药学学报杂志
Acta Pharmaceutica Sinica 약학학보
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中国药学会 中国医学科学院药物研究所
- 影响因子： 1.27
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0513-4870
- 国内刊号： 11-2163/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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外排型转运体与CYP450酶所介导的药物相互作用
多种药物同时给药后药物间相互作用能引发许多不良反应和治疗上的困难.引起这种药物相互作用的主要因素包括药物外排型转运体:P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp,MDR1)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)以及乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)3种ABC转运体以及药物代谢酶细胞色素P450 (CYP450).近年来,大量研究发现决定口服药物生物利用度的主要因素是肠道细胞中CYP3A对已吸收药物的生物转化作用和肠道细胞中P-gp对己吸收药物的主动外排作用.同为CYP3A和(或)P-gp底物的药物,当其与CYP3A和(或)P-gP的抑制剂同时服用后,药物的口服生物利用度可能升高.MRP、BCRP与P-gp同属药物的外排泵,与P-gp有重叠的底物特异性.MRP及BCRP与代谢酶CYP3A之间也存在着相似于P-gp的药物相互作用.本文从外排型转运体的类型、参与药物代谢的主要CYP450酶家族CYP3A、临床上由外排型转运体及代谢酶共同介导的药物相互作用和体外研究方法等方面进行综述.
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腺相关病毒在帕金森病基因治疗研究中的应用进展
腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体因具有安全性好、免疫原性低、能介导基因长期稳定表达、可感染分裂和非分裂细胞等优点,成为目前具发展前景的基因治疗载体,己广泛应用于临床研究.在众多帕金森病基因治疗研究中大多以AAV为载体.本文在简述AAV生物学特性的基础上,着重论述了AAV携带神经营养因子、多巴胺合成相关酶和谷氨酸脱羧酶相关基因在帕金森病基因治疗中的新研究进展.
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醛氧化酶的研究进展
醛氧化酶(aldehyde oxidase,AOX)是一类高度保守的钼-黄素蛋白,主要存在于哺乳动物细胞质中,具有广泛的底物特异性,可催化醛类及含氮、含氧杂环类化合物的氧化反应.该酶体内分布较广,存在种属及个体间差异,在药物及外源物的Ⅰ相代谢中发挥重要作用.本文将简要介绍AOX的生物学特性及在药物代谢中的作用.
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人参皂苷对HPA轴作用的研究进展
人参是一种典型的适应原,它的作用与下丘脑-垂体-肾上腺系统(HPA)轴内分泌系统有关.皂苷是人参中的主要有效成分,具有与固醇类激素相似的结构.本文结合适应原的定义和HPA轴调节作用的规律,从总皂苷和皂苷单体两方面探讨了人参对HPA轴作用的影响,并总结了其药理作用与HPA轴作用的关系.
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化合物IMB-1680体外抗动脉粥样硬化的活性研究
探讨化合物IMB-1680的体外抗动脉粥样硬化活性.利用己构建的高表达人CD36细胞株Sf9[hCD36]和CHO[hCD36]测定量效曲线,荧光显微照相法和流式细胞实验检测细胞对变性低密度脂蛋白(modified low density lipoprotein,mLDL)的摄取,巨噬细胞泡沫化实验检测细胞内脂质积聚.结果表明:IMB-1680在Sf9[hCD36]、CHO[hCD36]模型上IC50值分别为2.80及8.79 μmol·L-1; IMB-1680能显著抑制细胞摄取DiI-AcLDL,同时能显著减少巨噬细胞RAW264.7摄取脂质.本研究为开发新型抗动脉粥样硬化药物奠定了基础.
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蝙蝠蛾被毛孢菌丝体激活自噬、改善高脂饮食诱导的小鼠代谢综合征
探讨蝙蝠蛾被毛孢菌丝体(Mycelium of Hirsutella hepiali Chen et Shen,MHCS)对代谢综合征的影响及作用机制.首先采用游离脂肪酸与MHCS处理肝细胞,检测自噬相关的LC3、p62水平与脂滴堆积.其次高脂喂养小鼠建立代谢综合征模型,将50周龄小鼠随机分为:对照组、模型组、给药组.干预至80周龄后每组随机抽取15只小鼠,测量口服葡萄糖耐量、空腹血糖、胰岛素、胰岛素样生长因子(IGF-1)水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI);检测肝脏组织中LC3、p62与炎症相关p-NF-κB p65、NF-κB p65、IL-6与CXCL-8水平;观察肝脏内空泡面积、脂滴堆积与纤维化病理改变;其余小鼠继续饲养至110周龄,统计死亡率.结果表明,MHCS显著上调游离脂肪酸处理的肝细胞自噬水平,给药组小鼠口服葡萄糖耐量、胰岛素抵抗显著改善,自噬水平显著增加,炎症显著缓解,肝脏病理改善且生存率显著增高.提示MHCS可能通过激活肝脏自噬,改善小鼠代谢综合征.
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芒果苷调控单核细胞NF-κB (P65)与IκBα表达对慢性支气管炎大鼠的保护作用
研究芒果苷对香烟烟熏所致慢性支气管炎大鼠外周血单核细胞NF-κB (P65)与IκBα表达的影响及其组织保护作用.以香烟烟熏建立慢性支气管炎大鼠模型.分别以实时荧光RT-PCR、流式细胞术检测单核细胞NF-κB (P65)、IκBα的mRNA与蛋白表达,ELISA法检测血清hs-CRP、TNF-α,肺组织HE染色镜检病理评分.结果显示,芒果苷显著抑制单核细胞NF-κB (P65)的mRNA与蛋白表达,上调IκBα的mRNA与蛋白表达,降低血清hs-CRP、TNF-α水平,减轻细支气管慢性炎症损伤.结果提示,芒果苷可显著减轻香烟烟熏引起的慢性细支气管炎症,此保护作用可能与其调控单核细胞NF-κB (P65)、IκBα的表达有关.
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Vam3对硝普钠诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡及SIRT1与p53表达的影响
研究Vam3对硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡的保护作用及机制.分离培养大鼠关节软骨细胞,以SNP诱导,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,DAPI染色观察细胞核形态学改变,DCFH-DA探针检测细胞内ROS,TMRE探针检测线粒体膜电位,Western blotting检测SIRT1、乙酰化p53(ac-p53)、cleaved caspase 9及cleaved caspase 3表达.结果显示,Vam3可显著抑制SNP诱导的软骨细胞早期凋亡,改善核固缩、碎裂等改变,抑制ROS生成及稳定线粒体膜电位;同时,Vam3可上调SNP诱导凋亡的软骨细胞SIRT1表达、降低ac-p53水平、抑制caspase 9及caspase 3活化.结果表明,Vam3能显著抑制SNP诱导的大鼠关节软骨细胞凋亡;上调SIRT1表达,降低ac-p53水平,可能是其发挥软骨细胞保护作用的潜在机制.
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新型HIF-1抑制剂三白脂素-8衍生物LXY6099的抗肿瘤作用
为了发现新的以HIF-1为靶点的小分子抑制剂,并研究其抗肿瘤作用,本研究首先对三白脂素-8的结构进行修饰,然后通过基于报告基因的HIF-1抑制活性筛选得到有效化合物,后通过体外MTT实验和体内裸鼠异体移植瘤等方法验证化合物的抗肿瘤作用.结果表明,筛选得到的新型衍生物LXY6099对HIF-1具有明显的抑制作用,IC5o为2.46×10-10 mol.L-1(比母体化合物低100倍左右);对多种人源肿瘤细胞的生长均具有良好的抗增殖作用,能有效抑制人源乳腺癌MX-1的生长(抑制率达到44.58％).结果提示,LXY6099作为一个结构新颖的HIF-1抑制剂,在体内外均具有一定的抗肿瘤作用.
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新型S1P1受体激动剂Syl948抗皮肤移植排斥反应研究
Syl948是通过化学合成获得的一种全新结构的选择性鞘氨醇-1-磷酸1型受体(sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1P1)前药类激动剂.体外HTRF-IP1 (homogeneous time-resolved fluorescence-IPl)检测显示,其活性磷酸酯形式Syl948-P对S1P1具有较强的激动活性[EC50:(83±16) nmol·L-1],而对S1P3激动作用较弱[EC50:(1 026±-90) nmol·L-1],表明其具有良好的受体激动选择性.体内生物活性研究表明,单次灌胃给予SD大鼠Syl948(10 mg·kg-1)能够显著降低动物外周血淋巴细胞水平,大淋巴细胞降低百分率为63％,与相同剂量的阳性药芬戈莫德(fingolimod,FTY720)作用强度相当(以克分子剂量比较).单次灌胃给予SD大鼠Sy1948 (10 mg·kg-1),对大鼠心率没有明显影响,优于阳性药FTY720.每天灌胃给予小鼠Syl948(2或4 mg·kg-1)能够显著延长小鼠皮肤移植模型中移植皮片的存活时间.上述研究结果提示,Syl948具有较强的抗皮肤移植排斥反应活性,且无减缓心率的不良反应.
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索拉非尼类似物的合成和体外抗肿瘤活性研究
本研究以索拉非尼为先导化合物,对其结构进行改造,合成了一系列酰肼羧酸类化合物.用MTT法对目标化合物进行了体外抗肿瘤活性筛选,结果显示部分化合物对测试肿瘤细胞的抑制活性优于阳性对照药索拉非尼,其中化合物7c对ACHN、HCT116、MDA-MB-231的IC50值分别为9.01、4.97和6.61 μmol.L-1.
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苯甲酰磺胺噻唑类PTP1B抑制剂的构效关系研究
蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatase,PTP) 1B是治疗2型糖尿病(T2DM)及肥胖症的潜在靶点.在前期研究中,基于PTP1B酶的变构抑制位点设计得到了具有体内胰岛素增敏作用的苯甲酰磺胺噻唑类非竞争性PTP1B抑制剂Ⅱ.本文基于化合物Ⅱ进行了初步的构效关系研究,共设计合成新化合物13个,其中化合物10具有显著的PTP1B抑制作用,其对人重组PTP1B的半数抑制浓度IC50为3.97 μmol·L-1,与化合物Ⅱ相当.
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石竹中一个新的环二肽
对石竹(Dianthus chinensis)地上部分进行了化学成分研究,经过一系列正相和反相色谱柱和高效液相色谱等现代分离技术,分离得到4个环二肽(1～4),并通过MS、NMR、IR和LC-MS等波谱学方法对这些化合物进行结构鉴定,其中cyclo-(L-N-methyl Glu-L-N-methyl Glu) (1)为一个新的环二肽.
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新型苯并咪唑衍生物的设计、合成和抗结核活性研究
脲基衍生物是新报道的一类具有抗结核活性的化合物,其主要作用机制是通过抑制质膜转运子MmpL3,从而抑制结核杆菌细胞壁的合成.AU1235作为此系列的代表化合物,存在药代性质较差的问题.本文以AU1235为先导化合物,通过骨架跃迁策略设计并合成了一系列新型苯并咪唑衍生物,并进行体外抗结核活性测试.结果表明,2-氨基苯并咪唑类化合物8b在保留良好抗结核活性(MIC 0.03 μg·mL-1)的同时,其代谢稳定性得到了改善,为进一步的结构优化提供了重要参考.
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青天葵中一个新二萜苷
利用D101大孔吸附树脂、硅胶、ODS柱色谱以及制备型高效液相色谱等方法对青天葵植物化学成分进行研究,从青天葵的60％乙醇提取物中分离得到一个新的半日花烷型二萜苷(1).通过HR-MS、1D和2D NMR以及化学方法鉴定化合物1为12,17-epoxy-3-hydroxy-17-methoxy-labdan-13-en-16,15-olide 3-O-α-rhamnopyranosyl-(1→2)-O-β-glucopyranoside,命名为nervilifordoside A.
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长循环脂质化策略增强达托霉素抗耐甲氧西林金葡菌全身感染
随着病原体耐药的控制难度持续增大,除不断研发新型抗生素之外,对已有抗生素进行递送研究与新制剂创制具有同等重要性.达托霉素是近年来上市的一种新型脂肽类抗生素,目前仅有其普通溶液型注射剂用于临床.本文采用聚乙二醇修饰的脂质体作为载体,考察并系统评价经优化制备的长循环达托霉素脂质体(PLD)抗耐甲氧西林金葡菌(MRSA252)全身感染.通过优化制备得到的达托霉素脂质体粒径小[(111.5±15.4)nm]、载药量较高[(5.81±0.19)％],并具有良好稳定性.体内外评价结果显示,在相同剂量下PLD与达托霉素原料药及普通脂质体制剂相比,对MRSA252有更持久的抑制效果,并能显著提高耐甲氧西林金葡菌全身感染模型小鼠的存活率.此外,PLD能显著提高达托霉素在肺部的分布并显示良好的安全性.上述研究结果提示,长循环脂质化达托霉素对抗MRSA严重感染(血源性肺炎等)具有良好的应用前景,可为达托霉素新制剂的研发及临床相关研究提供重要参考.
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药物-蛋白质相互作用谱分析环糊精-白藜芦醇超分子包合性能及理论模型建立
采用药物-蛋白质相互作用谱研究β-环糊精(β-cyclodextrin,β-CD)与白藜芦醇(resveratrol,Res)药物超分子包合作用并比较分析其与经典方法的异同.利用Gaussian量化方法计算β-环糊精与Res的稳定包合构型,计算各构型的总能量.运用分子模建方法探索白藜芦醇/包合物与牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin,BLF)相互作用过程中超分子包合物的稳定构型并比较分析其差异性.结果表明,相互作用谱法既能更灵敏地表征包合物的包合性能,又能有效展现BLF输送包合物的机制,分子模拟结果与量化计算结果基本一致,均获得了包合物的稳定构型.相关结果可为研究白藜芦醇-β-环糊精包合物的药理作用提供实验依据,为包合物超分子体系的研究方法提供参考.
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载盐酸伊立替康的半乳糖修饰脂质-介孔硅核壳纳米粒对肝癌细胞的抑制效果
本文旨在构建一种全新的半乳糖修饰的脂质-介孔硅核壳纳米载体(galactosyl modified lipid bilayercoated mesoporous silica nanoparticles,GPEM)以增强抗肿瘤药物对肝癌细胞的抑制效果.研究以盐酸伊立替康(irinotecan,CPT-11)为模型药物,修饰半乳糖配基的Pluronic P123 (Gal-P123)和磷脂材料构建功能性脂质膜,结合介孔硅纳米粒(mesoporous silica nanoparticles,MSNs),采用薄膜分散法制备GPEM,表征其粒径、电位、微观形态和体外释放行为.研究纳米载体在人肝癌细胞Huh-7细胞摄取能力、胞内抗肿瘤药物蓄积水平,并以细胞凋亡率和细胞活性评价其抗肿瘤细胞效果.结果表明:GPEM核壳结构清晰,外层脂质膜完整,内部MSNs介孔结构有序;平均粒径为(78.01 +2.04) nm.功能性脂质膜在正常生理环境下可防止药物提前泄露;在胞内酸性条件下脂膜破裂,药物快速释放.同时,功能性脂质膜可有效提高载体与Huh-7细胞的亲和性,增加细胞摄取.与MSNs相比,GPEM使胞内CPT-11蓄积浓度提高约4倍,半数抑制浓度(IC5o)降低了约2倍,细胞凋亡率上升了48.6％,抗肝癌细胞效果显著增强.
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透明质酸修饰的核壳纳米粒对视网膜色素上皮细胞基因转染效率的研究
本文旨在制备透明质酸(hyaluronic acid,HA)修饰的核壳纳米粒(pHA-LCS-NPs)作为基因药物传递载体,并对视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,ARPE-19)基因转染效率进行研究.采用薄膜分散水化-挤膜法制备核壳纳米粒(LCS-NPs),通过HA与二油酰磷脂酰乙醇胺(dioleoyl phosphatidylethanolamine,DOPE)发生酰胺反应,对脂质膜进行修饰,制得pHA-LCS-NPs.本研究对纳米粒微观形态、粒径和zeta电位进行考察;采用XTT法测定载体的细胞毒性;以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,pEGFP)基因为报告基因,探讨不同含量HA修饰的pHA-LCS-NPs对ARPE-19细胞基因转染效率的影响.结果表明:纳米粒呈现清晰的核壳结构,平均粒径为(214.9±7.2) nm,zeta电位为(-35 +3.7) mV; pHA-LCS-NPs组24 h基因的累积释放率低于30％; 48 h的细胞转染效率是壳聚糖纳米粒(CS-NPs)组的1.81倍、裸质粒组的3.75倍,且无明显细胞毒性.以上结果显示,pHA-LCS-NPs有潜力成为一种高效低毒的非病毒型基因药物传递载体.
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基于细胞动态生物反应谱的抗肿瘤先导化合物筛选方法研究
为弥补抗肿瘤活性评估常规断点检测法操作繁琐、灵敏度低等局限,尝试建立基于细胞动态生物反应谱的抗肿瘤先导化合物筛选新方法.依据活细胞具有电阻抗生物传感属性,以细胞指数、半数抑制浓度IC5o和脱附曲线为评价指标,采用实时在线分析技术动态监测模式药表柔比星、顺铂、卡铂对HepG2细胞生长的影响,并辅以CCK-8 (cell counting kit-8)和显微监视佐证.结果显示,以细胞指数-作用时间关系表征的细胞动态生物反应谱可灵敏地反映模式药抑制HepG2细胞的动态特征效应信息,3种药物的IC50分别为(0.53±0.04)、(9.79+0.26)和(597.00±3.79) μg·mL-1,进一步发现3种药物的脱附曲线差异明显,提示其作用特征可能不同,这与常规检测方法及文献报道一致.研究表明,具有无标记、非侵入、实时动态等特点的细胞动态生物反应谱技术,可定性定量地表征3种药物对HepG2细胞作用的过程动态信息,反映不同药物作用特征性差异,有望为抗肿瘤先导化合物的发现及作用特点或机制阐释提供线索.
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基于生物分子网络的槲皮素生物效应机制
运用代谢组学及生物效应网络方法研究槲皮素生物效应的机制.采用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术测定空白组与槲皮素给药组大鼠血清,质谱数据采用MATLAB软件处理,利用偏小二乘辨别法分析空白组、槲皮素给药组之间的代谢差异,并通过变量重要性投影选取潜在的生物标志物,结合质谱信息和数据库检索对潜在的生物标志物进行鉴定,确定了4个化合物的结构、代谢途径,以及相关的酶和作用靶点,分别为维生素A酸及视黄醛酸受体(RARβ)、花生四烯酸和COX-2同工酶、3,5-二碘酪氨酸及甲状腺过氧化物酶(TPO)、尿苷二磷酸葡萄糖和磷酸二酯酶(PDEs).通过生物效应网络并结合相关文献证明槲皮素可使维生素A酸对视黄醛酸受体(RARβ)的诱导能力增强、活化甲状腺过氧化物酶(TPO)、还可作为COX-2同工酶和磷酸二酯酶(PDEs)的抑制剂.该研究在生物分子网络调控的层面阐释了槲皮素的多种生物效应,说明代谢组学及生物效应网络方法能用于槲皮素生物效应机制的研究,为进一步揭示药物作用机制提供了新方法.
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谷浓度采样设计和算法对群体和个体药动学参数估算的影响
本研究以符合一室和两室模型特征的奥卡西平和他克莫司为典型药物,采用蒙特卡洛法模拟服药后的稳态谷浓度,且均用一室模型拟合,考察不同多谷浓度采样方案(每名受试者采集1～4个谷浓度)和NONMEM软件中的不同算法对群体和个体药动学参数估算的影响.结果表明:表观清除率(CL/F)估算的准确度和精密度优于其他参数.对于奥卡西平,增加每名受试者的谷浓度采样次数,所有参数估算的准确度和精密度均有改善.对于他克莫司,随着采样增加,CL/F与其个体间变异的估算更稳定,残差变异估算也更可靠,但前者的估算准确度无改善.算法中蒙特卡洛重要抽样法(IMP)和基于后验估计的IMP法(IMPMAP)较稳定可靠.个体参数的估算仅与算法中是否含个体间变异和残差变异的交互作用有关.随着变异水平减小,群体或个体参数估算的准确度和精密度均有改善,且残差变异的影响大于个体间变异.上述结果可为基于谷浓度的群体药动学研究提供参考.
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UPLC-MS/MS法研究国产辛伐他汀及片剂的杂质谱
采用超高效液相-三重四级杆质谱联用技术对国内上市的辛伐他汀及其片剂的杂质谱杂质进行分析.本研究共确证了辛伐他汀的12个杂质,其中2个杂质为新化合物.所有杂质均以辛伐他汀和洛伐他汀的质谱裂解途径为模板,进行了质谱解析.该研究为辛伐他汀生产过程中的杂质控制和质量标准的有效制订提供了详实的数据支持.
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应用基于NMR代谢组学评价2',3',5'-三氧乙酰基-N6-(3-羟基苯胺)腺苷剂量相关效应
2',3',5'-三氧乙酰基-N6-(3-羟基苯胺)腺苷(WS070117)是天然产物虫草素的衍生物,体内外实验证明它具有显著脂质调节活性,并且毒性低.本次研究采用基于NMR代谢组学方法评价不同剂量WS070117调血脂活性.高脂血地鼠用6个不同剂量的WS070117(3、12、50、100、200和400 mg.kg-1·d-1)治疗.采用主成分分析法(PCA)及正交偏小二乘法-判别分析法(OPLS-DA)两种多变量方法分析地鼠血清氢图谱.结果表明,WS070117能有效调节高脂血地鼠脂代谢、胆碱代谢及糖代谢紊乱,且其效应与剂量呈正相关.3 mg·kg-1·d-1的WS070117具有微弱脂质调节活性,而12和50 mg·kg-1·d-1的WS070117都显著调节代谢物浓度向正常水平转归,当WS070117的剂量达到100 mg·kg-1-d-1时,它的脂质调节活性强于阳性对照药.结果表明,基于NMR代谢组学可能成为评价调血脂化合物剂量效应关系的有效方法.
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三氧化二砷中间代谢产物二甲基亚砷酸(DMAⅢ)与大鼠血红蛋白相互作用的分子机制研究
为了研究三氧化二砷的中间代谢产物三价二甲基亚砷酸DMAⅢ与大鼠血红蛋白的作用位点及其机制,本研究将SD大鼠随机分成对照组和给药组,对照组单次经口给蒸馏水,给药组单次经口给予三价亚砷酸(iAsⅢ),分离大鼠血红细胞→溶血→获得血红蛋白.利用高效液相质谱(HPLC)联用结合电感耦合等离子质谱仪(ICP-MS)分析砷结合血红蛋白的化学形态.利用时间飞行质谱(LC/ESI-TOF-MS)分析DMAⅢ与血红蛋白结合位置,进一步采用分子对接(molecular docking)方法预测了DMAⅢ与血红蛋白的结合模式,从分子水平上分析了DMAⅢ与血红蛋白的作用机制.实验结果表明,砷以DMAⅢ与大鼠血红蛋白结合,主要结合位点为血红蛋白的alpha链螺旋的Cys13周围的氨基酸口袋,该位置使DMAⅢ更容易结合半胱氨酸,并阻止了DMAⅢ的游离.指出DMAⅢ与血红蛋白的高亲和力与Cys13周围的空间结构有直接关系.
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以经典药物化学方法研发的达拉非尼
1 B-Raf靶标的重要意义所有的真核生物细胞都有多个丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路,MAPK属于细胞内的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,具有调节细胞生长、增殖、分化和血管重塑等功能.B-Raf作为蛋白激酶Raf中的一员,在MAPK通路中起关键作用.当B-Raf调控域发生突变,特别是V600E突变,使激酶发生构成性的激活,引起细胞癌变.抑制变异的B-RafV600E激酶,是治疗黑色素瘤和结肠癌的药物靶标.达拉非尼(dabrafenib)是由GSK研发,于2013年上市的治疗转移性黑色素瘤的抗肿瘤药物.
关键词： -
甘草鲨烯合酶1基因多态性及其与β-香树脂醇合成酶共表达对β-香树脂醇积累的影响研究
甘草是我国常用的大宗药材之一.甘草中主要的活性成分为甘草酸,其生物合成途径受到很多酶的调节.鲨烯合酶(squalene synthase,SQS)及β-香树脂醇合成酶(β-amyrin synthase,β-AS)是其中的两种关键酶.为了揭示鲨烯合酶基因多态性及其与β-香树脂醇合成酶共表达对MVA代谢途径的影响,本文构建了7种载体,分别含有3种不同的SQS1基因和β-AS基因,将其在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中表达,通过TLC及GC-MS检测代谢产物β-香树脂醇的含量.结果显示SQS1基因与β-AS基因共表达有助于代谢产物β-香树脂醇的积累,在3种不同的SQSl基因中,以SQS12为好.本文为进一步研究功能基因对甘草酸代谢途径的影响以及提高甘草酸的含量奠定了理论基础.
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酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因单倍体缺陷型突变株的构建
羊毛甾醇合酶基因(lanosterol synthase gene,erg7)编码的羊毛甾醇合酶是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甾醇生物合成途径中重要的限速酶.酿酒酵母固有的甲羟戊酸(MVA)/麦角甾醇代谢途径的中间体2,3-氧化鲨烯也是三萜类化合物的合成前体.因此,羊毛甾醇合酶催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点.下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢,可为应用合成生物学技术在酿酒酵母中组建三萜类化合物的代谢途径奠定基础.本研究通过设计含有与erg7基因ORF序列两侧同源的长引物,以质粒PUG66为模板进行PCR,构建带有loxP-Marker-loxP的erg7基因敲除组件,采用LiAc/SS CarrierDNA/PEG方法转化双倍体野生型酿酒酵母INVScl,通过同源重组的方式构建酿酒酵母erg7基因单倍体缺陷型突变株.半定量PCR和实时定量PCR结果表明,突变株内erg7基因表达水平下降约1倍.TLC和HPLC结果表明,突变株内麦角甾醇含量下降至野生型菌株的42％.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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