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AIDS合并血友病巨大炎性假瘤切除一例
患者男,20 岁.2 岁时因外伤出血不止诊断为甲型血友病,此后,多次输注凝血Ⅷ因子.2002 年确诊为HIV 感染,而且有乙型肝炎和丙型肝炎病毒感染.当时CD4 在70 个细胞/μl,应用抗HIV 治疗,CD4 升至200 个细胞/μl 左右.2005 年出现右侧大腿肿胀,考虑为血肿,并逐渐加大.2007 年6 月18 日因右侧大腿肿块住上海市公共卫生临床中心外科.入院诊断:右侧大腿血肿,AIDS,血友病甲型,丙型肝炎,乙型肝炎.
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vWF促进intein剪接的BDD-FⅧ的分泌和活性
vWF是由巨核细胞和血管内皮细胞合成的糖蛋白,其主要功能之一为凝血Ⅷ因子(FⅧ)的载体,防止后者被血浆酶降解.作者近的工作证明intein可应用于双载体转移B结构域缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)基因,通过翻译后的蛋白质反式剪接形成完整的功能性BDD-FⅧ蛋白.为了研究vWF对于intein连接的BDD-FⅧ分泌和活性的影响,通过intein融合的BDD-FⅧ重、轻链基因和vWF基因共转染培养的293细胞,采用ELISA观察了分泌至培养上清液中的由intein剪接的全长BDD-FⅧ抗原量,并用Coatest检测了由其产生的活性.结果显示,vWF基因共转染细胞上清液中,全长BDD-FⅧ抗原量为(235±21)ng·mL-1,活性为(1.98±0.2)u·mL-1,明显高于未转染vWF的细胞[(110±18)ng·mL-1和(1.10±0.15)u·mL-1],也明显高于单独转染BDD-FⅧ基因的对照细胞[(131±25)ng·mL-1和(1.22±0.18)u·mL-1],表明vWF基因共转染可显著改善双载体转BDD-FⅧ基因后intein剪接的BDD-FⅧ蛋白的分泌和生物活性.为基于蛋白质剪接的断裂BDD-FⅧ基因转移的甲型血友病基因治疗研究中,应用vWF基因共转移以提高治疗的功效提供了依据.
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脱氧萎镰菌醇通过下调GRP78提高双链转FⅧ基因细胞分泌重链和生物活性
双链转凝血Ⅷ因子(FⅧ)基因是克服AAV载体容量限制的有效方法,但重链分泌的低效性带来链不均衡性.本文旨在用脱氧萎镰菌醇(deoxynivalenol,DON)降解内质网分子伴侣蛋白GRP78,通过减少重链与GRP78的结合提高重链分泌,改善双链转FⅧ基因的功效.用DON处理双链共转基因细胞,观察了双链转FⅧ基因293细胞分泌的重链和FⅧ活性.结果显示,用500 ng·mL-1 DON处理细胞3h后,GRP78蛋白水平明显降低,细胞的生长不受明显影响；单独转FⅧ重链基因的DON处理细胞分泌的重链量[(59±11) ng·mL-1]明显高于对照细胞[(15±4)ng·mL-1],双链共转基因时重链的分泌量进一步增加,为(146±34) ng·mL-1,活性达到(0.66±0.15) U·mL-1,明显高于双链转基因对照细胞[分别为(76±17) ng·mL-1和(0.35±0.09) U·mL-1].结果表明,DON可通过下调GRP78改善重链的分泌性,提高双链转FⅧ基因的功效,为进一步动物体内双AAV载体转FⅧ基因提供了实验依据.
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Cys突变体凝血Ⅷ因子的蛋白质反式剪接
为改善蛋白质反式剪接效率,将B-区缺失型FⅧ (BDD-FⅧ)重链的Tyr664和轻链的Thr1826突变为Cys,双载体共转COS-7细胞,观察了细胞内蛋白质剪接、二硫键形成和细胞培养上清液中分泌的剪接BDD-FⅧ量和活性.Western blotting检测结果显示,Cys突变可在细胞内形成链间二硫键,剪接BDD-FⅧ蛋白量明显增加;双夹心ELISA检测分泌的剪接BDD-FⅧ为(128±24) ng.mL-1,明显高于对照(89±15) ng.mL-1；Coatest 法检测结果显示,细胞分泌的凝血活性为(0.94±0.08) u.mL-1,也明显高于对照(0.62±0.15) u.mL-1.结果表明,链间二硫键形成可显著提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因作用,为进一步动物体内实验提供了依据.
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亮氨酸拉链促进蛋白质剪接介导的双载体转凝血Ⅷ因子基因
作者近基于蛋白内含子(intein)的双载体转B区缺失型凝血Ⅷ因子(BDD-FVIII)基因研究证明,表达后的重、轻链可通过蛋白质反式剪接成为共价连接的完整BDD-FVIII分子并发挥凝血生物活性,但存在不完全剪接的前体蛋白.本文试图通过将具有特异性强相互作用的亮氨酸拉链引入intein序列,提高反式剪接的效率,用双载体系统向培养的COS-7细胞共转融合intein的重链和轻链基因,通过瞬时表达观察了细胞内BDD-FVIII的剪接和分泌至培养上清液的剪接BDD-FVIII量和生物活性.结果显示,Western blotting检测到共转基因细胞内明显增强的BDD-FVIII剪接,表现为前体蛋白的减少；分别用ELISA和Coatest法分析共转基因细胞培养上清液中分泌的剪接BDD-FVIII蛋白量和生物活性为(106±12) ng·mL-1和(0.89±0.11) U·mL-1,明显高于无亮氨酸拉链的intein融合重链和轻链基因共转基因细胞[(72±10) ng·mL-1和(0.62±0.07) U·mL-1],而且不依赖细胞机制的蛋白质剪接反应明显增强,表现为混合培养的转重链和轻链基因细胞上清液中增加的剪接BDD-FVIII蛋白量和生物活性[(36±11) ng·mL-1和(0.28±0.09) U·mL-1].结果表明,亮氨酸拉链可通过增强融合于重链和轻链的intein间的相互作用提高蛋白质反式剪接的效率,改善基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FVIII基因的效果,为进一步的动物体内基于蛋白质剪接的双腺相关病毒(AAV)载体转FVIII基因研究提供了实验依据.
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影响冷沉淀质量的因素分析
随着医疗技术的不断发展,成分输血的有效性和安全性也逐步提高,临床医师根据患者病情,缺什么,补什么,有针对性地输入相应的血液成分以达到治疗的目的,冷沉淀即为其中一项.冷沉淀cryoprecipitate是新鲜冰冻血浆FFP在低温约0~5℃解冻后沉淀的白色絮状物,冷沉淀因其制作工艺简单、价格低廉临床应用广泛.冷沉淀是指血浆冷沉淀中含有凝血Ⅷ因子及纤维蛋白原,可治疗缺乏凝血Ⅷ因子及纤维蛋白原而出血不止的患者及甲型血友病患者.因此,保证冷沉淀的质量,提高冷沉淀活性,已成为患者的救命稻草,也是我们成分科工作的重点.
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子宫腺肌病患者子宫各部位血管形态的研究
目的探讨子宫腺肌病患者子宫内膜、子宫肌层和腺肌病病灶部位血管形态的改变.方法手术切除子宫标本62例,其中子宫腺肌病32例,无症状子宫肌瘤30例.用凝血Ⅷ因子(VWF)标记腺肌病和肌瘤患者子宫内膜、子宫肌层、腺肌病病灶及子宫肌瘤的血管形态,采用MPIAS-500图像处理系统进行图像分析.结果腺肌病组子宫内膜血管数量和面积较肌瘤组显著增加(P<0.01),并呈现周期性变化.异位内膜的血管数量及面积显著大于在位内膜(P<0.01),但无周期性变化.腺肌病组正常子宫肌层血管与肌瘤组相比显著扩张(P<0.01),腺肌病病灶周围子宫肌层的血管数量和面积较正常子宫肌层显著增加(P<0.01).腺肌病组中,月经过多者子宫内膜的血管数量(P<0.05)和面积(P<0.05)较月经正常者增加,而子宫肌层的血管数量(P<0.01)和面积(P<0.01)与子宫大小呈正相关.结论子宫腺肌病患者子宫内膜和子宫肌层的血管形态发生改变,并可能导致月经过多、子宫增大等临床症状.血管生成可能在子宫内膜侵入子宫肌层的过程中发挥一定作用.
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补阳还五汤联合MSCs移植对TIMP-1干预后MCAO模型大鼠凝血Ⅷ因子的影响
目的:揭示补阳还五汤联合MSCs移植对大脑中动脉栓塞再灌注大鼠模型((MCAO))抗凝血、促进血管新生的机理.方法:采用TIMP-1对模型进行干预,侧脑室给予MSCs,联合补阳还五汤灌胃,采用免疫组化法检测凝血因子Ⅷ的表达.结果:联合补阳还五汤联合MSCs移植组能够降低缺血区凝血因子Ⅷ数量,12 h、24 h为明显,与模型组、抑制剂组、单纯MSCs组相比,有极显著性差异(P＜0.01);至36 h时有一定升高,与其他组相比,无显著性差异(P＞0.05),随后表达Ⅷ因子数量又开始下降,至48 h时,与模型组、抑制剂组相比,有显著性差异(P＜0.05),与单纯MSCs组相比,无显著性差异(P＞0.05).结论:补阳还五汤联合MSC移植,能够降低TIMP-1干预后脑缺血模型大鼠缺血脑组织Ⅷ因子数量,起到抗凝血,抑制血栓的形成.
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2011～2013年新鲜冰冻血浆质量抽检结果分析
新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)是采集后存储于冷藏环境中的全血,好在6h(保养液为ACD)或8h(保养液为CPD或CPDA-1),但不超过18h将血浆分离出并速冻呈固态的成分血[1].为实时监控本站FFP质量,笔者严格按文献[1,2]要求,每月对成品库FFP随机抽取≥4袋样本量,进行外观、标签、容量、无菌实验、血浆总蛋白含量和凝血Ⅷ因子活性等项目的检测.现将2011～2013年FFP质量抽检结果报告如下.
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麦克尔憩室出血合并甲型血友病1例临床护理
麦克尔憩室是回肠壁上距盲部40～50 cm处一囊状突起,主要由于卵黄蒂近段退化不全引起的,是常见的胃肠道先天性畸形,可并发肠梗阻、穿孔、炎症、出血甚至肿瘤等[1].多发病于儿童,成人有临床症状者不多见且难以诊断,病死率可达6％[2].血友病是一组由于遗传性凝血酶原合成障碍而引起的出血性疾病,包括甲型、乙型、丙型及获得性血友病,其中甲型血友病常见,主要为凝血Ⅷ因子缺乏.2011年10月,我们收治1例麦克尔憩室出血合并甲型血友病患者,经急诊手术和精心护理,痊愈出院.现报告如下.
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血友病患者人工全髋关节置换术的围术期护理
目的 探讨血友病患者人工全髋关节置换术的围术期护理方法.方法 对5例因股骨头无菌性坏死行人工全髋关节置换术的血友病患者,术前动态监测血Ⅷ因子水平,及时输注凝血因子,予以有针对性的心理护理,术后严密观察出血情况,预防感染,加强对患肢的位置观察及长度测量以防脱位的发生,指导患者循序渐进做好康复锻炼.结果 本组5例患者术中出血量500～600 ml,术后无异常出血,切口愈合时间为10～15 d,未出现感染等并发症,髋关节功能恢复良好.结论 人工全髋关节置换合并血友病患者的临床治疗风险与护理难度大,在围术期护士应积极配合治疗计划制定严谨的护理措施,配合动态监测血Ⅷ因子水平,加强预防出血的护理措施,正确进行康复锻炼,做好出血的预防是关键.
