创伤弧菌溶细胞素对小鼠肝脏自然杀伤T细胞和TCRβ－细胞毒性差异

创伤弧菌（ Vibrio vulnificus），又称海洋弧菌，是一种革兰染色阴性的嗜盐性条件致病菌，主要存在于海水和海产品中，目前具体致病机制尚不明确。创伤弧菌经伤口或消化道感染人体后，可引起严重的创口感染、坏死性筋膜炎和原发性败血症等疾病，其中原发性败血症的致死率高达50％以上［1］。该菌毒力因子众多，溶细胞素是其唯一分泌至胞外且具有种属特异性的外毒素，在该菌的感染致病过程中发挥着重要作用。自然杀伤T细胞（natural killer T cell， NKT）是一类既表达NK细胞表面分子（如小鼠NK1．1），又表达T细胞表面受体（如TCRα／β）的特殊免疫细胞，主要参与固有免疫应答，在抗感染和抗肿瘤中发挥重要作用。然而，由于NKT细胞的数量和百分比在各脏器（如肝脏、脾脏）中比例较低，且缺乏特异和敏感的标志物，使得其研究受到了一定限制。本研究通过流式细胞术结合 TCRβ、CD1d-tetramer 和 live／dead等荧光抗体或荧光染料染色分析重组创伤弧菌溶细胞素（ rVvhA）对小鼠肝脏NKT细胞的影响，并比较rVvhA对NKT细胞和CD1d-tetramer－TCRβ－细胞的杀伤作用，探讨其对肝脏中上述细胞的影响，为揭示创伤弧菌溶细胞素分子致病机制提供实验依据。

利用同一份胃黏膜标本进行幽门螺杆菌分离培养及 CYP2 C19基因多态性检测的研究

目的：分析北京和山东地区胃病患者CYP2C19代谢类型分布，以及探索用一份胃黏膜标本同时进行幽门螺杆菌（ Helicobacter pylori，HP）分离培养及CYP2C19基因多态性检测的可行性。方法2013年3月至2014年4月收集北京和山东地区快速尿素酶试验（RUT）阳性患者胃黏膜活检标本共1649份，利用同一份胃黏膜活检标本研磨后进行HP菌株分离培养和提取胃黏膜标本基因组DNA用于患者 CYP2C19基因多态性检测。 CYP2C19基因多态性检测中，利用 CYP2C19倡2、CYP2C19倡3特异性引物进行PCR扩增，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，分析成功率并进行DNA测序，并分析北京和山东地区CYP2C19代谢类型分布情况。结果1649份胃黏膜标本成功分离HP菌株1415株，分离率为85．81％。 CYP2C19特异PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳条带清晰特异，成功率为100％且符合测序要求。统计分析结果显示北京地区和山东地区胃病患者CYP2C19代谢类型间差异无统计学意义（P＞0．05），性别对于北京和山东地区CYP2C19基因多态性分布无显著性影响。结论利用同一份胃黏膜标本进行HP菌株分离培养及CYP2C19基因多态性检测具有可行性。北京地区与山东地区胃病患者 CYP2 C19代谢类型之间差异无统计学意义且性别对于CYP2C19基因多态性分布无显著性影响。

引发重症监护室内血流感染的粘质沙雷菌同源性分析

目的：分析从绍兴市中心医院重症监护室（ ICU）内血流感染患者中分离的粘质沙雷菌株的同源性和耐药情况，为临床合理用药及感染控制提供依据。方法收集ICU病房2013年6月至2013年9月血流感染中分离培养出来的粘质沙雷菌株，并从ICU医务人员手上采集细菌，进行分离培养。对培养出的17株粘质沙雷菌进行药敏检测，用PCR技术扩增常见耐药基因，使用脉冲场凝胶电泳（ PFGE）技术进行同源性分析。收集患者的临床资料，用Spearman相关法进行统计学分析。结果17株粘质沙雷菌对第一代、二代头孢霉素、庆大霉素、环丙沙星耐药率100％，对阿米卡星及头孢他啶敏感，对碳青酶烯类的耐药率为11．76％～35．29％，PCR扩增结果显示1（5．88％）株粘质沙雷菌携带TEM基因，17株粘质沙雷菌PFGE分型一致。结论粘质沙雷菌是重要的致病菌，存在着院内传播现象，具有多重耐药性。临床应根据药敏试验合理选用抗菌药物，加强感染控制，防止耐药菌株在院内交叉传播和暴发流行。

生酮饮食对难治性癫痫患儿 Th 细胞亚群的影响

目的：探讨生酮饮食（ketogenic diet，KD）治疗对难治性癫痫（intractable epilepsy，IP）患儿Th细胞亚群的影响。方法 IP患儿35例，同年龄健康对照组18例。采用流式细胞术分别检测外周血CD3＋CD8－IFN-γ＋（Th1）细胞、CD3＋CD8－IL-17A＋（Th17）细胞及CD4＋CD25＋Foxp3＋（Treg）细胞比例；实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测外周血CD4＋CD25－T细胞中T-bet、ROR-γt、IFN-γ、IL-17A、过氧化物酶增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPAR-γ）mRNA及CD4＋CD25＋T细胞Foxp3、GITR、CTLA-4、PPAR-γmRNA的表达；酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测受试者血浆中前列腺素F2a （prostaglandin F2a，PGF2a）、环氧化酶-2（cyclooxygenases-2，COX-2）蛋白浓度；流式微球阵列技术（CBA）检测受试者血浆IL-17A、IFN-γ蛋白表达水平。结果（1）IP患儿外周血Treg细胞比例明显低于同年龄健康对照组（P＜0．05），KD治疗后，Treg细胞数量明显增加（P＜0．05）；IP患儿外周血Th1、Th17细胞比例明显高于同年龄健康对照组（P＜0．05），KD治疗后显著下降（P＜0．05）；IP患儿外周血CD4＋CD25＋Treg细胞转录因子Foxp3及相关因子GITR、CTLA-4基因转录水平明显低于健康对照组（P＜0．05），治疗后明显上调；CD4＋CD25－T细胞中T-bet、ROR-γt、IL-17A、IFN-γ等Th1／Th17细胞相关因子表达量显著高于健康对照组（ P＜0．05），治疗后明显下降；（2） IP患儿CD4＋CD25＋及CD4＋CD25－细胞PPAR-γ基因表达明显低于对照组（P＜0．05），KD治疗后表达量明显上升（P＜0．05），相关性分析发现Treg细胞与PPAR-γ表达呈正相关（r＝0．61，P＜0．05），Th1及Th17细胞与PPAR-γ表达呈负相关[Th1（r＝－0．54，P＜0．05）；Th17（r＝－0．64，P＜0．05）]；（3）IP患儿IL-17A及IFN-γ血浆浓度明显高于健康对照组（P＜0．05），KD治疗后明显下降（P＜0．05），COX-2及PGF2a 血浆浓度明显高于正常对照组（P＜0．05），KD治疗后显著下降（P＜0．05），相关性分析发现COX-2表达与PPAR-γ呈负相关（r＝－0．571，P＜0．05），PGF2a表达与PPAR-γ亦呈负相关（r＝－0．586，P＜0．05）。结论 KD可抑制氧化应激反应，降低COX-2及PGF2a蛋白浓度，上调PPAR-γ表达，调节Th细胞亚群紊乱，减少炎症细胞因子产生，这可能是KD治疗IP的作用机制之一。

类风湿关节炎患者 iNKT 细胞频率与 IFN-γ／IL-4的相关性研究

目的：检测类风湿关节炎患者外周血中恒定自然杀伤T细胞（ invariant nature killer T， iNKT）的频率及功能的变化，分析iNKT细胞频率与血清中IFN-γ／IL-4比值的相关性，进一步明确iNKT细胞在类风湿关节炎（ rheumatoid arthritis， RA）发病中的意义。方法收集70例RA患者（并对其中30例患者在缓解期连续跟踪）和40例健康人外周静脉抗凝血并分离单个核细胞（ peripheral blood mononuclear，PBMC），采用流式细胞技术（fluorescence-activated cell sorting，FACS）分析样本中iNKT细胞频率；再对PBMC体外培养，FACS动态检测iNKT细胞增殖频率；MILLIPLEX MAP Human Cytokine／Chemokine kit检测相应血清及PBMC培养上清中IFN-γ／IL-4的水平；RT-PCR检测iNKT细胞中IFN-γmRNA与IL-4 mRNA表达水平。结果与健康对照组相比，RA患者iNKT细胞频率及增殖频率显著降低（P＜0．05），增殖延迟。治疗后缓解期患者iNKT细胞频率及增殖频率有所恢复，与活动期RA患者比较差异有统计学意义（P＜0．05），与健康对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）；与健康对照组相比，活动期RA患者血清及PBMC培养上清中IFN-γ／IL-4比值升高，差异有统计学意义（ P＜0．05）。缓解期RA患者血清中IFN-γ／IL-4比值下降，与活动期比较差异有统计学意义（ P＜0．05），与健康对照组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）；活动期RA患者iNKT细胞中IFN-γmRNA表达升高、IL-4 mRNA表达降低。缓解期RA患者与健康对照组间IFN-γmRNA、IL-4 mRNA表达水平的差异不明显；RA患者外周血中iNKT细胞频率与IFN-γ／IL-4比值呈负相关（ P＜0．05）。结论RA患者存在iNKT细胞频率低下与功能缺陷。 iNKT细胞参与RA发病过程，且与病情活动性密切相关。

人结肠癌细胞 HT-29表达 Tn 抗原的机制研究

目的：探讨结肠癌细胞株HT-29中Tn（＋）细胞表达Tn抗原的机制。方法免疫磁珠分选结肠癌细胞株HT-29中HT-29-Tn（＋）细胞与HT-29-Tn（－）细胞；RT-PCR、PCR 扩增Cosmc基因，测序比对是否存在基因突变。野生型Cosmc转染正常及肿瘤细胞；Western blot检测转染后Cosmc蛋白表达状况；荧光分析法检测转染前后T-synthase活性。结果分选后的HT-29-Tn（＋）细胞缺乏T-synthase活性，Cosmc基因编码区缺失，转染WtCosmc可恢复Tn抗原阳性细胞的T-synthase活性，抑制Tn抗原表达。结论 Cosmc基因编码区缺失引起T-synthase活性丧失导致人结肠癌HT-29-Tn（＋）细胞表达Tn抗原。

IL-35在感染、炎症与自身免疫性疾病中的作用

白细胞介素（ interleukin， IL ）-35是IL-12家族的新成员。2007年，Vignali和Liew两个研究小组首次报道了IL-35的生物学功能［1-2］，使其成为了白细胞介素研究的新热点。IL-35与IL-12家族其他成员IL-12、IL-23和IL-27一样，均为异源二聚体蛋白。 IL-35由EB病毒诱导基因3（ Epstein-Barr virus-induced gene 3， EBI3）和IL-12p35（IL-12A）两个亚基所组成，虽然它在结构上与其他3个成员相似，但却具有其独特的生物学功能。研究发现， IL-35是一种主要由调节性T细胞（regulatory T cells， Treg）分泌的抑制性细胞因子，也是诱导Treg细胞增殖和减少辅助性T细胞（ T helper cell， Th）17数量的新抗炎细胞因子，广泛参与体内的免疫应答过程，与多种炎症相关性疾病（如胶原诱导性关节炎［3］、慢性乙型肝炎［4］、实验性自身免疫性脑脊髓炎［5］等）的发生、发展密切相关。本文将对IL-35的生物学特征及其在感染、炎症与自身免疫性疾病中的作用进行综述。

宿主抗病毒因子BST-2／tetherin的免疫学功能研究进展

人体具有多种固有免疫机制，其中一类具有抗病毒作用的蛋白质叫作宿主限制因子，在病毒复制周期的各阶段抵抗病毒，而病毒通常具有相应的拮抗机制对抗宿主限制因子的抑制作用。目前发现的HIV-1宿主限制因子包括：在病毒逆转录过程中导致致死突变的 APOBEC3（ apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide like 3）家族［1］；抑制病毒核衣壳解聚的TRIM5α（ the α-isoform of the tripartite motif-con-taining protein 5）［2］；降解dNTPs抑制病毒逆转录的SAMHD1（SAM domain and HD domain-containing protein 1）［3］；抑制病毒基因组入核的MX2（ myxovirus resistance gene 2）［4］；将新生病毒阻滞在细胞膜上的BST-2（ bone marrow stromal cell anti-gen 2）／tetherin［5-6］。

鼻咽癌特异性减毒重组疫苗 Lmdd-LMP2 A 的构建及其抑瘤效应的研究

目的：构建含有EB病毒潜伏膜蛋白2A（LMP2A）的减毒单核增生性李斯特菌重组疫苗（Lmdd-LMP2A），并检测其抑瘤效应，旨在为鼻咽癌的免疫治疗提供新的思路及理论依据。方法将EBV-LMP2A基因克隆入李斯特菌穿梭载体p1565中，再将重组穿梭载体p1565-LMP2A电转化至减毒单核增生性李斯特菌株Lmdd感受态细胞中，得到重组疫苗Lmdd-LMP2A。进而对HLA-A2转基因小鼠皮下接种CNE-1／HLA-A2／LMP2A鼻咽癌细胞株，建立皮下荷瘤鼠模型。利用尾静脉注射法接种李斯特菌疫苗免疫荷瘤鼠并检测其特异性CTL诱导情况及抑瘤效应。结果成功构建了重组减毒李斯特菌鼻咽癌疫苗Lmdd-LMP2A，该疫苗高度减毒，安全性较好且稳定表达LMP2A蛋白并诱导特异性T细胞免疫应答。荷瘤鼠抑瘤模型结果表明，与对照组相比，Lmdd-LMP2A能明显的抑制肿瘤生长。并且，Lmdd-LMP2A免疫组也能延长小鼠的荷瘤生存期，均显示了该种重组疫苗的有效抑瘤价值。结论成功构建的减毒重组李斯特菌疫苗Lmdd-LMP2A，可以在确保安全性的同时发挥良好的特异性抗肿瘤效应，对于肿瘤治疗具有潜在的临床意义。

表达丙型肝炎病毒多个融合抗原的复制型DNA 疫苗在小鼠体内免疫原性的研究

目的：探索新型的基于丙型肝炎病毒（ HCV）多个靶抗原的复制型DNA疫苗的免疫效果。方法本研究构建了两种表达基于HCV中国1b代表株（河北株）多个靶抗原的复制型DNA疫苗：pSCK-CE1E2Y（核心蛋白Core、包膜蛋白E1、E2抗原）和pSCK-H155（Core、E1、E2、非结构蛋白NS3融合抗原），蛋白印迹试验分析靶抗原表达，皮内电转法免疫BALB／c小鼠后评价其免疫应答，采用表达异型（ JFH1，2 a型） HCV多聚蛋白的重组痘苗病毒接种的小鼠攻击替代模型进行保护效果分析。结果蛋白印迹试验表明DNA疫苗中靶抗原体外可有效表达；两种DNA疫苗均可诱导多抗原特异的抗体反应及T细胞免疫应答；未检测到明显的交叉免疫保护。结论两种复制型DNA疫苗均可诱导针对多抗原的体液及细胞免疫应答，但不能诱导有效的交叉保护。本研究为HCV新型疫苗研制提供了一定参考。

本刊使用的医学缩略语

为了精简文字，使文章读起来更简练易懂，现将本刊常用且基础医学领域中所熟知的专业名词缩略语公布如下（按英文首字母顺序排列），本刊在论文中将不再注释。

远程投稿系统作者常见问题

问题1：作者如何投稿？
　　（1）注册网站会员，邮箱获得登录名和密码；（2）申请成为杂志作者，需要给哪个杂志投稿，就申请成为哪个杂志的作者，一个作者可以同时申请成为多个杂志的投稿作者；（3）进入系统，点击左侧菜单栏【期刊管理系统】，点击之后系统会列出期刊系统作者的所有功能，点击【作者投稿】，按步骤一步步往下操作，后点击【投稿】，完成投稿操作。

表达 HIV-1建立感染相关病毒（T／F）膜蛋白的重组痘病毒与蛋白疫苗联合免疫豚鼠后体液免疫特征研究

目的：研究表达HIV-1建立感染相关病毒（ T／F）膜蛋白的重组痘苗病毒rTT-B、rTT-C和rTT-CON与gp140蛋白疫苗联合免疫豚鼠后抗体反应情况。方法采取Prime-boost免疫策略对豚鼠进行rTT初免1次，间隔4、8周后gp140蛋白疫苗加强免疫2次。免疫前和末次免疫后2、6、10周采豚鼠血，检测血清中HIV-1特异性结合抗体、中和抗体以及抗体的相对亲和力。结果（1） rTT-B、rTT-C和rTT-CON三种病毒和蛋白联合免疫均诱导了强烈的针对HIV-1 B′／C、B、AE亚型特异性结合抗体，抗体滴度范围为111430～1024000，其中，rTT-C和rTT-CON和蛋白联合免疫2周后诱导的B′／C和AE亚型特异性抗体滴度显著高于rTT-B（P＜0．05），但3种病毒蛋白联合免疫诱导的B亚型膜蛋白特异性抗体滴度差异无统计学意义。（2）3种病毒蛋白联合免疫都能诱导较强滴度针对SF162和ZM109的中和抗体，抗体滴度范围为83．76～649．30，3种病毒间差异无统计学意义。（3）3种病毒蛋白联合免疫都能诱导与免疫保护有关的HIV-1 V1V2-gp70特异性抗体，3种病毒间差异无统计学意义。（4）3种病毒蛋白联合免疫诱导的抗体对HIV-1 B′／C、B、AE亚型膜蛋白具有较强亲和力，3种病毒间差异无统计学意义。结论重组痘苗病毒rTT-B、rTT-C和rTT-CON与gp140联合免疫豚鼠后可以有效诱导出针对同源和异源病毒膜蛋白的结合及中和抗体。

重庆市 HIV-1慢性感染者亚型交叉反应中和抗体的分析

目的：了解重庆市HIV-1感染者体内亚型交叉中和抗体的水平，并分析其特点，为后续表位研究和HIV-1疫苗研制提供科学数据。方法选取重庆市236份HIV-1慢性感染者为研究对象，采用国际通用的假病毒单复制TZM-bl细胞荧光检测系统，使用多个不同亚型的HIV-1假病毒株交叉筛选，对这些血浆样本进行了中和谱筛查和抗体中和能力（ID50）的检测。结果236份血浆样本中，有18份能交叉中和B和C亚型假病毒，占总样本量的7．63％；其中15份样本对多亚型假病毒表现出不同程度的型交叉中和作用。结论重庆市HIV-1慢性感染者血浆样本中存在HIV-1亚型交叉的广谱中和抗体。

HIV-1早期感染者外周血中 CD56＋T细胞表型和功能特征分析

目的：探讨HIV-1早期感染者外周血中CD56＋T细胞表型和功能变化特点，了解该变化与疾病进展状态的相关性。方法采集HIV-1早期感染者样品53例，HIV-1阴性健康对照31例，分离外周血单个核细胞（ PBMC ）后，流式细胞术检测 CD56＋T 细胞数量及细胞表面分子 CD16、CD161、NKB1、NKG2A、NKp46、NKG2D、NKG2C、CD158a表达水平。将PBMC与K562细胞共孵育，检测CD56＋T细胞分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的水平，以及细胞毒效应分子CD107a的水平。结果HIV-1早期感染者外周血中CD56＋T细胞数量较健康对照明显减少（P＝0．025），且与血浆病毒载量呈负相关（P＝0．021，r＝－0．316）。 CD56＋T细胞表面分子CD16（P＝0．003）、CD161（P＝0．023）、NKB1（P＝0．023）、NKp46（P＝0．021）表达较健康对照显著降低，其中NKB1的表达水平与CD4＋T细胞数量呈正相关（P＝0．007，r＝0．364），而与病毒载量呈负相关（P＝0．030，r＝－0．299）。 HIV-1早期感染者CD56＋T细胞自发分泌IFN-γ和TNF-α以及细胞毒效应分子CD107a水平明显低于健康对照（ P均＜0．001），在靶细胞K562存在情况下，其杀伤能力也显著低于健康对照（ IFN-γ和TNF-α：P均＜0．001，CD107a：P＝0．016）。结论 HIV-1早期感染者CD56＋T细胞数量下降，表型发生改变，分泌细胞因子和细胞毒效应分子能力下降，提示在HIV-1感染早期CD56＋T细胞即受到损伤，且与疾病进展相关。

HIV-1感染者外周血单个核细胞SAMHD1表达检测及其与IFN-α水平的关系

SAMHD1（ sterile alpha motif domain and HD domain 1）是一种新发现的HIV-1宿主限制因子，它通过水解dNTPs，使病毒的逆转录过程受阻来限制HIV-1的感染。 SAMHD1的表达受干扰素调控， IFN-α可以显著促进 SAM-HD1的表达。而HIV-1感染可以产生一系列的炎症反应和细胞因子的分泌，包括IFN-α水平的升高。 HIV-1感染者SAMHD1表达水平的变化及其与IFN-α水平的关系目前尚未见报道。本研究中，我们检测了HIV-1感染者外周血单个核细胞（ peripheral blood mononuclear cells， PBMC） SAMHD1表达水平，并分析了其与血浆IFN-α水平的关系。

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