW/BW)和左心重量指数(LVW/BW),观察心肌病理学改变,测定左心室心肌组织中羟脯氨酸(Hyp)含量、血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果表明,与空白对照组相比,ISO组大鼠心功能明显受损,心脏重量指数HW/BW和LVW/BW、心肌细胞横截面积(CSA)、心肌间质胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)、心肌组织Hyp含量明显升高,血清SOD活性下降,MDA含量升高.与ISO组相比,GSP能明显改善心功能,降低心脏HW/BW和LVW/BW、CSA、CVF、PVCA和左心室心肌组织中Hyp含量,增加血清SOD活性,降低血清MDA含量.GSP对ISO诱导的大鼠心室重构具有明显的逆转作用,其机制可能与抗氧化应激,提高机体的抗氧化能力有关.

文多灵碱键合人血清白蛋白位点的表征

本文利用荧光增敏光谱法及紫外吸收光谱法结合计算机模拟技术研究了模拟生理条件下文多灵碱的光谱特征及它与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的键合作用.同步荧光及紫外光谱图的信息表明文多灵碱对蛋白微环境有影响.荧光光谱表明文多灵碱对HSA有较强的荧光增敏作用,根据荧光滴定的数据求得不同温度下(303、310和317 K)药物与蛋白相互作用的结合常数及结合位点数.分子模拟的结果显示了文多灵碱与HSA的键合模式和键合机制,表明药物与蛋白有较强的键合作用,维持药物与蛋白的相互作用力主要是疏水作用,兼有4个氢键(位于氨基酸残基Arg218、Lys195、Arg222和Ala291位).位点竞争实验显示文多灵碱键合在HSA的site Ⅱ区.通过计算得到的热力学参数(依据范德霍夫公式计算得△H~0与△S~0的值分别为-10.30kJ·mol~(-1)和79.98 J·mol~(-1)·K~(-1))确定了药物与蛋白的相互作用力类型主要为疏水兼静电作用.

液相色谱-串联质谱法分析抗肿瘤新药乙烷硒啉在大鼠体内的代谢产物

本研究对抗肿瘤新药1,2-[二(1,2-苯并异硒唑.3(2H)-酮)]乙烷(乙烷硒啉,BBSKE)在大鼠体内的代谢产物进行鉴定.在灌胃给予大鼠单剂量乙烷硒啉200 mg·kg~(-1)后,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS~n)对大鼠尿液、粪样、胆汁和血浆中的代谢产物进行检测,通过全扫描和选择离子扫描,以及根据多级质谱裂解规律对代谢物的结构进行分析.研究发现在大鼠尿样、粪样、胆汁和血浆中检测到3种Ⅰ相代谢产物和1种Ⅱ相代谢产物,其代谢途径分别为氧化、甲基化、硫甲基化和葡萄糖醛酸化反应,提示乙烷硒啉在大鼠体内的代谢方式可能是通过氧化、甲基化及葡萄糖醉酸化反应形成代谢产物.

聚乙烯亚胺介导siRNA分子体内外基因沉默VEGFR2表达

应用阳离子聚合物聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹靶向小鼠VEGFR2基因的siRNA分子,以研究其体外基因沉默作用及不同给药途径的肿瘤生长抑制作用.采用共聚焦显微镜观察荧光染料CY3标记的siRNA分子的细胞内定位,RT-PCR和Western blotting检测VEGFR2 mRNA和蛋白表达水平基因沉默效果,建立裸鼠皮下肿瘤模型比较经瘤内和尾静脉给予siVEGFR2/PEI抑制肿瘤生长的作用.共聚焦显微镜观察证实PEI能成功转染siRNA分子进入细胞质,siVEGFR2/PEI转染的MS1细胞中VEGFR2 mRNA和蛋白表达水平明显下降,沉默效率分别为28.2%和23.6%.瘤内给与siVEGFR2/PEI组裸鼠肿瘤体积[(189.429±17.562)mm~3]明显小于空白组[(365.844±20.713)mm~3]和PEI静脉给药组[(315.507±20.491)mm3~].结果表明,PEI能有效介导siRNA分子转染进入细胞质并能特异性沉默靶基因的表达.未经组织靶向性修饰的PEI不具有肿瘤靶向作用,瘤内注射的抗肿瘤效应优于静脉给药途径,这为进一步研究PEI介导的siRNA分子体内基因沉默效应的机制和优化该给药系统临床治疗肿瘤应用奠定了基础.

博宁霉素引起肿瘤细胞衰老的特征

鉴于细胞衰老是抑制肿瘤的重要步骤,考察博宁霉素引起人肿瘤细胞衰老的特征.采用MTT法和克隆形成率实验检测细胞增殖抑制作用;衰老相关的β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老;流式细胞仪测定细胞周期分布以及细胞内活性氧自由基水平;Western blotting检测蛋白的表达水平.结果表明,博宁霉素对人口腔上皮癌KB细胞的作用,明显强于人非小细胞肺癌A549细胞.与阳性对照药多柔比星的作用相似,博宁霉素可引起这两种细胞均出现衰老特征,这与细胞阻滞在G_2/M期、细胞内活性氧自由基增加有关.0.1 μmol·L~(-1)博宁霉素可以诱导KB细胞衰老,检测到衰老标志蛋白P21的表达明显增加;而高浓度的博宁霉素激活细胞凋亡通路.本研究结果表明:博宁霉素引起细胞衰老,也是其抑制肿瘤细胞增殖的机制之一.

QSAR, docking studies and pharmacophore identification of phenylmethyl phenoxy propyl amino propanoic acid derivatives as leukotriene A_4 hydrolase in

力达霉素-单抗Fab'片段不同连接偶联物的抗肿瘤作用比较

研究力达霉素与抗Ⅳ型胶原酶单抗的不同连接键的小型化免疫偶联物的抗肿瘤作用.制备长短链的二硫键以及硫醚键抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)与抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11的Fab'片段连接的免疫偶联物,ELISA法测定偶联物的免疫活性,体外细胞克隆形成测定和体内荷瘤裸小鼠模型观察两种偶联物的抗肿瘤作用.体外研究显示,Fab'-LDM偶联物部分保留了抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11对抗原的亲和力,硫醚键偶联物对体外培养的人纤维肉瘤HT-1080细胞的杀伤作用强于LDM和二硫键偶联物.实验结果显示,LDM等剂量条件下硫醚键偶联物Fab'-SSMPB-LDM和Fab'-SMBS-LDM组的抑瘤率分别为87.7%和78.0%,二硫键偶联物Fab'-SPDP-LDM和Fab'-LCSPDP-LDM组分别为74.8%和72.3%,游离LDM组为70.9%,相比较长连接键的硫醚键偶联物抑瘤作用显著增强.Fab'-SSMPB-LDM和Fab'-SMBS-LDM组动物的平均生存时间延长为165.8%和145.2%,Fab'-SPDP-LDM和Fab'-LCSPDP-LDM组分别为82.2%和107.5%,LDM组为71.9%.与二硫键偶联物组比较,硫醚键偶联物组能显著延长荷瘤鼠的生存期;长硫醚键偶联物抗肿瘤作用和对荷瘤动物生存期延长作用强于短硫醚键偶联物.长链硫醚键偶联物Fab'-SSMPB-LDM肿瘤生长抑制作用提高,荷瘤动物生存期显著延长,有望开发为新的肿瘤治疗药物.

炎琥宁中主要有关物质的结构鉴定

为了对炎琥宁中3个主要有关物质的结构进行鉴定,采用制备高效液相法分离杂质,并应用LC-ESI/TOFMS、LC-ESI/MS~n、NMR、UV、IR等对主要有关物质进行结构鉴定.结果发现其中一个杂质是炎琥宁的水解氧化产物,另外两个杂质是炎琥宁水解掉不同琥珀酸形成的单酯.由此表明炎琥宁容易被水解和氧化,应在阴凉干燥处保存.

采用扩展Wilson理论研究电解质的临界相对湿度与溶解度的关系

根据热力学原理,电解质药物临界湿度与溶解度之间存在密切联系.作者从理论上探索了电解质的溶解度与临界相对湿度的关系,并分别根据拉乌尔定理和扩展的Wilson模型,由电解质的溶解度数据计算了饱和溶液中溶剂的活度即电解质的临界相对湿度.结果表明,按拉乌尔定理计算的临界相对湿度值与其文献报道值有明显的系统误差;按扩展的Wilson模型来计算则与文献报道值相当一致.

聚合物胶束用于口服给药的研究进展

聚合物胶束是由两亲性聚合物自发形成的热力学稳定体系,它对难溶性药物具有良好的增溶效果.许多具有良好活性的药物由于溶解性差,其口服给药受到限制.将聚合物胶束作为口服给药的载体可以显著改善药物的溶解性,增加透过生物膜的药量,进而提高药效.此外,聚合物组成和性质具有多样性,利用聚合物的这一特性可以制备出对pH值、温度敏感或者具有黏膜黏附性的胶束.在提高药物溶解度的同时,通过改变药物在胃肠道中的释放过程,进一步提高其生物利用度.本文主要介绍聚合物胶束在口服给药方面的研究进展,分析并总结其作为口服给药载体应用的特点和前景.

p38 MAPK及其抑制剂在子宫内膜异位症中的作用

子宫内膜异位症(EMs)是与炎症有关的雌激素依赖性疾病.p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)受性激素、炎症因子等因素的激活,在细胞凋亡、增殖、炎症、应激等多种细胞反应中起着重要的作用,并直接参与子宫内膜异位症发生发展过程的调控.p38 MAPK信号转导通路在性激素和炎症之间的特殊调节作用,将有助于更好地理解子宫内膜异位症错综复杂的病理假说.p38 MAPK抑制剂在子宫内膜异位症的研究中发挥重要作用,且前景广阔.在信号通路水平上阻断和调控p38 MAPK的表达和活性,有望成为防治子宫内膜异位症的新策略.

反相C_(18)液相色谱柱选择性理论及其应用

反相HPLC分析中色谱柱的选择性受到了越来越多的关注,在这些色谱柱中,C_(18)柱是目前常用的色谱柱,然而各种C_18色谱柱在分离效果上也存在着较大差异,因此能否找到合适的C_18柱关系到整个实验的成败.经过近年来的研究,已形成了一些色谱柱分类、选择方法,如色谱柱参数(H,S,A,B,C)法、相似系数(F值)法等,减少了色谱柱选择的盲目性.本文结合近年来的研究,归纳了这些方法的优点及其在应用过程中的局限性,并基于前人的理论,结合实际工作,为药品分析中合理选择色谱柱提出了建议和方法.

药物分子设计的策略:药理活性与成药性

化合物的内在活性和成药性是创新药物的两个基本要素,活性是药物的基础和核心,成药性是辅佐活性发挥药效的必要条件,两者互为依存.药物在体内的药剂相、药代动力相和药效相可概括为活性和成药性的展示过程.成药性是药物除活性外的其他所有性质,包括物理化学性质、生物化学性质、药代动力学性质和毒副作用,这是在不同层次上表征药物的性质和行为,但又相互关联与制约.活性与成药性由化学结构所决定,体现在微观结构与宏观性质的结合上,寓于分子的结构之中.先导物的优化是对活性、物化、生化、药代和安全性等性质的多维空间的分子操作,因而具有丰富的药物化学内涵.

不同茎叶比例的穿心莲药材中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的X射线衍射定量分析方法的探讨

穿心莲中药材为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分.秋初茎叶茂盛时采割,晒干.性味苦、寒,归心、肺、大肠、膀胱经,具有清热解毒、凉血、消肿的功能.