几种抑制HIV-1复制酶的植物成分

植物活性成分结构多样性和其作用多靶点的特点,已使其成为寻找抗HIV-1药物的重要来源之一.为从植物中获得结构新颖的抗HIV-1活性先导化合物,本文应用HIV-1蛋白酶(PR)、逆转录酶(RT)和整合酶(IN)筛选模型,对45个来源于毛莨科、芸香科和五味子科等植物的结构清楚的化合物进行了体外活性测定.12个三萜类化合物中8个具有抑制HIV-1 PR活性,其中2个还具有抑制IN活性;15个木脂素类化合物中2个具有抑制HIV-1 RT活性.6个生物碱类、7个黄酮类及5个其他结构类型的化合物都无明显抑制3种复制酶的作用.植物来源的三萜类化合物抑制PR或IN的活性较好,值得深入研究.

HIV-1前体蛋白早成熟化激活剂筛选模型的建立及应用

HIV-1蛋白酶(PR)活性的严格调控对于病毒的生存至关重要.在病毒蛋白表达及病毒颗粒装配过程中,处于病毒前体蛋白Gag-Pol中的蛋白酶必须以无活性状态存在,避免前体蛋白Gag-Pol和Gag被提前酶切加工(前体蛋白早成熟化).干扰HIV-1蛋白酶活性的调控机制,特异性的激活前体蛋白中的蛋白酶,诱导前体蛋白早成熟化,就可以直接抑制病毒的复制.根据这一设想,运用生物发光共振能量转移技术,建立细胞水平的HIV-1前体蛋白早成熟化激活剂筛选模型,并通过3 000个化合物的试验性筛选对筛选模型进行评价.研究结果表明该筛选方法灵敏可靠,特异性高,重复性好(Z'因子为0.905).

去甲斑蝥素体外抗HIV-1作用研究

为从天然产物中获得与现有药物作用机制不同、结构新颖的有效抗HIV-1化合物,在细胞培养系统及体外无细胞复制酶系统中进行抗HIV-1药物筛选.结果发现,去甲斑蝥素(NCTD)在传代和原代淋巴细胞培养系统内抑制HIV-1实验室传代病毒株的p24抗原,在人外周血单核细胞培养系统内对临床分离的AZT敏感病毒株和耐药病毒株也有抑制作用.半数抑制浓度为1.8～20.2 μmol·L~(-1),在MT-4细胞培养系统内与AZT合用的联合指数<0.3,具有明显的协同抗HIV-1作用,但在体外NCTD对HIV-1逆转录酶、整合酶和蛋白酶均无抑制作用.由于NCTD结构简单,不同于现有结构类型的抗HIV-1药物,如经修饰改造并优化,可望获得高效低毒的新型抗HIV-1化合物.

中药复方祛毒增宁胶囊抗艾滋病毒体外药效学的研究

本研究以现代医学为基础,结合中医辨症的原则,特别是经过体外抗病毒实验的筛选,选择既具有抗病毒作用,可增强机体免疫功能又符合中医辨症原则,以黄芩等4味中药组成复方,经过正交设计,优选提取溶剂和工艺,制成胶囊,暂定名为祛毒增宁胶囊(ZL-1).体外药效学研究表明,祛毒增宁胶囊可有效抑制病毒在MT4、HeLa和PBMC中的复制,IC_(50)分别为105.2、70.7及77.4 μg·mL~(-1).祛毒增宁胶囊中主要成分JH与齐多夫定(AZT)不同剂量配伍,表现出明显的增效作用,同时,对蛋白酶抑制剂抗性株也有明显的抑制作用,在0.12 mg·mL~(-1)质量浓度下抑制率为100%.此制剂已完成临床前研究,并获批准进入临床观察阶段.

环己酰亚胺及其衍生物的抗病毒活性研究

环己酰亚胺能抑制大多真核细胞的蛋白合成,常作为生化研究试剂被广泛使用.本文对其抗病毒活性进行了较系统研究,结果显示,环己酰亚胺体外对人类免疫缺陷病毒、流感病毒、柯萨奇病毒、肠道病毒、单纯疱疹病毒及人巨细胞病毒等多种RNA病毒和DNA病毒显示出很强的抑制作用.尤其是对目前临床上尚缺乏有效治疗药物的柯萨奇病毒B及肠道病毒EV71的强抑制作用令人关注.本文对环己酰亚胺的结构修饰及其构效关系进行了初步探讨,环己酰亚胺分子结构中的C-2'羟基和C-2"羰基为抗病毒活性必需基团,对C-2'羟基和C-2"羰基的修饰均导致其抗病毒活性的降低或消失.

LC-MS/MS法同时测定洛匹那韦和利托那韦的血浆浓度

建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定人血浆中洛匹那韦(LPV)、利托那韦(RTV)的浓度.血浆样品经碱化沉淀蛋白后,经乙酸乙酯液-液萃取,以甲醇-0.1%甲酸水溶液(80:20)为流动相,AgilentZORBAX Eclipse XDB-C_(18)(150 mm×4.6 mmID,5 μm)柱分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对LPV为629.6→155.2,RTV为721.4→268.2,内标替米沙坦(TEL)为515.2→276.2.测定血浆中LPV线性范围为62.5～10 000 ng·mL~(-1),检测限为15 pg·mL~(-1),RTV的线性范围为12.5～2 000 ng·mL~(-1),检测限为8 pg·mL~(-1),r均大于0.99.日内和日间精密度均小于15%,提取回收率均大于75%.该法选择性强、灵敏度高、重现性好,能同时快速、准确测定人血浆LPV和RTV浓度,为临床治疗药物浓度监测(TDM)奠定基础.

喹啉酮酸类化合物的设计合成与抗HIV-1整合酶活性研究

以HIV-1整合酶为靶点,设计并合成了8个含喹啉酮酸类新化合物,其结构经~1H NMR和MS确证.用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA方法)测定了其体外抗HIV-1整合酶活性.结果表明,目标化合物中D-2、D-4和D-7对HIV-1整合酶的抑制活性小于100 pmol·L~(-1),有待对此类化合物作进一步细胞水平的活性评价.

以病毒RNA核转运为靶点的抗HIV-1药物筛选模型的建立及应用

目前.临床使用的抗AIDS一线药物主要是HIV逆转录酶抑制剂和蛋白质酶抑制剂.但是,由于这类药物价格昂贵、严重的副作用、毒性、耐药性等问题U益严重,发展新作用机制的抗HIV-1药物已成当务之急.因此,本课题以HIV-1病毒RNA核转运关键蛋白Rev为靶点,建立了新型抗HIV药物筛选模型,以期寻找具有新作用机制的抗病毒药物.在筛选模型中,选择了由HIV-1病毒偏爱性密码子所编码的GFP(GFP_(HIV))作为报告基因,用于快速简便地分析样品对Rev依赖的RNA核转运的影响.选取抑制剂来普霉索B作为模型的阳性对照对本模型进行了初步评价,计算出Z'因子为0.822 0.上述结果初步证明了该模型可用于新型抗HIV药物的筛选.对3 000个化合物进行初筛,阳性率为9.3%,复筛阳性率为7.3%.通过抗病毒活性的测定实验以及对阳性化合物进行免疫印迹检测,后发现IMB7C7这个化合物以病毒RNA核转运为靶点,是具有较好效果的特异性抑制剂.

两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂耐药病毒株的体外选择和鉴定

两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂(nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)JB25和JB26在体外均具有显著的抗HIV活性,为了在临床试验前阐明病毒是否容易对这两种药物产生耐药性及导致耐药性的病毒基因突变,在体外诱导并鉴定了对这两种化合物耐药的HIV-1毒株.以HIV-1 NL4.3作为亲代野生型病毒感染MT-2细胞,从两种化合物2倍的IC_(50)开始,以细胞病变(cytopathic effect,CPE)为指标,将病毒在含有浓度逐渐增加的药物的条件下连续传代,每代均在超过75%的MT-2细胞出现CPE后收集病毒培养上清液,然后取1 mL接种新的MT-2细胞同时提高药物浓度为原来的2倍,共计传12代.JB25在第6代出现L100I(TTA→ATA)突变,在第12代又变成100M(ATA→ATG),L100M是不常见的突变形式,其对HIV NNRTIs耐药的影响未见报道,在第10代还同时出现了对NNRTIs高度耐药的Y188C(TAT→TGT)突变.JB26在第10代出现了L100I(TTA→ATA)突变.JB25和JB26在体外容易产生耐药性,而对JB26耐药比JB25要困难,导致耐药的主要基因突变发生在病毒逆转录酶基因的188和100位密码子.

三个非核苷类逆转录酶抑制剂S-DABO类衍生物的体外抗HIV作用

本文对3个新S-DABO类衍合物(RZK-4、RZK-5、RZK-6)的体外抗HIV活性进行了研究.化合物RZK-4、RZK-5和RZK-6在200 μg·mL~(-1)的浓度下均能完全抑制HIV-1逆转录酶的活性.3个化合物对多种细胞均呈现出低毒性,且均在较低浓度下具有抑制HIV-1病毒实验株、临床株和耐药株的作用,治疗指数为3 704～38 462.其中,化合物RZK-6对HIV-1耐药株HIV-1_(ⅢB) A17具有非常显著的抑制作用.结果表明,这3种S-DABO类衍生物有良好的体外抗HIV-1作用,具有开发成为抗HIV-1药物的前景.

5-苯基-1-苯氨基-1氢-咪唑衍生物的定量结构细胞毒性关系

采用量子化学半经验AMI法和从头计算HF/3-21g*方法,计算了42个抗HIV 5-苯基-1-苯氨基-1氢-咪唑衍生物相关的量子化学参数,特别是计算了相应化合物的溶剂化自由能参数.在此基础上,结合传统理化参数,建立了相关系数高(r=0.938)、标准偏差较小(s=0.125)的回归方程(去掉化合物3);用留一法获得的交叉验证的相关系数平方Q~2=0.799>0.5.研究结果对设计新的低毒抗HIV-1药物具有一定的指导意义.

The development of anti-HIV-1 drugs

二芳基嘧啶类HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂研究进展

2008年FDA批准上市的新一代非核苷类逆转录酶抑制剂Etravirine(TMCl25)和Ⅲ期临床候选药Rilpivirine(TMC278)都是二芳基嘧啶(DAPY)类化合物,均对HIV野生型和多种耐药性病毒株有相当强的抑制作用.DAPY类药物的发现和发展是多学科合作研发新药的成功范例.本文综述了新一代HIV 非核苷类逆转录酶抑制剂DAPY类化合物的发现、发展及新研究进展.

HIV entry inhibitors: progress in development and application

我国中药来源的抗HIV天然化合物研究进展

由于迄今仍无艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)疫苗问世,抗人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)药物仍然是艾滋病治疗的主要手段.传统中药和药用植物来源的天然化合物具有结构多样性、毒性较低、来源广泛等特点,因而在防治艾滋病方面有着独特的优势和巨大的潜力.研究者已经对天然化合物抗HIV作用进行了大量研究,并取得了可喜的成绩,发现了一些生物碱、香豆素、木脂素、黄酮类、萜类、鞣质类、多糖类、蛋白质和多肽类等天然化合物具有抗HIV的活性.然而,多数研究都是在体外试验完成的,大多数天然化合物体外抗HIV活性偏低,而且抗HIV的靶点仍不十分清楚.本文结合笔者实验室研究工作,重点介绍近年来我国传统中药来源的抗HIV活性较强的天然化合物研究进展.

HIV-1融合抑制剂研究现状及发展趋势

HIV-1融合抑制剂是继逆转录酶和蛋白酶抑制剂后的新一类抗HIV感染药物,通过阻断病毒与靶细胞膜的融合从而抑制病毒进入靶细胞,在感染的初始环节切断HIV-1的传播,其中多肽类融合抑制剂T-20已于2003年上市.HIV-1融合抑制剂以HIV-1跨膜糖蛋白gp41为作用靶标,它们是一些天然或合成的多肽以及小分子化合物,通过与gp41功能区结合从而抑制其促融合功能的发挥.近年来,随着对膜融合过程分子机制以及gp41功能研究的不断深入,新的以gp41不同功能区为靶点的融合抑制剂分子不断被发现,成为倍受关注的研究热点之一.本文着重对近年来HIV-1融合抑制剂的研究现状及发展趋势进行综述.

2005～2008年抗HIV-1化学治疗新药的重要研究进展

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)和获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)仍然是全球关注的健康问题,研究开发新型抗HIV化学药物具有重要意义,上市新药的成功研发案例对此可能有借鉴之处.本文对2005～2008年间FDA批准上市的抗HIV-1化学药物及部分候选药物的发现过程和生物活性特点进行了综述.

结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在HIV-1晚期复制的作用及其抑制剂

人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)复制的晚期阶段是整个复制周期中的关键环节.该阶段HIV-1经装配、出芽释放和成熟过程产生能感染新靶细胞的成熟病毒颗粒.结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在此阶段发挥着重要作用,它通过协同自身不同区域,有利于蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA和蛋白质-脂质相互作用,从而促进成熟感染病毒颗粒的产生.针对此阶段设计的药物,可有效地阻断HIV-1成熟,从而抑制病毒感染.本文综述了结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在HIV-1晚期复制的作用及其抑制剂的研究进展.

α,γ-二酮类HIV-1整合酶抑制剂研究进展

整合酶(integrase,IN)是人类免疫缺陷1型病毒(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)复制过程必需的酶,而人类细胞中没有该酶的类似物,理论上抑制IN对人体副作用很小,因此HIV-1 IN成为治疗艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)合理的靶点.本文综述了近年来α,γ二酮类IN抑制剂的发展现状,为发展定量构效关系(quantitative structure-activity relationship,QSAR)、进行虚拟筛选、确认药效团假说和指导合成活性更高的IN抑制剂提供参考.

抗艾滋病毒化学治疗药物的新进展

迄今共有25种抗HIV-1的化学治疗药物在临床使用,包括8种核苷和核苷酸类及4种非核苷类逆转录酶抑制剂,10种蛋白酶抑制剂,2种病毒进入抑制剂和1种整合酶抑制剂.此外,还有20多种针对HIV-1不同靶点的新药进入了临床试验研究阶段.高效抗逆转录病毒治疗具有明显降低病毒载鼍,显著升高CD4~+数目,改善患者生存质量和延长患者生命的效果.通过对于给药时机和药物选择,病毒对药物的耐受,药物引发的代谢并发症,药物间的相互作用等进行的深入研究,HIV-1/AIDS的化学治疗逐步进入了理性的个性化阶段.

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