NOD/SCID孕鼠淋巴细胞表型检测和NK细胞活性分析

目的观察NOD/SCID小鼠免疫状况和生育力特征,并分析NK细胞亚群对同基因交配组合NOD/SCID×NOD/SCID妊娠结局的影响.方法采用流式细胞术对未孕和孕13.5 d的NOD/SCID小鼠进行淋巴细胞表型分析,并系统地观察和比较NOD/SCID×NOD/SCID和BALB/c×BALB/c小鼠的生育力特征.分别采用多聚次黄苷酸-胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,poly I:C)或抗asialoGM1单抗(anti-asialo GM1)刺激或抑制NK细胞活性,并分别观察这些因素对妊娠结局的影响.结果 与对照组NOD/SCID小鼠相比,poly I:C处理组NOD/SCID×NOD/SCID小鼠平均每窝产仔数增多,而注射抗asialo GM1单抗则使胚胎吸收率增高,进而平均每窝产仔数显著减少.结论在NOD/SCID小鼠孕期母-胎界面保持适当水平的NK细胞活性对妊娠结局有利.

角蛋白17上HLA-DRB1*07限制性T细胞表位的确定

目的对银屑病自身抗原棗角蛋白17的HLA-DRB1*07限制性T细胞表位进行确定.方法在前期已确定角蛋白17的HLA-DRB1*07限制性T细胞表位区试验基础上,借助互联网服务器对其中的T细胞表位进行分析预测,人工合成T细胞表位DNA并进行GST融合表达和纯化;分离纯化外周血T细胞,将各融合表位肽段分别与正常人和银屑病患者的T细胞体外作用,检测T细胞增殖程度和培养上清中1FN-γ水平变化,从而筛选出强反应性表位.结果角蛋白17的S1(118-132)、S2(169-183)、S4(323-337)和S4(348-362)表位能够显著地促进银屑病患者T细胞增殖和IFN-γ分沁,与正常对照组比较差异有统计学意义(P均＜0.001).结论 S1(118～132)(VRALEEANTELEVKI)、S2(169～183)(ANILLQIDNARLAAD)、S4(323～337)(MQALEIELQSOQLSMK)和S4(348～362)(ENRYCVQLSQIQGLI)是银屑病特异性强反应性HLA-DRB1*07限制性T细胞表位.本研究为以后研究银屑病的免疫发病机制和治疗打下了一定基础.

我国福建汉族人HSP70基因多态性分析

目的了解福建省汉族人HSP70基因多态性分布,进而为探讨HSP70基因多态性与疾病的相关性提供遗传背景资料.方法应用聚合酶链反应技术、限制性内切酶分析检测了127名福建汉族正常人的HSP70基因3个多态性位点,并比较了部分不同地区和人群之间的基因型与等位基因频率.结果福建汉族人HSP70-1基因型(GG,GC和CC)分布频率分别是55.1%、40.2%和4.7%;HSP70-2基因型(AA,AG和GG)分布频率分别是44.1%、48.8%和6.9%;HSP70-hom基因型(TT,TC和CC)分布频率分别是59.8%、37.0%和3.2%;HSP70-1等位基因频率G和C分别是75.2%和24.8%;HSP70-2等位基因频率A和G分别是68.5%和31.5%;HSP70-hom等位基因频率T和C分别是78.3%和21.7%.福建汉族人HSP70-1的基因型分布和等位基因频率同日本、墨西哥人群比较差异无统计学意义,与美国和西班牙人比较,差异有统计学意义(P＜O.01).福建汉族人HSP70-1的GG纯合型(55.1%)显著高于美国(42.6%)和西班牙(33.0%)人群;福建汉族人HSP70-2的基因型分布和等位基因频率与日本人比较差异无统计学意义,与墨西哥、美国和西班牙人群比较,差异有统计学意义(P＜0.05),福建汉族人HSP70-2的AA纯合型(44.1%)高于墨西哥(23.0%)、美国(38.8%)和西班牙(20.0%)人群;福建汉族人群的HSP70-hom基因型和等位基因频率分布同日本、墨西哥、美国和西班牙人群的基本一致,差异无统计学意义,福建汉族人群的HSP70基因型和等位基因频率分布同中国台湾汉族人基本一致,差异无统计学意义,与武汉地区汉族人某些位点存在差异.结论福建汉族人HSP70基因多态性分布不同于某些地区的人群,具有种族和地区差异.

肠出血性大肠杆菌O157:H7特异性脂多糖抗原的制备

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7是产verd毒素的食源性肠道致病菌,可引起人类患血性腹泻、肾衰竭、尿毒综合征等症.本文应用热酚水法提取纯化了EHEC O157:H7脂多糖抗原及其O-特异性多糖(O-specific polysaccharide,O-SP)侧链.

幽门螺杆菌下调人胃黏膜分泌性白细胞蛋白酶抑制因子的表达

目的通过低剂量阿斯匹林的处理作为炎性模型,研究分析人胃和十二指肠黏膜分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)表达下调是否与幽门螺杆菌(Helicobacter prlori,Hp)定居或感染有关.方法选择20例健康志愿者分成Hp+和Hp-组,其中Hp+组成功进行了根除治疗.每组10人,每人口服阿司匹林100 mg/d.通过活检提取受试者不同部位胃黏膜的总RNA和蛋白,采用RT/realtime PCR检测SLPI的mRNA表达水平和单抗ELISA定量测定SLPI蛋白,统计分析SLPI基因表达的相关数据.结果与Hp-组比较,Hp+组胃窦黏膜SLPI表达水平显著降低,但Hp+组经抗生素根除治疗后其SLPI水平恢复至与Hp-组相当的水平.在低剂量阿司匹林处理下,所有受试者表现组织学观察到的活动性或慢性炎性征.各组在药物处理的不同时间虽有一定的差异,但与药物处理对照组(第0天)比较,SLPI的表达差异没有统计学意义[第1天:(77±880)pg/10?g蛋白;第3天:(941±149)pg/10?g蛋白;第7天:(763±363)pg/10?g蛋白].阿司匹林处理的1周内以胃窦为主的胃炎持续存在(活动性:1.5～1.7;慢性:1.2～2.1),但与Hp-和Hpe(根除组)比较,Hp+组的胃窦黏膜SLPI蛋白表达仍显著降低.结论低剂量阿司匹林处理所致炎性反应对人胃黏膜SLPI的表达没有影响,胃窦黏膜SLPI基因表达的下调与Hp感染有关.

牙龈卟啉单胞菌临床菌株fimA基因变异性和表达频率及其重组表达产物的致炎作用

目的了解牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)fimA基因变异性,构建fimA基因原核表达系统,鉴定其表达产物(rFimA)的致炎作用,检测FimA在Pg临床菌株中表达频率,了解FimA与慢性牙周炎的关系.方法采用高保真PCR从6株Pg临床菌株中扩增fimA基因并测定其核苷酸序列.构建fimA基因原核表达系统,制备rFimA兔抗血清.采用Western blot鉴定rFimA抗原性和免疫反应性.建立ELISA检测38株Pg临床菌株FimA表达情况和97例慢性牙周炎患者212份龈下菌斑标本中的FimA.检测rFimA诱导人脐静脉内皮EVC-304细胞分泌IL-1、IL-8、TNF-α和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的作用.结果 6株Pg临床菌株fimA基因核苷酸序列完全相同.所构建的原核表达系统rFimA产量高达细菌总蛋白的50%左右.rFimA可与Pg全菌抗血清发生结合反应,免疫家兔可获得高效价抗体.94.7%(36/38)菌株和91.5%(194/212)龈下菌斑标本ELISA结果阳性.1和10μg的rFimA作用EVC-304细胞48 h,其分泌的IL-1α水平升高(P＜0.05);但作用12 h即可出现高水平的ICAM-1(P＜0.05),未发现有诱导IL-8和TNF-α的作用(P＞0.05).结论 fimA基因序列保守,在Pg临床菌株中有很高的表达频率.rFimA有良好的抗原性和免疫反应性,可作为Pg血清学检测试剂盒和段疫苗的候选抗原.rFimA有较强的诱导细胞分泌ICAM-1的作用.

天山山地灰旱獭-长尾黄鼠鼠疫疫源地鼠疫菌基因分型研究

目的对天山山地灰旱獭-长尾黄鼠鼠疫疫源地鼠疫菌进行基因分型.方法根据已经证实的22个差异区段(DFR)设计引物,对每株鼠疫菌进行PCR扩增.结果 61株天山疫源地鼠疫菌株共包括4个基因型,即1、2、3、4型.基因型1、2和3在北天山疫源地西部鼠疫菌株中都有分布,但尼勒克菌株的基因型全部为1型.南天山疫源地阿合奇和阿图什两个县菌株的基因型存在显著差别,阿合奇菌株基因型与北天山疫源地的菌株比较接近,而3株阿图什菌株的基因型均为4型,与帕米尔高原长尾旱獭鼠疫疫源地鼠疫菌株相同.结论基因分型结果与纪树立的生态分型基本一致.天山疫源地和帕米尔高原疫源地在阿图什县有交叉.

格林-巴利综合征相关空肠弯曲菌flaA基因的克隆及序列特征

近年来研究发现,空肠弯曲菌感染与部分格林-巴利综合征(Guillain-Barresyndrome,GBS)发病密切相关.空肠弯曲菌引起GBS的发病机制非常复杂,由于GBS常发生于少数几种特殊血清型的空肠弯曲菌感染,提示这些空肠弯曲菌可能具有某种独特的毒力特征,而这种毒力特征与引起GBS有关.空肠弯曲菌的鞭毛是其一个重要的毒力因子,在空肠弯曲菌感染的致病机制中起重要作用.鞭毛微丝由两个高度同源的基因flaA和flaB编码,只有flaA与空肠弯曲菌的动力有关,目前有关鞭毛基因与GBS关系的研究多集中于flaA基因.

粪肠球菌sprE基因的功能研究

近有报道在肺炎链球菌发现HtrA(high-temperature requirement A)蛋白,与细菌克服高温、氧化和渗透压力有关.肠球菌原来属于D组链球菌,其许多特性与链球菌相似.肠球菌能否产生HtrA蛋白酶以及确切的功能目前尚不清楚.我们利用BLAST将肺炎链球菌HtrA蛋白酶编码基因与粪肠球菌染色体基因组进行同源性比较,发现粪肠球菌有一个全长为851 bp的开放性读框与肺炎链球菌htrA基因有较高的同源性.进一步从基因文库查找此开放性读框,发现它是编码粪肠球菌假定的丝氨酸蛋白酶基因,被命名为sprE.为了研究sprE基因的确切功能,利用基因敲除构建粪肠球菌sprE基因突变菌株,在不改变该细菌其它遗传性状的基础上,研究sprE基因在粪肠球菌抗高温和氧化作用.

浙江东方田鼠分离汉坦病毒株S基因的克隆和序列分析

目的对国内首次从东方田鼠分离到的汉坦病毒(HV)ZT10 S基因克隆进行序列分析.方法参考GenBank发表的汉坦病毒核蛋白基因序列,设计合成一对引物,提取分离株ZT10细胞培养物的总RNA,对ZT10 S基因进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约1.7 kb的条带,回收纯化后,将其克隆至pGEM-T载体中,然后进行核苷酸序列的测定及分析.结果与4株SEO型病毒(SR-11、R22、Guo3、8610)核苷酸和氨基酸同源性分别为87.9%～96.0%和96.9%～97.9%,与HTN型病毒株76-118的核苷酸和氨基酸同源性分别为71.3%和81.9%,与其他型汉坦病毒的同源性均很低,表明此分离株ZT10为SEO型汉坦病毒.结论为进一步研究其进化和变异提供了有利条件,也为生产SEO型汉坦病毒特异性核蛋白抗原,免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究奠定了基础.

柯萨奇B组3型病毒中国分离株VP4、3D基因序列及系统发生树分析

目的研究柯萨奇B组3型病毒(CVB3)中国分离株结构蛋白VP4、非结构蛋白3D基因序列及变异性.方法在HeLa细胞中增殖病毒,用RT-PCR扩增目的基因片段,与pMD18-T载体连接,PCR初步鉴定后测序,进行序列同源性及系统发生分析.结果 CVB3中国分离株VP4基因含207个碱基,编码69个氨基酸,与Nancy株氨基酸同源性为97.10%;3D基因含1386个碱基,编码462个氨基酸,与Nancy株氨基酸同源性为97.62%.在系统发生中,CVB3中国株VP4基因、3D基因均与Nancy株聚簇.结论 CVB3中国分离株VP4和3D基因长度与Nancy株一致,进化上属同一分支.

北京地区人偏肺病毒融合蛋白F编码基因的序列分析

目的进一步了解北京地区人偏肺病毒(hMPV)编码基因的特征.方法在原先工作的基础上,从分属于hMPV的两个不同基因进化簇(即基因型)的两份临床标本BJ1816和BJ1887中扩增F蛋白全基因,克隆至pBS-T载体中并进行测序,与GenBank中hMPV的基因序列进行比较分析和种系进化分析.结果 BJ1816和BJ1887的F基因全长均为1620个核苷酸,编码539个氨基酸.BJ1816和BJ1887 F蛋白基因之间的核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为83.8%和94.4%,与同一基因簇内的hMPV有相当高的氨基酸同源性(98.3%～99.6%).BJ1816和BJ1887的F蛋白是典型的I型糖蛋白,具有与迄今已发现的hMPV相同的裂解位点(RQSR).BJ1816和BJ1887之间F2亚单位的氨基酸同源性高于F1亚单位的同源性(96.9% vs 93.8%);除位于羧基末端的跨膜区和胞质尾区外,F1亚单位的其余部分较保守(95.4%);糖基化位点保守.种系进化分析显示BJ1816和BJ1887属于不同的进化簇.结论 F蛋白的序列分析进一步证明BJ1816和BJ1887分属于不同的基因型,其F蛋白的基因特征与其他国外文献中所报道的hMPV相似,是病毒的膜表面糖蛋白,提示其在病毒的感染与免疫中起到重要的作用.

副粘病毒F蛋白HR1和HR2在特异性膜融合中的作用

目的了解副粘病毒融合蛋白(F)分子上的七肽重复序列(HR1、HR2)在特异性膜融合中的作用.方法采用基因定点突变方法,在新城疫病毒(NDV)F与人副流感病毒(hPIV)F基因上创造相同的酶切位点.酶切后采用基因重组方法将F的HR1基因片段相互交换,得到交换HR1的两个嵌合体(chimera),即NDV C-HR1和hPIV C-HR1.用同样的方法又得到交换HR2的两个嵌合体,即NDV C-HR2和hPIV C-HR2.将各种嵌合体DNA与同源及异源HN DNA共转染BHK21细胞后,在真核细胞中表达.Giemsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测F蛋白的表达效率.结果交换HR1后,NDV C-HR1的融合功能只有野毒株的53.91%,hPIV C-HR1的融合功能达到野毒株的83.15%;交换HR2后,NDV C-HR2的融合功能略高于野毒株,达到野毒株的107.23%,hPIV C-HR2的融合功能却只有野毒株的12.01%.FACS分析表明,交换HR1后的NDV C-HR1和hPIVC-HR1的表达效率均下降.交换HR2后,NDV C-HR2的表达效率没有改变,而hPIV C-HR2的表达效率下降.结论 NDV F的HR1对其特异性膜融合具有重要作用,而HR2则没有病毒特异性;hPIV F的HR1和HR2对hPIV的特异性膜融合都有重要作用.

以壳聚糖为佐剂的幽门螺杆菌蛋白抗原对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用

目的探讨以壳聚糖为佐剂的幽门螺杆菌(Hp)抗原对Hp感染的免疫保护作用.方法 BALB/c小鼠随机分为9组:(1)空白对照组:PBS溶液;(2)壳聚糖酸溶液组;(3)壳聚糖颗粒组;(4)Hp抗原组;(5)Hp抗原+壳聚糖酸溶液组;(6)Hp抗原+壳聚糖颗粒组;(7)Hp抗原+CT组;(8)Hp抗原+壳聚糖酸溶液+CT组;(9)Hp抗原+壳聚糖颗粒+CT组.各组于第O、7、14、21天灌胃各免疫1次,免疫后4周给予109CFU/ml的SSI Hp菌液0.5 ml/只进行攻击,隔日1次,共2次.4周后,采用定量Hp培养和病理改良Giemsa染色法检测胃黏膜内Hp感染情况.结果 (1)以壳聚糖为佐剂的Hp抗原的免疫保护率达60%,与以CT为佐剂的Hp抗原的免疫保护率(58.33%)相似,显著高于单纯Hp抗原组及其他不含Hp抗原组(P＜0.05),同时以CT+壳聚糖为佐剂的Hp疫苗的保护率为84.62%、85.71%,高于CT或壳聚糖单独作佐剂组.(2)病理组织学检测含佐剂组的Hp定植计分显著低于无佐剂组和无抗原组(P＜0.05),壳聚糖和CT联合应用组的Hp定植计分低,显著低于单以CT为佐剂组(P＜0.05).(3)Hp定量培养Hp定植密度在佐剂中含壳聚糖组均显著低于对照组和单纯Hp抗原组(P＜0.05),而单以CT为佐剂组Hp定植密度与对照组和单纯Hp抗原组差异无统计学意义(P＞0.05).结论以壳聚糖为佐剂的Hp抗原对Hp感染具有免疫保护作用,并且与CT有协同作用.

汉滩病毒重组腺病毒疫苗与DNA疫苗的联合免疫效果分析

汉坦病毒基因组由L、M、S 3个负链RNA片段组成,M片段编码囊膜糖蛋白G1和G2,G1和G2在病毒的吸附、病毒膜与细胞膜的融合、中和抗体的产生等方面起着重要作用.以腺病毒为载体的活载体疫苗安全性好,能有效感染呼吸道和肠道等组织细胞,不仅能激发黏膜免疫,还能诱导系统免疫和细胞免疫反应.

HIV-2 gp105重组鸡痘病毒引起小鼠细胞和体液免疫应答

人免疫缺陷病毒Ⅱ型(human immunodeficiencyvirus type 2,HIV-2)于1986年在几内亚-比绍被发现.起初HIV-2仅在西非呈区域性流行,随后在欧洲、美洲和亚洲也出现了感染者和发病者.我国的首例HIV-2感染者于1998年在福建省发现[1],并检测出HIV-1与HIV-2的共感染患者[2].因此,研究有效的HIV-2疫苗势在必行.HIV-2 env基因编码前体蛋白gp140,后者裂解后生成外膜蛋白gp105和跨膜蛋白gp36.gp105是病毒的主要抗原,其表面具有大量的Ab表位、TH表位和CTL表位,能诱导机体产生强烈而广泛的中和抗体和细胞毒(CTL)反应,因此是基因工程疫苗研究的重要靶点.本研究将已构建的HIV-2 gp105重组鸡痘病毒大量制备后免疫BALB/c小鼠,观察其在小鼠体内的免疫原性,以获得第一手的实验资料.

结核分枝杆菌含信号肽的Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫保护效果研究

目前人类预防结核病的惟一疫苗棗卡介苗(BCG)存在着不足,研制新型、有效、安全的预防结核病的疫苗成为国内外学者共同关注的一个重要课题.目前由于大多数结核病DNA疫苗的免疫保护效果尚不如BCG,因此,提高DNA疫苗免疫效力是目前结核病核酸疫苗研究的热点.本研究选择新近从结核杆菌培养滤液(CF)中纯化分离出的一种低分子量蛋白抗原棗含信号肽的Mtb8.4(MS)作为目的抗原,与人白细胞介素12(hIL-12)构建成结核病嵌合基因疫苗,旨在提高MS的免疫效力.

鼠疫耶尔森菌重组质粒pVAX1/Fl-V的构建及其免疫效果的研究

目的获得含有鼠疫F1和v抗原编码基因的重组真核表达质粒pVAX1/F1-V,并测定其诱导特异性免疫应答的能力.方法 PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序,构建pVAX1/F1-V融合重组质粒,转染Cos-7细胞,用Western blot方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒pVAX1/F1-V加GM-CSF佐剂免疫BALB/c小鼠,观察免疫效果,400个半数致死量(LDso)强毒鼠疫菌皮下攻毒观察保护率.结果 pVAX1/F1-V在Cos-7细胞中表达,免疫鼠体内产生特异性抗体,通过抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定表明所构建DNA疫苗以诱发TH1型免疫为主,攻毒保护率达60%.结论成功构建F1-v融合蛋白真核表达载体,具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,对强毒鼠疫菌皮下攻毒有一定的保护效力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础.

pMAGE-Al/EGFP转染的人树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤免疫效应的研究

树突状细胞(DC)是目前已知功能强的抗原提呈细胞,被广泛应用于研制各种肿瘤疫苗[1].肿瘤特异性抗原MAGE-Al在不同来源肿瘤组织中有较高表达[2],因而在肿瘤免疫治疗中一直备受重视.本实验中我们构建了重组真核表达载体pMAGE-Al/EGFP,体外电转染人人外周血单核细胞来源DC,并评价其体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力,以期为临床开展MAGE-Al为基础的免疫治疗提供有利的分子生物学工具.

凋亡抑制蛋白XIAP和促凋亡因子Smac在胰腺癌化疗抵抗中的作用

目的探讨X-相关凋亡抑制蛋白(XIAP)和促凋亡因子Smac在胰腺癌细胞化疗抵抗中的作用,以及转染胞浆表达型Smac基因靶向下调XIAP对化疗药物诱导的胰腺癌细胞凋亡的影响.方法应用流式细胞术检测顺铂、5-FU介导的Panc-1、BXPC-3的凋亡率及胞浆染色分析细胞XIAP表达变化,Westem blot分析XIAP、Smac、Caspase-3表达水平;构建pEGFP-N1/Smac真核表达载体并转染胰腺癌Panc-1细胞,流式细胞术检测转染Smac基因前后Panc-1细胞的凋亡敏感性.结果与BXPC-3细胞相比,Panc-1对顺铂或5-FU介导的凋亡具有较强抵抗性,Western blot分析显示Panc-1细胞高表达XIAP,在化疗药物作用下化疗敏感细胞BXPC-3胞浆内XIAP水平下降明显多于Panc-1细胞,而且凋亡的BXPC-3细胞释放人胞浆内的成熟Smac蛋白水平明显高于Panc-1细胞.转染胞浆表达型Smac基因至化疗抵抗Panc-1细胞,可明显下调其XIAP表达水平,促进效应Caspase-3分子活化,显著提高顺铂、5-FU诱导的细胞凋亡率.结论胰腺癌细胞XIAP的表达水平下调与其化疗敏感性有关,XIAP是克服化疗抵抗的重要靶分子,而上调Smac活性蛋白的胞浆表达作为一种有效调节信号,通过拮抗XIAP的凋亡抑制作用协同化疗药物促进胰腺癌细胞凋亡.

双歧杆菌脂磷壁酸对结肠癌细胞Toll样受体表达的影响

目的通过研究双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)对结肠癌细胞中Toll样受体(TLR)表达的影响,探讨TLR在启动双歧杆菌LTA抗肿瘤信号转导通路中的作用.方法用RT-PCR检测结肠癌细胞HCT-116经双歧杆菌LTA处理前后TLR的表达变化.结果结肠癌HCT-116细胞有TLR的基础表达,且经LTA处理后受体的表达增强,呈剂量依赖性.结论双歧杆菌LTA可上调TLR的表达,提示双歧杆菌LTA诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导途径可能由TLR启动.

反义DcR3 RNA转染诱导肝癌细胞凋亡的作用

目的研究DcR3反义mRNA在肝癌细胞凋亡中的作用.方法构建pVAXI-as-DcR3反义表达载体,转染肝癌细胞,Western blot法观察DcR3蛋白合成有无降低,流式细胞术、TUNEL等方法观察凋亡变化.结果 Western blot证实反义重组体可有效阻滞DcR3表达,同时转染了pVAXI-as-DcR3的肝癌细胞凋亡较对照组增多.结论 DcR3反义RNA可使肝癌细胞凋亡增多.

人血管生长素的亚细胞定位

已有大量研究表明血管生成素(angiogenin,ANG)与肿瘤的快速生长和转移有密切的关系,肺癌、胰腺癌、乳腺癌等患者的外周血血清中,ANG的水平明显升高,血清ANG的水平与这些肿瘤的发展及转移呈显著正相关,因此,可以检测血清中ANG的水平来预测肿瘤的发生与发展情况.此外,ANG对于创伤、烧伤及血循环较差的股骨头、半月板等损伤的修复具有较大的临床应用价值.

新型疫苗国家工程研究中心(北京微谷生物医药有限公司)成立

检测克林霉素诱导耐药的葡萄球菌

为了检测葡萄球菌中克林霉素诱导性耐药,正确报告药物敏感试验结果,临床实验室标准化委员会(CLSI,即NCCLS)2004年发布M100-S14[1],增加了克林霉素对葡萄球菌纸片诱导试验,国内陈民钧教授作了介绍[2].我们根据文件规定,在128株金黄色葡萄球菌(金葡)和283株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)中操作D试验,现将结果报告如下.

VEB-3型与VEB-1型超广谱β-内酰胺酶生化特性的比较

目的研究VEB-3型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的生化特性,并与VEB-1型ESBL进行比较.方法将blaVEB-3和blaVWEB-1基因连接至pET28a载体上,并用重组质粒转化大肠埃希菌BL21进行克隆表达,分别挑选blaVEB-3或blaVEB-1阳性表达的菌落测定β-内酰胺类抗生素对其低抑菌浓度(MIC),同时提取酶蛋白进行等电点和酶动力学分析.结果 VEB-3和VEB-1型ESBL具有基本一致MIC和相同的等电点(pI=7.45),但两者的酶动力学性质存在一定的差异:对头孢他啶和头孢噻肟,VEB-3较VEB-1表现出更高的亲和力,两者Km相差一倍左右;对头孢噻吩,VEB-1比VEB-3更具亲和力;而对阿莫西林,VEB-1型ESBL表现出很高的亲和力,而VEB-3仅有低的亲和力,两者Km相差20多倍.结论 VEB-3和VEB-1型ESBL具有相同的等电点,不同的动力学参数,blaVEB-1基因中Leu56→Phe突变可能导致了两者酶动力学性质的差异.

医院耐甲氧西林葡萄球菌感染的生态学特征

目的研究葡萄球菌医院感染的生态学特征,为β-内酰胺类抗生素过度使用导致的医院内肺感染提供预防措施.方法以多重耐药凝固酶阴性葡萄球菌作为主要研究对象,采用临床追踪、痰微生物种群定量分析、苯唑西林和头孢西丁耐药表型筛选以及mecA基因检测及序列同源性比较.结果 30%(56/185)重症监护病人分离到耐药表型符合研究对象的葡萄球菌;感染与住院时间、病种、头孢哌酮/舒巴坦和亚胺培南使用有关,常与多重耐药鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌同时出现;当葡萄球菌超过细菌总数的50%时,应高度警惕继发感染和菌群失调;13%(24/185)病例以菌群交替为特征;64%(36/56)的病例凝固酶阴性葡萄球菌出现在亚胺培南或头孢哌酮/舒巴坦使用1周后;所有耐甲氧西林葡萄球菌菌株含1个533 bp的mecA基因;17株溶血葡萄球菌mecA基因间同源性为99.74%;56株葡萄球菌mecA基因的同源性是97.9%.结论从生态学的3个层面:宏观生态(医院环境、病人条件、抗生素使用等情况)、微生物生态(呼吸道微生物种群变化)、分子生态(mecA基因耐药基因同源性分析)分析葡萄球菌医院感染的特征,为控制医院感染提供新的思路.

部分医院MRSA菌耐消毒剂qacA、qacA/B基因检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是医院感染的主要病原菌.因MRSA具有耐多药特征,已成为临床抗感染治疗的难题.为进一步了解国内部分地区MRSA菌中耐消毒剂基因家族的存在状况,我们对分离自常州、湖州、杭州、南昌4家医院131株MRSA进行了qacA、qacA/B基因检测.

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