CPSIT＿0271的定位、表达时相及其诱导THP-1细胞产生促炎症因子

目的：研究鹦鹉热嗜衣原体（ Chlamydophila psittaci，Cps） CPSIT＿0271蛋白的定位和表达时相，及其重组蛋白对人单核细胞（ THP-1）产生促炎症因子的诱生作用。方法原核表达、纯化GST-CPSIT＿0271重组蛋白，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，ELISA分析血清抗体滴度。间接免疫荧光法初步观察内源性CPSIT＿0271的定位，并通过Western blot 分析CPSIT＿0271在Cps感染HeLa细胞8 h、18 h、24 h、36 h和48 h后的表达情况。用不同浓度GST-CPSIT＿0271刺激THP-1细胞，ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α水平。结果在Cps感染的HeLa细胞中，CPSIT＿0271分布于衣原体包涵体内。 CPSIT＿0271在Cps感染HeLa细胞后36 h开始表达，在48 h时表达量增加。 GST-CPSIT＿0271免疫小鼠，产生较强的免疫应答，小鼠血清特异性抗体效价为1∶16000。当GST-CPSIT＿0271蛋白浓度为2～5μg/ml时，刺激THP-1细胞产生IL-6、IL-1β和TNF-α的水平与CPSIT＿0271呈明显的剂量依赖关系。5μg/ml的GST-CPSIT＿0271蛋白刺激THP-1细胞，TNF-α和IL-1β在24 h时达到高峰，IL-6在48 h时达到高峰。结论 CPSIT＿0271蛋白分布于包涵体内，CPSIT＿0271基因可能为Cps晚期表达基因；GST-CPSIT＿0271具有较好的免疫原性，并能促进THP-1细胞分泌促炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β。

9型重组腺相关病毒介导 R65核酶基因体外转染人血管不同细胞的对比研究

目的：研究9型重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus 9，rAAV9）载体介导R65核酶基因及增强型绿色荧光蛋白（ enhanced green fluorescent protein ，EGFP）对体外培养人脐静脉内皮细胞（ human umbilical vein endothelial cells ， HUVECs ）、人主动脉平滑肌细胞（ human aortic smooth muscle cells ， HASMCs）的转染及病毒载体对两种不同细胞的增殖情况和对NF-κB通道P65表达的影响。方法 rAAV9-EGFP-R65按转染复数（multiplicity of infection，MOI）为1×105、1×106、1×107转染HUVECS、HASMCS细胞，倒置荧光显微镜下观察 HUVECs、HASMCs 细胞中EGFP 的表达，流式细胞仪检测rAAV9-EGFP-R65对HUVECs、HASMCs细胞的转染效率，Alamar Blue 检测rAAV9-EGFP-R65载体对HUVECS、HASMCs细胞增殖的影响。 Western blot法检测rAAV9-EGFP-R65对HUVECs和HASMCs两种细胞中NF-κB通道P65表达的影响。结果 rAAV9-EGFP-R65转染的荧光强度随着MOI的增加和转染时间的延长而增加。 HUVECs和HASMCs在rAAV9-EGFP-R65转染24 h后EGFP 开始表达。 HUVECs 在转染后第6天达到高峰，而HASMCs在转染后第5天达高峰。高峰表达时流式细胞术检测rAAV9-EGFP-R65对HUVECs的转染率分别为MOI＝1×105组：（1．40±1．20）％，MOI＝1×106组：（12．30±1．35）％，MOI＝1×107组：（52．80±2．05）％。rAAV9-EGFP-R65对HASMCs的转染率分别为MOI＝1×105组：（5．30±1．04）％，MOI＝1×106组：（18．30±2．24）％，MOI＝1×107组：（52．40±3．21）％。 rAAV9-EGFP-R65转染HUVECs和HASMCs细胞后，细胞生长及形态均正常，Alamar Blue法进一步检测表明HUVECs和HASMCs各细胞内转染组与未转染组之间A值差异均无统计学意义。 Western blot 法检测显示rAAV9-EGFP-R65转染HUVECs 和HASMCs 两种细胞后NF-κB通道P65的表达减弱。结论 rAAV9-EGFP-R65能够有效转染人脐静脉内皮细胞和人主动脉平滑肌细胞，对两种细胞增殖均无抑制作用，均能有效抑制两种细胞中NF-κB通道P65的表达。

急性乙型肝炎病毒感染的免疫应答

乙型肝炎病毒（ hepatitis B virus，HBV）感染机体后主要有两种结局：急性自限性和慢性持续性。机体能否清除病毒，取决于感染者的年龄和免疫状态。免疫功能健全的成年人感染后大多呈现为自限性。儿童、免疫力缺陷的成年人或者母婴传播多表现为持续性感染。机体产生有效的免疫应答是清除HBV的关键因素，并且与肝脏的炎症和疾病的进展有关［1］。目前人们对HBV感染的发病机制和免疫应答还不完全清楚。本文就急性HBV感染过程中机体的免疫应答的相关进展以及争议作一综述。
　　一、固有免疫应答
　　固有免疫是抵抗微生物感染的第一道防线，但固有免疫在控制HBV感染中的作用却一直存在争议。长期以来部分学者认为HBV不被固有免疫识别，是一种潜伏病毒（stealth virus）［2］。急性黑猩猩感染模型显示， HBV感染早期，肝内与固有免疫相关的各种基因的转录水平没有明显变化，也就是不介导产生固有免疫应答［3］。近土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus ，WHV）模型也显示，WHV感染土拨鼠后肝组织内没有检测到固有免疫相关的基因表达上调［4］。与人免疫缺陷病毒（ human im-munodeficiency virus，HIV）和丙型肝炎病毒（hepati-tis C virus，HCV）相比，HBV感染患者外周血内产生抗病毒相关细胞因子和趋化因子的水平明显较低，反应时间也明显延迟［5］。另外，急性HBV 感染早期，患者外周血内能检测到高水平的IL-10，从而抑制NK细胞分泌IFN-γ的能力［6］。这些结论均提示HBV感染不诱导机体产生固有免疫应答。

单核细胞增生李斯特菌自溶素的功能与调控

单核细胞增生李斯特菌（ Listeria monocytogenes）是一种在环境中普遍存在的革兰氏阳性菌，无芽孢结构、兼性厌氧，能引起人和动物严重的食源性感染。食用被该菌污染的食物后，病原菌可经胃到达小肠，若突破肠屏障，可引起发热性肠胃炎，患者或携带者的排泄物经土壤又可能再次污染食物。若病原菌转移至肝脏，可引发隐形肝炎。对免疫功能低下或不全的个体，还可能导致败血症、脑膜炎及孕妇流产等病症，其致死率高达30％～40％［1］。
　　自溶素（ autolysin ）是一类能够降解细菌自身细胞壁的肽聚糖水解酶，在细菌中普遍存在［2］。自溶素与细菌的多种生物学功能有关，如降解细胞壁、促使细胞分离及调节细胞壁更新。在感染宿主时自溶素可以协助细菌黏附并入侵宿主细胞，影响细菌在胞内及胞间的扩散力并诱导免疫细胞产生细胞因子。自溶素的生物学功能还体现在生物膜、鞭毛及孢子形成、遗传转化能力、蛋白分泌及自我溶解等方面，与细菌的致病力密切相关［1，3］。本文就自溶素的结构、基因功能和调控机制进行综述，旨在为自溶素功能研究提供参考。

远程投稿系统作者常见问题

问题1：作者如何投稿？
　　（1）注册网站会员，邮箱获得登录名和密码；（2）申请成为杂志作者，需要给哪个杂志投稿，就申请成为哪个杂志的作者，一个作者可以同时申请成为多个杂志的投稿作者；（3）进入系统，点击左侧菜单栏【期刊管理系统】，点击之后系统会列出期刊系统作者的所有功能，点击【作者投稿】，按步骤一步步往下操作，后点击【投稿】，完成投稿操作。

中华医学会系列杂志开始标注数字对象惟一标识符

数字对象惟一标识符（ digital object identifier ，DOI）是对包括互联网信息在内的数字信息进行标识的一种工具。在传统的出版物中，书刊、磁带、光盘都有国际标准编号（ ISBN、ISSN、ISCN）及其条形码，作为出版物的惟一标识。这些标识使出版物得到有效的管理，便于读者查找和利用。而网上的文档一旦变更了网址便无从追索。数字信息标注DOI如同出版物的条形码，是一个永久和惟一的标识号。随着时间推移，数字对象的某些有关信息可能会有变化（包括存储的物理位置），而DOI可让使用者直接由此链接到出版商的数据库、文献、摘要甚至是全文，识别码可以直接指引到出版物的本身，使国内外各种来源、不同物理地址的各种类型的学术信息实现互链互通。 DOI是一个可供全球期刊快速链接的管理系统，整个系统由国际DOI基金会（ IDF）进行全球分布式管理。随着DOI的普及，可以借助其进行相关的科研评价，分析高被引频次作者、单位和论文等相关信息，了解各个领域学术研究的热点、影响和趋势，以及研究者在本研究领域的影响力及新研究成果。中文和外文资源，一次和二次文献，科技文献和数据通过DOI可实现动态的、开放式的知识链接，整体提升包括期刊在内的数字资源的使用率，为读者提供更好的服务。进而逐步提高中国期刊的被引率，整体上提高中国精品期刊在国际上的影响度和显示度，终推动并建立一个与世界接轨的、永久的、开放互动、成员主动参与、覆盖主要学术研究信息领域的知识链接系统，推动数字期刊的发展和繁荣。

《中华微生物学和免疫学杂志》书写规范

1．根据GB／T 7408-94《数据元和交换格式信息交换日期和时间表示法》，由特定起点与终点定界的时间段的表示，起点与终点之间以一字线为分隔符，而不再用波纹线。示例如下：
　　2001-2004年，而不再表示为2001～2004年，但“～”可以用“至”取代。
　　注意：除了上述时间段之外的其他计数、计量范围的表示，仍然用波纹线“～”表示，如：2～8 kg。
　　2.根据人民卫生出版社出版的全国高等学校教材《卫生统计学》第5版，报告统计学检验的结论时，对P值小于或等于检验水准（一般为0．05）的情况，一律描述为“差异有统计学意义”，同时写明P的具体数值或相应的不等式，不再采用将P＜0．05描述为“差异有显著意义（或差异有显著性）”、将P＜0．01描述为“差异有非常显著意义（或差异有非常显著性）的表述方法。在用不等式表示P值的情况下，一般选用P＞0．05、P＜0．05和P＜0．013种表达方式即可满足需要，无需再细分为P＜0．001或P＜0．0001。

本刊启用稿件远程管理系统

为顺应当今期刊网络化、数字化的发展趋势，更好地为广大作者、读者提供高质量的服务，中华医学会杂志社开发了稿件远程管理系统。该系统根据中华医学会系列杂志稿件处理流程、编辑加工规范、审稿制度、管理规范等业务需求设计，采用先进的数据库及网络技术，具有强大的数据处理和分析能力。稿件远程管理系统将协助作者、编辑、审稿专家、编委、定稿会专家、总编等相关人员多位一体地进行稿件业务处理，解决编辑部对稿件网络化流程管理的需要，并实现各类查询功能。2009年9月，本刊正式启用稿件远程管理系统，访问中华医学会网站（http：／／www．cma．org．cn）首页上方“业务中心”进行稿件处理操作。
　　该系统包括作者在线投稿、在线查稿、专家在线审稿、编委在线定稿、总编办公、远程编辑等功能，通过网上投稿、网上查稿、网上审稿，实现作者、编辑、审稿专家的一体化在线协作处理，从而构建成为一个协作化、网络化、角色化的编辑稿件业务处理平台。对于广大作者而言，该系统大的优点是支持在线投稿、方便作者及时了解稿件进程、缩短稿件处理时滞。

本刊使用的医学缩略语

为了精简文字，使文章读起来更简练易懂，现将本刊常用且基础医学领域中所熟知的专业名词缩略语公布如下（按英文首字母顺序排列），本刊在论文中将不再注释。

关于中华医学会系列杂志投稿网址的声明

南京地区儿童肺炎链球菌临床分离株的PspA 蛋白分型

目的：调查由来自PspA家族1和PspA家族2的3个PspA蛋白组成的重组蛋白疫苗在流行的肺炎链球菌中的覆盖率。方法采用ELISA方法，分别用这3个蛋白的抗血清与159株南京地区儿童中的肺炎链球菌分离株（包括47株侵袭性菌株）进行反应，对PspA 蛋白分布情况进行研究。结果分属于9个血清型的47株侵袭性菌株中，10．7％的菌株为PspA家族1菌株，89．3％的菌株为PspA家族2菌株，而没有PspA家族3的菌株。在所有159个菌株中，属于PspA家族1的菌株为10．1％，属于PspA家族2的菌株为88．0％，另有1．9％的菌株不能用本研究中所采用的方法进行PspA蛋白分型，但仍然没有发现属于PspA家族3的菌株。结论这3个PspA蛋白组成的疫苗可以覆盖本研究中（南京地区）几乎所有的临床侵袭性和非侵袭性分离株。

肺炎克雷伯菌临床菌株β-内酰胺酶基因型及其表达诱导与抑制机制

目的：了解肺炎克雷伯菌临床菌株常见β-内酰胺酶基因型及其携带模式、抗生素诱导及组氨酸激酶抑制剂抑制β-内酰胺酶基因表达的初步机制。方法采用微量试管稀释法及E-test检测肺炎克雷伯菌临床菌株对β-内酰胺类抗生素的敏感性。采用PCR和测序法检测β-内酰胺类抗生素耐药肺炎克雷伯菌株携带的主要β-内酰胺酶基因型，纸片扩散确证试验检测其β-内酰胺酶活性。采用实时荧光定量RT-PCR了解头孢噻肟诱导β-内酰胺酶基因表达以及组氨酸激酶抑制剂氯氰碘柳胺抑制头孢噻肟诱导β-内酰胺酶基因表达的作用。结果118株β-内酰胺类抗生素耐药肺炎克雷伯菌均表达β-内酰胺酶，其中90．7％（107/118）菌株可检出KPC-2、SHV-11、TEM-1、CTX-M-14和/或OXA-1基因，其中TEM-1（71．0％）和SHV-11（64．5％）基因检出率明显高于其他3种β-内酰胺酶基因（ P＜0．05）。68．2％（73/107）菌株携带两种以上β-内酰胺酶基因型，其中 TEM-1＋SHV-11（30．8％，33/107）为优势β-内酰胺酶基因型携带模式。除KPC-2 mRNA外，1/4 MIC头孢噻肟能使肺炎克雷伯菌TEM-1、SHV-11、CTX-M-14、OXA-1 mRNAs水平显著升高（ P＜0．05），该诱导作用可被100μmol/L氯氰碘柳胺所抑制（P＜0．05）。结论 TEM-1和SHV-11是本地区肺炎克雷伯菌临床菌株所携带的主要β-内酰胺酶基因型，TEM-1＋SHV-11为β-内酰胺酶基因型优势携带模式。亚致死量头孢噻肟可诱导肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因表达上调，组氨酸激酶抑制剂氯氰碘柳胺具有抑制头孢噻肟诱导肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因表达上调的作用。

HCV 慢性感染及自发清除对血清微量元素含量的影响及其与血清白蛋白和HCV 病毒载量的关联研究

目的：分析HCV慢性感染和HCV自发清除者体内血清微量元素锌、铁、镁、钙、铜和磷的含量特征及其与血清白蛋白和HCV病毒载量之间的关系。方法采用原子吸收分光光度法检测并比较HCV慢性感染患者（59人）、HCV自发清除者（65人）和健康对照者（48人）血清中上述6种微量元素的含量变化。分析HCV慢性感染者中微量元素水平与血清白蛋白和HCV病毒载量的关联性。结果 HCV慢性感染者血清中锌的含量明显低于健康对照者，铁、铜和磷的含量高于健康对照者；在HCV慢性感染患者中锌和血清白蛋白呈正相关关系（r＝0．4022， P＝0．0016），铁（r＝-0．3001， P＝0．0209）、铜（ r＝-0．3856， P＝0．0036）及磷（ r＝-0．3600， P＝0．0075）与血清白蛋白呈负相关；在HCV慢性感染者中血清锌（r＝-0．4367， P＝0．0005）与HCV病毒载量呈负相关，铜（r＝0．3328， P＝0．0139）和病毒载量呈正相关关系。 HCV自发清除者体内微量元素含量与健康对照者之间无明显差异，血清钙、镁水平在3组人群之间没有显著差异。结论 HCV慢性感染可引起血清中微量元素锌、铁、铜及磷的含量异常，随着HCV的自发清除体内微量元素含量恢复正常，在慢性HCV感染中微量元素的异常与肝功能和病毒载量的水平密切相关。

《中华微生物学和免疫学杂志》征订启事

《中华微生物学和免疫学杂志》2013年33卷关键词索引

《中华微生物学和免疫学杂志》编辑部地址变更通知

初免加强型结核疫苗保护力评价用动物模型的建立

目的建立适合评价BCG初免加强型结核新疫苗的豚鼠动物模型，并用新型结核疫苗进行验证性评价。方法按初免-加免间隔时间，分为短期（间隔14周）评价和长期（间隔54周）评价两次实验。短期评价中BCG免疫14周后豚鼠给予重组结核疫苗（ AEC/BC02）加强免疫2次；长期评价中BCG免疫54周后豚鼠给予重组结核疫苗（ AEC/BC02）加强免疫3次。两次实验中均设置阴性对照组（NS→NS）和卡介苗对照组（BCG→NS）。末次加强免疫1周后，所有豚鼠攻毒结核分枝杆菌（ M．tuberculosis，Mtb），感染6～7周后，处死豚鼠，评价豚鼠肝、脾、肺综合病变指数，并检测脾脏活菌负荷量。结果短期评价：疫苗加强组豚鼠肝、脾、肺综合病变指数评分（3．33±5．00）低于卡介苗对照组（5．56±7．27）和阴性对照组（47．00±28．11），疫苗加强组和卡介苗对照组与阴性对照组相比均有统计学差异（分别P＝0．0001和P＝0．0002），但疫苗加强组与卡介苗对照组无统计学差异（ P＝0．4294）。疫苗加强组豚鼠的脾菌分离数对数（log10CFU）平均值为0．78±1．55，低于卡介苗对照组1．06±1．87，但差异无统计学意义；低于阴性对照组5．47±0．61，差异有统计学意义（P＝0．0003）。长期评价：疫苗加强组豚鼠肝、脾、肺综合病变指数评分（5．0±7．6）低于卡介苗对照组（14．4±13．5）和阴性对照组（56．9±14．1），差异有统计学意义（分别P＝0．0394和P＜0．0001）；疫苗加强组豚鼠的脾菌分离数对数平均值为1．00±1．86，低于卡介苗对照组的1．46±1．94，但差异无统计学意义；低于阴性对照组的5．43±0．56，差异有统计学意义（P＝0．01）。卡介苗对照组豚鼠的脾菌分离数对数平均值为1．46±1．94，低于阴性对照组的5．43±0．56，差异有统计学意义（P＝0．0089）。结论综合对比短期评价与长期评价两次实验，评价初免加强型新疫苗的动物模型应适当延长初免和加强免疫的间隔时间。

我国结核病新疫苗研究策略的探讨

为了反映我国在重大传染病方面的研究现状，本刊曾邀请包括闻玉梅院士在内的14位国内知名学者和专家撰稿，于2013年第33卷第1期组织出版了重大传染病专刊（重点号）。该重点号的出版引起了许多业内专家针对难点问题的讨论，这正迎合了我们出版该期的初衷---为研究者搭建一个专业技术讨论平台。正是因为重点号的刊出，一年来，本刊收到一些结核病研究方面的不同观点和见解。因此，将这个至今未能克服的“古老”而“热点”病种作为本期专栏组稿（结核病专题），若能对专业学者在该研究领域中的思路有所启迪，便是我们编者莫大的欣慰。

治疗性新型结核疫苗保护力评价用动物模型的建立

目的：建立治疗性新型结核疫苗抗结核保护力临床前评价用动物模型。方法采用单细胞耐多药结核分枝杆菌菌液感染豚鼠，感染途径为豚鼠腹股沟皮下，感染剂量每只为1000 CFU/0．2 ml。共进行2个实验，实验Ⅰ为在感染豚鼠3 d后，给予免疫治疗和/或化学治疗，分别于感染豚鼠后5、7、9周，取各组豚鼠4只进行解剖，观察肝、脾、肺的综合病变指数、脾脏结核杆菌荷菌量以及肝、脾、肺的组织病理改变；实验Ⅱ为在感染豚鼠14 d后，给予不同剂量免疫治疗和/或化学治疗，于感染豚鼠5周后，对各组豚鼠进行解剖，观察肝、脾、肺的综合病变指数和脾脏结核分枝杆菌荷菌量。结果在感染-治疗间隔时间为3d的实验Ⅰ中，感染豚鼠后第5周、7周和9周的结果显示，免疫治疗联合化疗、单一免疫治疗和单一化疗，都可有效抑制结核病变和降低脾脏结核杆菌荷菌量，与阴性对照比较均有统计学意义；同时，免疫治疗联合化疗的治疗方法优于单一的免疫治疗和单一的化疗，且随着停药时间延长，单一免疫治疗组和单一化疗组豚鼠脏器结核病变程度有大幅回升，而免疫治疗联合化疗组仅略有回升。在延长感染-治疗间隔时间为14 d的实验Ⅱ中，无论哪种治疗方法均能减轻结核病变和降低脾脏结核杆菌荷菌量，且免疫治疗联合化疗的治疗效果更佳。结论建立的治疗性新型结核疫苗抗结核保护力评价用豚鼠模型具有很好的重复性，可作为治疗性新型结核疫苗临床前研究效力评价动物模型。

重组结核分枝杆菌 ESAT6-CFP10蛋白与 PPD 皮肤试验的动物实验比较

目的：动物实验中评价重组结核分枝杆菌ESAT6-CFP10蛋白（以下简称：重组ESAT6-CFP10蛋白）皮肤试验情况，同时与PPD（结核菌素纯蛋白衍生物）皮肤试验进行比较。方法以不同分枝杆菌分别致敏豚鼠，致敏成功后每只豚鼠皮内分别注射重组ESAT6-CFP10蛋白和PPD。用双盲法记录注射后48 h局部皮肤反应的纵径和横径，计算其均值。以结核分枝杆菌活菌感染豚鼠，在感染后不同时间内选取一定只数的豚鼠，皮内分别注射重组ESAT6-CFP10蛋白和PPD，记录注射后24 h局部皮肤反应的纵径和横径，计算其均值，并统计两种皮试反应的阳转率情况。结果在结核分枝杆菌活菌、结核分枝杆菌死菌和卡介苗致敏豚鼠中，PPD皮肤试验均为阳性，局部硬结直径分别为（11．4±0．9） mm、（11．8±1．1） mm和（13．2±0．8） mm。在结核分枝杆菌活菌致敏豚鼠中，重组ESAT6-CFP10蛋白皮肤试验为阳性，局部硬结直径为（13．7±5．7） mm；在结核分枝杆菌死菌和卡介苗致敏豚鼠中，重组ESAT6-CFP10蛋白皮肤试验均为阴性，局部硬结直径为0。结核分枝杆菌H37 Rv感染豚鼠后，第9天开始随机选取相应只数的豚鼠进行重组 ESAT6-CFP10蛋白和PPD的皮肤试验。第2周时24只豚鼠全部进行皮试试验，ESAT6-CFP10蛋白全部阳转，阳转率为24/24，硬结反应平均值为（19．9±3．0） mm；而PPD的阳转率仅为15/24，硬结反应平均值为（6．1±5．5） mm。第4周时PPD开始全部阳转，阳转率为33/，硬结反应平均值为（12．7±2．5） mm。结论重组ESAT6-CFP10蛋白皮肤试验能够鉴别卡介苗接种和结核分枝杆菌死菌、活菌感染，并且较PPD能够早期进行诊断。

结核分枝杆菌潜伏感染豚鼠模型的建立和验证

目的：建立结核分枝杆菌（M ycobacterium tuberclu osis，Mtb）潜伏感染治疗用疫苗的豚鼠评价模型。方法豚鼠皮下攻毒5．0×103 CFU Mtb，于不同时间点用0．5μg重组结核杆菌ESAT6-CFP10蛋白对豚鼠皮试，观察皮试阳转情况。攻毒2周后，模型组豚鼠采用5 mg异烟肼灌胃治疗，每周3次，持续4周；对照组豚鼠不做化疗。在Mtb感染后的第6周，分别取未经异烟肼治疗的豚鼠和经异烟肼治疗的豚鼠解剖，比较豚鼠的肝、脾和肺的脏器综合病变指数以及脾活菌数（ log10 CFU）。根据上述结果建立豚鼠的潜伏感染模型，并用两个参考疫苗对该模型进行验证。结果豚鼠攻毒Mtb 2周后，EC皮试反应全部转阳，皮试反应大小为（19．9±3．0） mm。模型组豚鼠经4周异烟肼治疗后，脏器综合病变指数为0，脾未分离出活菌数。对照组豚鼠不经化疗，脏器综合病变指数为38．8±16．5，脾活菌数为（5．1±0．3）log10 CFU。停药后，模型组豚鼠结核病自然复发，在两次参考疫苗的验证中，脏器综合病变指数分别为48．5±23．9和51．30±23．41，脾活菌数分别为（4．5±1．3）和（4．2±1．1） log10 CFU，肺部活菌数分别为（4．1±1．2）和（3．4±1．3） log10 CFU。结论 Mtb攻毒豚鼠后，异烟肼化疗可抑制Mtb增殖，成功建立豚鼠的Mtb潜伏感染模型。该模型重复性好，可用于潜伏感染治疗用疫苗的评价。

脑心肌炎病毒实验性疫苗免疫原性初步研究

目的：制备脑心肌炎病毒（ EMCV）实验性疫苗并对其免疫原性进行初步研究。方法采用Vero细胞培养EMCV病毒，微量细胞病变法检测病毒滴度；经过浓缩、过滤、超速离心等方法初步纯化EMCV；摸索病毒灭活方法；确定病毒半数致死量（ LD50）；通过肌肉注射途径免疫小鼠，微量中和试验测定血清中和抗体效价；免疫后小鼠分别以100LD50、50LD50和25LD50进行腹腔攻毒试验。结果以1∶4000β-丙内酯4℃放置12 h作为病毒灭活条件，病毒半数致死量17 CCID50/ml；免疫小鼠能检测到中和抗体并对病毒攻击具有抵抗力。结论 EMCV实验性疫苗能诱导小鼠产生保护性抗体。

乙型脑炎病毒 EDⅢ蛋白的表达纯化及在 Array-ELISA 方法中的应用

目的：拟在大肠杆菌中高效表达纯化乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白，希望能为乙型脑炎（乙脑）病毒（ JEV）感染血清的诊断试剂盒提供候选抗原。方法针对乙脑病毒的EDⅢ蛋白设计特异的PCR扩增引物，对提取的乙脑病毒RNA进行RT-PCR扩增，获取目的基因并构建重组质粒，将重组质粒转入E．coli BL21中并在IPTG作用下表达目的蛋白。将表达的乙型脑炎病毒EDⅢ抗原系列稀释后与对照抗原同时点制在ELISA微孔板中，采用Array-ELISA技术同时检测临床JEV感染患者及正常人血清，并与间接免疫荧光方法的检测结果进行比较。结果成功克隆了JEV EDⅢ蛋白基因段，并在E．coli BL21中表达，成功获得EDⅢ蛋白。该重组蛋白可用于Array-ELISA方法，进行JEV感染血清的检测，并且与传统免疫学检测方法---间接免疫荧光法结果一致。结论该重组抗原可作为JEV感染血清检测的候选抗原。

流感疫苗生产用新型细胞基质 MDCK细胞的质量控制研究

目的：对流感疫苗生产用新型细胞基质MDCK细胞进行全面地质量控制检测，并对检测项目及结果进行汇总和分析。方法根据《中国药典》三部，对待检MDCK细胞进行细胞鉴别、内、外源因子和致瘤性检测，同时根据国际新要求对MDCK细胞的裂解物及细胞DNA的致癌性进行检测。结果待检MDCK细胞为贴壁、上皮样细胞形态，犬细胞来源，平均染色体数为80±1；未发现细菌、真菌、支原体污染，内、外源病毒的污染检测结果显示，待检细胞中未发现有致细胞病变、产生血吸附、血凝或致动物死亡的非特异性病毒，逆转录病毒、牛源性病毒和犬特异性病毒检测均为阴性；取107个活细胞接种每只裸鼠，观察12周后，接种部位未发现结节，大体解剖显示主要脏器亦未出现结节，病理检查显示与对照组无明显差异，细胞未显示具有致瘤性。以等量细胞的裂解物和细胞DNA接种裸鼠，均未致裸鼠产生结节，病理检查结果与对照组无明显差异，提示细胞未显示致癌性。结论待检MDCK细胞具有生产流感疫苗的潜在可能性。