N-肉豆蔻酰基转移酶--抗真菌药物作用新靶点

目前抗真菌药物主要针对羊毛甾醇14α-去甲基化酶(唑类抗真菌药物)[1]、真菌细胞膜脂质(多烯类抗真菌抗生素)[2]和真菌细胞壁β-1,3葡聚糖合成酶(脂肽类抗真菌药物)[3]这3个靶酶,但所研发的药物均存在一定的局限性,如抗菌谱窄、耐药性严重、生物利用度低、毒副作用较强等问题[4～6].因此,除了优化改良现有药物的结构和制剂外,寻找具全新作用机制(靶酶)的高效、低毒、高选择性的新型先导化合物成为抗真菌药物研究的重要方向.近年来,大量实验证明,N-肉豆蔻酰基转移酶(N-myristoyltransferase,NMT)是一个极具前景的抗真菌药物作用新靶点.本文将就其结构、功能、催化反应机制及抑制剂方面的研究进展作一综述.

代谢组学研究现状与展望

人类基因组测序工作的完成,迎来了后基因时代.人们对生命过程的理解有了很大的提高,研究的热点转移到基因的功能和几个"组学"研究,包括研究核糖核酸(RNA) 转录过程的转录组学、研究某个过程中所有蛋白及其功能的蛋白质组学、研究代谢产物的变化及代谢途径的代谢组学.

基于极化荧光方法的人LOX-1配体高通量筛选

目的建立以极化荧光为检测方法的高通量筛选技术,通过大规模筛选发现氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的天然配体.方法密度梯度超速离心获得正常人血中低密度脂蛋白(LDL),然后用CuSO4(5 μmol·L-1)修饰为氧化型低密度脂蛋白(oxLDL).FITC标记hLOX-1,以受体(LOX-1)和配体(oxLDL)的相互作用为基础建立筛选模型,用极化荧光检测方法,在激发光485 nm、发射光525 nm,对3 200个样品进行高通量筛选,并用Z′因子值评价实验.结果 Z′因子值为0.75,根据建立的基于极化荧光的高通量筛选实验方法,发现3个化合物与hLOX-1有较高的结合活性,IC50值小于31.6 μmol·L-1.结论极化荧光检测方法适合于高通量筛选技术,具有较高的稳定性、灵敏性和可重复性.

细胞色素P450 CYP2C9*3对格列本脲和氯诺昔康中国人体药代动力学的影响

目的研究人体内细胞色素P450 2C9酶突变等位基因CYP2C9*3对格列本脲和氯诺昔康药代动力学的影响.方法采用PCR-RFLP方法对83名无血源关系的受试者进行CYP2C9*3等位基因的筛查,基因型为CYP2C9*1/*3(n=7)和*1/*1(n=11)的受试者分别参加了格列本脲和氯诺昔康的人体药代动力学试验.采用LC/MS/MS法分别测定受试者口服格列本脲(2.5 mg)和氯诺昔康(8 mg)后不同时刻血浆中格列本脲和氯诺昔康的浓度.结果两组受试者口服格列本脲后,CYP2C9*1/*3组AUC0-∞显著增加,为CYP2C9*1/*1组的1.5倍,CL/F降低了40%;两组受试者口服氯诺昔康后,CYP2C9*1/*3组AUC0-∞亦显著增加,为CYP2C9*1/*1组的2.2倍,CL/F降低了55%.结论 CYP2C9酶的突变等位基因CYP2C9*3对格列本脲和氯诺昔康的药代动力学有显著性影响.

人磷酸二酯酶同工酶3A在昆虫杆状病毒系统中的表达

目的利用杆状病毒表达系统探讨人磷酸二酯酶同工酶3A(HPDE3A)在Tn细胞中的表达.方法用重组HPDE3A杆状病毒感染昆虫Tn细胞进行蛋白表达,通过RT-PCR,SDS-PAGE和Western blotting技术检测HPDE3A表达情况.结果重组杆状病毒在感染Tn细胞后形态变化明显,获得表达产物,RT-PCR扩增结果证实了Tn细胞中HPDE3A的mRNA水平增高,Tn细胞能够表达出与HPDE3A多克隆抗体结合的蛋白,蛋白分子质量约为120 kD.结论 HPDE3A在昆虫杆状病毒表达系统中可以稳定表达,为进一步研究HPDE3A的生物学活性及筛选HPDE3A抑制剂奠定了基础.

大黄素对大鼠近端结肠平滑肌细胞电压依赖性钾通道的影响

目的研究大黄素对大鼠近端结肠电压依赖性钾离子通道的影响,以探讨其增强结肠运动的机制.方法采用全细胞膜片钳技术测定电压依赖性钾离子通道快速激活型钾电流及延迟整流型钾电流.结果大黄素(1～30 μmol·L-1)浓度依赖性地阻断延迟整流性钾通道,加快电流失活,其阻断作用不需要钾通道的开放.30 μmol·L-1大黄素可抑制快速激活型钾电流.5 μmol·L-1大黄素对钾通道的激活动力学及失活动力学没有影响,但30 μmol·L-1大黄素使其激活动力学曲线明显右移,斜率常数由(13.0±0.6)上升至(19.6±2.5) mV,同时也使失活动力学曲线明显右移.结论大黄素可阻断延迟整流型钾通道及快速激活型钾通道,其阻断作用不是开放阻断.

姜黄素对前列腺特异抗原基因表达的抑制

目的研究姜黄素对前列腺特异抗原(PSA)表达的影响.方法化学发光法检测不同浓度的姜黄素处理前列腺癌细胞株LNCap后PSA含量,利用荧光素酶报告基因pGL-3构建含PSA基因5′侧启动子区640 bp DNA的荧光素酶表达载体pGL3-PSA,并将其转染LNCap细胞,不同浓度姜黄素作用24 h后应用荧光素酶测定系统检测荧光素酶表达活性.Western blotting检测姜黄素处理过的LNCap细胞雄激素受体(AR)的表达.结果姜黄素抑制PSA、荧光素酶和AR受体的表达,并有浓度依赖性.结论姜黄素通过抑制雄激素受体的表达减弱对PSA基因启动子的作用,从而抑制PSA的表达.

新的核苷类化合物β-L-D4A的化学合成及体外抗HBV作用

目的以D型谷氨酸为原料,通过一系列化学转化,合成了新的核苷类化合物β-L-D4A,并初步探索其体外抗HBV作用.方法合成β-L-D4A,用红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证目标化合物的结构,以2.2.15细胞(HepG2细胞进行HBV基因组转染后所得)培养为基础,Southern印迹法检测不同浓度化合物体外抑制HNV DNA复制作用,并求出50%抑制的药物浓度,即EC50.以四噻唑蓝(MTT)比色分析法检测不同浓度药物的细胞毒性,求出IC50.结果化合物β-L-D4A经红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证;2.2.15细胞培养上清液病毒DNA的Southern印迹、自显影结果显示病毒的抑制呈明显的浓度依赖性,计算出EC50为0.2 μmol·L-1,胞内DNA的Southern印迹、自显影显示类似的结果;细胞毒性实验显示IC50为200 μmol·L-1.结论体外实验显示β-L-D4A具有明显的抑制病毒DNA复制作用,且无明显的细胞毒性,TI值为1 000,高于临床用Lamivudine (750),有望开发为临床抗HBV用药.

商陆培养细胞对6β-santonin的生物转化

目的利用商陆培养细胞对6β-santonin (1)进行生物转化,以获得多种利于进一步进行结构改造的衍生物.方法将底物1与商陆培养细胞共孵化,采用色谱分离技术得到产物,通过理化性质和光谱数据对产物进行结构鉴定.结果与商陆培养细胞共孵化7 d后,底物1转化为5个产物(2～6),其中3为新化合物.结论利用商陆培养细胞可对6β-santonin进行选择性还原及羟基化反应,可为其进一步化学结构改造提供有价值的中间体.

安宫黄体酮母液中两个新化合物的分离与结构鉴定

目的研究药物安宫黄体酮中所含的杂质.方法应用柱色谱方法进行分离和纯化,NMR和MS等波谱方法确定结构.结果从安宫黄体酮母液中分离得到2个化合物.结论化合物1和2为新差向异构体,其结构分别鉴定为:17α-氧乙酰基-2β,6α-二甲基孕甾-4-烯-3,20-二酮;17α-氧乙酰基-2α,6α-二甲基孕甾-4-烯-3,20-二酮.

环维黄杨星D的前药改造及生物活性研究

目的通过对植物活性单体--环维黄杨星D的前药改造,以寻求疗效更好、治疗安全范围更宽的心血管药物.方法根据前药设计原理,设计合成目标化合物,并研究其生物活性.结果获得7个环维黄杨星D新衍生物,并经光谱证明其结构.结论选取部分环维黄杨星D新衍生物进行抗心律失常药理实验,结果表明部分化合物药理效果优于环维黄杨星D.

喹喔啉衍生物的设计合成及抗肿瘤活性研究

目的设计和合成新型喹喔啉类抗肿瘤药物.方法以4-氯-2-硝基苯胺为起始原料经取代、还原关环、氧化、和氯代合成了中间体2,7-二氯喹喔啉(7),再在喹喔啉的2位引入不同的取代酚结构单元,合成了一系列共9个新喹喔啉衍生物.结果目标产物利用1H NMR,MS和IR进行结构确认.结论初步体外抗肿瘤活性测试表明,在1×10-4 mol·L-1浓度时,部分目标化合物的抗肿瘤活性和XK469相当.

酮洛芬及其异丙酯对HaCaT细胞构建的组织工程皮肤的渗透作用

目的体外构建适用于经皮给药研究的组织工程皮肤.方法以表皮角质形成细胞系HaCaT细胞及人真皮成纤维细胞为细胞来源,用I型牛胶原蛋白为真皮基质包埋成纤维细胞,其上接种HaCaT细胞,采用气-液界面方式培养,观察不同的培养介质对组织工程皮肤的影响,HE染色切片观察培养皮肤结构形态.以酮洛芬及其异丙酯为模型药物研究经皮渗透和代谢特性.结果 HaCaT细胞经气-液界面培养可形成类表皮层,但不能形成完整的角质层.维生素C可明显促进细胞增殖,维生素D3可促进细胞分化,雌二醇对此组织工程皮肤没有明显的影响.同皮肤细胞匀浆代谢相似,酮洛芬异丙酯被代谢成原药酮洛芬.结论 HaCaT细胞在气-液界面培养条件下可形成多层分化不完全的表皮层,保留了一定的酶活性,可用于药物的经皮渗透和代谢等研究.

番茄红素微囊的体内外药剂学行为

目的考察番茄红素微囊的体外释放、番茄红素原料及番茄红素微囊在家犬体内的药代动力学、体外释放和体内吸收的相关性.方法用分光光度法测定释放介质中番茄红素的含量.用HPLC法测定家犬体内的番茄红素含量,数据用3P87程序处理,得到各主要药代动力学参数.体内吸收与体外释放进行点点相关.结果微囊体外释放呈肠溶性,原料及番茄红素微囊的T1/2α分别为7.30和15.06 h;T1/2β分别为28.10和46.76 h;Tmax分别为22.32和41.03 h;AUC0-∞分别为1.67和2.08 μg·h·L-1.体内外相关性良好.结论微囊较原料药呈现缓释特征,体内外相关性结果表明可以根据体外释放情况预测体内的吸收.

电子自旋共振技术研究吸收促进剂及剂型因素对紫杉醇大鼠小肠黏膜渗透的影响

小肠是大多数药物口服吸收的主要部位,小肠黏膜为类脂质双层结构的生物膜,药物的极性及药物制剂中类脂质成分可以直接影响其吸收.

岩黄连注射液的高效液相色谱质谱联用指纹图谱研究

目的建立岩黄连注射液的指纹图谱.方法色谱部分采用高效液相色谱梯度洗脱法,色谱柱为Kromasil 100-10C18柱(250 mm×4.6 mm ID,5 μm);流动相为乙腈和水;流速为0.5 mL·min-1;在254 nm波长下进行分析.质谱部分采用电喷雾离子阱质谱分析,正离子扫描方式.结果通过LC/MS对其中的11种主要成分进行了指认,LC/UV对其中的2种成分进行了定量评价.结论所建指纹图谱能体现岩黄连注射液的特点,相似度评价和方法学考察结果良好,可用于质量控制及定量测定.

HPLC-ESI-ITMSn法鉴定麻黄碱及其大鼠体内主要代谢产物

目的建立快速灵敏的LC-ESI-ITMSn分析检测麻黄碱及其大鼠体内代谢物的方法.方法以麻黄碱对照品对LC-ESI-ITMS2色谱及质谱条件进行了优化,分析总结其电喷雾质谱的一级电离规律和多级质谱裂解规律,以此作为麻黄碱大鼠体内代谢物分析鉴定的依据.健康大鼠空腹灌胃麻黄碱10 mg·kg-1,收集0～48 h的尿样,经C18小柱固相萃取分离纯化后,直接采用LC-ESI-ITMSn方法对尿样进行测定.结果根据生物体内药物代谢转化规律及母体药物的色谱-质谱行为规律,在尿样中鉴定出3个第I相代谢产物,未发现第II相代谢产物.结论本方法灵敏、快速、选择性高、专属性好,可用于麻黄碱的代谢产物研究.

HPLC/ELSD指纹图谱和星座图聚类法在清开灵注射液质量评价中的应用

目的对清开灵注射液的质量进行科学评价,为有效控制中药质量提供一种可靠方法.方法采用HPLC/ELSD指纹图谱技术结合星座图聚类法,测定不同厂家的18个批次清开灵注射液的指纹图谱,并评价产品质量.结果本法直观、准确地表达了产品的质量信息.结论本法是中药质量评价的一种直观、合理、有效的技术手段.

湖北贝母的HPLC指纹图谱分析

目的建立湖北贝母的指纹图谱分析方法.方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法以Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm ID,5 μm)为色谱柱;流动相:甲醇(含0.05%三乙胺)-水梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;记录时间:60 min;以蒸发光散射检测器(ELSD)检测,检测条件:漂移管温度75 ℃,氮气流速1.9 L·min-1.结果用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离较好,达到指纹图谱要求.结论为更好的控制湖北贝母的内在质量提供了可靠的分析方法.

杜鹃嫩枝叶挥发油化学成分研究

目的分析比较映山红(Rhododendron simsii Planch.)和南昆杜鹃(Rhododendron naamkwanense Merr.)嫩枝叶挥发油的化学成分.方法采用药典方法提取挥发油,利用毛细管气相色谱-质谱(GC-MS)和化学计量学及标准物对照的方法对各个色谱峰定性,并用色谱峰面积归一法获得各化合物的相对含量.结果共鉴定了124种化合物,其中共有化合物48种.从映山红和南昆杜鹃挥发油中分别鉴定出94和78种化合物,分别占总挥发油的84.47%和90.25%.其中72.76%和88.07%为含氧化合物,主要为萜醇、酸和酯类物质.1-辛烯-3-醇(4.00%,7.90%),3,7-二甲基-1,6-二烯-3-辛醇(12.60%,3.48%),薄荷醇(2.15%,3.29%),9,12,15-三烯十八烷酸(1.15%,45.34%),植醇(15.21%,8.56%),9,12,15-三烯十八烷酸乙基酯 (9.16%,8.01%)为映山红和南昆杜鹃挥发油所共有的主要化学成分,分别占总挥发油的44.27%和76.58%.映山红中还含有棕榈酸(7.73%),9,12-二烯十八烷酸(1.85%),十四烷酸甲基酯(1.38%)等主要化学成分.结论利用GC-MS分析法结合化学计量学分辨方法和标准物质鉴定挥发油化学成分,比单独使用GC-MS法结果更加准确、可靠.

2006年征订