中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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DNA免疫诱导小鼠产生抗人心肌肌钙蛋白T抗血清的研究
目的通过基因免疫诱导BALB/c小鼠产生抗人心肌肌钙蛋白T (cTnT)的抗体应答,并比较不同免疫佐剂、预处理方法对免疫应答的影响. 方法构建cTnT的真核表达质粒pCI-cTnT,大量提取、PEG纯化质粒,通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠并加强免疫,每隔2周取血,ELISA法分析抗cTnT的体液应答,免疫印迹检测抗血清的特异性.并比较布吡卡因预处理、CpG ODN核酸佐剂、弗氏不完全佐剂对抗体应答效果的影响. 结果接种pCI-cTnT质粒的小鼠血清中检测出抗cTnT特异性抗体,加强免疫使抗体滴度提高;使用CpG ODN后免疫应答增强,弗氏不完全佐剂可明显增强免疫效果,而吡卡因预处理使应答水平下降;初次免疫后14周仍可测得较高的抗体应答. 结论采用含cTnT基因的质粒DNA免疫,成功地诱导小鼠产生抗cTnT的抗体;传统的弗氏不完全佐剂可作为核酸免疫的佐剂使用.
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LPS诱导巨噬细胞凋亡的研究
目的探讨脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞发生凋亡的分子机理及信号传导通路. 方法采用夹心ELISA法检测巨噬细胞NF-κB的核内浓度;硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量;吖啶橙荧光染色及凋亡电泳试验显示巨噬细胞凋亡情况. 结果 LPS刺激可诱导巨噬细胞的NF-κB活化、NO分泌并终导致细胞凋亡,而特异性PKC抑制剂(Cal C)和NF-κB阻断剂(PDTC)能在不同程度上抑制LPS的生物活性作用. 结论 LPS诱导肺巨噬细胞凋亡的信号传导通路有PKC、NF-κB 的参与,而NO等生物活性介质在其中发挥了重要作用.
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可调控表达IL-2基因骨髓基质细胞促进异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建
目的探讨可调控表达IL-2基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建的促进作用. 方法构建四环素诱导的表达小鼠IL-2基因的逆转录病毒载体,转染包装细胞PT67,感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H-2d),构建可诱导表达IL-2基因的工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet-on-IL-2.受体小鼠C57BL/6(H-2b)经γ射线致死剂量照射后,输入供体BALB/c(H-2d)骨髓细胞1×107/只(去除T细胞),同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet-on-IL-2 5×105/只.灌服多西环素(Dox)诱导IL-2表达.于骨髓移植(BMT)后30d、60d检测小鼠脾细胞对ConA的反应强度,空斑形成细胞(PFC)数和迟发型超敏反应(DTH),脾细胞中T辅助细胞前体频数(HTLp)及移植后小鼠脾脏T细胞亚群CD4+/CD8+的比值,评价BMT后免疫功能的恢复情况. 结果成功建立四环素诱导IL-2基因表达的基因工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet-on-IL-2.异基因BMT、联合输注QXMSC1tet-on-IL-2能显著提高BMT小鼠脾细胞对ConA的反应,增加脾脏淋巴细胞HTLp及PFC数目,并使DTH反应增强,改善小鼠脾脏T细胞亚群CD4+/CD8+的比值. 结论共输注可调控表达IL-2基因的骨髓基质细胞可促进异基因移植小鼠免疫功能重建.
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人外周血T细胞系间接识别SLAⅠ类分子引起的异种细胞增殖反应
目的确认猪→人异种移植中存在针对猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen, SLA)Ⅰ类分子的间接识别而引起的急性细胞性排斥. 方法用纯化的中国版纳猪SLAⅠ类P1基因工程蛋白为抗原,体外反复刺激健康人外周血T细胞,建立P1特异性T细胞系.观察抗原特异性CD4+ T细胞系在自身APC存在下对版纳猪外周血单个核细胞与软骨细胞的反应性,以及HLA-DR单抗与氯喹的阻断作用. 结果建立10株SLAⅠ类P1抗原特异性T细胞系,其中8株以TCRαβ+CD4+为主要表型,将其合并使用.该CD4+ P1特异性T细胞系在自身APC存在下对相同品系版纳猪PBMC与软骨细胞均产生显著增殖反应.经抗人HLA-DR单抗与氯喹处理均能明显阻断其增殖反应. 结论健康人外周血T细胞可通过间接识别SLAⅠ类抗原对版纳猪细胞产生明显应答.
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超广谱β-内酰胺酶TEM和SHV型全长基因PCR直接测序
超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)TEM和SHV型是常见的基因型,并且呈全球性分布.TEM和SHV的衍生型不断出现.TEM和SHV型全长基因测序对亚型的区别、新亚型的确认和各衍生型的基因进化树分析以及分子流行病学研究具有重要意义.本文介绍TEM和SHV型全长基因PCR直接测序方法.
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4株金黄色葡萄球菌临床分离株的多位点测序分型
多位点序列分析(Multilocus Sequencing Typing, MLST)是近年报道的一个具有很高分辨能力的分子生物学方法,它的主要优势是已经建立了有大型数据库的国际网站http://www.mlst.net,可以直接将实验结果提交数据库与已知的流行株进行比较,分析不同时间不同地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)临床分离株的遗传相关性.本研究对从天津分离的4株金葡菌临床株进行MLST分型,并与国际流行克隆株比较,了解它们的遗传背景和可能的来源.
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内在化的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌诱导宿主细胞凋亡
目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的内在化过程及内在化后引起宿主细胞的变化情况,并探讨宿主细胞[Ca2+]i变化与MRSA内在化及细胞凋亡之间的关系. 方法利用激光扫描共聚焦显微镜追踪宿主细胞[Ca2+]i的动态变化,流式细胞术观察细胞凋亡情况. 结果 MRSA ATCC-67-O不能被Hep2细胞内在化,却可以进入ECV304细胞,并导致ECV304细胞凋亡,抑制细胞[Ca2+]i的升高未能影响内在化的菌数和凋亡的细胞数. 结论内在化的MRSA ATCC-67-O能够诱导ECV304细胞发生凋亡.宿主细胞[Ca2+]i变化与MRSA ATCC-67-O内在化及细胞凋亡之间并非直接的因果关系.
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幽门螺杆菌ureB及ureB-hspA融合基因在减毒鼠伤寒沙门菌中的表达及小鼠的免疫应答
目的构建H.pylori ureB单基因及ureB和hspA融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗候选株,并进行初步的免疫原性分析. 方法将H.pylori ureB单基因及ureB和hspA融合基因分别克隆入pTrc99A-asd质粒的多克隆位点之内.挑取单菌落质粒鉴定后,分别将其电击经中间宿主X3730转入终宿主X4072,SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达.将疫苗候选株经口或鼻免疫BALB/c小鼠. 结果疫苗候选株能够分别表达出相对分子质量(Mr)为64×103的UreB蛋白及77×103的UreB-HspA融合蛋白.在免疫BALB/c小鼠的肠液和血清中可以分别检测到针对H.pylori的特异性分泌型IgA和IgG抗体. 结论构建了能够表达幽门螺杆菌UreB及UreB-HspA融合蛋白的活菌疫苗候选株,为探索制备H.pylori口服活菌疫苗奠定了基础.
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嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶的特性
嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)是一种条件致病菌,对临床常用抗菌药物耐药.产金属β-内酰胺酶(MBL)使其对卡巴培南类及头孢菌素类耐药.我们采用纸片协同法筛选出产MBL的可疑菌株,以等电聚焦确定其等电点,并对MBL基因进行克隆、测序,从生化及分子水平了解嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶的特性.
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幽门螺杆菌结构性群体形成的研究
目的研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)由浮游状单细胞转变成结构性群体过程中蛋白质表达差异. 方法用超微结构形态观察及双向电泳技术比较浮游状幽门螺杆菌及其结构性群体全菌蛋白表达图谱的差异,将结构性群体形成过程中表达量显著增加的蛋白斑点,进行胶内酶切,肽混合物使用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪进行质谱分析,获得4个明确的肽质量指纹谱,通过蛋白质数据库进行检索分析. 结果与结构性群体形成密切相关的蛋白质为鞭毛丝帽蛋白、2-磷酸甘油酸酯脱水酶、3,4-邻苯二酚-2-丁酮4-磷酸盐合成酶和热休克蛋白33同类物. 结论上述蛋白的鉴定将有助于发现幽门螺杆菌新的致病因子以及抗菌靶位.
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人巨细胞病毒感染对脐静脉内皮细胞粘附分子和核转录因子表达的影响
目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)体外感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表面细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA和核转录因子kappa B(NF-κB)表达的影响,探讨NF-κB活化与ICAM-1 mRNA表达的关系. 方法用RT-PCR方法检测ICAM-1 mRNA的表达,用凝胶电泳迁移率改变试验(EMSA)检测NF-κB活性. 结果 HUVEC感染HCMV后1h,NF-κB活性增加(P＜0.05),感染后2h,ICAM-1 mRNA表达增加(P＜0.05),二者均于8h达高峰,至24h时仍维持较高表达(P＜0.01);加入NF-κB活性抑制剂四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)后,NF-κB活性明显减弱,同时ICAM-1 mRNA的表达也明显降低(P＜0.01). 结论 HCMV感染可激活NF-κB,使ICAM-1 mRNA的表达增加,从而引导炎症反应至感染部位,并有利于病毒感染在细胞间扩散.NF-κB参与ICAM-1转录的调控,其活性变化影响ICAM-1 mRNA的表达.
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北京株和广州株SARS病毒与非典型肺炎患者血清中和抗体反应观察
目的研究北京和广州地区分离的SARS病毒的抗原性关系,为非典型肺炎疫苗候选株的筛选提供依据. 方法采用Reed-Muench法测定BJ01和GZ01株病毒的滴度,分别选取北京和广州地区SARS病人血清各6份,采用固定病毒-稀释血清法进行微量细胞交叉中和试验,测定两地病人血清对BJ01和GZ01株病毒的中和抗体水平及交叉中和能力,分析这两株SARS病毒抗原性的差异. 结果北京和广州两地的非典型肺炎病人血清能够中和本地分离的SARS病毒.两地血清可互相交叉中和BJ01和GZ01株SARS病毒.中和抗体水平相同. 结论北京和广州两地分离的SARS病毒BJ01和GZ01株抗原性相似、差异较小.
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登革2型病毒E蛋白免疫优势表位的筛选鉴定
目的用噬菌体展示肽库筛选登革2型病毒(DEN2)E蛋白的抗原表位,并确定该抗原表位性质. 方法以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子,生物淘洗噬菌体随机12肽库,将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导,通过噬菌体展示肽序列与DEN2 E蛋白的氨基酸一级结构的对比,初步确定E蛋白的抗原表位;用模拟该表位线性序列的合成十肽进行抗体结合试验、噬菌体竞争抑制试验及与DEN感染患者的血清学试验,确定其为免疫优势线性表位. 结果肽库淘洗获得的11个ELISA阳性的噬菌体克隆有相似的结构基序WFKKGSS,其展示肽与DEN2 E蛋白390～398 AA序列有3～5个氨基酸相同.对应于DEN2 E蛋白390～399 AA的合成十肽能与淘洗单抗特异反应,并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合.该合成肽与DEN2感染患者血清有较高的免疫反应性. 结论本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定的DEN2 E蛋白(E390～398 AA)线性序列为免疫优势表位,其对应的合成肽E10可望用于DEN2感染的快速诊断.
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寻常型银屑病患者皮损表皮TNF-α受体p75的表达及其意义
银屑病是一种具有遗传倾向的炎症性增殖性皮肤病,其发病机制尚未完全阐明,但其皮损表皮中有多种细胞因子包括TNF-α高表达.TNF-α与其细胞上的受体结合才能发挥其生物学效应,目前国内外尚未见有关银屑病皮损表皮p75 mRNA表达与否的研究报道.为探讨TNF-α受体p75在寻常型银屑病皮损表皮中的表达及其意义,我们采用免疫组化和RT-PCR方法对进行期寻常型银屑病患者皮损表皮TNF-α受体p75进行了检测.
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香烟烟雾提取物对人外周血单个核细胞IL-8 mRNA表达的影响
目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)对人外周血单个核细胞(PBMC) IL-8 mRNA表达的影响及其细胞内信号途径. 方法体外应用CSE与健康者PBMC共同培养,用RT-PCR检测IL-8 mRNA的表达,用免疫细胞化学染色法检测核因子κB(NF-κB)的表达;并观察NF-κB抑制剂和酪氨酸蛋白激酶抑制剂对CSE诱导的PBMC IL-8基因表达的影响. 结果加入CSE培养的人PBMC,IL-8 mRNA的表达增加,作用24h高,NF-κB活化细胞百分比增加;NF-κB抑制剂和酪氨酸激酶抑制剂均使CSE诱导的IL-8 mRNA表达水平下降. 结论吸烟使人PBMC的IL-8 mRNA表达水平显著增加,与NF-κB和酪氨酸激酶有关.
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银屑病患者非专职性天然免疫细胞红细胞与血小板CD35相关性分析
银屑病是一发病机理不甚明了的自身免疫性疾病,而各种血细胞共有的天然免疫分子CD35(补体受体Ⅰ型即CR1)是为重要的天然免疫分子之一.淋巴细胞、粒细胞等白细胞具有天然免疫分子CD35,红细胞与血小板也具有CD35,我们通过实验对比研究,发现银屑病患者红细胞CD35与血小板CD35分子数量都显著上升,而且两者之间呈正相关性.
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血清中IL-4和TNF-α水平与慢性荨麻疹的相关性
慢性荨麻疹患者30例(男17例,女13例),年龄20岁～67岁,病程6周～15年.检查前7d停止使用皮质激素类药物和抗组胺类药物治疗,且不接受脱敏治疗,既往无过敏性鼻炎、异位性皮炎、哮喘、寄生虫感染及自身免疫病等过敏炎症性疾病病史.
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儿童支气管哮喘变应原分析
对46例儿童支气管哮喘进行了血清特异性IgE水平的检测,以发现引起哮喘的体外致病因素.2001年1月～2003年1月南京中医药大学第二附属医院哮喘专科门诊儿童支气管哮喘患者共46例,男25例,女21例,年龄2～14岁,其中2～4岁10例,5～8岁19例,9～14岁17例.病史2个月～10年.依据<全国小儿呼吸道疾病学术会议>提出的标准诊断为支气管哮喘.
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BCG30主要分泌蛋白对尘螨变应性患者TH1/TH2平衡调节作用的观察
目的研究结核杆菌相对分子质量(Mr)为30×103的主要分泌蛋白(BCG30,也称Ag85B)对尘螨变应原过敏所致的哮喘等变应性患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌TH1、TH2细胞因子的调控作用. 方法常规分离27例尘螨过敏的变应性患者(A),其中18例哮喘患者(A1)、9例变应性鼻炎或皮炎患者(A2)和13例正常人(B)的PBMC,在离体与螨变应原、BCG30单独或复合共培养,ELISA法测定培养上清IL-5、IFN-γ的水平. 结果 A、A1、A2、B 4组无刺激状态下的IL-5、IFN-γ水平无差异(P＞0.05).尘螨变应原刺激可显著促进A、A1、A2 3组PBMC分泌IL-5, P均＜0.05,同时,A组的IFN-γ水平自身比较亦明显增高(73.58pg/ml±30.23pg/ml vs 30.71pg/ml±18.87pg/ml,P＜0.05).将尘螨变应原与BCG30和PBMC进行复合培养,并与单独尘螨变应原刺激组比较,其IFN-γ水平在A组(92.89pg/ml±29.07pg/ml vs 73.58pg/ml±30.23pg/ml)和A1组(87.60pg/ml±36.45pg/ml vs 58.75pg/ml±7.84pg/ml)均较后者为高(P均＜0.05),且A组的IFN-γ/IL-5的比值较单独尘螨变应原刺激组显著增高(5.03±1.36 vs 4.20±1.64,P＜0.05),而A1组其比值亦有增高趋势(P=0.07).正常人中各刺激组间所有指标均无差异. 结论对尘螨过敏的变应性疾病患者,其PBMC在尘螨变应原存在时较正常人更容易向TH2为主的免疫反应偏移,BCG30能诱导变应性患者产生TH1免疫反应并促使TH1/TH2平衡的恢复.
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哮喘患儿外周血单个核细胞表面CD86分子的表达
支气管哮喘(哮喘)是以气道高反应性和慢性气道炎症为特征的变态反应性疾病.T细胞的协同刺激途径在T细胞的增殖和效应发挥中起重要作用.为进一步探讨协同刺激分子CD86(B7-2)在哮喘发病中的作用及其与IgE的关系,我们检测了哮喘患儿PBMC中单核细胞及活化B细胞上CD86分子的表达,并探讨了CD86的表达与血浆总IgE水平的关系.以期能为研究哮喘的发病机理及寻求新的治疗方法提供一些理论依据.
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El Tor型霍乱弧菌疫苗候选株IEM108抗CTXΦ转染的生物安全性试验
CTXΦ超免疫是由rstR介导的,rstR抑制后转染进入CTXΦ中rstAB基因表达所引发的基因组复制与整合.Davis等[1]以rstR抑制携带CTXΦ基因组的重组自杀质粒在菌细胞内的复制来研究rstR的作用,我们简化了rstR对rstAB转录表达抑制的实验模型,采用比较克隆有RS区的重组自杀质粒接合转移频率的方式来进行安全性评价.
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IFN-γ基因对表达DHBV preS/S蛋白质的DNA疫苗诱生免疫应答的影响
目的利用DHBV感染鸭模型,研究鸭IFN-γ真核表达质粒作为免疫佐剂对DNA疫苗诱导免疫应答的影响和预防DHBV感染的作用. 方法用DuIFN-γ真核表达质粒与DHBpreS/S DNA疫苗共免疫,或用DHBpreS/S DNA疫苗单独免疫正常幼鸭,检测经免疫前后鸭PBMC表达DuIFN-γ的mRNA水平(半定量竞争性RT-PCR)、诱生的抗体水平(ELISA)、病毒攻击免疫鸭后血清和肝脏中的病毒DNA变化(斑点和Southern印迹核酸杂交). 结果 IFN-γ表达质粒作为免疫佐剂,可以增强DNA疫苗诱导的鸭PBMC IFN-γ的mRNA表达水平.用大剂量病毒攻击免疫鸭的结果显示,用DuIFN-γ表达质粒和DHBpreS/S DNA疫苗共免疫鸭清除DHBV的速度,明显比仅用DHBpreS/S DNA疫苗免疫鸭清除病毒的速度快,肝脏中DHBV总DNA和共价闭环DNA(cccDNA)的量也低于DHBpreS/S DNA单独免疫组. 结论 IFN-γ真核表达质粒作为免疫调节佐剂在DNA免疫中具有潜在的应用价值.
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El Tor型霍乱弧菌口服活疫苗候选株IEM108的构建
目的构建能够诱导抗菌抗毒素免疫和抵抗CTXΦ转染的霍乱弧菌生物安全性口服活疫苗候选株. 方法以不产毒的El Tor型霍乱弧菌疫苗候选株IEM101为出发菌株,以管家基因thyA为选择压力,在IEM101的thyA基因缺失株IEM101-T中,通过质粒-染色体致死平衡系统表达霍乱毒素B亚单位基因ctxB和介导CTXΦ噬菌体免疫的rstR基因.在家兔模型中,通过检测血清杀弧菌抗体和抗CTB的IgG抗体来评价该新建疫苗候选株的免疫原性;以对家兔攻毒试验后肠段积液量来评价其保护力. 结果含ctxB、rstR和大肠杆菌来源的thyA基因的重组质粒在IEM101-T中稳定存在,GM1-ELISA 检测ctxB基因能够很好表达.动物试验表明,该新建疫苗候选株能刺激机体产生高滴度的血清杀弧菌抗体和抗CTB IgG抗体,能较好抵抗至少4μg纯品CT和不同毒株的攻击. 结论应用质粒-染色体致死平衡系统构建了能抵抗CTXΦ转染和稳定表达ctxB的生物安全性抗菌抗毒口服活疫苗候选株,其在家兔模型中有较好的免疫原性和保护力.
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评估SARS病情发展快速检测方法的建立及应用
目的建立SARS患者红细胞天然免疫粘附功能的快速检测方法,探讨天然免疫清除功能在评估SARS病情发展变化中的意义. 方法红细胞天然免疫粘附功能快速检测方法:将1μl离心沉淀的红细胞和100μl自身血浆与150μl定量的靶细胞混合,37℃水浴30min.1个结合5个或以上红细胞的靶细胞为一个粘附功能单位,计算粘附率. 结果临床确诊为SARS的病人在收住院1周内其红细胞天然免疫粘附功能即不同程度地下降,并且随病情的加重持续降低,随病情好转开始回升,在完全恢复期出现一过性地高于正常人平均水平,随后稍有下降;死亡前病人的红细胞天然免疫粘附功能全部消失. 结论红细胞天然免疫粘附功能快速检测方法操作简单、重复性和稳定性好,可作为临床动态观察 SARS病情发展变化、疗效评估及预后判断的重要参考指标.
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链球菌M6蛋白的纯化及其在银屑病患者血清检测中的应用
为了进一步研究A群化脓性链球菌M6蛋白和点滴型银屑病之间的关系,我们对银屑病患者咽部菌群进行分离培养[1]并对培养分离的链球菌中的M6蛋白基因进行检测[2],对检测具有M6蛋白的化脓链球菌菌株再进行增殖培养,然后采用分子筛和阴离子交换层析的方法对链球菌菌体中的M6蛋白进行纯化,现将结果报道如下:
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用PCR-RFLP方法探讨人红白血病细胞系HLAⅡ基因型
在免疫应答和免疫调节中人类白细胞抗原(HLA)起着至关重要的作用.目前研究指出:HLA抗原与人类疾病的发生、发展以及预后有着密切的关系.HLA抗原与疾病关联的可能机理是存在某些与 HLA紧密连锁并处于连锁不平衡的免疫反应基因或疾病易感基因.
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以CⅡTA-pⅠ作为树突状细胞特异启动子构建腺病毒双表达载体
目的构建CⅡTA-pⅠ启动子特异调控的鼠TGF-β1和PLP-Ig重组双表达载体,以期达到在树突状细胞中特异表达. 方法从鼠外周血单个核细胞克隆CⅡTA-pⅠ启动子,从ConA刺激的小鼠脾单个核细胞和WT-1杂交瘤细胞克隆TGF-β1基因和Ig重链Fc基因;体外经IRES序列连接后,通过穿梭载体与腺病毒载体骨架连接,鉴定后在HEK293包装.从小鼠骨髓造血细胞培养树突状细胞.流式细胞仪检测树突状细胞CD80、CD54和Ⅰ-Ad的表达,鉴定树突状细胞的成熟度和纯度.病毒转染后,采用ELISA方法鉴定该病毒在树突状细胞中TGF-β1基因的表达水平;Western blot鉴定PLP-Ig的表达. 结果该双表达重组腺病毒载体经测序、限制性内切酶分析、PCR等鉴定,与预期结果一致;病毒感染树突状细胞的培养上清液和细胞分别经ELISA和Western blot检测证实TGF-β1和PLP-Ig得到了独立表达,在HEK293细胞中则无表达,并随树突状细胞的成熟,表达量逐渐增高. 结论以CⅡTA-pⅠ作为树突状细胞特异启动子构建的重组腺病毒双表达载体,在树突状细胞中得到了特异、独立的表达,为靶向树突状细胞表达功能基因进行基因治疗奠定了基础.
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跨膜型超抗原SEA融合蛋白的表达及其对小鼠黑色素瘤的免疫治疗作用
目的制备跨膜型超抗原融合蛋白,研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用. 方法用已构建的重组跨膜型超抗原的表达载体pET-28a-TM-SEA转化E.coli BL21(DE3)pLysS 宿主菌,在IPTG诱导下产生目的蛋白;用Ni-NTA His Bind Resin纯化带有His-Tag的目的蛋白.采用免疫组化法、免疫荧光法和流式细胞术检测其对细胞膜的锚定作用.建立C57BL/6小鼠的黑色素瘤模型,观察跨膜型超抗原SEA融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用. 结果跨膜型超抗原融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上.融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并延长其生存期. 结论跨膜型超抗原融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用,有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
