药学学报杂志
Acta Pharmaceutica Sinica 약학학보
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中国药学会 中国医学科学院药物研究所
- 影响因子: 1.27
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0513-4870
- 国内刊号: 11-2163/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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新型PPARδ受体激动剂体外活性筛选及对高血脂金黄地鼠的调脂作用
对新型过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)激动剂HS060098激活PPARα、PPARy和PPARδ受体的活性进行筛选,并研究其对饮食性高脂血症金黄地鼠的血脂调节作用.首先,以肝癌HepG2细胞构建PPARs-荧光素酶基因报告系统,转染绿色荧光蛋白(green fluorescentprotein,GFP)质粒作为内参,分别加入不同浓度的HS060098后继续培养24 h,通过检测荧光素酶的相对活性来评价HS060098对PPARα、PPARy、PPARδ的激动活性;其次,以高脂饮食法复制金黄地鼠高脂血症模型,分别通过预防性给药与治疗性给药考察HS060098对高脂血症金黄地鼠血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平和脂肪指数的影响.体外研究结果显示,HS060098对PPARδ受体具有显著的激活作用,半数有效浓度(EC50)为0.01 μmol·L-1;对PPARα和PPARy并无明显的激活效应.体内研究结果显示,通过预防性给药和治疗性给药,与模型组比较,HS060098(5、10和20mg.kg-1)均可显著降低高脂血症金黄地鼠血浆中TC、TG、LDL-C水平和脂肪指数(P< 0.01,P<0.05),升高HDL-C水平(P<0.01,P<0.05).结果提示,HS060098具有较强的PPARδ激动活性,且对金黄地鼠实验性高脂血症具有显著的预防和治疗作用.
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五味子甲素对NLRP3炎性小体活性的抑制作用及机制初步研究
探讨五味子甲素(deoxyschizandrin,schisandrin A)对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中NLRP3 (NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3)炎性小体活性的抑制作用及初步机制.CCK-8法检测细胞毒性,根据细胞存活率确定给药浓度.通过Western blot方法检测细胞培养上清中IL-1β和caspase-1的表达,分析不同浓度的五味子甲素(25、50、100和200 μmol·L-1)对尼日利亚菌素(nigericin,Nig)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)诱导的NLRP3炎性小体活化的影响,检测细胞中pro-caspase-1、pro-IL-1β、ASC和NLRP3等蛋白的表达变化;免疫荧光技术分析NF-κB (p65)的入核情况.根据CCK-8法的结果,确定了五味子甲素的给药浓度范围为6.25~400 μmol·L-1.在25~200 μmol·L-1浓度内,五味子甲素能够抑制Nig和ATP引起的NLRP3炎症小体活化,进而抑制IL-1β的分泌.免疫荧光和Westem blot实验结果显示,五味子甲素对NLRP3炎症小体活性的抑制作用不依赖于NF-κB通路活性及其诱导的NLRP3、ASC和pro-IL-1β等炎性小体蛋白的表达.综上,本实验首次证实,五味子甲素在一定浓度范围内通过阻断caspase-1活化,抑制caspase-1对pro-IL-1β的剪切活化,进而抑制NLRP3炎性小体的活性,减轻免疫炎症反应.本研究为五味子甲素防治NLRP3炎性小体相关的疾病提供了参考依据.
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基于网络药理学的百合地黄汤干预心理亚健康作用机制研究
借助网络药理学技术预测并筛选百合地黄汤主要活性成分及其潜在靶点,探讨百合地黄汤对心理亚健康的多成分-多靶点-多通路干预作用机制.采用ADME/T计算方法筛选百合地黄汤的活性成分,依据中药系统药理学技术平台(TCMSP)、反向药效团匹配数据库(PharmMapper)和医学主题词表(Medical Subject Headings,缩写为MeSH)疾病分类预测和筛选百合地黄汤活性成分的作用靶点,并采用Sybyl中的Surflex-dock 模块对靶标预测结果进行验证.采用Cytoscape软件构建百合地黄汤活性成分-靶点-疾病网络,通过ClueGO插件对靶点的基因功能以及涉及的代谢通路进行分析.结果显示在百合地黄汤中筛选出11个活性成分,共涉及神经和免疫等21个靶点,且活性成分与预测的靶点有较好的相互作用,预测的21个靶点主要参与了GABA信号转导、cAMP信号通路以及单胺转运等相关生物过程.结果表明百合地黄汤可能通过调控G-蛋白偶联受体活性和单胺类神经递质的表达发挥干预心理亚健康的作用,体现中药多成分、多靶点、多途径的作用特点,为阐释百合地黄汤干预心理亚健康的作用机制提供科学依据.
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虫草素对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用及机制研究
探讨虫草素对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用及保护机制.将12周龄的雄性B6.V-Lepob/Lepob小鼠,按照血糖和体重分层后随机分为5组,并以C57BL/6J小鼠为对照组.每周监测一次体重和摄食,在给药2周和4周时,眼眶静脉取血测定血清中的各项生化指标,在给药5周时,进行胰岛素耐量实验,在给药7周后取肝脏组织对甘油三酯、胆固醇及炎症因子含量进行检测,并进行苏木精-伊红染色和油红O染色;提取肝组织的总RNA,采用实时定量PCR技术分析与脂质合成和炎症相关基因的表达.结果显示,虫草素可以有效降低ob/ob小鼠血脂水平,改善肝功能,明显降低肝脏组织脂质含量和炎症因子水平,而对胰岛素抵抗未见改善作用.实时定量PCR结果表明,虫草素可显著降低ob/ob小鼠肝脏组织中与脂质合成及炎症相关mRNA的表达.结果提示,虫草素对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝具有改善作用,其作用机制可能与下调脂质合成和炎症相关基因表达有关.
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优降宁对CYP3A4/3A7基因启动子和增强子区组蛋白甲基化修饰及其转录的影响
观察优降宁(pargyline)对细胞色素P450 3A (cytochrome P450 3A,CYP3A)亚型CYP3A4/3A7启动子及增强子区组蛋白甲基化修饰及其基因转录的影响.原代分离培养人胎肝细胞,分为空白对照组、溶媒组、优降宁低、中、高(0.6、1.2、2.4 mmol·L-1)浓度组,HepG2细胞用0.03、0.3、3 mmol·L-1优降宁处理48 h,观察组蛋白甲基化修饰对CYP3A4/3A7基因表达的影响;3 mmol·L-1优降宁处理组与对照组的HepG2细胞进行染色质免疫共沉淀,选取特异CYP3A4/3A7启动子、增强子区位点设计引物进行实时定量PCR,H3K4me2富集以input百分比表示观察富集的改变.结果表明,优降宁能促进人原代胎肝细胞、HepG2细胞增殖生长,与溶媒对照组相比,优降宁(1.2、2.4 mmol·L-1)显著升高人原代胎肝细胞CYP3A7表达水平,且优降宁(3 mmol·L-1)显著升高HepG2细胞CYP3A4/3A7表达水平(P< 0.001);CYP3A4近端启动子区(-362~+53)和增强子区(-7 836~-6 093)的肝细胞核因子4A (hepatocyte nuclear factors 4A,HNF4A)结合位点及CYP3A7启动子区(-163~+103)和增强子区(-4 054~-3 421,-6 265~-6 247)的糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)结合位点与对照组相比,处理组均表现为H3K4me2高度修饰(P<0.01,P<0.001).提示优降宁诱导CYP3A4/3A7启动子及增强子区HNF4A、GR结合位点H3K4me2高度富集激活CYP3A4/3A7基因转录.
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苯丙烯酰胺类化合物的设计、合成及抗血小板聚集活性
依据拼合原理,设计并合成了20个具有苯丙烯酰胺类结构的化合物,其结构均经IR、1HNMR、13CNMR和MS确证.采用Bron比浊法测定了所有化合物对二磷酸腺苷(adenosine diphoshate,ADP)及花生四烯酸(arachidonic acid,AA)诱导的血小板聚集的抑制活性.初步药理结果显示,化合物6b、9b、9d和9h对AA诱导的血小板聚集具有较好的抑制作用;化合物6b、6d、6j、9b和9g对ADP诱导的血小板聚集具有较好的抑制作用.
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N-1,3,4-噻二唑-2-基硫色满-4-酮-2-甲酰胺衍生物的合成及抗真菌活性测定
鉴于1,3,4-噻二唑和硫色满酮类化合物均是具有广泛生物活性的杂环化合物,为寻找具有抗真菌生物活性的新颖化合物,本文以取代苯硫酚和顺丁烯二酸酐为原料,合成中间产物2-羧基-硫色满酮,再与2-氨基-1,3,4-噻二唑反应,终合成了14个含有1,3,4-噻二唑片段的硫色满酮类衍生物.目标化合物的结构均由核磁共振氢谱(1H NMR)、核磁共振碳谱(13CNMR)和高分辨质谱(HR-MS)确证.采用微量稀释法对所合成的化合物进行抗真菌活性的测定.测试结果表明,化合物3a和3e对絮状表皮癣菌和总状毛霉菌的小抑菌浓度分别达到8 μg·mL-1和16 μg·mL-1,均优于阳性对照药物氟康唑.化合物3e对玉米小斑病菌、油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌的抑制活性均优于阳性对照药物多菌灵.化合物3b对玉米小斑病菌的抑制活性优于阳性对照药物多菌灵.
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α-CD-PAMAM抗血清阳离子聚合物的构建及其作为基因载体的性能评价
本文合成了一种α-环糊精(α-cyclodextrin,α-CD)与聚酰胺-胺(polyamidoamine,PAMAM)的接枝聚合物(CyD-G1).1H核磁测试结果表明,每个环糊精分子上平均接枝了6.4个PAMAM-G1分子.凝胶电泳结果显示,CyD-G1可以有效结合DNA,并保护DNA免于核酸酶DNase Ⅰ的降解.当载体与DNA复合物的N/P比为40时,可以压缩DNA形成平均粒径为120 nm左右的粒子,复合物表面的zeta电位约为+21 mV.该复合物可以在血清存在的条件下保持粒子的完整性并在360 min内稳定性良好.与对照品PEI-25K载体相比,CyD-G1在高浓度时仍表现出较低的细胞毒性.将CyD-G1与市售Lipofectamine 2000和PEI-25K对比转染发现,CyD-G1/DNA复合物在多种细胞系中具有较高的转染率,而且转染水平不受血清影响.通过激光共聚焦观察并结合流式细胞分析表明,该阳离子聚合物介导DNA可以在4h内有效进入细胞核内.上述结果证明,该阳离子聚合物作为一种非病毒型基因传递系统具有优良的性能以及体内给药应用的潜在可行性.
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四类眼用制剂流变学性质的研究
通过对4类眼用制剂流变学性质的研究,比较眼用凝胶剂与其他3种类型眼用制剂流变学性质的区别,为增加眼用凝胶剂质量标准中流变学指标和参数提供了依据.采用锥板式模具流变仪测定了4类眼用制剂非稳态与稳态流变学参数,分析测定结果,总结区分眼用凝胶剂与其他类型眼用制剂的流变学指标和参数.结果显示:①在线性黏弹区内,眼用凝胶剂的弹性模量应大于黏性模量;②眼用凝胶剂应为具有一定屈服应力和触变性的剪切变稀型非牛顿流体;③在温度为25℃,剪切速率为50 s-1时,眼用凝胶剂动力黏度应大于0.5 Pa·S.本文确立了眼用凝胶剂的特征流变学指标和参数,测定方法简单、操作性强,对于眼用凝胶剂的处方设计、生产工艺与质量控制具有重要意义.
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柴胡属药用植物的分子鉴定及市售柴胡药材的质量调查
柴胡是常用的大宗中药材之一,在我国有着两千多年的药用历史.但是目前柴胡药材品种混乱,有25种、8变种、3变型的柴胡属药用植物在不同地区和中药材市场作为柴胡使用,通过传统方法鉴别极为困难.为快速准确地对柴胡属为数众多的药用植物进行鉴定,本文从全国9省份14居群采集了168株柴胡属药用植物,扩增获得了长度为600~606 bp的ITS序列;通过DNAMAN比对分析找到86个变异位点,并确定了19种ITS单倍型(TH1~TH19);利用MEGA 5.0进行K2P (Kimura 2-parameter)遗传距离分析,发现种间遗传距离显著大于种内遗传距离;利用邻接(neighbor joining,NJ)法构建系统发育树,显示各物种聚类关系清晰,因此建立了基于ITS序列的柴胡属药用植物分子鉴定方法.利用该方法对来自全国5个主要中药材市场的52份柴胡药材进行了分子鉴定,并进一步利用HPLC法测定各药材中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量,应用ANOVA和LSD T检验进行统计学分析,从而对市售柴胡药材的质量进行评价.本文不仅对柴胡属药用植物的快速准确鉴定具有重要意义,而且对于掌握市场上柴胡药材的流通现状及质量评价具有指导意义.
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基于SSR标记的雷公藤属植物遗传多样性和遗传结构评价
雷公藤属植物是中药免疫抑制剂的首选原料药材.近年来,由于生态环境破坏和人为过度采挖,雷公藤属植物野生资源急剧减少,濒临灭绝,因此亟需保护其野生资源和评价其遗传多样性.本文通过简单重复序列分子标记(simple sequence repeat,SSR)探讨了28个雷公藤属植物野生居群(9个省共计396个样本)的遗传多样性和遗传结构.结果表明,雷公藤属植物具有较高遗传多样性水平,多态百分比(PPL)为77.29%,Shannon's信息指数(Ⅰ)为0.6394,平均基因杂合度(Ⅱ)为0.359 9.雷公藤属植物居群间存在较高的遗传分化,平均基因流(Nm)为0.228 7.Nei's遗传距离构建群体聚类树和Structure聚类分析表明28个居群可分为6支系,昆明山海棠主要被分成四川、云南、贵州-重庆3支,东北雷公藤单独聚为1支,雷公藤被分成2支,其中过渡类型LQ和NY被单独聚为1支.本文为雷公藤属植物野生资源保护、遗传多样性研究和分子标记辅助育种等方面的研究提供理论依据.
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天仙子中参与托品烷生物碱生物合成的ArAT基因的克隆及功能鉴定
托品烷类生物碱是临床上广泛应用的抗胆碱药物,其生物合成涉及到苯丙氨酸的转氨基反应.根据天仙子(Hyoscyamus niger)侧根和叶的转录组数据,筛选到3条功能注释为芳香族氨基酸氨基转移酶的基因,命名为HnArAT1、HnArAT2和HnArAT3.通过序列同源性分析,发现HnArAT3与颠茄的AbArAT4的氨基酸序列同源性高,两者为直系同源.组织表达谱显示,HnArAT3基因在根中特异性表达,与其他3个合成途径基因(PMT、TRI和H6H)表达模式相同.用病毒诱导的基因沉默(VIGS)方法在天仙子植株中鉴定HnArAT3的功能,对感染了病毒的植株,用实时荧光定量PCR检测基因的表达量,HPLC法测定托品烷类生物碱的含量.结果表明,在pTRV2-HnArAT3干扰的植株中,HnArAT3基因的表达量有显著下降,3种托品烷类生物碱莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪碱含量也有显著的降低.以上结果表明HnArAT3是天仙子中参与托品烷类生物碱生物合成的苯乳酸支路途径基因.HnArAT3基因的克隆为进一步研究托品烷类生物碱的生物合成和代谢调控奠定了基础,也为开展托品烷类生物碱的代谢工程研究提供了新的候选靶基因.
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基于微流控芯片技术的荆芥诱导肺肿瘤细胞凋亡谱效关系研究
为了进一步全面地阐明荆芥药材乙醇提取物中主要发挥抗肺癌作用的化学组成,本文基于微流控芯片技术开展不同产地荆芥药材乙醇提取物的体外抗肺肿瘤药效学研究,并通过HPLC方法建立9种不同产地荆芥药材乙醇提取物的指纹图谱,将药效指标与指纹图谱的相关信息通过灰色关联度软件进行谱效关系分析,采用HPLC-Q-TOF/MS的技术手段对其进行快速分析与鉴定.结果显示,关联系数较大的色谱峰中第19、6、16、11、18号峰所代表的化合物为香叶木素、木犀草苷、木犀草素、橙皮苷、芹菜素;第10、12、20号峰可能为柚皮素-7-O-葡萄糖醛酸苷或槲皮苷、迷迭香酸甲酯或异鼠李素-3-木糖苷、5,7-二羟基-6,4-二甲氧基黄酮.该研究进一步明确了荆芥中发挥抗肺肿瘤作用的主要化学组成,为荆芥药材的质量控制及中药复杂成分的药效物质基础研究提供方法学探讨和实验依据.
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HPLC-QTOF/MS方法分析元胡止痛方的化学成分
为全面阐明元胡止痛方的化学成分,本研究利用高效液相色谱串联四级杆/飞行时间质谱仪(HPLC-QTOF/MS)对元胡止痛方的化学组成进行分析鉴定.通过QTOF/MS提供化合物的准确分子质量、碎片离子信息,结合参考文献及部分对照品保留时间和质谱数据,共鉴定出元胡止痛方中51个化合物,包括28个生物碱类成分和23个香豆素类成分.本研究快速、准确、系统地分析了元胡止痛方的化学组分,为其质量控制和药效物质研究奠定基础.
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从精准医学谈药物设计的微观结构
精准医学应用“组学”和系统生物学在分子水平上分析患者的病因,并以靶向治疗手段对患者做个体化处治.精准医学与药物密切相关.药物作为治疗手段和物质供给侧,在精准医学中主要体现两个方面:针对特定的靶标或机制进行新药研发;针对疾病的分子特征对患者做个体化治疗的临床应用.基于特定靶标研发新分子实体是实施精准医疗的前提与保障;而精准医疗的效果和发现的线索又反馈于新药深化研究,二者相互依存和促进.在精准医学的框架下,新药研究所涵盖的大都是熟知内容:靶标的发现与确证;靶标与适应证的关联(概念验证);先导物的发现与优化;临床前研究的药效、药代和不良反应与临床试验的关联;药品设计、产业化和药物经济学的精益化等.从分子水平的视角看,药物的疗效源于药物分子的特定原子或基团与生物大分子的互补性和在三维空间的相互结合,这些原子基团或片段的严格排布映射了与效应靶标的精确结合.靶标蛋白即使发生微小的残基改变,也会导致大分子的构象变化,这时药物的分子结构必须做精细的微调以适配变化了的结构(构象)要求以避免脱靶作用.为了进行个体化治疗,需要根据患者生物标示物的分子特征选择有针对性的药物,因而需要研制多种新分子实体.本文列举一些实例试图解析在精准医学时代药物分子设计的某些趋势.
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佐米曲坦诱导雄性大鼠肝CYP3A2的作用机制
作者前期研究发现佐米曲坦(ZOL)对雄性大鼠肝中CYP3A2具有诱导作用,而对雌性大鼠没有诱导作用.阐明其机制对于研究ZOL的药物相互作用和个体化用药具有积极意义.由于生长激素(GH)与一些蛋白的性别差异性表达密切相关,因此,本研究探究了ZOL对大鼠GH分泌的影响,以及其对脑垂体化学损伤大鼠模型肝中CYP3A2的诱导作用.结果发现,ZOL可以抑制正常大鼠体内血浆GH水平.与正常组大鼠的诱导结果不同,ZOL抑制了损伤组雄性大鼠肝中CYP3A2的表达.另外,ZOL对于雌雄原代肝细胞中的CYP3A 1/2无明显诱导作用.进一步研究发现,给予ZOL后正常雄性大鼠肝中肝细胞核因子4α(HNF4α)的入核水平明显增加,而正常雌性大鼠、脑垂体化学损伤大鼠和大鼠原代肝细胞中HNF4α的入核水平无明显变化.结果表明,GH和HNF4α在ZOL性别差异性诱导CYP3A2的过程中发挥了重要的作用.
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肠道菌群介导溃疡性结肠炎大鼠肠CYP3A和P-糖蛋白的变化及机制
肠道细胞色素P450 3A (cytochrome P450 3A,CYP3A)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是肠屏障的重要组成部分.炎症性肠病中肠CYP3A和P-gp下调伴随肠道菌群紊乱.但两者是否关联?机制如何?尚不清楚.本研究采用5%葡聚糖硫酸钠诱导大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC),并对正常动物分别灌胃正常及UC动物粪便,发现粪便移植改变了受体动物肠道菌组成,而移植UC粪便组肠CYP3A2和P-gp mRNA的表达显著下调.外膜囊泡(outer-membrane vesicles,OMVs)是革兰阴性菌产生、进行群体行为及与环境通信的关键结构.不同处理组的OMVs均能下调人结肠腺癌细胞Caco-2中CYP3A4和P-gp的mRNA表达,而UC组以及UC粪便处理组的OMVs的抑制作用更强,且相对分子质量3~5万的OMVs组分的作用更显著.细胞经toll样受体4 (toll like receptor 4,TLR4)抑制剂瑞沙托维处理或转染TLR4 siRNA能够阻断OMVs对CYP3A4和P-gp的下调.本研究证实,UC肠道菌部分通过分泌OMVs活化TLR4受体通路下调肠道CYP3A和P-gp表达.
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抑郁症中的免疫代谢调控异常与药物干预研究进展
针对单胺类神经递质失衡的经典抗抑郁治疗方案有着较大的局限性.近年来,临床和动物实验不断揭示炎症免疫机制与抑郁症的发生、发展密切相关.随着神经-免疫-代谢互动研究的深入,免疫代谢异常驱动的神经炎症反应和病变已成为抑郁病理机制和药物干预研究的重要方向.本文在阐述抑郁症病理网络中免疫代谢失调环节的基础上,总结抗抑郁活性化合物免疫代谢调控的新作用,并探讨以上研究进展对于抗抑郁症药物研发策略和临床治疗的启示.
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人细胞色素P450酶2J2的功能及其配体研究进展
细胞色素酶P450 2J2 (cytochrome P450 2J2,CYP2J2)广泛分布于人体多个组织,参与众多内源性化合物和外源性药物的代谢.CYP2J2可催化花生四烯酸(arachidonic acid,AA)生成具有多种生理功能的环氧化二十碳三烯甘油酸(expoxyeicosatrienoic acids,EETs),进而在调节心血管功能和肿瘤发生发展中发挥重要作用.此外,CYP2J2在阿司咪唑、依巴斯汀和特非那定等临床药物的肠道代谢中也发挥关键作用,是多种药物肠道首过代谢环节的重要屏障.本综述结合国内外新近研究进展,系统介绍了CYP2J2的分布、功能及催化特征,CYP2J2功能的表征方法和探针底物研究现状、药物等外源物对CYP2J2的调节作用以及CYP2J2与人类疾病间的关系等,旨在使国内医药领域的研究者更加深入地了解CYP2J2的功能及其在疾病发生发展中的作用.本文通过对近年来CYP2J2配体(底物和抑制剂)研究进展的总结,以期为以CYP2J2为靶点的新药研发提供指导和参考.
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非P450酶介导的药物氧化代谢研究进展
常见的催化药物氧化代谢的非P450酶包括黄素单氧化酶(FMO)、单胺氧化酶(MAO)、醛氧化酶(AO)、黄嘌呤氧化酶(xO)、乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH).近年来,它们在药物氧化代谢中的作用越来越受到重视.但是,由于在药物发现和先导化合物优化过程中通常使用P450酶相关的体外模型进行代谢研究,非P450酶在药物氧化代谢中的贡献往往被低估.本文综述了以上非P450酶的催化反应类型、常见底物、基因多态性以及药物相互作用,并总结了非P450酶介导药物氧化代谢的体外研究模型及影响因素.与P450酶类似,非P450酶可以直接催化药物发生氧化代谢,产生具有治疗活性的代谢物或者毒性代谢物.这类酶也可以进一步氧化经P450酶催化产生的毒性代谢物,发挥解毒作用.与P450酶相比,大部分非P450酶(如FMO和MAO)不容易被诱导.
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基于BODIPY母核的羧酸酯酶1特异性荧光探针底物的设计研发
羧酸酯酶1 (carboxylesterase 1,CE1)是哺乳动物体内分布的一种重要的丝氨酸水解酶,广泛参与多种内外源性酯类化合物(包括胆固醇酯等内源物,以及酯类药物及杀虫剂等外源物)的水解代谢.本研究基于人羧酸酯酶1 (hCE1)偏好底物的结构特征,选取8-羧酸-BODIPY为荧光母核,设计合成了4种BODIPY-8-羧酸酯衍生物,进而通过单酶筛选和酶抑制实验考察了hCE1催化4种酯类底物的特异性.研究发现,BODIPY-8-羧酸酯的醇基部分越小,hCE1对底物的选择性越高,BODIPY-8-羧酸甲酯(BCM)和BODIPY-8-羧酸乙酯(BCE)均可以作为hCE1的特异性荧光探针底物.在此基础上,选择了水解速率更快的BCM为hCE1探针底物,进一步考察了BCM在人肝微粒体(HLM)和hCE1单酶中的水解动力学,并借助该底物开展了hCE1抑制剂的高效表征研究.研究发现BCM在HLM和hCE1中的酶动力学行为及Km值非常接近,表明hCE1是HLM中参与BCM水解的主要代谢酶.此外,抑制剂表征实验表明BCM可用于hCE1抑制剂的高效筛选与评价,且可用HLM代替hCE1单酶进行酶抑制剂的筛选与评价.
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基于药物代谢酶和转运体基因组学的药物精准治疗
药物基因组学旨在研究药物效应(药物体内过程、安全性和有效性)的个体差异与基因变异(药物代谢酶、转运体和药物靶点)之间的关系.药物精准治疗是以药物基因组学为基础,结合患者的其他个体情况实施量体裁衣式的药物治疗.本文总结了基于药物代谢酶和转运体基因组学的药物精准治疗的临床应用进展,提出应重点关注的科学问题(包括多基因和非遗传因素对药物效应的影响、治疗药物监测与药物基因组学检测的整合),同时提出临床应用中面临的瓶颈问题及其相关对策.
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白花前胡丙素、丁素、E素对羧酸酯酶的抑制作用
白花前胡丙素、丁素、E素是从中药白花前胡中提取的重要成分,具有多种药理学活性.本研究通过体外人肝微粒体孵育体系,检测白花前胡丙素、丁素及E素对人体重要的Ⅰ相代谢酶一羧酸酯酶1和羧酸酯酶2活性的抑制作用,同时进行抑制动力学评价和体外-体内外推.结果显示,100μmol·L-1白花前胡丁素对羧酸酯酶1有很强的抑制作用,抑制率达到81.7%.白花前胡丁素对羧酸酯酶1抑制作用类型为非竞争性抑制,抑制动力学参数(K)为122.2 μmol·L-1,提示白花前胡丁素可能影响在体内对羧酸酯酶1产生影响,从而引发内源性代谢障碍或药物-药物相互作用.
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PKC/NF-κB-PXR信号通路对P-糖蛋白基因表达的调控研究
P-糖蛋白(P-gp)是ABC (ATP binding cassette)转运体家族重要成员,也是药物在机体内转运的重要载体.本文考察PKC/NF-κB-PXR信号途径对LS 174T细胞中P-gp基因表达的调控作用.运用孕甾烷X受体(PXR)-MDR1双荧光报告基因实验探究PKC激动剂佛波酯(PMA)对LS174T细胞中MDR1荧光素酶活性的影响;分别采用real-time qPCR和Western blot检测PMA对LS174T细胞中P-gp mRNA表达、蛋白表达及NF-κB通路相关蛋白的影响.结果表明,PKC激动剂PMA能明显抑制PXR介导的P-gp荧光素酶活性、mRNA和蛋白表达,并能显著性增加胞内RelA/p65的核转位.此外,siRNA干扰实验结果显示,PKCa siRNA、RelA siRNA或PXR siRNA干扰均可显著削弱PMA对P-gp基因表达的下调作用.因此,PKC激动剂能显著抑制PXR介导的P-gp基因表达并伴随NF-κB激活,提示PKC/NF-κB-PXR信号通路对P-gp基因表达具有重要的调控作用.
年 | 期数 |
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