神经炎症调控靶点在帕金森病治疗中的作用

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种以多巴胺能神经元退行性病变为主要特征的神经退行性疾病.目前临床上用于治疗PD的药物只能改善疾病的症状,并不能阻止或延缓疾病的进程,因此需要寻找新的分子靶点阻止或延缓多巴胺能神经元的丢失.在PD发展过程中,脑中始终存在着以胶质细胞激活为主要特征的神经炎症反应,越来越多的证据表明神经炎症在PD的发生和发展中起至关重要的作用,大量酶和受体参与神经炎症这一过程.因此本文主要对与神经炎症密切相关的酶和受体作一综述,致力于提供可能阻止或延缓疾病进程的潜在的与炎症相关的治疗靶点.

家蚕作为人类疾病模型与用于药物筛选的研究进展及展望

家蚕(Bombyx mori)具有饲养容易、子代多、生命周期短、大小适中易于实验操作、遗传背景清楚、突变资源丰富等优点,长期被用作实验遗传学材料,被确定为鳞翅目昆虫的研究模式.家蚕也逐渐成为人类疾病模型和药物筛选的新型实验动物.近期的相关研究表明,在家蚕丰富的遗传资源中,存在着诸多人类遗传疾病模型,如苯丙酮尿症模型、帕金森病模型和海-普综合征模型等.家蚕在人类病原微生物致病机制探究方面也做出了重要贡献.此外,家蚕能够用于药代动力学研究及系统地评价药效及药物安全性,并且能够实现高通量药物筛选,可大大缩短新型药物的研发周期.本文综述了家蚕作为疾病模型及用于药物筛选的研究进展,分析了其开发前景,以期能够帮助人们全面地了解家蚕在新药研发中的作用,为大规模开展基于家蚕人类疾病模型的药物筛选提供参考.

尾加压素Ⅱ及其受体的研究进展

尾加压素Ⅱ (urotensin Ⅱ,UⅡ)是目前已报道的体内具有强收缩血管能力的活性肽,UⅡ与UⅡ受体(urotensin Ⅱ receptor,UT)广泛分布于中枢及外周的各组织器官中,发挥多种生理作用.UⅡ/UT系统表达水平的变化与多种疾病进程密切相关,因此近年来被认为是治疗多种疾病的潜在靶点.本文从配体及受体表达分布、生理活性、病理表现和拮抗剂分类等方面对该系统进行综述.

肿瘤靶向型pH敏感多肽类药物递送系统研究进展

pH敏感性多肽类药物递送系统,以肿瘤组织酸性的细胞外环境为靶点,具有肿瘤特异性高、细胞毒性低,且能显著提高传统抗癌药物的活性等优点,近年来受到了广泛的关注.本文总结了5种类型靶向作用于肿瘤细胞的pH敏感性多肽类药物递送系统的研究进展,对今后肿瘤靶向型药物的设计和应用有重要意义.

聚合物药物结合物胶束在抗肿瘤药物递送方面的研究进展

聚合物药物结合物胶束(polymer-drug conjugated micelles,PDCM)作为抗肿瘤药物递送载体具有多种优势,可以增加疏水性药物的溶解度,延长体内循环时间,提高药物的稳定性,减小全身毒性,增强药物的治疗效果等.而且,也可以用含有多种功能基团的聚合物来制备多功能聚合物药物结合物胶束.本文介绍了聚合物药物结合物胶束的概况及各种多功能修饰的聚合物药物结合物胶束,综述了聚合物药物结合物胶束在抗肿瘤药物递送方面的研究进展.

抗耐甲氧西林金葡菌(MRSA)天然产物研究进展

耐甲氧西林金葡菌(MRSA)是一种严重威胁人类健康的多重耐药性病原菌.寻找结构新颖、高效低毒的抗MRSA先导化合物一直是抗生素研究领域的重要方向.具有结构多样性和复杂性的天然产物在抗MRSA新药的研发中表现出独特的优势和巨大的潜力.本文对2010年至今发现的抗MRSA天然产物及其药物化学研究进展进行综述.

Militarine改善慢性脑缺血大鼠认知功能障碍及白质损伤的研究

研究1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)对慢性脑缺血大鼠认知功能障碍及脑白质损伤的影响.采用永久性双侧颈总动脉结扎建立慢性脑缺血大鼠模型.通过Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆能力;牢固蓝(luxol fast blue,LFB)染色法检测大鼠胼胝体白质髓鞘的变化;Western blot检测大鼠胼胝体髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达;免疫组织荧光技术检测大鼠胼胝体环核苷酸磷酸二酯酶(2’,3’-cyclic-nucleotide 3’-phosphodiesterase,CNPase)阳性细胞的改变.结果显示,militarine可改善慢性脑缺血大鼠在水迷宫实验中的表现,在20 mg·kg-1·d-1剂量下大鼠逃避潜伏期、首次穿越原平台位置时间明显缩短,穿越原平台的次数明显增加.同时,胼胝体白质脱髓鞘现象得到明显改善,MBP表达明显上调,CNPase阳性细胞数量明显增加.提示militarine能够改善慢性脑缺血大鼠的认知功能障碍,减轻脑白质缺血性损伤.

金松双黄酮对尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶的抑制作用

借助体外代谢孵育体系考察了金松双黄酮(sciadopitysin,SP)对12种人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGTs)的抑制作用,通过体外-体内外推(IV-IVE)预测体内药物-药物相互作用(DDI)的风险.以混合人肝微粒体(HLM)及重组表达的人UGTs作为酶源,选用4-甲基伞形酮(4-MU)、三氟拉嗪(TFP)、N-3-羧丙基-4-羟基-1,8-萘酰亚胺(NCHN)分别为UGTs酶的广谱探针底物、UGT1 A4和UGT1A1的特异性探针底物,评估金松双黄酮对12种人UGT酶的抑制作用.通过非线性拟合求得半数大抑制浓度IC50和抑制动力学常数Ki及抑制类型;并基于体外参数预测了金松双黄酮通过抑制UGT1A1引发的潜在DDI风险.体外抑制实验表明,金松双黄酮对UGT1A1、UGT1A3、UGT1A8和UGT1A10有较强的抑制作用,当终浓度为10 μmol·L-1时,UGT1A1、UGT1A3、UGT1A8和UGT1A10的残余活性均小于30％.金松双黄酮对UGT1A1、UGT1A3、UGT1A8和UGT1A10的半数大抑制浓度IC50为0.20～1.34 μmol·L-1,抑制动力学常数Ki为0.07～2.12 μmol·L-1.口服金松双黄酮240 mg·d-1可导致UGT1A1底物的AUC增加19％～147％.金松双黄酮可竞争性的抑制UGT1A1、UGT1A3、UGT1A8和UGT1A10催化的4-MU-O-葡糖醛酸化反应及UGT1A1催化的NCHN-O-葡糖醛酸化反应.金松双黄酮对UGT1A1的强抑制作用有可能减缓UGT1A1底物的代谢,进而引发DDI风险.上述研究提示金松双黄酮与临床药物联合应用时,应该特别注意其通过抑制UGT酶而引发的DDI.

治疗阿尔茨海默病的中药有效成分的网络药理学研究

为了探索用于治疗阿尔茨海默病的中药方剂的网络药理学,本文收集了阿尔茨海默病相关的25个作用靶点以及13种治疗阿尔茨海默病中药方剂,根据单味药出现的频率,从中选取了7种代表性的中草药进行后续研究.利用已建立的机器学习分类模型对中草药的化学成分进行作用靶点预测,并构建了化合物-靶点网络、靶点-靶点网络及靶点-疾病网络来解释中药方剂的多种有效成分的协同作用机制.此外,经过血脑屏障透过性分析及对预测靶点的验证,得到了7个具有代表性结构的多靶点的先导化合物.本文应用网络药理学研究了抗阿尔茨海默病的传统中草药有效成分的网络作用机制,为抗阿尔茨海默病的中药临床应用及多靶点药物设计提供了重要信息.

成纤维细胞生长因子21在大肠杆菌细胞周质中的表达

成纤维细胞生长因子21 (FGF21)是近期发现的糖脂代谢调节因子,其安全、有效和不依赖胰岛素调节血糖的特点,使其有望成为治疗糖尿病的新型药物.为研究人FGF21 (h-FGF21)在大肠杆菌细胞周质表达,本实验在pET27b载体PelB (pectate lyase B)信号肽下游连入h-FGF21基因,成功构建了pET27bPelB-h-FGF21重组质粒,并发现pET27bPelB-h-FGF21转化E.coli BL21(含DE3)经诱导后能够在细胞周质成功地表达h-FGF21,表明PelB信号肽在h-FGF21细胞周质表达中起到了关键作用.经周质蛋白提取和两步离子交换层析,利用灰度分析软件分析得到了纯度大于95％的h-FGF21蛋白,SDS-PAGE与Western blotting结果证明了日的蛋白大小约20 kDa;经HepG2细胞的葡萄糖吸收实验以及在Ⅱ型糖尿病db/db小鼠上的短期和长期血糖变化实验结果表明,细胞周质表达的h-FGF21 (ph-FGF21)与胞内表达的FGF21 (ih-FGF21)的生物学活性在统计学上无显著差异.

天麻素及派立辛改善东莨菪碱致学习记忆障碍的构效关系

天麻素是天麻的主要有效成分之一,派立辛(parishin)和parishin C也是从传统中药天麻中提取到的水溶性单体化合物,它们与天麻素在结构上关系紧密.Parishin类化合物为天麻素与柠檬酸在不同羧基位点酯合后的化合物.为了比较它们改善学习记忆的能力,本课题组采用东莨菪碱造成的学习记忆障碍模型和在体长时程增强(long-term potentiation,LTP)记录,研究了天麻素、parishin和parishin C的作用并分析其构效关系.Morris水迷宫实验中,15和50 mg·kg-1 parishin C,以及150 mg·kg-1 parishin可显著改善东莨菪碱损伤的空间学习记忆能力,缩短寻找平台的潜伏期(P＜0.05),而天麻素在150 mg·kg-1时的作用不显著.大鼠在体LTP研究结果显示,parishin C(5、10和20 mg·kg-1)及parishin(10、30和100 mg·kg-1)均可剂量依赖地改善东莨菪碱抑制的LTP(P＜0.05);天麻素(100 mg·kg-1)仅有改善趋势(P＞0.05).因而,在东莨菪碱模型中parishin C的作用强于parishin,天麻素的作用弱.

喹啉并吡咯烷和二氢喹啉并吡咯烷衍生物的合成及Kv2.1抑制活性评价

本文合成了新结构的喹啉并吡咯烷和二氢喹啉并吡咯烷类化合物14个,评价了化合物对钾离子通道亚型Kv2.1的抑制活性.发现二氢喹啉并吡咯烷类化合物3a和5a对Kv2.1具有抑制活性,IC50值分别为10.2和9.0 μmol·L-1.本文对构效关系进行了初步分析,研究结果为进一步结构改造提供了启示.

苦参酸类衍生物抗柯萨奇病毒B3的活性分子探针构建

12-N-苯磺酰基-11-苦参酸衍生物是一类全新结构骨架、对柯萨奇病毒B3 (CVB3)显示较好活性的化合物,但其作用机制尚不清楚.本研究在前期构效关系基础上设计合成了两类分子探针:一类是用于BIAcore垂钓探寻靶蛋白的苦参胺类探针;另一类是用于生物素亲和层析寻找靶蛋白的生物素酸苦参酯类探针.通过对其抗CVB3活性评价,发现生物素分子探针10a具有较好抗CVB3活性,IC50值为0.8 μmol·L-1,SI值为58.3.此类活性分子探针的成功构建为此类化合物靶标蛋白寻找与探索提供了关键的化学工具.

波棱内酯川:藏药波棱瓜子中分离到的一个新的联芳基七元内酯类化合物

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、半制备HPLC等柱色谱技术,从藏药波棱瓜子中分离得到4个化合物,通过化合物的理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构分别为:2,11-dimethoxy-3,9-dihydroxy-7 H-dibenzo[c,e]oxepin-5-one (1)、7,8’-didehydroherpetotriol (2)、herpetotriol (3)和kaempferitrin (4).其中,化合物1为一个新的联芳基七元内酯类化合物,命名为波棱内酯Ⅲ.

水飞蓟宾纳米晶自稳定Pickering乳液的制备及评价

为提高水飞蓟宾的口服生物利用度,以水飞蓟宾纳米晶为固体微粒,采用高压匀质法制备水飞蓟宾纳米晶自稳定Pickering乳液(silybin nanocrystalline self-stabilizing Pickering emulsion,SN-SSPE).考察匀质压力、药物加入量对SN-SSPE形成的影响,以激光共聚焦显微镜、扫描电镜和原子力显微镜等研究表征SN-SSPE的乳滴粒径与形态结构.从乳液的稳定性、体外药物释放和体内药物吸收等方面对SN-SSPE进行评价.结果发现,匀质压力越大,纳米晶粒径越小,压力大于100 MPa时粒径变化较小;水飞蓟宾加入量达到300 mg及其以上时,纳米晶能够完全覆盖油滴表面,形成稳定的SN-SSPE.优化的SN-SSPE乳滴粒径为27.3±3.1 μm,具有明显的核壳状结构.SN-SSPE的稳定性比SN纳米晶混悬液高,至少可稳定40天以上.SN-SSPE的体外释放速率与纳米晶混悬液相似,比原料药显著加快.大鼠灌胃后,SN-SSPE的血药峰浓度相对于纳米晶混悬液和原料药分别提高了2.5倍和2.3倍,AUC分别提高了1.4倍和3.8倍.研究结果表明,难溶性药物纳米晶可以稳定Pickering 乳液;药物纳米晶自稳定Pickering乳液对于提高难溶性药物的口服生物利用度有着广阔的应用前景.

基于脂质体的新型肿瘤成像荧光探针的构建及初步评价

本研究以脂质体作为药物载体,利用磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine,PE)和吲哚花青绿(indocyanine green,ICG)的疏水相互作用,制备了纳米荧光探针LipoICG.再通过人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)包裹,对脂质体的结构进行固化,制备了一种新型的纳米荧光探针H-LipoICG.实验制得的LipoICG为大小均匀的圆球形,粒径约为94.47 nm,zeta电位约-43.5 mV,包封率(encapsulation efficiency,EE)约81.5％;H-LipoICG为大小均匀的圆球形,粒径约为121.5 nm,zeta电位约为-32.3 mV,EE约为98.2％.说明通过HSA包裹,能提高脂质体的载药量.药物释放结果表明,ICG在LipoICG中的释放速度比在H-LipoICG中快,证明HSA的包裹能使脂质体的结构更稳定,有利于维持ICG的荧光强度.通过Cell Counting Kit-8 (CCK-8)实验研究材料对人乳腺癌细胞MCF-7的毒性,证明LipoICG和H-LipoICG材料对细胞无毒,具有良好的生物相容性.通过研究材料在荷瘤小鼠体内的组织分布,说明HSA修饰后的脂质体H-LipoICG比LipoICG具有更强的肿瘤靶向性和更高的荧光强度,能够在注射8h后富集于肿瘤组织,显著勾勒出实体瘤的轮廓并维持荧光信号至24 h.H-LipoICG具备良好的肿瘤荧光成像性质.

CYP3A探针底物咪达唑仑在大鼠体内的非线性药动学过程及剂量优化

ITS与叶绿体基因组多片段组合鉴定甘肃产秦艽基原植物的策略

对甘肃产龙胆属Gentiana秦艽组6种植物(粗茎秦艽G.crassicaulis、麻花秦艽G.straminea、大叶秦艽G.macrophylla、小秦艽G.dahurica、管花秦艽G.siphonantha及黄管秦艽G.officinalis)进行遗传多样性分析,并建立物种DNA条形码.测定各样品(包括外类群椭圆叶花锚Halenia elliptica)核糖体ITS区及叶绿体matK、rbcL、rpoC1、trnL(UAA) intron、psbA-trnH、atpB-rbcL、trnS(GCU)-trnG(UCC)、rpl20-rps12、trnL(UAA)-trnF(GAA)共410条序列,对基因组内存在明显多样性的物种,梳理其基因型式样;进行基于大叶秦艽叶绿体DNA基因Ⅱ型,小秦艽ITS区基因Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型序列鉴定相关物种的方法学研究.结果显示:7个叶绿体片段具有物种鉴定意义;大叶秦艽随机取6个样品,小秦艽或黄管秦艽每个样品随机取12个阳性克隆测序,实际获得相关基因型鉴定序列的概率大于90％.建立的甘肃产秦艽组植物DNA分子个性化鉴别方法可将6个物种有效区分.

麦角菌Cp-1菌株遗传转化体系的建立

麦角菌Cp-1菌株是本实验室筛选获得的工业生产菌株,能产生多种麦角生物碱.为了实现该菌株定向生物合成某种特定的药用麦角碱,遗传转化体系的建立不可或缺,但由于麦角菌本身存在遗传异质性,现有的遗传转化体系不能满足Cp-1菌株的需要.本文研究了菌丝体浓度、溶壁酶浓度和酶解时间对原生质体形成的影响,并考察了该菌株对不同抗生素的敏感性,以期建立其遗传转化体系.结果表明,使用1％溶壁酶(5 mL) 25℃酶解菌丝体(1 g)2h后,即可产生大量的原生质体.在PEG的介导下,以1.5 mg·mL-1的潮霉素B为筛选标记,转化质粒pAN7-1于原生质体,可获得大量转化子,PCR诊断证明外源基因已成功地整合到Cp-1菌株的基因组上.本研究为进一步改良Cp-1生产菌株奠定了重要的基础.

HPLC同时测定红芪中8个活性成分的含量及聚类分析

建立了HPLC法测定红芪中腺苷、γ-氨基丁酸(GABA)和6个黄酮类化合物(毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、异甘草素、芒柄花素和美迪紫檀素)的含量.样品用甲醇回流提取4h,采用HPLC-DAD (二极管阵列)和HPLC-ELSD(蒸发光散射)系统,色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水,柱温40℃,流速1.0 mL·min-1,漂移管温度110.5℃,载气流速3.1L·min-1.结果8个成分的线性关系良好(r2 =0.992 8～1.000 0);精密度、稳定性和重复性的RSD均小于2％;加样回收率为96.78％～103.45％,RSD为0.29％～1.61％.测定24批不同产地红芪的指标成分含量,并以其作为变量因子进行聚类分析,结果基本按地域性聚成2类并与主成分分析结果一致.该方法准确、灵敏、简便,为多指标控制红芪药材质量提供了实验依据;将聚类分析用于红芪质量控制具有一定的可靠性和客观性.

UPLC-Q-TOF/MSE方法分析养血清脑颗粒的化学成分

为系统阐明复方中药养血清脑颗粒的化学组成,本研究采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间/全信息串联质谱(UPLC-ESI-Q-TOF/MSE)技术,对养血清脑颗粒的化学成分进行分析.通过Q-TOF-MSE提供化合物的准确相对分子质量、质谱碎片离子信息,与对照品的保留时间和质谱数据比对,结合参考文献,共鉴定出142种成分,主要包括酚酸类、单萜苷类、醌类、生物碱类和苯酞内酯类5类成分,并对各成分的药材来源进行归属.本研究全面、快速、准确地分析了养血清脑颗粒的化学成分,为养血清脑颗粒的药效物质基础和质量控制等研究奠定了基础.

黄芪注射液1H NMR指纹图谱研究

建立黄芪注射液的1H NMR指纹图谱,并对8批黄芪注射液进行初步的质量分析.采用核磁共振技术分别建立黄芪注射液的初级和次级代谢物1H NMR指纹图谱,借助1H-1H化学位移相关谱(COSY)和1H-13C化学位移相关谱(HSQC),对黄芪注射液中的化学成分进行指认;结合相似度和相对含量分析对8批黄芪注射液进行质量分析.从黄芪注射液的核磁指纹图谱中共指认初级和次级代谢产物25个,对8批黄芪注射液的1H NMR图谱分析结果显示,不同厂家的注射液产品之间在化学组成上存在较大差异,且初级代谢产物含量及波动范围远远高于次级代谢产物,是黄芪注射液质量均一性的主要影响成分.本研究初步分析了黄芪注射液产品的质量差异状况,为提升其质量控制水平奠定了研究依据.

UPLC-ESI-MS/MS法测定八子补肾胶囊中14种成分的含量

建立UPLC-ESI-MS/MS法测定八子补肾胶囊中14种成分的含量.Waters ACQUITY BEH C18柱(50mm×2.1 mm,1.7 μm),柱温为40℃;流动相为A(乙腈)-B(0.1％乙酸),梯度洗脱;电喷雾离子源(ESI源),源温度为150℃,毛细管电压为2.0 kV,离子源补偿电压为50 V,脱溶剂气温度为500℃,脱溶剂气流量为800 L·h-1,锥孔气流量为150 L·h-1,雾化气压力为7.0 Bar(1 Bar=100 kPa),接口处加热,采用多反应监测模式.在本方法条件下,14种成分的线性关系良好(r2≥0.999 1),定量限为0.11～4.52 ng·mL-1.精密度为0.8～2.1％.平均回收率范围为97.89％～101.9％.该方法操作简便、快速、准确度高、重现性好,可用于八子补肾胶囊的质量控制.

抑制HIV1病毒侵入的首创药物马拉维罗

1 干预HIV病毒进入宿主细胞的环节1.1 HIV1进入宿主细胞的过程HIV病毒感染宿主细胞是衣被与胞膜的融合过程,融合是分步进行的:①识别与结合CD4受体:病毒颗粒的外膜糖蛋白gp120与跨膜糖蛋白gp41识别宿主细胞表面受体CD4,并与之结合附着在细胞膜上;②与CCR5受体结合:结合于CD4的gp120构象发生变化,识别并结合于宿主细胞的辅受体趋化因子受体CCR5,遂之gp41与gp120分离;③核酸进入:gp41的α螺旋变构,形成管束状构象,与膜蛋白融合,病毒的核酸穿越胞膜进入宿主细胞.研制抗HIV1药物可以在不同的环节干预病毒进入细胞,例如屏蔽和抑制CD4受体或者CCR5受体.