NFKBIA 3'UTR不同基因型载体的构建及其功能差异性比较

验证NFKBIA基因3'非翻译区(3'UTR)两个SNP--rs8904C＞T和rs696G＞A的功能.以两个位点分别为CC纯合子和GA杂合子基因型的人全基因组DNA为模板,通过设计不同引物以扩增长度为503 bp的NFKBIA基因3'UTR片段,经测序验证后将该片段克隆至荧光素酶载体pGL3-promoter中,构建4种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696G、pGL3-rs8904C/rs696A、pGL3-rs8904T/rs696G和pGL3-rs8904T/rs696A,并转染LS 174T细胞,检测荧光素酶活性.与转染了pGL3-vector组(阴性对照)相比,转染重组双荧光素酶报告质粒的荧光素酶活性均显著下降(P＜0.001).对于rs696G＞A,含等位基因A的两种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696A和pGL3-rs8904T/rs696A的荧光素酶活性分别比含等位基因G的两种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696G和pGL3-rs8904T/rs696G下降约45.1％ (P＜0.05)和56.1％ (P＜0.001).对于rs8904C＞T,含等位基因T的两种重组质粒分别与含等位基因C的两种重组质粒相比,荧光素酶活性无显著性差异.NFKBIA基因3'UTR双荧光素酶报告基因载体构建成功,并发现rs696G＞A会减弱荧光素酶活性的表达,rs8904C＞T对荧光素酶活性的表达无明显影响.

OATP1B1介导中药组分丹参素与瑞舒伐他汀的相互作用机制

本文探讨了基于药物转运体介导中药组分丹参素与瑞舒伐他汀相互作用的机制.首先初步探讨瑞舒伐他汀合用丹参素后瑞舒伐他汀在大鼠体内的药代动力学变化;然后建立大鼠原代肝细胞模型,探索丹参素对大鼠原代肝细胞摄取瑞舒伐他汀的影响,后利用慢病毒载体技术构建稳定表达OATP1B1 *1a与OATP1B1*5的HEK293T细胞模型,探索丹参素对表达OATP1B1 *1a与OATP1B1*5的HEK293T细胞摄取瑞舒伐他汀的影响.合用丹参素后,大鼠体内瑞舒伐他汀的药代动力学参数Cmax、AUC0-t、AUC0-∞分别增加约123％、194％和195％,而CLZ/F值降低了60％;20、40和80 μmol·L-1丹参素对肝细胞摄取瑞舒伐他汀均有抑制作用,并使其摄取分别减少了3.13％、41.15％和74.62％;抑制参数IC50为(53.04±2.43) μmol·L-1.丹参素对OATP1B1介导瑞舒伐他汀转运的抑制作用与OATP1B1基因型有关,对突变型OATP1B1*5的转运表现出明显的竞争抑制作用,药物浓度为1和10 μmol·L-1时,对OATP1B1*5转运瑞舒伐他汀分别减少了(39.11 ±4.94)％和(63.61 ±3.94)％,而当为野生型OATP1B1 *1a时,丹参素的抑制作用较轻,1和10 μmol·L-1丹参素对OATP1B1 *1a转运瑞舒伐他汀分别减少了(8.22±2.40)％和(11.56±3.04)％.丹参素可显著影响瑞舒伐他汀在大鼠体内的药代动力学特征,这与竞争抑制特异表达于肝细胞的OATP1B1介导瑞舒伐他汀的转运密切相关,但由于OATP1B1基因突变导致其转运能力的改变,丹参素只对OATP1B1*5介导瑞舒伐他汀转运表现出竞争抑制作用,对OATP1B1 *1a并无明显抑制作用.

黄芩醇提物干预D-半乳糖致衰老大鼠的尿液代谢组学研究

研究黄芩对D-半乳糖致衰老模型大鼠的影响,初步探讨黄芩的抗衰老作用机制.将SD大鼠随机分为5组,即空白组、模型组、黄芩低、中、高剂量(分别为50、100和200 mg·kg-1)组,采用皮下注射D-半乳糖(100mg·kg-1)法,建立亚急性衰老大鼠模型,并分别评价衰老大鼠的空间学习记忆能力(Morris water maze)和自主活动(open-field test).采用代谢组学技术对模型大鼠尿液进行NMR数据采集并结合多元统计分析,探讨抗衰老机制.结果表明,黄芩3个剂量均能改善衰老大鼠的行为能力.多元统计分析结果显示,黄芩低中高剂量组能使衰老大鼠尿液中柠檬酸、丙酮酸、乳酸、泛酸、三甲胺和β-羟基丁酸等6个标志物发生不同程度的回调,主要涉及能量代谢、糖代谢和肠菌代谢等代谢途径的调节,表明黄芩发挥抗衰老作用与这些途径相关.

甘松中一个新的咖啡酸酯类化合物

从甘松(Nardostachys chinensis Batal.)中分离得到1个新的咖啡酸酯类化合物和9个已知酚类化合物,通过物理化学性质和波谱学方法鉴定了它们的化学结构,分别为(E)-咖啡酸-赤式-紫丁香基甘油醇酯(1)、(+)-licarin A (2)、柚皮素-4',7-二甲醚(3)、(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、caraphenol A (5)、Z-miyabenol C (6)、原儿茶酸(7)、咖啡酸(8)、没食子酸(9)和香草酸(10).其中,化合物1为新化合物,2、5和6为首次从该属植物中分离得到.

N-{[(硫色满-4-酮-3-基)-苯基]-甲基}乙酰胺类化合物的合成、α-葡萄糖苷酶抑制活性评价及分子对接研究

利用Dakin-West反应“一锅法”合成了12个N-{[(硫色满-4-酮-3-基)-苯基]-甲基}乙酰胺衍生物.所合成的化合物经1H NMR、13C NMR、IR和HR-MS等方法进行了结构表征.葡萄糖氧化酶法测试结果表明,大多数目标分子表现出α-葡萄糖苷酶抑制活性,其中化合物4k抑制作用强(在浓度为5.39 mmol·L-1时,绝对抑制活性达到87.3％).根据活性测试结果对合成化合物的构效关系进行了讨论.用分子对接方法研究了化合物4k与α-葡萄糖苷酶的作用模式,为进一步的研究提供了依据.

济南游动放线菌CPCC 200056产生的3-去甲创新霉素发现与鉴定

创新霉素是我国科学家于20世纪70年代从游动放线菌中发现的一个具有含氮、含硫杂环新骨架的抗生素,曾作为抗菌药物进行了应用开发等研究.本研究采用ISP2固体培养基对创新霉素产生菌——济南游动放线菌CPCC 200056进行了发酵培养、乙酸乙酯萃取、TLC和LC-MS分析,发现了第一个天然的创新霉素类似物组分.经分离纯化和NMR解析,确定该类似物为3-去甲创新霉素(3-demethylchuangxinmycin),为新天然产物.与创新霉素相比,3-去甲创新霉素的抗菌活性比创新霉素显著降低.3-去甲创新霉素的发现不仅丰富了对创新霉素构效关系的认识,而且为研究创新霉素生物合成机制提供了线索.

姜黄素微球中药物存在形式与释药行为的关系研究

为了研究姜黄素微球中药物的存在形式及其与微球释药行为的关系,本文以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,使用SPG (shirasu porous glass)膜乳化装置制备了高、中、低3种载药量的姜黄素微球,并使用高效液相色谱法(HPLC)对3批微球的体外释放情况进行了研究.利用扫描电镜(SEM)对3批微球的形貌进行了观察,同时利用X-射线粉末衍射(XRD)、差示扫描量热仪(DSC)和红外光谱(IR)对微球中姜黄素的存在形式进行研究.制备的3批微球的载药量分别为(5.85±0.21)％、(11.71 ±0.39)％和(15.41±0.40)％,姜黄素与PLGA之间并未发生化学连接.在载药量低的微球中,姜黄素以无定形的非晶体状态分散在PLGA中,但载药量较高的两批微球中分别出现(2.12±0.64)％和(5.66±0.07)％药物结晶.结果发现,不同载药量的微球中姜黄素的存在形式不尽相同,同时这种区别也导致了3批微球的体外释放呈现梯度式差异.

关节腔注射用盐酸青藤碱原位液晶的制备及体内外评价

本文以植烷三醇(phytantriol,PT)、乙醇(ethanol,ET)和水三组分体系制备原位立方液晶(in situ cubic liquid crystal,ISV2),采用三元相图法优选出各向同性溶液,以可注射性、pH值、相转化少吸水量、相转化时间作为指标优化处方;在ISV2处方基础上加入维生素E醋酸酯(vitamin E acetate,VitEA)制备原位六角相液晶(in situ hexagonal liquid crystal,ISH2),以体外释药行为作为考察指标优化VitEA的添加量;采用小角度X射线散射对ISV2和ISH2吸水相转化后的液晶结构进行表征;对ISV2和ISH2的流变学性质进行研究;采用动态透析法对ISV2和ISH2体外释药行为进行比较;以佐剂性关节炎大鼠作为模型动物,盐酸青藤碱(sinomenine hydrochloride,SMH)作为模型药物,考察ISH2关节局部药动学.优选出的ISV2 (PT/ET/水,64∶16∶20,w/w/w;载药量为6 mg·g-1)可用于注射,pH值为5.20,相转化少吸水量为63.33 μL,相转化时间为4.21 s,体外可缓释SMH长达144h.优选出的ISH2 (PT/VitEA/ET/水,60.8∶3.2∶16∶20,w/w/w/w;载药量为6 mg·g-1)可用于注射,pH值为5.51,体外可缓释SMH长达240 h.大鼠关节腔局部药动学研究结果显示,ISH2组与溶液组相比,其t1/2α、t1/2β、tmax和MRT0-∞明显延长,ISH2组的AUC0-∞是溶液组的6.01倍.本研究制备的ISH2关节腔给药后可在关节局部缓释药物,延长药物驻留时间,提高药物利用度,具有较好的应用前景.

槟榔碱对大鼠肝脏CYP2E1的体内诱导作用

基于SRAP标记的白芨遗传多样性和遗传结构评价

白芨是我国传统中药材,近年来,由于生态环境的破坏和人为的过度采挖,白芨野生资源急剧减少,濒临灭绝,因此对其野生资源的评价及保护已刻不容缓.本文通过SRAP分子标记探讨了12个白芨野生居群的遗传多样性和遗传结构.结果表明,白芨具有较高的遗传多样性水平,其中多态性条带有210条,平均多态位点百分比(PPB)为90.48％,平均信息香农指数(Ⅰ)为0.5096,平均基因杂合度为0.3494.白芨居群间存在中等水平的遗传分化,遗传分化指数Gst为0.260 9.UPGMA聚类分析表明12个居群可分为三个支系,我国东部江苏南京、江苏镇江、安徽宣城和浙江杭州4个居群聚为一支,中部湖北、湖南、江西以及贵州7个居群聚为一大支,西部云南文山居群单独聚为一支.Mantel test检测表明,遗传距离和地理距离间有显著正相关性(r=0.6329;P＜0.000 1).本文为白芨野生资源的就地保护和迁地保护提供了理论依据.

绿原酸、隐绿原酸和新绿原酸在中性和碱性pH条件下的降解动力学

本文研究了绿原酸(5-CQA)及其同分异构体隐绿原酸(4-CQA)和新绿原酸(3-CQA)在中性和碱性pH条件下的降解规律.结果表明,3-、4-、5-CQA在酸性pH条件下较为稳定,在中性和碱性pH条件下不稳定,且随碱性的增强,降解越强烈,转化成的CQA总量越低,但并不生成咖啡酸.同时,3-CQA和5-CQA在水解时更趋向于转化为4-CQA,而4-CQA水解时更趋向于转化为3-CQA,而非5-CQA.通过比较中性和碱性pH条件下3-、4-、5-CQA的降解动力学参数发现,反应速率常数k值的大小顺序为4-CQA＞3-CQA＞5-CQA,降解半衰期t1/2值的大小顺序为4-CQA＜3-CQA ＜5-CQA,说明在中性和碱性pH条件下三者的稳定性顺序为4-CQA＜3-CQA＜5-CQA.

同位素内标-超高效液相色谱串联质谱法检测麦芽中11种真菌毒素

采用同位素内标法定量,建立了同时测定麦芽药材中11种真菌毒素污染水平的超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS).采用乙腈-水-乙酸(80∶19∶1)溶剂系统超声提取药材中真菌毒素,离心、过滤后,加入[13C17]-AFB1及[13C18]-ZEN标记的真菌毒素混合同位素标准溶液,以含0.1％甲酸的甲醇溶液-2 mmol·L-1乙酸铵水溶液为流动相于Phenomenex Kinetex C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6 μm)上梯度洗脱分离,以电喷雾离子源正负离子切换模式多反应监测方式检测(MRM).结果表明,11种真菌毒素在采用基质添加内标稳定同位素法定量时于各自的浓度范围内线性关系良好,r＞ 0.999 1,加标回收率为75.0％～117.0％,RSDs＜ 5.1％,检测限(LODs)和定量限(LOQs)分别为0.05～30 μg·kg-1和0.15～87.5 μg·kg-1,远低于欧盟规定的真菌毒素大允许残留量(MRLs).所测的20批麦芽样品中,9批检测到真菌毒素残留,通过相同保留时间处的特征离子二级碎片排除了假阳性结果.该方法的样品前处理过程简便快捷、检测方法重现性好、灵敏度高,适用于复杂麦芽基质中多种真菌毒素的同时定性定量测定.

胆黄连在实热证大鼠体内的整合药代动力学与药效学的相关性

研究胆黄连中生物碱成分的整合药代动力学与药效作用的相关性.大鼠分为正常组、模型组和给药组,模型组采用实热证模型,各组于给药后0、3、6和9h分别测定各大鼠的直肠体温,并采用UPLC-MS/MS方法检测胆黄连灌胃给药后不同时间点的小檗碱、药根碱和巴马汀的血药浓度,并结合权重系数,计算胆黄连中3种生物碱成分整合药代动力学参数,并与药效体温数据结果相结合,分析二者的相关性.胆黄连中生物碱成分在血浆中的达峰时间是1.11 h,胆黄连的解热作用在3h显著;胆黄连的整合药时曲线出现双峰现象,第二次达峰时间是4.82 h,胆黄连的解热作用在3～6 h较为显著,在6～9 h解热作用明显降低.胆黄连中的生物碱成分在体内的动态变化过程与解热药效作用之间的相关性良好.

金属离子对何首乌中二苯乙烯苷稳定性的影响

汤剂是中药临床常使用的剂型之一,汤剂中化学成分的稳定性关乎临床药效与安全性.有关汤剂用水中的金属离子对中药成分稳定性影响的研究报道较少,汤剂用水是否要控制金属离子也缺少科学依据.本文以何首乌中主要成分二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxy stilbene-2-O-β-D-glucoside,THSG)为例,比较研究了普通自来水、去离子水以及含不同浓度金属离子水对THSG稳定性影响的规律.结果表明,室温避光存放10天后,去离子水中THSG降解7％,而自来水中THSG完全降解;不同种类金属离子溶液均可使THSG含量下降,且下降程度与离子浓度呈浓度依赖关系.同一浓度下,Fe3+和Fe2+对THSG稳定性影响大,其中500 ppm(1 ppm=1×10-6 g·mL-1)浓度Fe3+和Fe2+水溶液中THSG含量下降超过98％;通过超高效液相高分辨质谱联用仪分析,在自来水以及含Cu2+、Ca2+、Zn2+、Mg2+和Al3+的水中发现THSG主要降解产物的可能结构为对羟基苯甲醛(相对分子质量122.036 7)和2,3,5-三羟基苯甲醛-2-O-葡萄糖苷(相对分子质量316.079 4);在含Fe3+和Fe2+的水中还发现可能为THSG加水二聚物的产物.上述结果表明,水中金属离子会显著影响THSG在水中的稳定性,提示如果水中金属离子不加以控制,则会对汤剂及含THSG液体制剂的临床疗效和安全性产生较大影响.临床煎制含何首乌的汤剂应使用去离子水,从而可避免在保存过程中其主要成分THSG的降解.同时,使用自来水煎制的汤剂应在短时间内服用.研究结果对加强金属离子对其他含不稳定基团(如羟基、不饱和键等)化学成分的中药汤剂稳定性的研究提供了重要信息和参考.

青蒿素类抗疟药的研制

1 青蒿素的研究背景1.1 举国体制研究抗疟药物20世纪60年代美国发动侵略越南战争,当地疟疾肆虐,疟原虫对已有药物产生耐药,使战斗力严重减弱.应越南要求中国提供有效抗疟药物,我国政府决定全国范围研究新型抗疟药,遂于1967年5月23日成立了研究协作组,简称“523任务”,涵盖60多个研究单位,500多位研究人员.在由启动研究到临床实验和应用的整个研发过程,统一由“523任务”调度,并非固定在一个研究单位中(张文虎.创新中的社会关系:围绕青蒿素的几个争论.自然辩证法通讯.2009,31:32-39).

下肢动脉硬化闭塞症患者股动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞极化表型与自噬信号相关性的研究

本文探讨了下肢动脉硬化闭塞症患者股动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞自噬与极化的相互联系.取下肢动脉硬化闭塞症截肢患者的股动脉标本,分别行HE (hematoxylin and eosin)、油红O和免疫荧光染色,观察动脉粥样硬化斑块形态、斑块内巨噬细胞表型及自噬体表达;采用实时荧光定量RT-PCR技术检测动脉组织巨噬细胞M1与M2型标记物的mRNA表达水平;采用Western blot方法检测巨噬细胞极化信号通路及自噬蛋白表达水平.结果显示,动脉标本染色可见明显脂质沉积和大量泡沫细胞及炎性细胞浸润,纤维斑块以M1型巨噬细胞为主,粥样斑块M1与M2表型同时高表达,其中M2型巨噬细胞升高尤为显著,且粥样斑块自噬水平明显高于纤维斑块.纤维斑块组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)、诱导性—氧化氮合成酶(iNOS)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素12 (IL-12) mRNA表达水平均明显高于粥样斑块组织(P＜0.01或0.05),而精氨酸酶1 (Arg-1)、转化生长因子β(TGF-β)、CD163及白细胞介素10 (IL-10)表达水平明显低于粥样斑块组织(P＜0.01).纤维斑块组织p-STAT1及NF-κB表达水平显著升高(P＜0.01),而粥样斑块组织p-STAT6表达显著升高(P＜0.01),粥样斑块组织自噬体蛋白LC3-Ⅱ表达水平明显高于纤维斑块组织(P＜0.01).研究提示早期动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞通过p-STAT1/NF-κB通路诱导向M1型极化,表达适度的自噬水平;而晚期斑块中巨噬细胞则通过激活p-STAT6通路诱导向M2型极化的过渡,M2型巨噬细胞较M1型具有更高的自噬水平.

自噬的分子标志物

自噬(autophagy)是真核细胞所特有的通过溶酶体降解细胞内物质成分的过程.自噬主要包括大自噬(macroautophagy)、小自噬(microautophagy)和分子伴侣介导的自噬(chaperon-mediated autophagy,CMA),此外还包括线粒体自噬(mitophagy)、聚集体自噬(aggrephagy)等选择性自噬.根据新的研究进展,本文总结了大自噬、分子伴侣介导的自噬以及线粒体自噬中的一些重要的分子标志物.

自噬对抗肿瘤药物毒性的调控作用研究进展

自噬是调节真核细胞生长、死亡、能量代谢的重要生物学机制.大量证据表明自噬参与多种抗肿瘤药物所导致的毒性,特别与心脏、肝脏及神经的损伤关系密切,目前对于自噬的调控作用是抗肿瘤药物毒性研究领域的热点.由于自噬对于心脏、肝脏和神经的功能是一把双刃剑,因此自噬对抗肿瘤药物毒性的调控作用是极其复杂的.这里作者将介绍自噬的基本概念并总结目前自噬对抗肿瘤药物毒性的调控作用.通过梳理这方面的研究成果将有助于抗肿瘤药物毒性的基础研究,并为抗肿瘤药物的毒性提供潜在的解决方案.

自噬在肿瘤发生与发展过程中的调节作用

自噬是经典的细胞内能量代谢和自我更新机制,在生物发育和维持机体稳态过程中发挥重要作用.近年来的大量研究表明自噬与肿瘤密切相关,自噬可以调节肿瘤的形成、增殖、转移以及能量代谢等诸多方面.同时,以调节自噬活性为理论依据的抗肿瘤药物己应用于临床治疗,通过改善自噬活性而抑制肿瘤已经成为肿瘤治疗的新思路.本文总结概述了近年来自噬相关的调节机制、自噬与肿瘤的关系及其在肿瘤治疗中的应用.

白藜芦醇诱导细胞自噬在神经退行性疾病进展中的作用

细胞自噬是清除自身异常蛋白和受损细胞器的过程,在调节细胞内环境稳态、细胞生长、发育和衰老以及疾病发生发展中起重要作用.自噬功能障碍与神经退行性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病等密切相关.这些疾病的大脑神经元内大多存在特定的病理性蛋白的异常聚集.白藜芦醇对自噬具有调节作用,能促进自噬流的发生,有效清除易形成聚集体的病理性蛋白,对神经退行性疾病具有一定的防治潜力.本文综述了白藜芦醇调节细胞自噬方面的功能及在神经退行性疾病防治的应用.

帕金森病中的自噬途径与关键药物靶点

帕金森病(PD)是一种常见的神经退行性疾病.在过去几十年中,对PD的发病机制的探索已有了较大的进步,环境因素和遗传因素都会导致PD的发生,然而它的具体发病机制仍然未知.近的研究表明自噬过程或许与PD密切相关,在许多PD患者和动物模型中都观察到了异常的自噬水平.此外,一些PD相关蛋白,如α-synuclein、Parkin和PINK1等都被发现参与自噬的调控,被认为与PD的发病机制相关.本文综述了几种重要PD相关蛋白在自噬途径中的作用,同时概述了通过调节自噬过程来治疗PD的潜在策略.

自噬受体介导的非自噬降解功能研究进展

近年来,越来越多的证据表明,自噬受体在介导泛素化及非泛素化蛋白转运至自噬体降解过程中扮演了重要角色.自噬受体可结合位于吞噬泡或者自噬体膜表面的微管相关蛋白1轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)识别相关蛋白携带的信号,将其精确地靶向自噬溶酶体.然而,自噬受体蛋白结构中所包含的多种结构域决定了其多样的功能,并非仅限于自噬.迄今为止,多项研究发现细胞中存在多种蛋白不仅可作为自噬受体参与细胞自噬,也可能作为信号通路的分子开关调节细胞的凋亡和存活.因此充分理解自噬受体蛋白的动态作用机制对探索细胞中某些信号分子之间的联系、疾病的生理或病理过程具有重要指导意义.本综述汇总了近年来发现的自噬受体蛋白,着重介绍其在细胞内介导的非自噬降解功能及其在细胞信号转导中的研究进展.

亚硝酸钠通过线粒体自噬增强人肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力

亚硝酸盐对细胞具有独特的氧化还原作用,可以促进肝癌细胞侵袭和转移,但是具体机制尚不清楚.癌细胞通过线粒体自噬,清除多余的线粒体,维持细胞的恶性特征.本文旨在探讨亚硝酸盐对肝癌细胞线粒体自噬的作用以及活性氧(ROS)和缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)在其中的作用.用系列浓度的亚硝酸钠在常氧下孵育人肝癌SMMC-7721细胞24 h,用MTT法测定吸光度值反映细胞活力,发现16 mg·L-1亚硝酸钠对细胞活力的促进作用强.Transwell小室实验显示,亚硝酸钠孵育细胞24 h,可以明显增强细胞迁移和侵袭能力;用微丝示踪剂和Mito-Tracker Red共染色,荧光显微镜下发现,亚硝酸钠促进应力纤维和伪足增加,线粒体呈现核周分布;以上现象均可以被活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)抑制.用ROS示踪剂DCFH-DA孵育,在荧光显微镜下发现,亚硝酸钠明显增强细胞内ROS水平.LC3免疫荧光和Western blot结果显示,亚硝酸钠明显增强细胞的自噬流;透射电镜观察发现,亚硝酸钠诱导细胞自噬溶酶体形成,NAC阻止自噬体降解.RT-PCR结果显示,亚硝酸钠明显降低线粒体标志分子COX Ⅰ和COX Ⅳ基因的表达;Mito-Tracker Green染色,激光共聚焦显微镜下发现,亚硝酸钠明显减少线粒体质量;Western blot结果显示,HIF-1α、线粒体自噬标志分子Beclin-1和Bnip3蛋白表达水平升高,这些现象同样被NAC所逆转.结果表明,亚硝酸钠(16 mg·L-1)增强SMMC-7721细胞ROS水平,通过HIF-1α诱导线粒体自噬,促进细胞迁移和侵袭.

形态学检测在自噬研究中的应用

自噬是降解损伤及丧失功能的细胞器或蛋白,维持细胞更新和稳态的关键细胞过程.自噬可分为三个相对独立的步骤:自噬泡起始形成阶段、自噬小体形成阶段以及成熟降解阶段,每个阶段都有其相对独特的形态学特征或分子标志物变化.本文综述了自噬研究中常用的形态学研究方法、结果阐释及这些过程中的关键注意事项.

自噬活性物质筛选系统研究进展

细胞自噬是近年来生物医学领域的研究热点,参与机体的多种生理及病理过程.自噬参与多种疾病的发生发展,以自噬为靶点的药物开发亦成为新的研究热点.随着对自噬研究的深入,如何对该过程进行精确的定性、定量研究以及如何通过实验手段干预自噬进程仍为现阶段研究的重点.同时,利用自噬的定量研究方法建立自噬活性筛选系统可对自噬活性物质进行筛选鉴定,为针对多种疾病的临床药物开发提供候选化合物.本文总结了多种自噬活性筛选系统的建立原理和方法.

自噬流的检测方法

自噬是调节真核细胞生长、死亡和能量代谢的重要生物学机制.细胞自噬行使其生物学功能的前提是自噬流的活化.大量证据表明自噬流受损与多种慢性炎性疾病,特别是肿瘤、神经退行性疾病及组织纤维化的发病密切相关,目前对于自噬流的检测是自噬与其相关疾病研究领域的热点.由于自噬流是一个由多个步骤组成的动态过程,因此往往需要精细的实验才能准确判断自噬流状态.本文将介绍自噬流的基本概念并总结目前常规使用的自噬流检测方法.这些方法将有助于自噬生物学机制的研究,并为自噬相关药物筛选提供有效的解决方案.