药学学报杂志
Acta Pharmaceutica Sinica 약학학보
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中国药学会 中国医学科学院药物研究所
- 影响因子： 1.27
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0513-4870
- 国内刊号： 11-2163/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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重组新城疫病毒rClone30-CD/5-FC系统的抗肿瘤活性
本研究提取大肠杆菌JM109菌株的全基因组,克隆获得CD基因,将CD基因和IRES-EGFP基因构建到pEE12.4表达载体上,形成pEE12.4IE-CD真核表达载体.用该表达载体转染人肝癌细胞后,以不同浓度的5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC)处理细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定CD/5-FC系统对人肝癌细胞HepG2的杀伤效果.当前导药物5-FC的浓度分别为10、20和30 mmol·L-1时,CD/5-FC系统对HepG2细胞的杀伤效率分别为18.07％、42.98％和62.20％,与对照组相比较差异具有统计学意义.急性毒性实验结果表明,小鼠尾静脉注射不同剂量5-FC,组间剂量比为1∶0.5,采用改良寇氏法测定5-FC对小鼠的LD50为507 mg·kg-1,95％可信限为374～695 mg·kg-1.再以LD50实验中大LD0剂量为基准,组间剂量差值为10 mg·kg-1,测得大安全剂量为200 mg·kg-1,并对体重、体征指标进行跟踪观察.这些检测结果可为动物实验奠定基础.将CD基因连于新城疫病毒(NDV) rClone30载体中并建立肿瘤动物模型,抑制肿瘤实验结果表明,重组新城疫病毒rClone30-CD/5-FC系统具有较高的体内抗肿瘤活性.综上所述,克隆获得的CD基因具有生物学活性,重组rClone30-CD/5-FC系统是一种潜在的治疗肿瘤的方法.
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地塞米松影响骨骼发育的斑马鱼模型的建立
本文首次采用斑马鱼模型动物,以糖皮质激素地塞米松为模型药,以建立一种快速、高效的骨质疏松新模型.将受精后4天(4 dpf)的斑马鱼幼鱼暴露于不同浓度地塞米松溶液中,设阴性(0.5％ DMSO)对照组,28.5℃下在24孔板中培养至9 dpf,至斑马鱼头部骨骼形成.并用此模型观察依替膦酸二钠对斑马鱼头骨矿化的影响及对10 μmol·L-1地塞米松诱导的斑马鱼骨质疏松的防治作用.采用茜素红对培养9天的斑马鱼骨骼进行染色,以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域.结果显示:与阴性对照组相比,地塞米松(2.5、10和25 μmol·L-1)组的斑马鱼头部骨骼染色面积和染色光密度值显著减少；依替膦酸二钠(15及30 μg·mL-1)能增加斑马鱼头骨矿化量并有效防止地塞米松诱导斑马鱼产生的骨质疏松.结果提示,地塞米松使斑马鱼头骨骼矿化量和骨密度显著降低,成功诱导斑马鱼产生骨质疏松.该模型亦成功验证依替膦酸二钠能防止骨质疏松的作用.
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喹啉-多胺缀合物的设计、合成及其胆碱酯酶抑制活性
本文设计合成了系列喹啉-多胺缀合物(8a～8n)并对其进行了胆碱酯酶抑制活性测试.结果表明部分化合物IC50值达到微摩尔级,其中化合物8n对乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)的抑制活性强,IC50值为8.78 μmol·L-1,8i对丁酰胆碱酯酶(butyrylcholinest erase,BChE)的活性强,IC50值为1.60 μmol·L-1,略优于对照药物rivastigmine.构效关系研究表明,多胺链的长度和连接基团对活性影响较大.分子对接表明化合物8i作用在AChE的催化活性位点(catalytic active site,CAS)和外周阴离子位点(peripheral anionic site,PAS).
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胆木的化学成分研究
为研究胆木水提取物中的化学成分,利用D101大孔树脂、硅胶和自动纯化系统等各种色谱手段对其水提取物进行分离和纯化,共得到9个化合物,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定化学结构,它们分别是:naucleamide G(1)、3,4-dimethoxyphenol-β-D-apiofuranosyl (1→6)-β-D-glucopyranoside (2)、kelampayoside A (3)、3α,5α-tetrahydrodeoxycordifoline lactam (4)、naucleamide A-10-O-β-D-glucopyranoside (5)、短小蛇根草苷(6)、3-表短小舌根草苷(7)、异长春花苷内酰胺(8)及喜果苷(9).化合物1为新化合物,化合物2为首次从该属植物中分离得到,化合物3和4为首次从该植物中分离得到.
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pH敏感性的脂质-介孔硅核/壳纳米粒作为抗肿瘤药物新型载体的初步研究
本文拟构建一种具有pH敏感性的脂质-介孔硅核/壳纳米粒(lipid bilayer-coated mesoporous silica nanoparticles,LMSNs)以提高抗肿瘤药物对肿瘤细胞的杀伤活性.采用水热-薄膜水化分散法合成制备了包载盐酸伊立替康(irinotecan,CPT-11)的脂质-介孔硅核/壳纳米粒(lipid coated mesoporous silica nanoparticles loaded with CPT-11,CPT-11-LMSNs),并对其进行了形态、粒度和释放度的表征.同时,以人乳腺癌细胞MCF-7为细胞模型,考察了载体的细胞摄取定位、药物胞内蓄积量和抗肿瘤活性.研究结果表明:LMSNs在透射电镜下呈圆整球形,平均粒径为(120.27±5.91) nm.载体在体外模拟正常生理环境中CPT-11泄露量低,而在模拟肿瘤胞内环境中快速释药,表明该载体的释药行为具有pH响应性.另外,LMSNs可有效提高MCF-7细胞对药物的摄取量,显著增加CPT-11对肿瘤细胞的杀伤力,将CPT-1 1介孔硅纳米粒(CPT-11-MSNs)的胞内药物累积量提高2.1倍,半数抑制浓度(IC50)降低1.4倍.
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壳核型磷酸钙/pDNA复合物-PLGA纳米粒的制备及体外研究
本文采用乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)包裹磷酸钙-质粒DNA纳米复合物(CaPi-pDNA)得到具有壳核结构的磷酸钙/pDNA PLGA纳米粒(CS-pDNA-CaPi-PLGA-NPs),对其体外相关性质进行了初步评价,并在形态、粒径、ζ电位、载药量、包封率、在介质中粒径的变化、抗核酸酶降解能力、体外释放性能、细胞毒性及细胞转染效率等方面与嵌入型磷酸钙/pDNA复合物的纳米粒(embedded-pDNA-CaPi-PLGA-NPs)进行了比较.结果表明:所制备的CS-pDNA-CaPi-PLGA-NPs外观圆整光滑,呈类球形,大小均匀,平均粒径为(155±4.5) nm,zeta电位为(-0.38±0.1)mV,包封率为(80.56±2.5)％,载药量为(1.16±0.04)％,在介质中稳定性较好,抗核酸酶降解能力强,并具有缓释效果,体外转染效率在转染后72 h达到(24.66±0.46)％,显著优于裸质粒[(0.33±0.04)％,P＜0.01]与普通PLGA纳米粒[(1.5±0.07)％,P＜0.01],且持续作用时间较embedded-pDNA-CaPi-PLGA-NPs更长,细胞的毒性显著低于聚乙烯亚胺(PEI).以上结果提示CS-pDNA-CaPi-PLGA-NPs是一种极富潜力的非病毒类基因传递载体.
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模式生物斑马鱼对川续断皂苷Ⅵ的代谢研究
首次采用模式生物斑马鱼研究续断中主要活性成分川续断皂苷Ⅵ的代谢,探索斑马鱼用于微量中药皂苷类成分代谢的可行性及合理性.采用高效液相色谱-电喷雾质谱检测,Zorbax Extend C18 (150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,0.05％甲酸乙腈-0.05％甲酸水梯度洗脱,正、负离子模式同时检测,根据准分子离子峰获得化合物分子量信息,通过与文献数据或对照品对照,鉴定川续断皂苷Ⅵ经斑马鱼暴露24 h后的药液及鱼体中的代谢产物.结果川续断皂苷Ⅵ经斑马鱼作用后,产生了脱去1分子、2分子及全部糖基的5种脱糖基代谢产物和1个羟基化产物,这与川续断皂苷Ⅵ在大鼠体内的代谢机制一致,提示斑马鱼对川续断皂苷Ⅵ的代谢具合理性,更具有化合物用量少,成本低、简单、高效的优势,特别是能体现在体代谢的综合结果,有望成为快速预测少量中药成分代谢、补充现有模型不足的全新的、模式生物代谢模型.
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基于化学分析的毒性中药附子炮制方法的合理性研究
以常用毒性中药附子为例,比较其所含乌头碱等双酯型生物碱(diester alkaloids,DAs)和苯甲酰乌头原碱等单酯型生物碱(monoester alkaloids,MAs)的毒性大小,以及两类成分在生附片和不同炮制品中含量差异,探讨中药炮制减毒的原理和工艺合理性.结果表明,MAs对大鼠的毒性至少低于DAs的1/64～1/180;炮制后DAs含量下降至生品的1/76.5～1/38.3,而MAs含量增加4.6～5.2倍或与生品基本持平,炮制品的MAs/DAs值较生品提高30～390倍.进一步对比附子不同炮制方法的合理性,发现无胆(胆巴)蒸制或炒制工艺与《中国药典》规定的传统胆制工艺相比,DAs含量无显著性差异,即不同炮制工艺的“去毒”能力相近；但无胆蒸制或炒制炮制品MAs含量较传统胆制炮制品增加5.3～8.7倍,提示无胆蒸制或炒制工艺的“存性”效果较好,且流程简单、不会引入无机杂质,建议推广应用.
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日本蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与生物信息学分析
为研究蟾蜍皮肤中多肽类有效成分,通过菌落PCR (polymerase chain reaction)对日本蟾蜍(Bufojaponicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行筛选,对测序结果进行分析及同源性比较,获得转胶蛋白-2(transgelin-2,TAGLN2)的5'端缺失的部分cDNA序列(GenBank登录号为JX197456),长为997bp,包括348 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5’端31 bp及3’端618bp的非翻译区(untranslated region,UTR),编码由115个氨基酸残基组成的蛋白质.推导的氨基酸序列含有一个调宁蛋白同源性结构域(calponin homology,CH)、两个可形成二硫键的半胱氨酸残基、3个α螺旋区域和5个潜在的磷酸化位点.氨基酸序列同源性分析显示,本文获得的日本蟾蜍N-端截短型TAGLN2与热带爪蟾(Xenopus (Silurana) tropicalis)和非洲爪蟾(Xenopus laevis)相对应部分的同源性分别为90％和89％,与其他7种动物的同源性介于71％～85％之间.
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微生物来源芳香类化合物异戊烯基转移酶研究进展
芳香类化合物的异戊烯基化不仅丰富了天然产物结构类型,而且常常能提高化合物的生物活性及生物利用度,在活性天然产物研究中具有重要意义.但异戊烯基芳香类化合物在天然界中分布范围窄,含量极微,且化学合成困难,制约了其作为药物的系统研究.通过克隆芳香类化合物异戊烯基转移酶基因,进行外源表达,并利用重组酶对结构多样的芳香类化合物进行定向异戊烯基化,可为异戊烯基芳香类化合物的合成提供全新的方法.本文对微生物来源芳香类化合物异戊烯基转移酶的分类、酶蛋白结构研究、酶功能鉴定及相关领域研究进展进行了综述.
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过表达内源PMT和H6H基因对颠茄发根托品烷类生物碱合成的影响
颠茄是我国药典规定的托品烷类生物碱包括东莨菪碱和莨菪碱主要的商业栽培的药源植物.本研究采用基于发根的基因表达系统,农杆菌介导遗传转化颠茄,潮霉素筛选获得转颠茄自身PMT和H6H基因发根;基因组PCR鉴定转基因发根;液体摇床培养后,HPLC测量莨菪碱和东莨菪碱含量;qPCR检测颠茄PMT和H6H基因表达水平.基因组PCR检测获得5个双基因共转化颠茄发根系,其中2个发根系(PH2和PH14)的总生物碱含量得到显著提高,高的PH2总生物碱含量为非转基因发根的2.7倍；另外3个转基因发根系总生物碱含量与对照相比没有显著性差异.4个转基因发根系(PH2、PH32、PH14和PH20)东莨菪含量都有提高,其中PH2东莨菪碱含量比对照提高了8.2倍.基因表达量与生物碱含量结果基本一致,说明颠茄发根中PMT和H6H两者同时维持高水平表达可以极大程度的促进东莨菪碱积累.
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青蒿素的合成生物学研究进展
青蒿素是应用广泛的一线抗疟药.现在市售的青蒿素主要是从植物中提取出来的,含量稀少和需求广泛导致青蒿素供应不稳定.建立一种环境友好、廉价的生产青蒿素的方法将是未来解决青蒿素来源问题的有效方法.通过合成生物学技术来制备青蒿素,利用细胞工厂将是未来青蒿素生产的主要方式.本综述简单介绍了青蒿素的生物合成途径,并对青蒿素生物合成相关基因,如紫穗槐-4,11-二烯氧化酶基因、细胞色素P450氧化还原酶基因、青蒿醛双键还原酶和醛脱氢酶基因进行了重点介绍.此外,本综述针对近年来青蒿素合成生物学发展的特点以及影响底盘细胞制备目的产物的因素进行了详细的论述.
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三萜皂苷合成生物学元件的初步开发:三七鲨烯环氧酶编码基因克隆及表达模式分析
中药合成生物学是将合成生物学思路引入中药天然产物次生代谢途径研究的一门新兴学科,其发展初期的首要任务是进行元件的开发与标准化,建立标准化的合成生物学元件库.三七(Panax notoginseng)作为人参属重要的药用植物,具有较高的药用价值,其主要活性成分是三萜皂苷.鲨烯环氧酶(squalene epoxidase)被认为是三萜皂苷与植物甾醇次生代谢途径中的关键限速酶,是三萜皂苷合成生物学研究的重要元件之一.本研究克隆获得三七中两种类型的鲨烯环氧酶编码基因(PnSE1、PnSE2),对其进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR (real-time PCR)方法检测其在4年生三七不同组织部位的表达模式,以及受茉莉酸甲酯(MeJA)诱导处理后基因的表达量变化,为实现中药合成生物学元件挖掘与开发奠定基础.PnSE1基因与PnSE2基因预测编码蛋白分别包含537和545个氨基酸,序列相似性为79％,但N端(前70个氨基酸)序列不保守.PnSE1基因在根、茎、叶、花中均有表达,以花中表达丰度高；PnSE2基因只在花中表达量显著,其余组织较弱.PnSE1基因响应MeJA诱导,诱导24 h后在叶中的表达量大；相同诱导条件下,PnSE2基因未响应诱导,表达水平无显著变化.结果表明,PnSE1和PnSE2基因具有不同的表达模式,在三七次生代谢产物合成中起不同催化作用,推测PnSE1基因参与三萜皂苷合成途径,PnSE2基因则在甾醇合成途径中起催化作用.
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一种用于筛选启动子元件库的酵母检测载体的构建及初步应用
天然药物合成生物学技术是一种采用多基因控制的方式,实现天然产物代谢途径在异源底盘细胞中的重构.启动子是调控基因表达的一种顺式元件,对多基因控制的代谢途径的平衡起着重要的作用.为了筛选获得性能优越的启动子用于多基因控制的代谢途径,一个基于红色荧光蛋白的酵母检测质粒被构建.首先,根据已经发表的红色荧光蛋白基因,设计并合成了一系列引物,通过连续重叠PCR的方法合成了全长红色荧光蛋白基因DsRed-Monomer,并将该红色荧光蛋白基因导入酿酒酵母,SDS-PAGE、Western blot以及荧光显微镜观察都表明该红色荧光蛋白基因在酿酒酵母中获得了表达.然后,将具备功能的DsRed-Monomer基因与酿酒酵母表达载体pGBT9进行重组,获得能进行启动子文库筛选的启动子检测质粒pGBT9Red.为了检测该质粒的效能,通过PCR从酿酒酵母基因组中克隆得到了6种启动子(包括4种诱导型启动子和2种组成型启动子),并将6种启动子分别克隆到pGBT9Red中,置于红色荧光蛋白基因DsRed-Monomer上游,通过荧光成像确定启动子对红色荧光蛋白基因表达的调控效率.结果表明,6种启动子(GAL1、GAL2、GAL7、GAL10、TEF2和PGK1)在酿酒酵母中均能调控DsRed-Monomer的表达.该检测质粒的成功构建为进一步进行启动子活性分析和启动子元件文库筛选奠定基础.
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紫杉醇药物中间体的合成生物学研究进展
天然药物合成生物学技术的发展促进了临床上重要的抗肿瘤药物紫杉醇的异源生物合成的研究,本文简要综述了紫杉醇药物中间体在大肠杆菌和酿酒酵母等工程细胞中异源生物合成途径的组建、代谢调控和代谢产物的分析及其规模化发酵生物制备的瓶颈问题.
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人参皂苷生物合成研究进展
人参皂苷是名贵药材人参和西洋参等人参属植物的主要有效成分,具有较好的抗肿瘤、抗炎、抗氧化和抑制细胞凋亡等药理活性.但人参皂苷在人参和西洋参中含量很低,大大限制了其开发与应用,利用生物技术手段合成人参皂苷并提高其含量已成为研究热点.近年来通过组织培养和生物转化进行人参皂苷生物合成的研究取得了一些进展.在人参皂苷生物合成途径解析及其反应机制研究方面,目前已从人参属植物中克隆到20多个与人参皂苷生物合成相关的基因并进行了功能验证,为通过合成生物学技术生产人参皂苷提供了基本的元器件.本文就以上几个方面的研究进展进行综述,为人参皂苷生物合成途径及其调控的深入研究提供理论依据.
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微生物药物合成生物学研究进展
微生物次级代谢产物结构复杂多样,具有抗细菌、抗真菌、抗肿瘤、抗病毒和免疫抑制等多种生物活性,是微生物药物开发的源泉.当前,微生物药物研究面临一些挑战:快速发现结构新颖、生物活性突出的化合物；理性化提高产生菌的发酵效价；以及以微生物为新宿主,实现一些重要天然药物的工业生产.合成生物学是在系统生物学和代谢工程等基础上发展起来的一门学科.本文对合成生物学在发现微生物新次级代谢产物、提高现有微生物药物合成水平和创制微生物次级代谢产物方面的研究进展进行了阐述.
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灵芝三萜合成关键元件GLCYP450及其还原酶GLNADPH的基因克隆及共表达载体构建
细胞色素P450是灵芝三萜生物合成途径中的关键元件,其催化反应过程中需要有NADPH/NADH为其传递电子.本课题组根据已获得的赤芝(Ganoderma lucidum (Leyss.Ex Fr.) Karst.)基因组数据中的CYP450和NADPH转录本序列,利用RT-PCR方法获得灵芝CYP450 (GLCYP450)和NADPH(GLNADPH)基因的全长cDNA序列,并在序列两端引入相应的限制性内切酶位点,通过酶切及连接反应,将GLCYP450和GLNADPH重组到酵母表达载体pESC-URA中,成功构建了酵母表达载体质粒pESC-GLNADPH-GLCYP4 50,为通过合成生物学手段研究灵芝三萜生物合成奠定基础.
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人参皂苷合成生物学关键元件HMGR基因克隆与表达分析
3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme-A reductase,HMGR)是甲羟戊酸途径中的第一个限速酶,直接催化人参皂苷的生物合成,是人参皂苷合成生物学研究中的重要元件之一.本研究克隆了人参(Panax ginseng)中一个新HMGR(命名为PgHMGR2)的编码区序列,并对其编码的蛋白进行生物信息学预测及基因表达分析.PgHMGR2与GenBank中的另一条人参HMGR的序列同源性仅为71.6％,因此,PgHMGR2是人参中HMGR基因家族的一个新成员.PgHMGR2基因全长1 770 bp,编码589个氨基酸残基.生物信息学预测PgHMGR2编码蛋白不含信号肽,包含两个跨膜区,具有HMGR催化作用的活性中心结构域.PgHMGR2编码蛋白与西洋参(Panax quinquefolius)的HMGR (GenBank登录号为ACV65036)具有99％的序列相似性.实时荧光定量PCR检测到PgHMGR2在人参花中表达量高,其次为叶和根,茎中表达量低.本研究是国内外首次获得的人参PgHMGR2基因的全长序列,为进一步鉴定PgHMGR2的功能及开展人参皂苷的合成生物学研究奠定基础.
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基于微生物来源糖类天然产物生物合成的糖基异构化
糖基化是生物系统中为常见也为重要的生物修饰反应之一,常见于微生物来源的具有生物活性的小分子天然产物,产生自然界为复杂的功能基团.此外,糖基对这些小分子物质的生物活性是必须的,因此,对糖亚基结构的修饰具有改善天然产物的生物活性的潜能.这种可能性促使人们研究糖生物合成的机制,并且通过改变天然产物的糖基部分来生产非天然糖基化的新的天然产物,以期改良甚至创造具有新生物活性的天然产物药物.本文在简述天然产物糖类的生物合成的同时,介绍一些应用组合生物合成学的方法对天然产物的糖亚基进行结构优化的范例.
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丹参4-羟基-3-甲基-2-丁烯基焦磷酸还原酶基因的全长克隆与诱导表达分析
本研究根据转录组数据提供的基因片段设计特异引物,利用cDNA快速末端扩增方法克隆丹参4-羟基-3-甲基-2-丁烯基焦磷酸还原酶全长cDNA (SmHDR),GenBank注册号JX233817,并进行蛋白结构预测、序列多重比对和构建进化树等生物信息学分析；然后采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测该基因在Ag+诱导后的表达情况,使用UPLC检测对应样品的丹参酮类化合物含量.获得的SmHDR全长基因由1 647个核苷酸组成,编码463个氨基酸,蛋白分子质量为51.88kD,等电点pI 5.72,二级结构中α-螺旋结构占35.64％、β-折叠占20.30％、无规则卷曲占44.06％.序列比对和系统进化分析表明,SmHDR与其他植物HDR家族具有较高的同源性,并与库洛胡黄连HDR两者的亲缘关系较近.RT-PCR结果显示,SmHDR受Ag+诱导后表达水平在12h时急剧上升后显著下降,丹参酮类成分含量受Ag+诱导后先缓慢上升,在120 h时有明显提高,两者的增加趋势呈正相关.推测SmHDR基因可能参与丹参酮类成分的生物合成,这为进一步研究丹参酮类成分生物合成及其次生代谢调控机制奠定了基础.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 |
| 1998 | 01 05 06 07 08 09 |
