中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.59
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0254-5101
- 国内刊号: 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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几种细胞因子对人脐血CD34+干细胞在体外诱导扩增为树突状细胞的研究
多种疾病用树突状细胞(dendritic cell, DC)作免疫治疗具有一定的疗效.由于DC在人体组织中含量甚微,限制了DC的研究及临床应用.因此如何获得足够的成熟DC便成为DC广泛应用的关键技术问题.我们比较了不同细胞因子组合对脐血CD34+造血干细胞在体外诱导扩增为DC的效率及功能的影响,提供一种体外获得大量成熟DC的有效途径.
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汉、蒙古族人MBL基因ExonⅠ54位密码子点突变频率及其血浆含量相关性研究
目的调查健康汉、蒙古族人甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)基因54位密码子点突变的情况,测定健康汉、蒙古族人血浆MBL含量,并对健康汉、蒙古族人MBL基因54位密码子点突变频率与其血浆MBL含量进行相关性分析. 方法 PCR扩增,测定序列并建立MBL基因点突变检测方法,即PCR-RFLP方法(BanⅠ酶切);用ELISA法测血浆MBL含量. 结果 (1) 建立了MBL PCR方法,该方法特异性高,重复性好,低检出量为160pg DNA.(2) MBL的限制性内切酶BanⅠ酶切结果:通过酶切电泳分析结果显示,所扩增标本出现下列3种情况:①MBL 54位密码子野生型纯合子为2条带,对应的相对分子质量为232bp和93bp;②54位密码子突变体纯合子只显示1条约325bp带;③54位密码子野生型突变体杂合子显示325bp、232bp和93bp 3条带.(3) 通过简单数基因计算MBL基因54位密码子点突变的频率,健康汉、蒙古族人基因突变频率分别为0.2321和0.1757.(4) 血浆MBL含量的测定:56例健康汉族人血浆MBL含量的平均值为1998.750μg/L,标准差为1505.152;37例健康蒙古族人血浆MBL含量的平均值为2525.676μg/L,标准差为1955.188.(5) 健康汉族人血浆MBL含量与其编码基因ExonⅠ 54位密码子的点突变频率,经等级资料的相关分析,χ2=48.107,P<0.001;r=-0.62;二者呈负相关.健康蒙古族人血浆MBL含量与其编码基因ExonⅠ 54位密码子的点突变频率经等级资料的相关分析,χ2=32.86,P<0.001;r=-0.641;二者呈负相关. 结论 (1) 建立的MBL PCR-RFLP测定点突变的方法特异性高、重复性好、灵敏度较高;(2) 健康汉族人、蒙古族人的基因突变频率,汉族人比蒙古族人基因突变频率偏高,差别无统计学意义;(3) 健康汉族人、蒙古族人血浆MBL水平,汉族人含量的平均值比蒙古族人偏低,但均值比较差别无统计学意义;(4) 健康汉、蒙古族人MBL基因ExonⅠ 54位密码子的点突变频率与其血浆MBL含量均呈负相关.
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膜型/分泌型MICA对NK细胞受体NKG2D的相反调节效应及其对NK细胞受体谱的影响
目的观察膜型和分泌型MICA对NK细胞受体表达的影响,以探讨NK细胞抗肿瘤活化机制及肿瘤细胞表达MICA分子的意义. 方法用MTT法测定人NK细胞系(NK92)的细胞毒活性;用RT-PCR或FACS检测NK细胞受体(NKG2D, NKG2A/B, KIR2DL1, KIR2DS1)及NKG2D的识别配体MICA的表达. 结果肿瘤细胞表面的MICA分子可上调NKG2D的表达,下调抑制性受体NKG2A/B和KIR2DL1的表达;而分泌型MICA (sMICA)分子对NKG2D及抑制性受体的表达均有抑制作用. 结论膜型MICA分子可上调NKG2D的表达,激发NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒效应;分泌型MICA分子则通过降低NKG2D的表达下调机体的抗肿瘤免疫效应,肿瘤细胞分泌sMICA分子为肿瘤发生免疫逃逸的机制之一.
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CpG基序诱导HL60细胞分化和凋亡作用的初步研究
研究发现细菌表面的肽聚糖、脂磷壁酸等菌体成份有直接的抗肿瘤作用,然而源于细菌DNA的CpG基序以及含CpG基序的寡核苷酸(CpG-oligodeoxynucletides,CpG-ODN)对肿瘤细胞的直接作用如何尚不明了,因此,初步研究了CpG-ODN对白血病HL60细胞的直接作用及其可能机制.
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越南中部京族HLA-DQA1等位基因多态性分析
目的检测和分析越南中部京族HLA-DQA1等位基因的多态性. 方法应用PCR-SSP方法对214名健康、无血缘关系的越南中部京族儿童、青年进行HLA-DQA1分型. 结果检出10个HLA-DQA1等位基因,频率高的为DQA1*0104(25.8%),低的是DQA1*0601(1%). 结论越南中部京族人的HLA-DQA1等位基因分布具有民族特征,与中国各民族及泰国人的HLA-DQA1等位基因分布有差异.
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变异链球菌生物膜结构观察
目的建立变异链球菌生物膜模型,用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察变异链球菌生物膜结构. 方法在盖玻片上分别形成6、12、18、24、48、72 h变异链球菌生物膜,将得到的各时段生物膜荧光染色后,用CLSM观察生物膜的断层扫描图像、生物膜厚度、每层红光绿光的面积,计算生物膜中细菌密度和活菌百分比,用软件处理扫描数据,得到生物膜的三维重建图像. 结果变异链球菌生物膜具有空间立体结构,形态多样,其中细菌密集,由死细菌和活细菌组成,还有丰富的基质和管道系统.24 h生物膜平均厚度大,生物膜内层、中间层的细菌密度相对较大,而外层较低,72 h内各时间段生物膜中活菌百分比由内往外逐渐增加. 结论变异链球菌生物膜有一定的厚度,具有三维立体空间结构,结构形态具有多样、不均质、开放的特点.
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不同毒力的问号钩端螺旋体对Vero及J774A.1细胞的黏附和内化
目的探讨问号钩端螺旋体对传代细胞黏附和内化的能力及其差异. 方法实验中采用非洲绿猴肾成纤维细胞(Vero)和小鼠单核巨噬样细胞(J774A.1)细胞株.采用透射电镜、扫描电镜和Fontana镀银染色法,观察问号钩端螺旋体强毒株黄疸出血群赖型56601、弱毒株波摩那群波摩那型56608黏附细胞及内化能力及其差异,采用腐生性的双曲钩端螺旋体三宝垄群patoc型PatocⅠ株作为对照. 结果问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株和波摩那群波摩那型56608株均能以一端或两端黏附于Vero及J774A.1细胞.钩体56601株和56608株对J774A.1的黏附率分别为49%和46.9%,对Vero细胞黏附率分别为24.2%和22.9%.钩体56601株和56608株可侵入上述2株细胞,在胞质内形成典型的吞噬泡.钩体56601株还可侵入宿主细胞核内,56608株则否.双曲钩端螺旋体三宝垄群patoc型PatocⅠ株不能黏附和侵入细胞. 结论两株受试的不同毒力问号钩体株均能黏附细胞,并以内化方式侵入细胞.细胞株的差异可明显影响钩体黏附和内化能力.问号钩体毒力的强弱可能与黏附能力无关,而与其侵入胞核的能力密切相关.
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问号钩端螺旋体血清群LipL32基因型分析及其重组蛋白的免疫学鉴定
目的探讨15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)中国参考标准株及2群2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在主要外膜蛋白(MOMP)基因(LipL32),克隆并构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性. 方法常规酚-氯仿法提取上述钩体株基因组DNA,高保真PCR扩增全长LipL32基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建表达系统,不同浓度IPTG诱导后用SDS-PAGE检测rMOMP表达情况.分别用兔抗TR/patocⅠ钩体全菌抗血清、rMOMPs免疫兔血清的Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性,显微镜凝集试验(MAT)检测rMOMPs免疫兔血清的交叉凝集效价,钩体细胞黏附模型检测抗体阻断效果. 结果上述17株钩体均有LipL32基因,但可分LipL32/1和LipL32/2两种基因型.13个LipL32/1和4个LipL32/2基因型之间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.12%~96.60%和97.79%~98.16%.IPTG诱导后rMOMP1和rMOMP2表达量分别占细菌总蛋白的40%和10%.rMOMP1和rMOMP2均能与兔抗钩体TR/patocⅠ血清发生结合反应,免疫家兔可对上述17株钩体产生1∶2~1∶64 MAT效价的凝集抗体.1∶2~1∶16稀释的兔抗rMOMP1和rMOMP2血清均能有效地阻断钩体的黏附. 结论所有检测的钩体具有LipL32/1或LipL32/2基因.所构建原核表达系统能表达rMOMP1和rMOMP2.rMOMP1和rMOMP2有良好的免疫原性和免疫反应性.rMOMP1和rMOMP2是具有属特异性的钩体表面外膜蛋白抗原,能诱生交叉凝集、阻断黏附的抗体.
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产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的分析
对我院2001年10月~2002年5月临床分离的30株非重复的产ESBLs大肠埃希菌进行检测,了解CTX-M基因的检出情况及产CTX-M酶大肠埃希菌的耐药性和同源性.
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SARS病毒对乳鼠和鸡胚致病性的初步观察
目的建立SARS病毒的动物模型. 方法选用1~5日龄的BALB/c乳鼠和昆明种乳鼠,通过脑内、腹腔和鼻腔3种途径,分别接种自广州和北京地区非典型肺炎病人中分离的SARS病毒BJ01和GZ01株,观察该病毒对不同种系小鼠的致病性.同时,选用8~10日龄鸡胚经尿囊腔接种这2株病毒,观察对鸡胚的致病性. 结果与结论采用SARS病毒BJ01和GZ01株经脑内接种,均可使BALB/c乳鼠和昆明种乳鼠发病或死亡,但这种致病性不规律;而从腹腔和鼻腔途径接种病毒均不能使乳鼠发病.鸡胚对该病毒不敏感.
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S基因显性阴性突变体干扰乙肝病毒颗粒组装的研究
目的探讨S基因突变对HBV病毒颗粒组装的影响. 方法构建野生型S基因、S基因突变的真核表达载体pcDNA3-S和pcDNA3-mS及S基因突变的全长HBV基因组表达载体pHBV-mS,用pHBV-mS与pcDNA3-S共转染HepG2细胞,pHBV-mS与pcDNA3共转染HepG2细胞,以adwR9与pcDNA3共转染为对照;pcDNA3-mS和adwR9共转染HepG2细胞,以adwR9和 pcDNA3共转染为对照,用荧光定量PCR检测胞内和上清中病毒量,用ELISA方法检测上清中S抗原. 结果 pHBV-mS与pcDNA3共转染组上清中病毒量较对照组低而胞内病毒量二者相同.pHBV-mS与pcDNA3-S共转染组上清、胞内病毒量与对照组相同.pcDNA3-mS和adwR9共转染HepG2细胞其上清中病毒量较对照组低而胞内病毒量两者相同.上清中S抗原实验组较对照组低. 结论 S突变体干扰HBV病毒颗粒的组装,导致的HBV病毒颗粒分泌下降.
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北京新发现的人偏肺病毒N蛋白编码基因的序列分析
目的了解新近从北京地区发现的人类偏肺病毒(human metapneumovirus, HMPV)N蛋白编码基因的特征. 方法从经RT-PCR检测HMPV阳性的临床鼻咽洗液标本中进行HMPV N蛋白全基因扩增、克隆至pUCm-T载体中并进行测序,与GenBank中的多株HMPV N蛋白基因序列进行比较和进化树分析. 结果经扩增并测序,标本BJ1816和BJ1887 N蛋白基因全长为1185bp,编码394个氨基酸.BJ1816 N蛋白基因与国际上第一株HMPV分离株NDL00-1和GenBank中其它的多株HMPV的核苷酸和氨基酸同源性分别为86.2%~99.0%和96.2%~99.7%.BJ1887 N蛋白基因与以上进行比较的各株HMPV的核苷酸和氨基酸同源性分别为86.6%~97.0%和96.4%~99.5%.BJ1816和BJ1887之间N基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为86.6%和96.4%.提示BJ1816和BJ1887分属于HMPV的两个不同的基因进化簇. 结论从基因水平进一步证明新近发现的婴幼儿肺炎的新病原确为HMPV,提示北京地区婴幼儿中同时存在两个不同进化簇(即基因型)的HMPV感染.
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再生障碍性贫血骨髓T淋巴细胞高表达肿瘤坏死因子
由免疫介导的造血功能抑制在再生障碍性贫血(AA)的发病过程中起重要作用,本研究应用流式细胞仪跟踪分析T细胞活化与TNF-α释放的相关性,并观察其在AA中不同T细胞亚群的变化,探讨T细胞极化与AA临床转归的相关性.
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肺炎支原体肺炎免疫功能动态变化
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, MP)是婴幼儿肺炎的主要病原之一,为观察患儿免疫功能的变化,对40例确诊为MP肺炎(MPP)的患儿进行了在急性期和恢复期外周血免疫球蛋白(Ig)、T淋巴细胞亚群、IL-2、sIL-2R、IL-6和IL-8水平的检测,为MPP患儿免疫学治疗提供依据.
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卡介菌多糖核酸和地塞米松对口腔扁平苔藓TH1/TH2细胞因子的调节作用
口腔扁平苔藓(oral lichen planus, OLP)是T淋巴细胞介导的免疫反应,其主要病理变化为固有层大量的T淋巴细胞呈带状浸润[1].卡介菌多糖核酸 (Bacillus Calmette-Guerin polysaccharide nucleic acid, BCG PSN)是从卡介菌中经热酚法提取的一种具有免疫调节功能的免疫调节剂,对慢性支气管炎、哮喘等疾病有较好的疗效.本研究拟通过观察BCG PSN和地塞米松对OLP患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)IFN-γ和IL-4的调节作用,探讨OLP患者的TH1/TH2免疫应答模式及BCG PSN和糖皮质激素对OLP患者TH1/TH2细胞因子的影响,为临床应用提供依据.
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原发性低丙种球蛋白血症Bruton's酪氨酸激酶表达研究
目的研究临床诊断为原发性低丙种球蛋白血症Bruton′s酪氨酸激酶(BTK)表达及意义. 方法使用抗BTK单克隆抗体通过流式细胞仪技术分析细胞内BTK 表达.经临床和常规实验室检查诊断为原发性低丙种球蛋白血症的8例来自不同家系的患者和其中5例患者的母亲. 结果正常对照者单核细胞BTK表达均大于95%.8例受检患者中7例单核细胞中BTK表达明显降低,基因分析存在BTK突变.1例BTK表达正常,基因分析BTK正常.检测的5例患者母亲中3例单核细胞BTK表达降低,BTK基因分析也表现为嵌合型.2例BTK表达正常,BTK基因正常. 结论通过流式细胞仪检测单核细胞内BTK表达可作为诊断X-连锁无丙种球蛋白血症(XLA)手段之一,并可能用于甄别XLA携带者.
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脱脂棉柱分离纯化人外周血T淋巴细胞的实验探讨
利用T淋巴细胞的非黏附性建立的尼龙毛分离技术,操作简便易行、无需特殊仪器而应用广泛.但目前国内尼龙毛来源并不容易,进口材料又相对昂贵.我们采用脱脂棉代替尼龙毛进行实验,同时与尼龙毛柱分离法进行比较,探讨脱脂棉柱分离纯化人外周血T淋巴细胞的实验效果.
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化学发光法检测CYP1A1基因多态性
目的建立增强化学发光法(enhanced chemiluminescence, ECL)检测CYP1A1基因多态性的方法. 方法实验方法同ELISA法,鲁米诺过氧化氢增强化学发光体系加入酶标板的每一个孔中,用单光子计数器检测其发光强度,即可鉴定样本基因型. 结果 30个标本的检测结果与ELISA相同,其灵敏度比琼脂糖凝胶电泳高1000倍,比ELISA法高10倍,辣根过氧化物酶标记DIG抗体的量为0.2mU,比ASA-ELISA法少,1 h杂交便可以判断标本的基因型,佳杂交时间为1.5~2 h,杂交温度为40~55℃. 结论该方法是一种更加灵敏和简便,极具发展前景的检测基因多态性的方法.
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恙虫病东方体Sxh951株56kD蛋白的表达及其在ELISA中的应用
目的构建含Orientia tsutsugamushi Sxh951株(Ot. Sxh951)相对分子质量(Mr)为56×103外膜蛋白基因(sxh56)的重组质粒pQE30/56,表达Mr 56×103蛋白并观察其在ELISA中的应用. 方法 IPTG诱导sxh56重组质粒;观察SDS-PAGE和免疫印迹结果;经Ni-NTA亲和层析纯化后的重组蛋白分别与Ot. Gilliam、Ot. Karp、Ot. Kato感染鼠血清进行ELISA和免疫印迹检测. 结果 SDS-PAGE和免疫印迹检测显示有一Mr约为56×103的特异蛋白带;ELISA和免疫印迹结果显示该重组蛋白只与Ot. Gilliam感染鼠血清呈阳性反应;重组蛋白用作ELISA包被抗原检测小鼠血清抗体IgG,特异性为100%,敏感性96.67%;检测人血清抗体IgG的敏感性为88.08%,特异性96.36%. 结论表达的重组Sxh56蛋白具有良好的免疫反应性;其作为ELISA包被抗原,具有良好的特异性和敏感性.
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CTLA4-Ig重组腺相关病毒载体的构建及转染表达效果
重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体是目前基因治疗领域中倍受瞩目的载体之一.本研究通过构建CTLA4-Ig基因重组腺相关病毒载体(rAAV-CTLA4-Ig),研究其对大鼠转染的表达效果及规律.
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小鼠IL-12单链融合基因真核表达质粒构建及其肿瘤基因治疗初探
目的构建小鼠IL-12单链融合基因(msIL-12),进行基因治疗初探. 方法用RT-PCR法从小鼠腹腔巨噬细胞总RNA分别获取p40cDNA和p35cDNA,2次PCR引入linker后,依次克隆入pcDNA3质粒,构建成msIL-12真核表达质粒(pmsIL-12);用DEAE-dextran法将PEG纯化的pmsIL-12转染COS-7细胞,用ELISA法检测其培养上清(转染上清)IL-12蛋白含量.皮内注射PEG纯化的pmsIL-12,用MTT法检测其对正常小鼠脾细胞NK活性的影响,观察其对荷H22腹水型肝癌细胞瘤小鼠生存期的影响. 结果所得p35cDNA序列与GenBank登录号M86672完全一致;所得IL-12p40cDNA序列与GenBank登录号AH004859报道完全相同,除第1000位碱基是G而不是A(但所编码氨基酸相同,都是丝氨酸)外也与GenBank登录号M86671报道相同.成功构建了小鼠IL-12单链融合基因真核表达质粒pmsIL-12,其转染COS-7细胞后的转染上清IL-12蛋白含量达(2.55±0.60)ng/ml.皮内注射pmsIL-12后,使正常小鼠脾细胞NK活性显著增强(P<0.01),使荷H22肝癌细胞瘤小鼠的生存期明显延长(P<0.05). 结论构建了小鼠IL-12单链融合基因的真核表达质粒,可用于基因治疗研究.
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重组内皮抑素联合靶向性preS2反义RNA对肝癌细胞的体内抑制作用
单纯抗血管生成治疗肿瘤,仅使肿瘤处于休眠状态,容易出现复发.如何将抗血管生成与其他肿瘤治疗方法有效结合,是目前肿瘤基因治疗中的研究热点.
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四种hGM-CSF/IL-6融合蛋白的基因构建、表达及活性比较
目的构建及表达具有hGM-CSF和hIL-6双重生物学活性的hGM-CSF/IL-6融合蛋白分子. 方法应用PCR技术对hGM-CSF和hIL-6的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3,克隆PCR产物,并构建成克隆有4种融合蛋白基因的pBV220表达质粒,4种融合蛋白分别是GM-CSF(9~127)-IL-6(29~184)(简称GI1)、GM-CSF(9~127)-IL-6(1~184)(简称GI2)、GM-CSF(1~127)-IL-6(1~184)(简称GI3)、GM-CSF(9~127)-IL-6(24~184)(简称GI4),表达质粒分别导入E.coli BL-21中诱导表达.通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白.使用hGM-CSF依赖细胞株TF1和hIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性. 结果对4种融合蛋白基因的测序结果表明,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli BL-21中均得到高效表达,表达的融合蛋白均占到总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在,通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得4种目的蛋白,其纯度均达到95%以上.活性测定结果表明4种融合蛋白均具有较高的hGM-CSF和hIL-6的双重生物学活性. 结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF/IL-6融合蛋白.
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雷公藤多甙对哮喘患者痰液IL-5和嗜酸细胞凋亡的影响
目的探讨雷公藤多甙(TP)对哮喘患者的治疗作用. 方法选择70例轻、中度哮喘缓解期患者,随机分成A组(TP治疗组)和B组(对照组),治疗前后分别采用ELISA法测定患者痰液白细胞介素5( IL-5)和可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R),应用流式细胞仪检测痰液嗜酸细胞(EOS)凋亡. 结果缓解期哮喘患者痰液中IL-5和sIL-2R明显升高.A组经TP治疗后,IL-5和sIL-2R明显降低,EOS凋亡率明显升高,B组治疗前后上述各项指标差异无显著性. 结论 TP可能通过抑制哮喘患者T细胞和B细胞的活化,增加EOS的凋亡,从而减少机体免疫-炎症反应.
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胶质瘤的白细胞介素-4免疫基因治疗实验研究
胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤.本研究通过逆转录病毒载体将白细胞介素-4(IL-4)基因导入逆转录病毒包装细胞,注入到脑内荷瘤大鼠肿瘤组织中,观察其对胶质瘤的治疗作用.
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美国西尼罗病毒感染的实验室诊断进展
西尼罗病毒(West Nile virus)病是一种烈性人畜共患疾病.该病病原与日本脑炎病毒(Japanese B encephalitis virus )、摩莱河谷脑炎病毒(Murray valley encephalitis virus)、圣路易斯脑炎病毒(St. Louis encephalitis virus)同属黄病毒(Flavivirus)属的日本脑炎病毒血清群,它们在血清学反应上有交叉.近年来西尼罗病毒感染在欧洲、中东、西亚和俄罗斯等地区和国家频频发生.令人瞩目的是1999年在美国纽约首次发生,尔后几乎扩散至全美各州,成为近年来影响美国大的传染病,截止2003年10月22日全美已有7386人感染发病,有155人死亡[1].本文简介美国西尼罗病毒感染实验室诊断的进展.
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乳腺高效表达人溶菌酶转基因小鼠的制备
目的研究自行构建的动物乳腺特异表达载体p205C3的表达特性. 方法将人溶菌酶(hLYZ) cDNA插入p205C3载体,用获得的基因构件注射小鼠受精卵,用PCR和Southern blot对出生鼠进行基因整合检测,用微球菌溶解试验和Western blot对表达产物进行鉴定. 结果共出生136只F0代小鼠,从中筛选出4只(1♀3♂)转基因整合阳性鼠,其中的1只母鼠不表达hLYZ,1只雄鼠的4只F1代母鼠乳汁中hLYZ的表达量分别为5、75、175和200μg/ml,纯合后的3只F3代母鼠乳汁中 hLYZ的表达量分别为526μg/ml、648μg/ml和750μg/ml,表达仅限于乳腺中,表达产物的相对分子质量与正常hLYZ相同. 结论 p205C3能驱动hLYZ cDNA在小鼠乳腺中特异和高效表达,可以用于动物乳腺生物反应器的研制.
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一种高效表达多肽或小分子蛋白平台的构建
目的克服小分子蛋白或多肽在大肠杆菌表达系统中易降解、表达量低的问题,为基因工程生产此类产品提供一种简便有效的解决方案. 方法以33个氨基酸的小分子蛋白(factor C的S3功能区)为例,用PCR方法扩增了基因,并克隆到载体pBBS.利用载体带有的BbsⅠ酶切位点特性和添加到引物上的特殊序列,使插入片段在体外定向连接成多联体,然后重新连接到pBBS. 结果成功构建了S3的二联体、四联体及八联体克隆.转移至表达载体pET22b后,在BL21细菌宿主中诱导表达.S3单体表达不明显,而四联体(rS3-4mer)表达量高.rS3-4mer经纯化后在酸性溶液中水解为rS3单体.以Western blot证明,多联体及其分解单体均可与S3抗血清特异性结合. 结论应用这一系统能有效地构建串联基因,从而提高小分子蛋白或多肽在大肠杆菌中的表达量.
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用CDR3导向抗体库法对鼠抗人膀胱癌单抗进行人源化
目的构建含鼠单抗CDR3的人源噬菌体抗体库,对膀胱癌鼠单抗进行人源化. 方法通过重叠PCR及DNA重组技术,将抗膀胱癌鼠单抗BDI的CDR3区与人淋巴细胞来源的多样化的VH和Vκ组合,构建含BDI CDR3的人源噬菌体抗体库;利用loxp-cre定位重组系统,增加轻、重链的组合配对,获大容量抗体库;用膀胱癌细胞(EJ)从中筛选人源化抗膀胱癌单抗Fab段,ELISA方法对所筛克隆进行特异性鉴定,同时运用竞争抑制实验对所筛特异性克隆进行抗原表位的核实. 结果首先构建了库容为2×107的含鼠CDR3区的人源噬菌体抗体库;经过在cre+细菌胞内的定位重组后,获得库容为1010的大容量噬菌体抗体库;用EJ细胞筛选到可与其特异结合的人源性Fab段;竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源单抗结合同一抗原表位. 结论在没有亲本鼠单抗基因,仅了解其CDR3序列的条件下,可通过CDR3导向,构建大容量抗体库,筛选到相应的人源化抗体基因.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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