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  • 应用分子流行病学调查一起HIV-1CRF02_AG家庭内传播

    作者:辛若雷;刘安;孙丽君;李佳;张琴;卢红艳;孙伟东

    目的 通过调查一起家庭内HIV-1传播事件,阐明家庭成员HIV-1毒株传播关系.方法 通过流行病学调查方法,对1例HIV-1抗体筛查有反应孕产妇及其配偶和所育婴儿进行随访和检测.运用一步法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HIV-1 ga基因和pol基因片段,构建系统进化树分析其进化传播关系.结果 孕产妇(EID1107M)在孕期保健期间存在HIV抗体血清阳转现象.其丈夫(EID1107F)随后确诊为HIV-1抗体阳性;其所育婴儿(EID1107I)在出生后8个月HIV-1核酸检测阳性.3个病例均感染HIV-1 CRF02_AG毒株,进化树上聚集成可靠进化簇,拓扑学结构表明“父-母-子”之间的传播关系.结论 加强婚前检查和孕期保健感染性疾病筛查,对阳性孕产妇病例实施及时有效的母婴阻断,避免传染性疾病的家庭内二代传播,提高出生人口质量.

  • 河南省人免疫缺陷病毒1型流行现状研究

    作者:赵飞;王哲;朱谦;崔兆麟

    目的 了解河南省人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)毒株的亚型状况及序列变异、流行特征,分析其传播来源和传播规律.方法 对2006-2007年在河南省采集的1287例HIV-1感染者抽取静脉血,用巢式聚合酶链反应(nest-PCR)对单个核细胞中前病毒脱氧核糖核酸的env基因和gag基因进行扩增,并测定和分析核苷酸序列.结果 1287份样本中存在B'、C亚型及BC、AE两个重组亚型,其在所有分析样本中的比例分别为95.882%(1234/1287)、0.466%(6/1287)、2.875%(37/1287)、0.777%(10/1287).与国内及国际的参考毒株RL42、C.95in21068、07-BC.CN.97.C54A、01AE.TH.90.CM240间的离散率分别为(9.327±0.245)%、(5.214±0.183)%、(6.278±0.194)%、(5.332±0.1 58)%.结论 目前河南省艾滋病感染者中有B'、C亚型及BC、AE两个重组亚型.泰国B'亚型依然占主导地位.B'亚型以既往有偿献血人员为主,BC亚型以性传播为主,AE亚型以性传播及既往献血途径为主,C亚型以性传播为主.

  • 湖北省HIV-1分子流行病学研究

    作者:褚小刚;张险峰;詹发先;汤恒;陈慧萍;彭庭海;龚作炯

    目的 了解湖北省HIV-1基因型分布特征.方法 对湖北省HIV-1主要流行区域进行流行病学调查,应用巢式聚合酶链反应对其中102例HIV-1感染者的env基因V3~V4区、gag基因P17/P24区和tat基因第一外显子区进行扩增,对各基因区阳性扩增样本进行序列测定,并对各基因区核苷酸进行序列分析.结果 所有目标人群中共存在B'、C 2种亚型以及CRF08-BC和CRF01-AE 2种重组毒株,B'亚型在人群和地域上分布广,涉及献血员、受血者以及二者的配偶和性乱人群,主要分布既往有偿献血员集中的地区.CRF08-BC、CRF01-AE重组主要涉及性乱人群,分布于经济发达的城市或地理位置偏南方的地区.C亚型为离散病例,主要涉及静脉毒品注射者.结论 湖北省已由既往单一HIV-1 B'亚型转变为多种亚型、重组亚型流行的复杂局面,各亚型在省内高危人群和地域分布不平衡,各有特点,从总的亚型流行特征来看,HIV-1在湖北省有加快流行和进一步复杂化的趋势.

  • 福建省艾滋病流行特征及流行趋势分析

    作者:严延生;郑兆双;邵一鸣;陈舸;颜苹苹;苏玲;郑健

    目的 分析实验室及流行病学调查等资料 ,认识艾滋病在福建省的流行特征及推测其流行趋势,为制定福建省艾滋病防治策略提供科学依据.方法 使用酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫印迹试验对高危及特定人群标本进行人免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测,对抗体阳性者进行个案流行病学调查及收集艾滋病病人临床资料,采集感染者全血分离淋巴细胞用套式聚合酶链反应扩增HIV-1 DNA片段进行序列分析鉴定病毒亚型.结果 从1987年1月至1997年12月30日止,全省共检测了569 870份标本,检出HIV抗体阳性70例,检出率为0.12‰ .其中AIDS病人21例,已死亡18例.福建省HIV/AIDS病例主要分布在福州、泉州和厦门等经济较发达的沿海地区,以境外感染为主,并向国内蔓延扩散,经异性性接触感染是福建省抗体阳性者的主要感染途径.17例艾滋病病人临床资料分析表明,艾滋病人存活期短,早期症状以持续或反复发热为主,艾滋病病毒序列分析证实HIV-1 E亚型为福建省主要流行株.结论 福建省艾滋病将主要在性乱人群中流行.

  • 广西HIV-1首次流行的分子流行病学分析

    作者:陈杰;刘伟;Nancy LY;Shambavi Subbarao;梁富雄;李荣健;梁绍伶;Timothy D;Mastro;Suranga Saguanwongse;Suthon Wongsheree

    目的 广西自1996年4月起在静脉吸毒者和卖血者中发现HIV感染者,为了解其传染来源和判断其流行趋势,对广西流行的HIV进行分子流行病学分析.方法 选取HIV抗体阳性血清标本44份,分别采用多肽酶免疫法(PEIA)和经逆转录PCR扩增作cDNA序列分析,分别确定其HIV-1基因亚型并加以比较.结果 结果表明广西存在4种HIV-1 M组基因亚型,即B'(泰国B亚型)、C、D、E亚型.在静脉吸毒人群和性混乱者中存在HIV-1 E亚型流行和C亚型感染者;而在卖血者中发现HIV-1 B'和D亚型感染.结论 HIV-1 D亚型感染和E亚型流行已在国内出现,E亚型病毒已由东南亚传入流行并将在我国南部形成新的流行区域.提出血清学分型方法可作为HIV-1基因亚型分析的筛选技术推广应用.

  • 河南省1157份人免疫缺陷病毒1型毒株亚型分析

    作者:赵飞;王哲;李文杰

    目的 了解河南省人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)毒株的亚型状况及序列变异、流行特征,分析其传染来源及传播规律,为河南省艾滋病防治策略提供依据.方法 对2005-2006年在河南全省收集的1157例HIV-1感染者抽取静脉血,分离单个核细胞(PBMC),用套式聚合酶链反应(nest-PCR)对单个核细胞中前病毒脱氧核糖核酸(DNA)的膜蛋白(env)基因进行扩增,并对其C2V3区核苷酸序列进行了测定和分析.结果 1157份样本中存在B'、C亚型及BC、AE 2个重组亚型.其在所有分析样本中的比例分别为96.456%(1116/1157)、0.346%(4/1157)、2.593%(30/1157)、0.605%(7/1157).与国内及国际的参考毒株RL42、C.95in21068、07-BC.CN.97.C54A、01AE.TH.90.CM240间的离散率分别为(8.971±3.182)%、(5.109±0.112)%、(3.568 4±0.254)%、(4.775±0.128)%.B'亚型以既往有偿献血人员为主,BC亚型以性传播为主,AE亚型以性传播及既往献血途径为主,C亚型以性传播为主.结论 目前河南省艾滋病感染者中有B'、C亚型及BC、AE两个重组亚型.泰国B'亚型依然占主导地位.在局部地区,非B'亚型有聚集的现象,应引起当地卫生机构的注意,加大对流动人员的检测.

  • 广东省人免疫缺陷病毒1亚型基因序列特征分析

    作者:万卓越;邢辉;李杰;王玉;刁丽梅;马鹏飞;林鹏;姜树林;邵一鸣

    目的 研究广东省人免疫缺陷病毒1(HIV-1)亚型的基因序列特征.方法 2002年采集100份HIV-1感染者的外周静脉抗凝血,分离单核细胞(PBMC),提取前病毒DNA,通过聚合酶链反应(PCR)扩增,获得包膜蛋白(ENV)区基因的核酸片段,并对其C2~V3及邻区核苷酸序列进行测定和分析.所得序列用GCG软件包进行系统进化树和氨基酸变异分析.结果 经过离散率计算和系统进化树分析后证实,其PCR扩增阳性的75份样品中,44份(58.7%)为重组毒株CRF01-AE(circulating recombinant form 01-AE),27份(36%)为CRF-BC,4份为泰国B'亚型(5.3%).结论 广东省HIV-1以CRF01-AE和CRF-BC为主,也存在泰国B'亚型.目前我省境内有多种亚型存在,流行趋势日益严峻.加强艾滋病患者的治疗,以及控制和预防艾滋病的传播是今后面临的重要任务.

  • 利用新型表达载体一步获得HIV-1核壳蛋白p24纯品

    作者:王自春;滕智平;张晓光;郭秀婵;袁静明;曾毅

    目的利用新型原核表达载体获得人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核壳蛋白p24纯品. 方法采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出HIV-1 HXB2株gag开放阅读框架的内壳蛋白p24的基因片段,将目的基因片段插入到新型表达载体pTXB中构建成重组表达质粒pTXB-p24.表达产物的纯品通过几丁质珠(chitin beads)的亲和与柱上DTT的剪切而得到.用SDS-PAGE和HPLC分析所得纯品的大小和纯度,用Western blot和胶体金实验检测其抗原性. 结果构建的重组表达质粒pTXB-p24经IPTG诱导得到C端融合Intein-CBD的p24蛋白,该蛋白通过几丁质珠(chitin beads)的亲和与柱上DTT的剪切得到纯化的非融合的p24重组蛋白.HPLC分析表明其纯度可达96%,胶体金结果显示纯化的p24可与HIV-1阳性患者的血清反应,具良好的抗原性. 结论利用新型原核表达载体可一步获得纯度为96%的非融合p24抗原纯品,为大规模生产该蛋白提供了可靠的保证.

  • 2006年北京市外来人口中HIV-1感染者流行毒株gag基因序列测定和亚型分析

    作者:叶景荣;邢辉;孙伟东;黑发欣;赵月娟;刘胜牙;张启云;张琴;刘海林;卢红艳;邵一鸣

    目的 了解北京市外来人口中HIV-1亚型的特点和流行规律.方法 随机采集北京市2006年外来人口中新确证HIV-1感染者的抗凝全血标本80份,分离血浆,提取病毒RNA,用套式聚合酶链反应扩增病毒gag基因,并进行序列测定和亚型分析.结果 系统进化分析确定北京市外来人口HIV-1毒株属于8个亚型,分别为B亚型4份,泰国B亚型15份,C亚型1份,CRF01_AE亚型5份,CRF02_AG亚型1份,CRF07_BC亚型29份,CRF08_BC亚型3份,CRF15_01B亚型1份.结论 北京市外来人口中已存在8种HIV-1亚型和流行重组型,应该加强对HIV-1亚型变异的监测.

  • 北京市2006年新确认HIV-1感染者耐药突变的流行性研究

    作者:叶景荣;李洋;张启云;黑发欣;陈强;张琴;白立石

    目的 研究北京市2006年新确认HIV-1感染者毒株的耐药突变本底数据.方法 随机选取北京市2006年新确认HIV-1感染者抗凝全血标本50份,提取血浆病毒RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1 pol区基因片段,并进行序列测定及耐药基因型分析.结果 成功扩增出34份标本的pol区基因;在1例样本的蛋白酶编码区检测出1个主要耐药突变,7例样本检测出7个次要耐药突变,主要耐药突变为M46L,毒株是CRF01_AE亚型,次要耐药突变有4种,出现的频率分别为A71T(2个)、A71V(3个)、Q58E(1个)、V11IV(1个).在14例样本逆转录酶编码区检测出一种或多种核苷类和(或)非核苷类逆转录酶抑制剂耐药突变,9例标本检出核苷类逆转录酶抑制剂耐药突变,出现频率分别为:V118I(42.9%)、M184V(7.1%)、A62V(7.1%)、K70T(7.1%)、K65R(7.1%)、K219N(7.1%)、T69d(7.1%)、V75LV(7.1%)、K219R(7.1%);10例标本检出核苷类逆转录酶抑制剂耐药突变,出现的频率分别为V1061(35.5%)、Y181C(15.4%)、K103KR(7.7%)、K103R(7.7%)、L100LV(7.7%)、V1081(7.7%)、V179D(7.7%)、V179DV(7.7%).结论 北京市2006年新确认HIV-1感染者毒株中已经存在一定比例耐药突变,有必要定期进行耐药性监测研究.

  • HIV-1高暴露持续血清阴性者对Nef、Gag肽段库的特异性CTL应答的研究

    作者:焦洋;谢静;韩扬;邱志峰;左玲燕;王爱霞;李太生

    目的 研究中国HIV-1高暴露持续血清阴性(highly exposed persistently seronegative,HEPS)者的Nef、Gag特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)应答特点,探讨HIV-1特异性CTL应答在这类特殊人群中抵抗感染的作用机制.方法 选取10例HIV-1高暴露持续血清阴性者,11例经性接触感染且从未接受抗病毒治疗的HIV/AIDS患者及4例未经暴露的健康志愿者.以覆盖HIV-1 gag全长和部分nef的14个肽段库为刺激原,应用IFN-γ ELISPOT法测定3组人群的特异性CTL应答,并对3组的应答强度、宽度以及对肽段库识别比例进行比较.结果 50%(5/10)的HEPS,100%(11/11)的HIV/AIDS患者均存在Nef及Gag特异性CTL应答,而4例健康对照均为阴性.存在应答的HEPS者对14个肽段库的平均应答强度和宽度分别是HIV/AIDS患者的4.3%和37.7%.在HEPS者中主要识别的肽段库均为HIV/AIDS患者中识别比例相对较低的肽段库.结论 与HIV/AIDS患者相比,HEPS者中的HIV-1特异性CTL应答存在着不同的特点和规律,可能在保护机体免于HIV-1感染中发挥着重要作用.

  • 1例以格林-巴利综合征为首发表现的急性HIV感染患者的护理

    作者:左玲燕;宋书梅;谢静;韩扬;徐珊;李太生

    报告1例以格林-巴利综合征为首发表现的急性人类免疫缺陷病毒感染患者的护理.在为患者进行全面的生活护理和营养支持基础上,保持呼吸道通畅,进行有效心理护理、功能锻炼,使其病情得到有效控制.同时该病例提示,在为急性、危重患者进行抢救及治疗护理的操作过程中,应秉承标准性预防原则,增强自我防护意识.

  • 中国部分地区未经抗病毒治疗的HIV-1感染者耐药性突变分析

    作者:尹春煜;卢洪洲;黄潇潇;李晓鸥;娄国强;翁心华

    目的 了解我国部分地区HIV-1感染者原发性耐药基因突变的发生情况及亚型分布.方法 收集浙江、上海、河南及安徽未经治疗的HIV-1感染者的血浆样本88份,采用反转录聚合酶链反应扩增pol基因片段,进行序列测定以及耐药性突变分析,并应用PHYLIP等软件构建进化树.应用SPSS 13.0软件进行统计分析,两样本构成比的比较采用Fisher's精确检验.结果 共获得79份HIV-1分离株的pol基因序列,亚型分析表明,54例(68.4%)为B亚型,22例(24.8%)为CRF01 _AE重组体,另有2例(2.5%) CRF07_BC重组体和1例(1.3%) CRF08_BC重组体.在7例(7/79,8.9%)样本中发现了有关抗反转录病毒药物的主要耐药性突变,其中3例( 3/79,3.8%)为核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)耐药性突变,4例(4/79,5.1%)为非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药性突变;所有样本均未发现对蛋白酶类(Pis)药物的主要耐药性突变.结论 慢性HIV-1感染者原发性耐药发生的概率仍较低,初次治疗前的耐药性检测并非必需.

  • HIV潜伏感染的细胞和分子机制

    作者:蒋卫民;卢洪洲;潘孝彰

    高效抗逆转录病毒治疗(HAART)使人免疫缺陷病毒(HIV)感染者的病死率明显下降.大多数感染者在接受抗病毒治疗后血浆HIV-RNA降至检测水平以下,然而病毒不能被彻底清除.因为在静止型CD4细胞中存在具有潜在复制能力的前病毒,隐源性的病毒复制可在低于检测极限的宿主中出现.所以,静止型CD4细胞成为HIV的病毒库.了解这些病毒库的分子生物学机制,对于研究治疗HIV感染的新方法及探索彻底清除病毒的方法是大有裨益的.

  • 两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂耐药病毒株的体外选择和鉴定

    作者:刘思扬;庄道民;董如华;白丽;李敬云

    两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂(nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)JB25和JB26在体外均具有显著的抗HIV活性,为了在临床试验前阐明病毒是否容易对这两种药物产生耐药性及导致耐药性的病毒基因突变,在体外诱导并鉴定了对这两种化合物耐药的HIV-1毒株.以HIV-1 NL4.3作为亲代野生型病毒感染MT-2细胞,从两种化合物2倍的IC_(50)开始,以细胞病变(cytopathic effect,CPE)为指标,将病毒在含有浓度逐渐增加的药物的条件下连续传代,每代均在超过75%的MT-2细胞出现CPE后收集病毒培养上清液,然后取1 mL接种新的MT-2细胞同时提高药物浓度为原来的2倍,共计传12代.JB25在第6代出现L100I(TTA→ATA)突变,在第12代又变成100M(ATA→ATG),L100M是不常见的突变形式,其对HIV NNRTIs耐药的影响未见报道,在第10代还同时出现了对NNRTIs高度耐药的Y188C(TAT→TGT)突变.JB26在第10代出现了L100I(TTA→ATA)突变.JB25和JB26在体外容易产生耐药性,而对JB26耐药比JB25要困难,导致耐药的主要基因突变发生在病毒逆转录酶基因的188和100位密码子.

  • 结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在HIV-1晚期复制的作用及其抑制剂

    作者:姜岩;刘新泳

    人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)复制的晚期阶段是整个复制周期中的关键环节.该阶段HIV-1经装配、出芽释放和成熟过程产生能感染新靶细胞的成熟病毒颗粒.结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在此阶段发挥着重要作用,它通过协同自身不同区域,有利于蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA和蛋白质-脂质相互作用,从而促进成熟感染病毒颗粒的产生.针对此阶段设计的药物,可有效地阻断HIV-1成熟,从而抑制病毒感染.本文综述了结构蛋白Gag及其相关基因(蛋白)在HIV-1晚期复制的作用及其抑制剂的研究进展.

  • mTSLP-V1/V2融合蛋白的真核表达与鉴定

    作者:楚鹰;王亭亭;芮昱文;宋思维;苏艾荣;程林;宋红勇;郑大同;吴稚伟

    目的:将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素( mouse thymic stromal lymphopoietin ,mTSLP)与人免疫缺陷病毒1型( hu-man immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法:以真核表达质粒pCEP-Pu为载体,构建mTSLP与gp120BAL V1V2融合基因的重组蛋白表达质粒pCTV1V2BAL。限制性酶切电泳与测序验证质粒构建正确后,使用PEI瞬时转染293 F悬浮细胞,表达产物以SDS-PAGE与Western blot进行分析,并对纯化后重组蛋白的V1/V2抗原表位进行了ELISA分析。结果:SDS-PAGE、Western blot分析显示,在表观分子量35 kD至55 kD的范围内存在一条不均一的糖蛋白条带,并且能与抗mTSLP多克隆抗体和抗His标签单克隆抗体发生反应。 HIV-1阳性病人血清能够识别mTSLP-V1/V2BAL上的HIV-1V1/V2抗原表位。结论:在293F中成功表达了mTSLP-V1/V2BAL融合蛋白,该蛋白具有HIV-1gp120BALV1/V2区的抗原表位,能够用于HIV-1 gp120 V1/V2亚单位疫苗的研究。

  • 趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA表达载体的构建及表达

    作者:刘艳;王珑;张大维;赵德明

    目的:构建趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,研究其对CXCR4基因表达的沉默效果,探索抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)治疗的新途径.方法:根据软件设计针对CXCR4基因的siRNA序列,经退火成互补双链,克隆到PsilencerM3.1-H1 neo载体中,经测序鉴定插入序列的正确性.转染MT4细胞后,采用RT-PCR及流式细胞仪方法检测转染siRNA质粒的实验组、转染空载体的阴性对照组和空白细胞对照组间抑制基因表达情况.结果:PCR及琼脂糖凝胶电泳检测重组质粒PsilencerM3.1-H1-siRNA neo,有正确的特异性片段,DNA测序也证明具有正确序列;该载体转染MT4细胞48 h后,能明显抑制CXCR4基因表达,其表达抑制率为70%,与空白对照组和阴性组比较差异有显著性(P<0.05).结论:成功构建趋化因子受体CXCR4的siRNA表达载体.

  • 人类免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白(Gag)在大肠杆菌中的表达

    作者:王杨;褚嘉祐;周东霞;孙明;黄小琴;俞建昆

    目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白Gag,为HIV感染的诊断和疫苗的研制奠定基础.方法通过PCR扩增获得HIV-1 gag基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1的tac启动子下游,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE和Western blot分析验证其表达产物.结果表达产物是相对分子质量为82 000的GST融合蛋白,且能与抗p24单克隆抗体发生特异性反应.结论重组Gag蛋白在大肠杆菌中得到了有效表达,且具有良好的抗原性,可进一步用于HIV感染及动物免疫等方面的研究.

  • HIV-1 Vif蛋白的体内表达及其生物学功能

    作者:张文艳;孔维;于湘晖

    目的 分别构建带有6His和mbp tag的HIV-1 Vif基因真核表达载体,在体内表达融合蛋白,并检测其生物学功能.方法 PCR扩增带有6His和mbp tag的HIV-1 Vif基因,克隆至真核表达载体VRl012上.将抗病毒因子APOBEC3G(A3G)分别与空载体VR1012、HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,检测Vif-mbp和Vif-6His的表达,并进行A3G体内降解试验.将A3G和/或可产生病毒的质粒HXB2Neo △ Aif分别与HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,通过A3G包装进病毒和Magi细胞感染试验,进一步检测HIV-1 Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白的生物学功能.结果 重组表达质粒Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012经双酶切鉴定证明构建正确.转染293T细胞48 h后,Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白均有表达,但表达的Vff-mbp有不同程度的降解.Vif-6His可降解A3G,使其表达量下降至10%左右,而Vif-mbp几乎不能降解A3G.Vif-6His可阻止A3G包装进病毒颗粒中,而Vif-mbp无此功能.Vif-mbp可使HXB2Neo △ Vif病毒感染能力恢复至15%,而Vif-6His可使其恢复至86%.结论 已成功构建了带有6His和mbp tag的HIV-1 Vif基因真核表达载体,表达的Vif-mbp融合蛋白影响了Vif的生物学功能,但Vif-6His融合蛋白不影响Vif的生物学功能.

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