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莱菔硫烷对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用
目的探讨植物化学保护剂莱菔硫烷(SFN)对结肠癌细胞的生长抑制及诱导作用的抗肿瘤机制.方法①体外培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,观察10-100μmol/L的SFN对Caco-2增殖动力学的影响,MTT法检测细胞生长抑制率.②采用RT-PCR及Western blot检测SFN诱导Caco-2细胞葡萄糖醛酸转移酶UGTlA及其同工型的表达,高效液相色谱法测定UGTlA的催化活性.③扫描电镜观察SFN诱导细胞凋亡的形态变化;流式细胞仪检测凋亡率.结果①30～100μmol/L的SFN对细胞增殖均有抑制作用,呈剂量和时间依赖效应.②10～35μmol/L SFN处理组UGT1AmRNA相对系数与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).UGT1AmRNA表达量与SFN的剂量呈正相关(r=0.79,P＜0.01);25μmol/L SFN处理组与对照组之间UGT1A1(P=0.006)、UGT1A8(P=0.017)、UGT1A10(P=0.008)表达的差异具有统计学意义;10～30μmol/L SFN作用于Caco-2细胞24h,随着浓度的增加,UGT1A蛋白带的灰度值比值增加.与对照组相比,P＜0.05;在SFN处理组对杂环胺N-OH-PhIP的葡萄糖醛酸结合能力明显增高.③扫描电镜观察,25μmol/L处理组无明显改变,50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L处理组发生明显的细胞形态结构变化,典型者出现凋亡小体;流式细胞仪检测结果示随着SFN浓度增高,凋亡率增加,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论①植物化学保护剂莱菔硫烷对结肠腺癌细胞株Caco-2的生长增殖具有抑制作用,呈剂量租时间依赖效应;②小剂量的莱菔硫烷能诱导UGT1A及其同工型UGT1A1、1A8、1A10mRNA表达,UGT1A蛋白表达增加,对杂环胺的葡萄糖醛酸结合能力增强;③大剂量的莱菔硫烷诱导结肠腺癌细胞凋亡.
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莱菔子素诱导结肠癌细胞凋亡及其机制
十字花科蔬菜中的异硫氢酸盐成分对癌症具有重要的化学预防作用[1,2],莱菔子素(sulforaphane,SFN)为异硫代氰酸盐衍生物,可诱导机体产生Ⅱ型解毒酶,增加对致癌物的代谢解毒作用.我们在SFN诱导结肠癌细胞株Caco-2 葡萄糖醛酸转移酶1A( UGT1A)表达的研究中发现,这种植物化学保护剂的浓度超过35 μmol/L时,细胞的形态学发生较明显变化,我们设想,是否高浓度的SFN有诱导Caco-2凋亡的抗肿瘤机制.
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葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)诱导羧酸药物代谢激活的研究进展
含羧酸基团的药物可以通过葡萄糖醛酸转移酶的代谢转化,形成亲电子活性的酰基葡萄糖醛酸苷活性中间代谢产物,然后经过一系列的非酶或酶反应形成蛋白加合物或DNA加合物.加合物的形成是含羧酸基团药物形成特异质反应和基因毒性的主要因素.本文以该类药物的代谢激活为例,阐述了酰基葡萄糖醛酸苷的化学活性、致毒机制、分布特征以及产生的毒性反应,并探讨了研究现状和前景.
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姜油和6-姜酚对小鼠肝脏主要Ⅱ相代谢酶活性及其mRNA表达的影响
目的 研究姜油和6-姜酚对小鼠肝脏UGT、SULTIA1和GST活性及其mRNA表达的影响.方法 给小鼠灌服不同剂量的姜油和溶媒对照液,每天2次,连续3天.以分光光度法,检测肝脏中上述代谢酶活性；以RT - PCR法,检测UGTlAl/SULTl AlmRNA在肝脏中的表达.结果 姜油(15 mg· kg-1)对小鼠UGT和GST活性有显著的诱导作用(P＜0.05或P<0.01)；以2-萘酚和4-硝基酚为底物测定SULTlAl活性时,姜油(15,3 mg·kg-1)对SULTlAl均有明显的诱导作用(P＜0.05或P<0.01)；RT-PCR结果显示,仅有10 mg·kg-1的6-姜酚能够提高UGTlAl/SULTlAl mRNA的表达.结论 临床用药期间,应注意食用姜类产品对Ⅱ相药物代谢酶的影响.
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性别对肾移植患者霉酚酸酯药代动力学影响的研究
目的 探讨性别对肾移植患者霉酚酸酯(MMF)药代动力学的影响.方法 纳入肾移植科手术患者178例.当体内药物浓度到达稳态后,于服药后0.5,1.5,4和9h取患者静脉血,用高效液相色谱法测定血浆中MMF代谢物霉酚酸(MPA)和葡萄糖醛酸霉酚酸(MPAG)浓度,估算0～12 h血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-12h).结果女 性剂量调整MPA AUC0-12h(46.24±2.98)mg·h·L-1·g-1,显著高于男性的(35.36±1.61) mg·h·L-1·g-1(P＜0.01);而MPAG/MPA女性(15.24±1.05)显著低于男性(18.68±0.87)(P＜0.05).此外,女性年龄与剂量调整MPA AUCo-12h呈负相关(P＜0.05),45岁以下年龄组的剂量调整MPA AUC0-12h(49.74 ±3.58)mg·h·L-1·g-1,显著高于45岁以上年龄组的(33.69 ±2.49)mg·h·L-1·g-1 (P ＜0.05).结论 在中国肾移植患者中,MMF体内代谢存在性别差异,且女性体内药物代谢与年龄相关.
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Gilbert综合征5例
Gilbert 综合征又称体质性肝功能不良症,是由于肝组织摄取非结合胆红素障碍或微粒体内葡萄糖醛酸转移酶不足、致使血液中非结合胆红素显著增高而发生黄疸的一类良性遗传性疾病,部分呈家族性,病情可反复发作.笔者对本院近2年来收治的5 例Gilbert 综合征患者的临床表现及肝组织病理表现进行整理分析,报道如下.
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莱菔子素诱导结肠癌Caco-2细胞株葡萄糖醛酸转移酶1A的表达及其机制
目的探讨莱菔子素(SFN)对结肠癌Caco-2细胞株葡萄糖醛酸转移酶1A(UGT1A) 表达的诱导作用及其机制.方法采用RT-PCR及Western 印迹检测SFN诱导Caco-2细胞株UGT1A 及其同功型的表达,高效液相色谱法测定UGT1A的催化活性;用共聚焦激光显微镜观察核转录因子Nrf2的转位.结果 (1)10～35 μmol/L SFN处理组UGT1A mRNA相对系数与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).UGT1A mRNA表达量与SFN的剂量呈显著正相关(r=0.79,P<0.01).25 μmol/L SFN处理组的诱导作用随着时间延长而增强,呈时间依赖性.25 μmol/L SFN处理组与对照组之间UGT1A1(P=0.006)、UGT1A8(P=0.017)、UGT1A10(P=0.008)表达的差异有统计学意义.(2)10～30 μmol/L SFN作用于结肠腺癌Caco-2细胞株 24 h,随着浓度的增加,UGT1A蛋白带的灰度值比值增加.与对照组相比,差异均有统计学意义.(3)在SFN处理组N-OH-PhIP-N2葡萄糖醛酸甙的峰值明显增高.(4)共聚焦激光显微镜观察在对照组细胞质中看到Nrf2红色荧光标记,而在25 μmol/LSFN处理24 h组的细胞可在胞核内看到强烈的红色荧光,表示这种信号转导因子的细胞内转位.结论 (1)小剂量的SFN能诱导UGT1A及其同工型 UGT1A1、 1A8、 1A10 mRNA表达,UGT1A蛋白表达增加,对杂环胺的葡萄糖醛酸结合能力增强.(2)SFN有可能通过核转录因子Nrf2激活UGT1A基因的转录表达.
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核因子E2p45相关因子2基因在茶多酚调节结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A及其同工酶表达中的作用
目的探讨核因子E2p45相关因子2(Nrf2)基因在茶多酚中的主要化学物质epigallocatechin gallate(EGCG)诱导结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A及其同工酶UGT1A8、UGT1A10表达中的调节作用.方法 EGCG分别作用Caco-2及HT-29结肠癌细胞12 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因表达水平的变化,免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜观察细胞内Nrf2蛋白定位的改变.此外,利用RNA干扰技术抑制细胞内Nrf2基因的表达,观察阻断前后EGCG对基因表达水平影响的改变.结果 (1)Caco-2及HT-29结肠癌细胞系、结肠癌及癌旁组织中UGT1A、1A8、1A10基因表达水平存在差异.(2)EGCG作用Caco-2及HT-29细胞后Nrf2、UGT1A、1A8、1A10表达升高1.8～9.2倍(均P＜0.05),免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜检测到Nrf2蛋白向细胞核内聚集.(3)酶切分析和测序证实成功构建了RNA干扰真核表达载体pSilence-Nrf2-A、B、C、D及随机序列对照pSilence-CON.(4)pSilence-Nrf2-B质粒转染可显著抑制Nrf2基因的表达,在Caco-2及HT-29细胞中抑制率分别为81.46%±1.68%及84.72%±2.08%(实验重复3次);稳定筛选建立的Nrf2低表达的细胞系Caco-2-siNrf2、HT-29-siNrf2,不仅基础UGT1A酶的表达水平降低,而且EGCG作用后酶诱导表达的作用消失.结论 Nrf2基因参与了EGCG诱导UGT1A及其同工酶表达的过程并在其中起关键作用,为进一步论证EGCG在结肠癌化学预防中的作用及其可能的机制提供了新的论据.
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阿卡宁的氧葡萄糖醛酸化代谢通路研究
目的 对紫草素的立体异构单体阿卡宁的氧葡萄糖醛酸代谢通路进行研究和表征.方法 采用液相色谱和质谱联用方法检测阿卡宁和其葡萄糖醛酸化代谢产物;将阿卡宁在人肝微粒体(HLM)、人肾微粒体(HKM)以及重组人类葡萄糖醛酸转移酶(UGT)中孵育,观察代谢轮廓、筛选参与催化的重组单酶、考察酶动力学;通过相关性分析以及化学抑制实验阐明UGT单酶对阿卡宁的选择性.结果 阿卡宁在含尿苷5’-二磷酸葡萄糖醛酸(UDPGA)的HLM孵育中,可以检测到1个UGT代谢产物.UGT单酶筛选发现UGTl A9高选择性催化阿卡宁.酶动力学研究显示在HLM、HKM和UGTlA9中阿卡宁的UGT代谢都呈底物抑制模式,并且表观亲和常数(Km)在3.75～4.50 μmol/L.阿卡宁和已知UGT1 A9探针底物异丙酚在12例个体人肝中的UGT代谢具有很好的相关性,R2为0.88.化学抑制实验显示在HLM中,厚朴酚和尼氟灭酸对阿卡宁的UGT代谢具有明显的抑制作用;睾酮、雷公藤红素和尼罗替尼对阿卡宁的UGT代谢均无明显抑制作用.结论 UGT代谢是阿卡宁(紫草素)在人体的重要代谢途径之一,阿卡宁是人类UGT1 A9的一个高选择性探针底物.
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O-葡萄糖醛酸苷的生物合成研究进展
葡萄糖醛酸结合反应是机体内重要的一类代谢反应,其中O-葡萄糖醛酸结合是常见的反应类型.O-葡萄糖醛酸苷的制备对于准确评估葡萄糖醛酸代谢产物的药理活性及安全性、药物代谢和药动学定量分析等研究至关重要.利用尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)生物合成目标代谢物是制备葡萄糖醛酸苷的重要手段之一.综述了近年来利用生物转化技术制备O-葡萄糖醛酸苷的研究进展,包括利用植物、微生物、动物来源及人重组UGT酶等不同方法制备O-葡萄糖醛酸苷的新进展,同时还综述了近年来国内外通过对生物反应体系和转化工艺的改进与优化,实现葡萄糖醛酸苷高效制备的相关技术和工艺特点.
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克里格勒-纳贾尔综合征
克里格勒-纳贾尔综合征(CNS)又称为先天性葡萄糖醛酸转移酶缺乏症、先天性非梗阻性溶血性黄疸，是一种少见的肝脏疾病，世界上仅有不到200个病例.
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水飞蓟宾非对映异构体在大鼠肝微粒体中葡萄糖醛酸化代谢的酶动力学比较研究
目的 比较水飞蓟宾A(silybin A,sa)和水飞蓟宾B(silybin B,sb)在大鼠肝微粒体中葡萄糖醛酸化代谢的酶动力学特性.方法 将系列浓度的水飞蓟宾(sa和sb的质量比为45∶53)加入到大鼠肝微粒体孵育液中进行孵育,采用HPLC法分别测定β-葡萄糖苷酸酶水解前和水解后孵育液中sa和sb的浓度,据此计算sa和sb的葡萄糖醛酸结合物的浓度,绘制酶动力学曲线,并计算酶动力学参数.结果 sa和sb的大反应速率(vmax)分别为(2.80±0.14) mmol·min-1·kg-1和(4.21±0.31) mmol·min-1· kg-1,米氏常数(K)分别为(36.66±7.52).μmol·L-和(89.78±23.08) μmol·L-,内在清除率(Clint)分别为76.38 L·min-1·kg-1和46.89 L·min-1·kg-1.结论 水飞蓟宾在大鼠肝微粒体中的葡萄糖醛酸化代谢具有立体选择性,sb的代谢速率快于sa.
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利胆排石汤对小鼠肝葡萄糖醛酸转移酶的体外诱导作用
目的:研究利胆排石汤对C57小鼠肝葡萄糖醛酸转移酶(B-UGT)的体外诱导在用.方法:用洋地黄皂苷作为体外B-UGT诱导的阳性对照物,参照Black氏法,测定利胆排石汤对C57小鼠肝B-UGT的活性.结果:利胆排石汤对B-UGT有提高其活性的作用.
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UGT2B7基因多态性与联苯胺职业暴露工人尿脱落细胞巴氏分级结果的关系
[目的]研究UGT2B7基因多态性与联苯胺职业暴露工人尿脱落细胞巴氏分级(PG)结果之间的关系.[方法]选取上海市染料化工行业职业性联苯胺接触队列中2003年接受膀胱癌医学监护的成员248人为对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测UGT2B7基因型;用巴氏分级法对尿脱落细胞进行分级.[结果]PG＞Ⅱ组和PG≤Ⅱ组的UGT2B7*1/*1(CC)基因型携带者的比率分别为54.9%和48.0%(P＞0.05).两组人群UGT2B7各基因型的分布频率也未见显著性差异(P＞0.05).[结论]UGT2B7基因多态性形态对联苯胺暴露工人PG升高的风险可能没有影响.
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尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A7基因多态性与抗结核药致肝损伤易感性的关系
目前,结核病仍是威胁人类健康的重要传染性疾病之一,结核病控制的策略主要是药物的化学疗法.抗结核药物引起的肝毒性已位居药源性肝损伤的第1位[1].尿苷葡萄糖醛酸转移酶(UGT)是一种重要的Ⅱ相反应代谢酶,对外源性化合物具有解毒作用.在UGT17已知的9个等位基因中,UGT1A7-131G/A和UGT1A7-208T/C携带者UGT1A7酶活性降低,而UGT1 A7-129T/G携带者酶活性与野生型等位基因相似.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠肿瘤生长与转移的作用
目的 观察不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对结肠肿瘤原位生长与转移的作用.方法 将40只BALB/C裸鼠均分为对照组和低、中、高剂量组.除对照组外,其他3组分别给了低、中或高浓度EGCG(分别为5、10和20 mg·kg~(-1)·d~(-1)),观察对结肠原位种植肿瘤的生长和转移的影响.HE染色观察肝、肺组织病理学改变;免疫组化检测结肠肿瘤组织中核因子E2p45相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)基因的蛋白表达水平;RT-PCR检测Nrf2、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(UGT)1A、UGT1A8和UGT1A10基因的mRNA表达水平.结果 低、中、高剂量EGCG组裸鼠肿瘤的平均重量为(152±63)、(76±42)和(18±10)mg,与对照组L(564±130)mg]比较差异有统计学意义(P值均<0.05).3组的肿瘤抑制率分别是73.0%、86.5%和96.8%.EGCG对肿瘤生长的抑制率与EGCG的剂量呈正相关(P值均<0.05).不同剂量EGCG组Nrf2基因的蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),且有核转录现象.不同剂量EGCG组Nrf2、UGT1A、UGT1A8和UGT1A10基因的mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05).结论 不同浓度的EGCG能预防裸鼠HT-29结肠原位肿瘤的局部生长和远处转移,且有剂依赖效应.这种作用可能通过诱导Nrf2,UGT1A、UGT1A8和UGT1A10基因的表达起作用.
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葡萄糖醛酸转移酶1A基因的组织差异性表达及多态调节
目的从mRNA、蛋白质及细胞水平分析尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A基因的组织差异性表达及多态调节.方法采用逆转录聚合酶链反应分析结直肠癌组40例、正常人群肠道黏膜20例、正常肝组织10例的UGT 1A mRNA表达;免疫印迹检测各组UGT 1A蛋白表达;高效液相色谱法测定各组UGT 1A酶的催化活性.结果①结直肠癌组织中UGT 1AmRNA表达量明显低于其周围正常黏膜,而后者低于正常人群肠黏膜组织,正常人群结直肠黏膜中UGT 1A mRNA表达量总体低于肝组织,P＜0.01.结直肠癌组、正常人群结直肠黏膜组织呈现个体差异表达,而肝组织的表达较均质.②癌组织、癌周正常黏膜及正常人群肠道黏膜中UGT1A各同工酶的表达例数均不相同.③UGT 1A蛋白表达在癌组织显著低于癌周正常组织,后者又低于正常人肠黏膜(P＜0.01),各组蛋白表达量亦各不相同.而肝组织呈均质表达.④癌组织的UGT 1 A酶活性低于癌周正常黏膜,而后者的微粒体酶活性低于正常人群肠黏膜微粒体蛋白,P＜0.01.结论①UGT1A基因位点呈组织差异性表达.②结直肠黏膜上皮UGT1A基因位点在转录水平及功能水平均存在多态调节,不同个体对致癌物的易感性不同可能是这种差异表达的结果.
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UGT1A1基因多态性与不同民族间新生儿高胆红素血症的关系
目的 探讨不同民族间新生儿高胆红素血症与胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT1A1)基因编码区第一及第四外显子突变类型的关系.方法 对147例病因不明的高胆红素血症新生儿和73例非高胆红素血症新生儿的UGT1A1基因进行PCR扩增、凝胶电泳、基因测序,比较两组间以及不同民族间的等位基因频率差异.结果 两组在第一及第四外显子中只发现G71R基因突变,未发现其他突变类型.两组G71R等位基因频率分别为0.204和0.034,高胆红素血症新生儿的G71R基因频率高于非高胆红素血症新生儿,差异有统计学意义(P＜0.001).高胆红素血症新生儿中壮族、汉族、混合民族的错义突变基因频率分别为0.19、0.27、0.20,非高胆红素血症新生儿为0.04、0.03、0.03,两两比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 G71R基因突变与研究地区新生儿高胆红素血症的发生相关,第—及第四外显子其他突变类型与新生儿高胆红素血症无关.不同民族在G71R错义突变基因频率上无明显差别.
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酚类化合物经UGTs代谢和药物相互作用的研究进展
由尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)介导的葡萄糖醛酸结合反应是多种内源性和外源性化合物在体内代谢、消除的重要途径.酚类化合物由于其多样的药理活性而受到广泛关注和研究,此类物质在体内易经UGTs代谢,生物利用度低.综述近年来酚类化合物经UGTs代谢及由UGTs介导的药物相互作用的研究进展.
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Gilbert综合征43例临床及肝组织病理分析
Gilbert综合征(Gilbert syndrome,GS)又称特发性非结合型高胆红素血症,是由于肝组织摄取非结合胆红素障碍或微粒体内葡萄糖醛酸转移酶不足、致使血液中非结合胆红素显著增高而发生黄疸的一类良性遗传性疾病,部分呈家族性,病情可反复发作.作者对本院近6年来收治的43例Gilbert综合征患者的临床表现及肝组织病理表现进行整理分析,现报道如下.
