修饰脂质体的可断裂聚乙二醇脂质衍生物的研究进展

聚乙二醇脂质衍生物可增加脂质体的稳定性,延长其体内循环时间.传统的长循环材料由于连接聚乙二醇与脂质的化学键太稳定,导致脂质体内容物释放延迟而影响药效.近年来提出可断裂聚乙二醇脂质衍生物的概念,该类衍生物具有可以在人的生理或病理条件下断裂的性质,能够延长脂质体体内循环时间,在到达靶部位后由于聚乙二醇已经从脂质体表面脱落,脂质体可以与病变细胞结合,从而将药物送入细胞.本文综述了可断裂聚乙二醇脂质衍生物的种类、断裂类型、在脂质体中的应用概况及在应用中的优势和局限.

硫氧还蛋白的生物学及其与阿尔茨海默病和帕金森病的关系

硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)是一种具有氧化还原活性的小分子蛋白质,具有抗氧化、抗凋亡、调节转录因子活性等功能,在氧化还原调节和细胞信号转导中发挥重要作用.本文对哺乳动物的Trx及其与阿尔茨海默病(AD)和帕金森病(PD)的关系的研究进展进行综述.基于Trx的神经保护活性,增加Trx的表达可望成为AD和PD防治的新靶点.

Pin1及其抑制剂的研究进展

Pin1是一个新的肽脯氨酰异构酶,特异性地催化蛋白质中磷酸化的Ser/Thr-Pro酰胺键的顺反异构,改变蛋白质的构象,调控蛋白质的功能.抑制Pin1的表达和活性,可抑制肿瘤细胞的生长.Pin1抑制剂有望发展成为新作用机制的抗癌药物.本文综述了近年来Pin1及其抑制剂研究的新进展.

人参皂苷Rb1通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ25-35诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化

探讨在Aβ25-35(beta-amyloid peptide (25-35),Aβ25-35)诱导的拟阿尔茨海默病样胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化中,人参皂苷Rb1对tau蛋白磷酸化及JNK/p38 MAPK的可能作用.应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法,观察tau蛋白磷酸化和JNK(c-jun N-terminal kinase)/p38 MAPK的表达情况.凝聚态Aβ25-35(20 μmol·L-1)作用于皮层神经元12 h,tau蛋白的磷酸化水平明显增高,同时JNK/p38 MAPK的总量及其活性形式--磷酸化JNK/p38 MAPK的蛋白表达水平也增加,人参皂苷Rb1可以减轻tau蛋白的磷酸化水平及JNK/p38 MAPK的蛋白水平.人参皂苷Rb1可通过JNK/p38 MAPK途径减轻Aβ25-35诱导的tau蛋白过度磷酸化.

槐果碱对HERG钾通道电生理功能的影响

HERG(human ether-a-go-go-related gene)钾通道在心律失常的发生及治疗中具有重要作用, 因此已成为近些年来的研究热点.本研究应用全细胞膜片钳技术记录在HEK(human embryonic kidney) 293细胞上稳定表达的HERG钾通道的电流和动力学曲线(激活、失活、复活和去活化)来研究不同浓度槐果碱对HERG电流及动力学曲线的影响, 以了解槐果碱抗心律失常的作用机制.结果表明, 槐果碱浓度依赖性地抑制HERG时间依赖性电流(Istep)及其尾电流(Itail).在0 mV时, 10、 30、 100及300 μmol·L-1槐果碱对Istep的抑制率分别为(10.7±2.8)%、 (11.3±5.5)%、(47.0±2.3)%及(53.7±2.5)%, 对Itail的抑制率分别为(1.1±3.0)%、 (17.1±3.3)%、 (32.7±1.9)%(P《0.05, n=12)及(56.0±2.4)%(P《0.05, n=13).100 μmol·L-1槐果碱作用后失活时间常数减小, 失活速率变快;复活时间常数在大部分指令电压下明显减小(P《0.01, n=12),复活速度加快;瞬时失活时间常数减小(P《0.05, n=12);稳态激活、去活化无明显改变.由此可看出,槐果碱通过影响通道的失活过程抑制HERG钾电流,使得心肌细胞复极时间延长,改善快速性心律失常.

三氧化二砷通过Bcl-2相关机制诱导哮喘患者T细胞凋亡

本研究观察了三氧化二砷对哮喘患者T细胞凋亡、白细胞介素-4分泌的影响,并探讨了Bcl-2的作用.分离哮喘患者(n＝21)和健康对照者(n ＝20)的外周血T细胞,分别加入三氧化二砷和地塞米松培养24 h.用荧光显微术、流式细胞仪DNA含量分析法和细胞色素c ELISA试剂盒检测T细胞凋亡,用ELISA的方法测量血清和细胞培养上清液白细胞介素-4水平,用免疫荧光流式细胞分析法测定Bcl-2基因表达.与健康对照者比较,哮喘患者T细胞体外培养24 h后自发凋亡减慢.地塞米松使哮喘患者和健康对照者的T细胞凋亡率均增加,两试验组间增加幅度无显著差异.三氧化二砷显著增加哮喘患者T细胞凋亡率,但对健康对照者T细胞凋亡影响不明显.哮喘患者血清白细胞介素-4水平升高,T细胞Bcl-2表达上调.而且,在体外培养24 h后,哮喘患者T细胞比健康对照者T细胞自发分泌的白细胞介素-4及Bcl-2的表达水平均有所提高.三氧化二砷显著减少哮喘患者T细胞白细胞介素-4分泌,下调Bcl-2表达,但对健康对照者T细胞无明显影响.地塞米松可使两试验组T细胞释放白细胞介素-4显著减少,但对两试验组T细胞Bcl-2基因表达影响不明显.结果提示:三氧化二砷在体外可诱导哮喘患者T细胞凋亡,减少白细胞介素-4分泌,下调Bcl-2基因表达可能是其重要机制之一.

双环醇对四环素诱发小鼠急性脂肪肝的保护作用

研究双环醇对四环素诱发小鼠急性脂肪肝的影响.小鼠一次腹腔注射四环素(180 mg·kg-1) 24 h后,收集血样和肝组织,采用生化法测定肝脏甘油三酯(triglyceride,TG)、胆固醇(cholesterol,CHO)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,以及血清脂质和转氨酶水平;光谱法测定小鼠线粒体脂肪酸β-氧化速率以及肝脏极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL,TG)分泌速率.结果表明,双环醇(150及300 mg·kg-1)连续灌胃给药3次可以不同程度地保护四环素引起的小鼠肝脏TG和CHO升高以及血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)升高和脂质异常.双环醇(300 mg·kg-1)还可减轻四环素诱发小鼠肝脏丙二醛(malondialdehyde,MDA)生成增加和GSH水平降低,并能抑制肝线粒体脂肪酸β-氧化速率下降.双环醇(300 mg·kg-1)可部分逆转四环素所致小鼠肝脏VLDL(TG)分泌速率的减少.由此可见,双环醇对四环素诱发小鼠急性脂肪肝具有明显的保护作用,其作用机制与保护肝线粒体β-氧化功能、改善肝脂蛋白分泌及转运以及抑制肝脏脂质过氧化密切相关.

1-(5-取代糠基)吲哚啉-2-酮衍生物的合成和初步抗肿瘤活性

为了寻找具有较好抗肿瘤活性的新型吲哚啉-2-酮类化合物,本研究以5-甲酰基-2,4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸乙酯与5位不同取代的吲哚啉-2-酮(2a～2d)为原料,首先经缩合得3-吡咯亚甲基-吲哚啉-2-酮(3a～3d),再经N烃化反应得到1-(5-甲酰基糠基)-3-(吡咯亚甲基)-吲哚啉-2-酮(4a～4d),然后与吲哚啉-2-酮缩合得到以5-亚甲基糠基连接的双吲哚啉-2-酮化合物(5a～5d).所合成的12个新型吲哚啉-2-酮类化合物的结构经核磁共振谱、质谱和元素分析确认.采用四氮唑盐(MTT)还原法测试所合成化合物的体外抗肿瘤活性,结果表明所合成的化合物均有一定的抗肿瘤作用,其中6个化合物对SPC-A1肺癌肿瘤株体外抑制活性优于舒尼替尼,特别是化合物5a～5d, IC50值均小于5 μmol·L-1,值得作为抗肿瘤药物先导化合物.

含羧酸侧链蒽醛缩氨基均三唑席夫碱衍生物的合成及抗肿瘤活性

为发现可用于抗肿瘤活性研究的新结构杂环胺席夫碱先导化合物, 本文用氨基均三唑硫代乙酸(2)与9-蒽醛缩合得 4-(9-蒽亚甲氨基)-5-苯基-均-三唑-3-硫乙酸席夫碱目标化物(3a～j).用MTT方法评价了新化合物体外抗肿瘤活性.结果表明,目标化合物对CHO、 HL60和L1210三种癌细胞株均有不同程度的细胞毒活性,具有进一步研究的价值.

猫儿刺的化学成分

猫儿刺(Ilex pernyi)为冬青科冬青属植物,民间常用于清热解毒,润肺止咳.本文对猫儿刺叶的化学成分进行研究,应用硅胶、Sephadex LH-20、反相硅胶和半制备RP-HPLC等分离纯化方法从其乙醇提取物中分离并鉴定了6个化合物:(E)-异丁香酚-α-L-吡喃阿拉伯糖基(1→6)- β-D-吡喃葡糖苷(1),山柰酚-3-O-桑布双糖苷(2),槲皮素-3-O-桑布双糖苷(3),异槲皮苷(4),丁香树脂酚葡糖苷(5),反枝苋苷IV(6).其中,化合物1为一新酚苷类化合物,命名为猫儿刺酚苷A.化合物2～6为首次从该植物中分离得到.

三棱的化学成分

为研究中药三棱(Sparganium stoleniferum Buch.-Ham)的化学成分,利用柱色谱技术进行分离纯化,得到5个化合物,根据理化性质、光谱数据鉴定其结构为:β-谷甾醇棕榈酸酯(I)、三棱双苯内酯(II)、三棱二苯乙炔(III)、6,7,10-三羟基-8-十八烯酸(IV)和胡萝卜苷棕榈酸酯(V).化合物II、III为两个新化合物.

红血藤的化学成分

红血藤为豆科密花豆属植物红血藤(Spatholobus sinensis)的干燥藤茎,是正品鸡血藤的地区代用品,至今未见化学成分和生物活性研究的报道.本研究运用溶剂法及各种色谱方法进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构.从其乙醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇部分分离得到8个化合物,分别鉴定为红血藤苷A(spatholosineside A,1),2′,4′,5,7-四羟基异黄酮(2),异甘草素(isoliquiritigenin,3),lupinalbin A(4),coumestrol(5),柚皮素(naringenin,6),原儿茶酸(protocatechuic acid,7),leonuriside A(8).化合物1为新化合物;化合物8为从本科植物首次得到;化合物2、 4、 5、 6为从本属植物首次得到;化合物3、 7为从红血藤首次得到.

聚乙二醇修饰的羟基喜树碱纳米脂质载体的制备及其小鼠组织分布

本研究采用熔融乳化-高压均质法制备了聚乙二醇(PEG)修饰的羟基喜树碱(HCPT)纳米脂质载体(HCPT-PEG-NLC)及非修饰的羟基喜树碱纳米脂质载体(HCPT-NLC),并考察了其形态、粒径及包封率.测定了HCPT注射液、HCPT-PEG-NLC及HCPT-NLC 3种制剂经小鼠尾静脉注射后在血浆、心、肝、脾、肺、肾及卵巢等主要组织的浓度,评价了HCPT-PEG-NLC及HCPT-NLC在各组织的靶向性效果.透射电镜下观察,HCPT-PEG-NLC及HCPT-NLC呈球形;测得平均粒径分别为(88.6±22.5)和(127.2±43.4)nm;包封率分别为(90.51±3.29)%和(84.37±2.81)%.经小鼠尾静脉注射后,HCPT-PEG-NLC及HCPT-NLC在多数取样时间点的血药浓度较HCPT注射液有所提高,HCPT在各组织中的消除半衰期明显延长.HCPT-NLC蓄集于网状内皮系统(RES),在肝、脾的相对摄取率(Re)和峰浓度比(Ce)明显高于HCPT-PEG-NLC.HCPT-PEG-NLC延长了药物在血浆中的滞留时间,提高了生物利用度,MRT及AUC0-24 h分别为注射液的19.80和17.02倍,并且与HCPT-NLC比较显著降低了RES的吞噬作用,在肺部表现出明显的靶向作用(Re及Ce分别为14.51,41.35).综上,HCPT-PEG-NLC可延长HCPT的体内循环时间,呈现明显的肺靶向性,有望作为HCPT肺癌治疗的理想载体.

独活有效成分大鼠在体单向灌流肠吸收

为了考察独活提取物中二氢欧山芹醇乙酸酯、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯等3种主要有效成分在大鼠的肠吸收性质,了解中药提纯后对大鼠肠吸收的影响,本文运用单向灌流模型并采用HPLC法测定独活提取物I(总香豆素含量＜10%)灌流液中3种成分在体肠灌流的浓度变化,并与独活提取物II(总香豆素含量≥60%)进行比较.结果表明二氢欧山芹醇乙酸酯、蛇床子素及二氢欧山芹醇当归酸酯的质量浓度分别为62～555 μg·mL-1、101～887 μg·mL-1和19～186 μg·mL-1,吸收量与浓度呈线性关系,无高浓度饱和现象,吸收速率常数(Ka)、吸收渗透系数(Papp)值基本保持不变.3种成分在大鼠小肠主要以被动扩散方式吸收;在各肠段均有吸收,其中结肠吸收好,各肠段的Ka、 Papp是结肠＞十二指肠＞空肠＞回肠,且结肠的Ka、 Papp值显著大于其他肠段;独活提取物II中3种成分的Ka、 Papp值显著小于独活提取物I中相应成分.

双氯芬酸钠肠溶微丸型片剂的研制

本文制备了双氯芬酸钠肠溶微丸型片剂.以丙烯酸树脂EudragitNE30D和EudragitL30D-55不同比例的混合物作为衣膜材料,对不同粒径大小的双氯芬酸钠速释丸芯进行不同增重水平的包衣,并与不同压缩特性和用量比例的缓冲微丸混合,压片.所得的双氯芬酸钠肠溶微丸型片剂在人工胃液中2 h内累积释放百分数《10%,在人工肠液中1 h内累积释放百分数为(83±2.42)%.结果表明EudragitNE30D与EudragitL30D-55以一定比例混合制备得到适合压片的肠溶微丸,硬脂酸制备的缓冲微丸可用于微丸型片剂的制备.

谷胱甘肽转移酶抑制剂的高通量筛选

谷胱甘肽转移酶(glutathione Stransferase,GST)是一组具有多种生理功能的同工酶家族,广泛分布于动植物体内,作为机体的II相解毒酶,参与机体的解毒作用[1].研究表明,GST的酶活性水平与肿瘤的耐药性密切相关[2～4].因此,GST可能是治疗耐药肿瘤的潜在药物作用靶点.目前已知的GST抑制剂大多因毒性较大,限制了临床应用.研究发现,一些动植物体内含有对GST有抑制剂作用的成分[5～8].为了广泛寻找GST特异性抑制剂,本研究旨在建立一种快速、高效、稳定、经济的高通量筛选方法,以GST为靶点,通过高通量筛选技术,对自然界广泛存在着的抑制GST活性的物质进行筛选,以期为开发安全有效的、提高耐药肿瘤临床化疗敏感性的药物提供新的技术方法.

液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中布地奈德

建立液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中布地奈德.血浆样品碱化后,经乙酸乙酯液-液萃取,以乙腈-5 mmol·L-1醋酸铵(60∶ 40,v/v)为流动相,Capcell Pak C18 MG柱分离;采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 489→m/z 357(布地奈德)和m/z 493→m/z 413(内标,曲安奈德).测定血浆中布地奈德方法的线性范围为25.0～2 000 pg·mL-1,定量下限为25.0 pg·mL-1,日内、日间精密度(RSD)均小于15%,准确度(RE)在-8.1%～-1.7%.应用本法研究6只比格犬单次和多次给予布地奈德缓释胶囊9 mg后的药代动力学结果显示:单次给药后Tmax为(3.5±3.3) h,Cmax为(786±498) pg·mL-1;多次给药后Cmax为(2 142±1 515) pg·mL-1.该法选择性强、灵敏度高、操作简便,适用于布地奈德缓释制剂的药代动力学研究.

吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯的代谢物5-氟尿嘧啶在大鼠体内组织分布和排泄

采用高效液相色谱法对吲哚美辛5-氟尿嘧啶甲酯(indomethacin 5-fluorouracil-1-ylmethyl ester,IFM)的代谢物5-氟尿嘧啶在大鼠体内的分布和排泄进行研究.生物样品经液-液萃取后,以甲醇-水-36%乙酸(3∶ 96.9∶ 0.1,v/v)或甲醇-水-36%乙酸(10∶ 89.9∶ 0.1,v/v)为流动相,使用DiamonsilTM C18色谱柱进行分离,检测波长为260 nm.大鼠灌胃IFM 100 mg·kg-1后, 5-氟尿嘧啶在胃、小肠、肝组织中浓度较高,其他组织和血浆中较低.5-氟尿嘧啶从尿液(0～24 h)、粪便(0～48 h)中排泄量分别占给药总量的0.006 5%和0.063%.该方法准确、专属性强,适用于IFM代谢物5-氟尿嘧啶的临床前药代动力学研究.

磷脂对甘草酸二铵小肠吸收的影响

研究磷脂对甘草酸二铵及甘草次酸小肠吸收的影响.建立大鼠原位单向肠灌流及伴有肠系膜插管的肠灌流模型,采用高效液相色谱法检测灌流液及血浆中的药物浓度,计算表观通透系数Papp和吸收速率常数Ka.建立大鼠灌胃后肝门静脉取血模型,测定门静脉血浆中药物浓度,以对灌流结果进一步验证.甘草酸二铵和甘草次酸均能跨肠壁吸收,其Papp分别为0.36和5.73 cm·min-1,加入磷脂后,Papp分别提高到0.68和7.98 cm*min-1.磷脂使甘草酸二铵本身的吸收略有增加,但统计学检验差异不显著,但对其肠道菌群代谢物甘草次酸的吸收有显著促进作用.

电化学脱附与荧光技术联用检测表面固定生物分子中的半胱氨酸残基

建立了一种检测表面固定的多肽以及DNA的方法.以还原型谷胱甘肽GSH为模型,将其固定在烷基硫醇自组装膜修饰的金电极表面,通过荧光试剂N-(9-吖啶)马来酰亚胺与游离巯基反应原位标记GSH,恒电位条件下脱附电极表面吸附物,检测脱附物在0.1 mol·L-1 KOH溶液中的荧光强度.GSH的检测限为40 pmol·L-1.该方法可扩展到检测电极表面固定的六肽FT(含3个半胱氨酸残基),脱附物的荧光强度约为GSH的3倍,和FT与GSH中半胱氨酸残基的数量比相吻合.此外,采用该方法对表面固定的DNA进行了序列特异性分析,结果满意.电化学脱附与荧光检测联用的方法灵敏度高、重现性好、样品用量少、快速准确.

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