非核苷类HIV-1逆转录酶抑制剂——二芳烃取代苯并咪唑类衍生物的设计、合成和活性评价

为寻找新型抗HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂先导物,靶向设计、合成和评价了苯并咪唑类系列化合物的抗HIV活性.在27个目标化合物中发现了3个苯并咪唑类化合物(A6、B3、B6)具有良好的抗HIV活性,EC50值分别为15.33、9.81和1.37 μmol·L-1;并获知该系列化合物的初步构效关系.抗HIV的二芳烃取代苯并咪唑类活性化合物,可作为进一步结构优化、发现高活性新结构抗HIV新先导物的新起点.

5-Fluorouracil loaded guar gum microspheres for colon delivery:preparation, characterization and in vitro release

蒙古鸦葱中的一个新三萜脂肪酸酯

利用硅胶、Sephadex LH-20及半制备HPLC等柱色谱方法从菊科鸦葱属植物蒙古鸦葱Scorzoneramongolica Maxim.的甲醇提取物中分离得到2个化合物,根据理化性质和光谱数据鉴定其结构分别为3β-十二酰高根二醇(1)和3β-十四酰高根二醇(2).其中,化合物1为新化合物,2为新天然产物.体外细胞毒活性显示化合物1和2对人肺癌细胞A-549显示一定的细胞毒活性.

酵母工程菌制备紫穗槐-4,11-二烯的研究

构建了两种能产生紫穗槐-4,11-二烯的酿酒酵母工程菌,其中附加体型工程菌W303-1B[pYeDP60/G/ADS]含有表达载体pYeDP60/G/ADS.整合体型工程菌W303-1B[rDNA:ADS]是将ADS基因的表达盒序列通过同源重组的方式整合到酿酒酵母W303-1B基因组中.GC-MS检测发酵产物,结果表明这两种工程菌均能产生紫穗槐-4,11-二烯,但附加体型工程菌产生的紫穗槐-4,11-二烯的产量要高于整合体型工程菌的产量.Southern杂交检测表明,ADS基因以单拷贝的形式整合到W303-1B基因组中,低于附加体型工程酵母中的ADS基因拷贝数.这些结果表明,ADS基因的拷贝数与酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的产量呈正相关.

药对青蒿-藿香挥发油成分的气相色谱-质谱和化学计量学分析

采用气相色谱-质谱(GC-MS)法分离检测药对青蒿-藿香以及藿香、青蒿挥发油成分,并利用化学计量学解析法对产生的二维色谱-质谱数据进行解析,得到各组分的纯色谱曲线和质谱,在质谱库中进行相似检索,实现对组分的定性,再用总体积积分法进行定量.实验结果表明,青蒿-藿香药对挥发油与单味药藿香、青蒿挥发油在质与量上均有明显差异.药对青蒿-藿香及藿香、青蒿挥发油鉴定的组分分别为70、48和69个,分别占总含量的85.93%、93.23%和88.85%.药对青蒿-藿香的挥发油成分主要来自青蒿,但藿香组分的相对含量较高.药对青蒿-藿香与青蒿、藿香的共有活性组分分别为51和34个;药对新增组分7个,主要为青蒿酸(2.99%)、对丙烯基茴香醚(1.92%).

罗汉果提取物和罗汉果苷Ⅴ对胰岛素分泌的调节作用

罗汉果作为一种保健食品和甜味剂已有长期的应用,有报道认为罗汉果及其提取物对糖尿病有一定的防治作用,然而目前还未见对其相关活性成分以及活性的报道.本研究运用鼠β细胞系细胞PIN-5F研究了罗汉果提取物以及罗汉果苷Ⅴ对于胰岛素分泌的影响.本研究结果显示.罗汉果提取物和罗汉果苷Ⅴ对胰岛素分泌有显著的促进作用.本研究从细胞水平揭示了罗汉果和罗汉果苷Ⅴ对于糖尿病人具有血糖调节作用,提示罗汉果提取物以及罗汉果苷对于Ⅱ型糖尿病的防治作用.

载反义寡核苷酸阳离子脂质体的制备及体内外研究

制备载端粒酶反义寡核苷酸的阳离子脂质体并考察其体外癌细胞的抑制作用及转染效率和小鼠体内分布情况.以磷脂-DOPE(二油酰磷脂酰乙醇胺)-十八胺-胆固醇为类脂成分,薄膜超声-吸附-冷冻干燥法制备稳定的载反义寡核苷酸阳离子脂质体.激光粒度仪测定冷冻干燥前后脂质体zeta电位及粒径,透射电镜观察其形态,葡聚糖凝胶柱分离未包封的反义寡核苷酸,紫外法测定冻干前后的载药率.MTT法检测反义寡核苷酸对乳腺癌细胞MCF-7的抑制.荧光显微镜观察不同时间细胞摄取荧光标记反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,asODN)的状况,计算转染效率和不同时间在小鼠心、肝、肺、肾、瘤体组织中的分布.海藻糖与甘露醇及甘氨酸为较好的冻干保护剂,制得的阳离子脂质体带正电荷,规则球形,大小较均匀,海藻糖作为保护剂复溶前后平均粒径为175 nm和320 nm,zeta电位在+32 mY,脂质体的载药率复溶后为83.2%.脂质体介导的5'-FITC荧光标记的asODN在乳腺癌MCF-7细胞中的平均转染率在2、4、8 h时分别为18%、26%、44%,并且细胞生长明显被抑制,与对照组比较,具有显著性差异(P<0.05).阳离子脂质体-asODN复合物体内主要分布在肝、肾、肺和瘤体组织,与对照组比较差异显著.采用该处方和工艺可成功制备稳定性大有改善的反义寡核苷酸阳离子脂质体.该脂质体介导的端粒酶asODN能够有效抑制乳腺癌MCF-7细胞生长,体外转染效率较高.该给药系统可明显增加组织特别是瘤体对asODN的摄入量.

小鼠限食/低温游泳模型评价黄连、吴茱萸及其复方寒热药性

建立黄连、吴茱萸及其复方左金丸、反左金丸寒热药性评价的新方法.通过限食游泳、饲喂高蛋白饲料复制小鼠体质模型;采用冷热板示差法,考察药物对小鼠温度趋向性的干预作用;同时测定耗氧量、肝组织ATP酶活性,考察药物对能量代谢的影响.结果表明,药物作用按"黄连→左金丸→反左金丸→吴茱萸"方向传递;即黄连增加动物在高温区分布,降低耗氧量及Na+-K+-ATP酶活性(n=6,P<0.01或P<0.05),而吴茱萸表现相反;提示黄连之性"寒"与吴茱萸之性"热",与传统理论认识一致.该方法可以直观且客观地表征黄连、吴茱萸寒热药性的差异及配伍后的变化趋势,为中药药性理论研究提供了新的技术手段.

十取代芦丁硫酸钠药动学和血浆蛋白结合率研究

十取代芦丁硫酸钠(RDS)作为一种补体免疫抑制剂对恒温动物和人类免疫缺陷病毒(HIV)具有很高活性.本文采用离子对固相萃取技术(IP-SPE)从大鼠血浆、尿液、胆汁和蛋白溶液中分离提取十取代芦丁硫酸钠,并考察了十取代芦丁硫酸钠静脉注射后的药动学参数、排泄(包括尿液和胆汁)和蛋白结合情况.大鼠尾静脉注射给药3个剂量(5、20和100 mg·kg-1)后,药-时曲线数据用药动学软件进行拟合,符合静脉注射二室模型,平均消除半衰期t1/2β为3.432±0.185 2 h,并且给药剂量与AUC具有良好的线性关系,药动学参数与给药剂量无关,提示十取代芦丁硫酸钠在大鼠体内的处置情况属于线性动力学.大鼠尾静脉注射十取代芦丁硫酸钠(20mg·kg-1)后,尿液和胆汁的累积排泄率分别为86.0%±6.1%和0.318 1%±0.208 7%.十取代芦丁硫酸钠与SD大鼠、Beagle犬和人血浆蛋白结合率为80%～90%,与HSA为85.7%±1.3%,而与人α1-AGP则为14.0%±3.2%,两者之间有极显著性差异(P<0.001).

丹皮酚减轻大鼠海马神经元缺糖缺氧损伤及抑制NMDA受体激活

本研究通过体外培养大鼠海马神经元建立缺糖缺氧损伤(OGD)模型,观察丹皮酚对神经元的保护作用及其对NMDA受体结合活性的抑制作用.原代培养的神经元于建立OGD模型前5 min分别加入丹皮酚及MK-801并观察其作用.OGD模型建立后神经元存活率显著降低,氨基酸分析仪测得的海马神经元细胞外液兴奋性氨基酸(EAA)浓度显著升高,且海马神经元NMDA受体结合活性及NMDA受体NR1亚基mRNA表达显著增强.而经过丹皮酚及MK-801处理后,倒置相差显微镜下观察神经元胞体损伤明显减轻,丹皮酚及MK-801显著降低了细胞死亡率(P<0.05)及细胞外液EAA的升高(P<0.05),并可抑制NMDA受体结合活性的增高及减弱NR1亚基受体mRNA的上调(P<0.05).实验结果表明,丹皮酚对离体培养的大鼠海马神经元OGD损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制兴奋性氨基酸升高及影响NMDA受体有关.

地塞米松诱导小鼠MIN6胰岛β细胞凋亡及其对AKT磷酸化的影响

为观察地塞米松对小鼠MIN6胰岛β细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达和AKT磷酸化的影响,选用小鼠MIN6胰岛β细胞为研究对象,用不同浓度地塞米松(50、100、200、400及800 nmol·L-1)诱导刺激不同时间,观察细胞凋亡的变化.通过Hochest/PI、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒观测细胞凋亡率:caspase-3检测试剂盒测定caspase-3含量;Western blotting测定细胞色素c(Cyt-c)、Bcl-2、Bax、T-AKT及P-AKT的蛋白含量.结果显示:地塞米松(50～800 nmol·L-1)作用48 h后,可诱导β细胞凋亡;100 nmol·L-1地塞米松处理72 h后,caspase-3含量明显增多;不同浓度地塞米松处理48 h,随着浓度的增加Cyt-c表达增多,Bax蛋白含量无明显变化,而Bcl-2蛋白含量有所降低.T-AKT表达无明显变化,p-AKT随地塞米松浓度增加表达减少.因此,地塞米松能够引起小鼠MIN6胰岛β细胞凋亡,其机制可能与抑制AKT磷酸化、下调Bcl-2表达有关.

4-(3-(4-溴苯基)-3-氧代-1-芳基丙氨基)-N-(5-甲基异噁唑-3-基)苯磺酰胺的合成与抗糖尿病活性的初步研究

由磺胺甲噁唑、对溴苯乙酮和芳香醛反应合成了17个未见报道的β-氨基酮化合物,制备方法简便、反应条件温和,产物收率32%～90%.通过1H NMR、13C NMR、MS和HR-MS对目标分子进行了结构表征.生物活性试验显示,在低浓度范围,所得化合物不仅显示一定的蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)和α-葡萄糖苷酶抑制活性,而且具有中等强度的过氧化物酶体增殖物激活受体反应元件(PPRE)的激动活性,7个化合物的激动活性超过40%,化合物12活性达到了66.35%,值得进一步研究.

脑靶向基因转运免疫脂质体的制备

构建一种高效的可以携带外源基因通过静脉注射的方式、透过血脑屏障进入脑内特异性表达目的蛋白的非病毒载体.通过不同比例的配比.对免疫脂质体合成过程中油相种类和油水比例、磷脂和胆固醇比例、旋转蒸发温度、超声温度和时间进行筛选优化,测定免疫脂质体的包封率和抗体偶联率.将包裹LacZ基因的免疫脂质体经尾静脉注射至大鼠体内,通过组织化学染色检测LacZ基因在大鼠体内的表达情况,验证合成的免疫脂质体是否可以转运外源基因跨过血脑屏障进入脑内表达.免疫脂质体合成的佳比例为磷脂-胆固醇为1∶1;脂药比为100∶1;油相种类为二氯甲烷,油水比例为4∶1;旋转蒸发温度为30℃;超声温度为10℃;超声时间为5 min,10%海藻糖可以增加免疫脂质体的稳定性.脂质体的包封率为87.24%,抗体偶联率为69%.将免疫脂质体通过尾静脉注射到大鼠体内后观察到LacZ基因在脑内及周围器官的表达.因此,通过工艺优化可以得到携带外源基因的免疫脂质体,其可以通过静脉系统跨过血脑屏障进入脑内并且表达,为实现颅内疾病的基因治疗奠定了基础.

GnRH受体拮抗剂LXT-101缓释多囊脂质体的制备及体外评价

采用物理测定方法探讨正电性合成多肽LXT-101与磷脂膜的相互作用并进行LXT-101多囊脂质体(DepoLXT-101)的处方工艺筛选,同时进行体外评价.采用zeta电位法和荧光光谱法测定LXT-101分子与磷脂双分子膜的相互作用,复乳法制备DepoLXT-101,HPLC法测定DepoLXT-101的包封率并对DepoLXT-101进行形态和粒径分布测定:以生理盐水为介质测定LXT-101多囊脂质体体外释放行为.LXT-101分子与磷脂双分子膜的相互作用主要为静电吸附作用,通过在第二水相加入少量阴离子表面活性剂可以提高复乳稳定性,改善药物对多囊脂质体形成的不良影响;制备的DepoLXT-101呈球形多囊室结构,粒径分布较窄,大多数粒子(95%)的粒径分布在5～20 μm,包封率较高.DepoLXT-101在37℃生理盐水介质中缓慢释药11 d以上,累积释放率达到70%～90%.本实验所设计的方法可以用于制备合成正电性多肽多囊脂质体.

中药脂质体稳定性的研究进展

稳定性是药物制剂质量研究的主要内容.采用脂质体新技术与传统中药结合制得的中药脂质体,其稳定性不仅影响制剂成型,同时也关系到中药的疗效与安全性.本文从中药脂质体稳定性的主要影响因素角度出发,结合近年国内外相关文献,分析、整理和归纳了提高中药脂质体稳定性措施的研究进展,旨在为中药脂质体制备及质量研究提供参考.

一氧化氮供体型新药研究

一氧化氮(NO)作为信使物质或效应分子在体内发挥极其重要的生理作用,NO生成不足或NO信号传导异常与多种疾病的形成和发展密切相关.因此,设计和研究NO供体型药物已成为新药发现的重要策略之一.本文作者结合自己的科研实践,综述近年来NO供体型新药的研究进展.

肿瘤药敏试验指导个体化治疗的研究进展

肿瘤患者对化疗的反应不尽相同,为了实现化疗的个体化、提高化疗的疗效,肿瘤药敏试验已逐渐在研究所和医院中开展.肿瘤药敏试验有助于为患者选择有效的化疗药物和制定合理的治疗方案,并能排除无效药,实现化疗药物(方案)个体化.目前,肿瘤药敏试验已发展为体内和体外两大系列10多种药敏试验,包括分离肿瘤单细胞体外培养法(MTT、MTS、ATP等不同检测方法)、裸鼠移植瘤模型法、胶原凝胶包埋培养法和微组织块培养法等.本文将就肿瘤药敏试验的常用方法、与临床结果的相关性研究、待解决的问题及应用前景等方面进行综述.

葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)诱导羧酸药物代谢激活的研究进展

含羧酸基团的药物可以通过葡萄糖醛酸转移酶的代谢转化,形成亲电子活性的酰基葡萄糖醛酸苷活性中间代谢产物,然后经过一系列的非酶或酶反应形成蛋白加合物或DNA加合物.加合物的形成是含羧酸基团药物形成特异质反应和基因毒性的主要因素.本文以该类药物的代谢激活为例,阐述了酰基葡萄糖醛酸苷的化学活性、致毒机制、分布特征以及产生的毒性反应,并探讨了研究现状和前景.

8-羟基二氢小檗碱改善高FFA和高糖诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用

我国应用小檗碱临床治疗2型糖尿病已有30多年的经验,虽确有疗效,但其药效强度不够,始终不能成为治疗糖尿病的主导药物.小檗碱的口服吸收率太低是其降糖效果不佳的主要原因.

体内外方法快速筛选系列候选化合物的药动学性质

天然药物分离提取技术和组合化学等技术的发展,大大加快了候选药物的发现速度,每年都有成千上万的新化合物需要进行筛选.药代动力学是药物筛选中至关重要的一个环节,统计数据表明,在药物开发阶段,大约有39%的候选化合物由于药代动力学方面的原因被淘汰[1].