中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.59
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0254-5101
- 国内刊号: 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人TACI-Fc融合蛋白对XG6细胞体外生长的调节作用
目的建立人TACI-Fc基因转染细胞,获得该融合蛋白,研究其对多发性骨髓瘤细胞系XG6的生物学作用.方法利用RT-PCR方法从扁桃体细胞中克隆全长TACI cDNA片段,将该基因的胞外段sTACI与人IgG1 Fc段连接到pcDNA真核表达载体上,使两者融合表达.脂质体法将重组质粒pcDNA-sTACI-Fc转入小鼠成纤维细胞系L929,ELISA法测定转染TACI-Fc基因的L929细胞培养上清中TACI-Fc的含量,培养上清经亲和层析柱纯化,获得纯化的融合蛋白TACI-Fc.然后应用台盼蓝染色活细胞计数和3H-TdR掺入法检测其对XG6细胞的生长和增殖的调节作用.结果经RT-PCR和ELISA方法检测表明,成功构建了稳定表达sTACI-Fc融合蛋白的基因转染细胞.基因转染细胞的培养上清经亲和层析柱纯化,得到TACI-Fc融合蛋白.体外检测其生物学活性结果表明,该融合蛋白可有效地阻断Blys对骨髓瘤细胞株XG6的促增殖作用.结论本实验成功地将TACI胞外段与人IgG1 Fc段在真核细胞中进行融合表达,表达的蛋白质具有良好的生物学功能,这为进一步对TACI基因进行功能研究奠定了物质基础.
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中国佤族人群MBL基因SNP及其单倍型与基因型的研究
甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin, MBL)通过激活补体凝集素途径和调理吞噬作用清除病原体及受感染细胞,在机体天然免疫中起关键作用[1].已发现MBL基因上存在至少20个单核苷酸多态性(SNP)位点,仅其中6个SNP位点对MBL血清水平有较大的影响,他们分别是启动子区-550(G/C)、-221(C/G)、+4(C/T)3个位点(分别称H/L、X/Y和P/Q等位基因)和结构基因第一外显子CGT52TGT、GGC54GAC、GGA57GAA 3个密码子点突变(分别称为D、B、C等位基因,即A野生型).按照排列组合的规律这6个SNP可随机组合成26种单倍型,但由于结构基因3个SNP位点与不同的启动子单倍型连锁不平衡,至今只检测到7种常见的单倍型.
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脂氧素A4抑制CTGF诱导的大鼠系膜细胞RANTES的产生
目的了解结缔组织生长因子(CTGF)是否诱导肾小球系膜细胞产生趋化因子RANTES,了解脂氧素A4(LXA4)是否影响CTGF对合成RANTES的诱导作用,并探讨其作用机制.方法应用CTGF刺激培养的大鼠肾小球系膜细胞,应用RT-PCR方法测定RANTES的mRNA表达,应用ELISA测定上清液中RANTES.应用趋化试验测定上清液对单核细胞(THP-1)的趋化作用.应用Western blot测定分裂原激活的蛋白激酶(p42/44 MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)和蛋白激酶B(PKB)的表达.应用凝胶电泳迁移率试验测定核因子-κB(NF-κB)的表达.构建含脂氧素A4受体同源基因(LRHG)的真核表达载体pcDNA3.1/LRHG,并转染系膜细胞,观察LXA4对CTGF作用的调节是否依赖LRHG.结果 CTGF刺激使系膜细胞RANTES的mRNA表达与分泌量增加,增加磷酸化(P)-p42/44 MAPK、P-PI3-K、P-PKB及NF-κB表达.LXA4呈剂量依赖性地抑制CTGF所致的上述变化.P-p42/44 MAPK抑制剂PD98059抑制CTGF诱导的p42/44 MAPK磷酸化与RANTES分泌.PI3-K抑制剂LY294002抑制CTGF诱导的PI3-K、PKB、NF-κB活化与RANTES分泌.NF-κB抑制剂PDTC抑制CTGF诱导的NF-κB活化与RANTES分泌.pcDNA3.1/LRHG转染使LXA4对CTGF诱导的p42/44 MAPK磷酸化与RANTES的分泌的抑制作用增强.结论 LXA4可抑制CTGF引起的系膜细胞分泌RANTES,其机制依赖于抑制p42/44 MAPK、PI3-K/PKB的磷酸化与NF-κB活化.而LRHG转染细胞可增强LXA4的抑制作用,提示LRHG参与了LXA4的抑制作用.
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生殖器都柏林念珠菌分离与PCR-RFLP鉴定
都柏林念珠菌是1995年采用现代分子生物学方法鉴定的念珠菌属的一个新种.近年来,都柏林念珠菌等非白念珠菌引起的深部感染比例逐渐增长,对氟康唑很容易产生不可逆的耐药性.因此都柏林念珠菌的分离与鉴定引起了国内外学者的高度重视.目前,45℃温度试验筛查都柏林念珠菌操作简便,已得到国内外学术界的广泛认可和采用.都柏林念珠菌DNA经限制性内切酶消化后,可产生独特的RFLP图谱,但单纯RFLP图谱结果模糊.为此,用PCR方法对核糖体DNA内部转录间隔区的编码基因进行核酸扩增,然后分析限制性酶酶切图谱,鉴定都柏林念珠菌,并对都柏林念珠菌在天津的流行情况作了分析.
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云南、福建和贵州省鼠疫耶尔森菌基因分型研究
云南省位于我国西南边陲,存在滇西山地齐氏姬鼠大绒鼠鼠疫自然疫源地(野鼠鼠疫疫源地)和滇西山地闽广沿海居民区黄胸鼠鼠疫自然疫源地(家鼠鼠疫疫源地),除了剑川地区属于野鼠鼠疫疫源地外,云南省的西北部疫区均属于家鼠鼠疫疫源地.福建省位于我国东南沿海,其境内的鼠疫自然疫源地也属于家鼠鼠疫疫源地.贵州省兴义市位于云南和广西省交界处,也属于家鼠鼠疫疫源地.为了比较家鼠及野鼠疫源地鼠疫耶尔森菌(以下简称鼠疫菌)基因组成的差别,采用PCR技术对分离自三省的69株鼠疫菌进行了基因分型研究.
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幽门螺杆菌中国菌株IS605插入靶基因的获得及分析
目的获得幽门螺杆菌插入因子IS605的插入靶位点并分析其插入特征.方法采用酶切、Southern blot、LA PCR体外克隆、连接、测序的方法获得不同菌株IS605的靶基因及拷贝数,并对插入位点进行分析.结果中国菌株G40A、G61B各两个拷贝的IS605分别插入在幽门螺杆菌功能未明的基因中;IS605插入位点的左侧(ORFA侧)富含"AT".结论 IS605的插入位点具有区域特异性的倾向性;LA PCR 体外克隆法是研究原核生物已知基因的周边基因及其拷贝数的较好方法.
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AAV2-BPI700-Fcγ1700重组病毒的制备及其转染小鼠后的抗感染作用
目的通过观测BPI700-Fcγ1700嵌合基因导入小鼠对小致死量E.coli感染攻击的抵抗作用,探讨基因治疗在细菌感染性疾病中应用的可能性.方法采用RT-PCR检测嵌合基因在转录水平的表达;采用免疫组化和酶联免疫吸附实验检测嵌合基因在蛋白水平的表达.结果 (1)基因导入小鼠中目的嵌合基因得到表达,在注射部位肌肉组织和血清中可检测到目的嵌合蛋白;(2)在小致死量E.coli感染攻击后,基因导入小鼠的存活率为31.43%,明显高于对照组小鼠的存活率4.62%;与小剂量头孢呋辛钠联合应用其存活率高达65%.结论 BPI700-Fcγ1700嵌合基因导入小鼠对致死量E.coli感染具有较好抵抗作用,提示抗感染基因治疗在细菌感染性疾病,特别是在感染高危人群中具有广阔的临床应用前景.
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炭疽保护性抗原受体结合区的关键氨基酸位点分析
目的分析炭疽毒素保护性抗原(PA)受体结合区与其功能相关的关键氨基酸位点.方法通过定点突变的方法将PA的Asp683分别突变成为一系列带有不同电荷以及不同长度侧链的氨基酸,通过细胞毒性实验分别探询电荷及立体结构对其活性的影响.同时对Asp683的一些邻近氨基酸进行了定点突变的研究.结果细胞毒性实验显示,不同的突变导致了PA活性不同程度的下降,其中Asp683电荷的改变对其活性的影响尤为明显,但当它突变为不带电荷的氨基酸时,PA仍然保留了一定的活性;而当Asp683突变为带正电的Lys后,PA却保留了相对较高的活性.结论 Asp683所带的负电荷在PA与其受体的相互作用中起着关键的作用,但PA与其受体之间的相互作用可能还通过一些其他方式进行.
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SARS-CoV N蛋白对真核细胞基因谱的影响
N蛋白位于SARS冠状病毒(SARS-CoV)颗粒的核心,是SARS-CoV的主要结构蛋白之一,它可以与病毒基因组RNA结合.目前研究表明N蛋白可以选择性激活AP-1(activator protein 1)信号转导途径;并发现在压力条件下(即缺乏生长因子时),N蛋白可以诱导COS-1细胞凋亡和肌动蛋白重组.本文研究了体外转染N蛋白真核表达载体后细胞基因转录水平的变化.通过长寡核苷酸芯片和SAM统计学处理,得到了瞬时表达N蛋白的真核细胞转录谱.N蛋白对哺乳动物细胞转录的影响可能与SARS-CoV的致病机理相关.
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HIV-1相关炎性细胞因子诱导人血管内皮细胞中潜伏感染KSHV的溶解性周期复制
目的研究HIV-1感染相关炎症细胞因子是否能够激活人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中潜伏感染的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV);探讨该激活作用是否由KSHV Rta基因所介导.方法采用体外模拟系统,研究了与HIV-1感染T细胞诱生的细胞因子相似的重组人细胞因子对HUVEC中潜伏感染的KSHV复制的影响.通过Northern blot和定量PCR检测ORF26(该基因编码的病毒次要衣壳蛋白仅在KSHV被激活时表达) mRNA表达来分析KSHV的激活.运用KSHV Rta基因启动子(KSHV复制时先被激活的启动子)驱动的虫荧光素酶报告基因进一步证实并扩展研究结果.结果包括干扰素-γ(IFN-γ)、肝细胞生长因子/扩散因子(HGF/SF)及制瘤蛋白M(oncostatin M, OSM)在内的重组细胞因子不仅可诱导HUVEC中潜伏感染的KSHV发生溶解性周期复制,而且能增强Rta启动子活性.结论 HIV-1感染相关的炎性细胞因子是诱导HUVEC中KSHV溶解性周期复制的因素,而且该过程至少有部分由KSHV的Rta启动子介导.
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登革1~4型病毒prM-E基因的双价和四价重组质粒DNA在小鼠中的免疫原性观察
目的在鼠模型中观察登革(DEN)病毒双价和四价重组质粒DNA的免疫原性,为登革多价DNA疫苗的研究奠定基础.方法采用可去除内毒素的试剂盒大量提取质粒DNA.将双价质粒DNA及将它们配伍后再与鼠源GM-CSF进行联合免疫,免疫途径采用肌肉注射,并加以电刺激,以提高质粒DNA的摄入效率.于初次免疫后第2和4周各加强免疫1次.然后在小鼠中分别测定针对登革1~4型病毒的体液和细胞免疫应答水平.采用间接免疫荧光法和中和试验测定血清抗体效价,细胞免疫应答水平通过测定脾淋巴细胞的增殖指数和其分泌的IFN-γ浓度进行评价.细胞浸润实验通过对免疫部位的肌肉进行HE染色确定.结果小鼠在初次免疫后第4周即开始产生针对DEN1~4型病毒的抗体,随着时间的延长,抗体效价逐渐上升.第14周中和抗体效价高达1∶32.淋巴细胞的刺激指数及其分泌IFN-γ的浓度均显著高于对照组.GM-CSF对体液免疫应答有促进作用,但对细胞免疫应答无显著的促进作用.结论本研究所构建的双价和四价重组质粒DNA在鼠模型中具有较好的免疫原性,这为登革多价DNA疫苗的研究奠定了基础.
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HIV-1 黑龙江省分离株CHNHLJ03009包膜克隆及分析
目的分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (human immunodeficiency virus type 1, HIV-1)原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征.方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV包膜直接克隆,进行序列分析及系统树分析.构建了一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行了感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征.结果共获得2个有功能全长env克隆,分别命名为CHNHLJ03009c34 (GenBank 序列号为AY905493)和CHNHLJ03009c33.用全长env氨基酸序列与国内外分离株进行同源性比较分析发现,与分离株CHNHLJ03009c34的包膜同源性高的病毒为云南的HIV-1 B'亚型分离株RL42,同源性为91.52%.系统发育分析结果表明,该株为泰国B'亚型,与云南分离株RL42的遗传距离近.对包膜蛋白结构分析结果显示,分离株CHNHLJ03009c34包膜在抗原性和亲水性上与RL42没有明显差别.感染性检测结果显示该病毒只能感染U87.CD4.CCR5细胞, 不能感染U87.CD4.CXCR4细胞.结论本研究从黑龙江省一名HIV-1阳性者克隆到HIV-1 CHNHLJ03009病毒的包膜基因,该病毒属于B'亚型(泰国亚型),为R5亲嗜性毒株.该包膜基因克隆为首次报道的黑龙江分离株.
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登革2型病毒NS3蛋白NTPase/RNA解旋酶结构域的原核表达及活性研究
目的表达登革病毒非结构蛋白NS3 NTPase/RNA解旋酶结构域(dNS3),纯化表达产物并对其活性作初步研究.方法提取感染登革2型病毒的BHK-21细胞总RNA,RT-PCR扩增目的基因,经NcoⅠ、HindⅢ双酶切后连入表达载体pET28a,转化宿主菌BL21(DE3),优化诱导表达条件,SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达蛋白.表达产物经亲和层析纯化,超滤浓缩脱盐,孔雀绿钼酸铵法检测NTPase活性.结果成功构建重组表达载体pET28a-dNS3并在大肠杆菌中获得可溶性表达,纯化产物经测定具有良好的NTPase活性及抗原性.体外条件下证实登革2型病毒非结构蛋白NS5(RDRP)对dNS3的ATPase活性有促进作用,提示在病毒复制时NS3与NS5间的相互作用对NS3的生物活性及对病毒复制过程可能具有调控作用.结论本研究为基于抑制NS3 NTPase/RNA解旋酶活性的抗病毒药物的筛选提供了实验依据.
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CpG-ODN联合HBsAg体外对慢性乙肝患者外周血树突状细胞STAT、SOCS通路的影响
目的研究含非甲基化CpG基序的免疫刺激寡核苷酸(CpG-ODN)联合重组HBsAg对慢性乙肝(CHB)患者外周血树突状细胞(dendritic cell, DC)表面标志、功能及胞浆信号传导与转录激活因子(STAT)、细胞信号转导抑制因子(SOCS)表达的影响.方法由CHB患者和健康者外周血单核细胞诱导扩增DC,以CpG-ODN或联合HBsAg刺激DC,并与TNF-α比较,评价其对DC表面标志、分泌IL-12 p70及刺激同种T细胞增殖能力的影响;应用Western blot法检测DC胞浆STAT1、3、4、5、6以及SOCS1、3蛋白的表达.结果与PBS组比,TNF-α、CpG-ODN或联合HBsAg能明显提高CHB患者DC表面分子HLA-DR表达,IL-12 p70分泌增加,刺激同种T细胞增殖能力增强,CpG-ODN联合HBsAg还能明显提高CD1a的表达;CpG-ODN或联合HBsAg、TNF-α对DC胞浆STAT1、4、6和SOCS1、3的表达呈不同程度增强作用,对STAT3、5的表达无明显影响.结论 CpG-ODN与TNF-α一样能促进CHB外周血DC分化、成熟;CpG-ODN或联合HBsAg能增强DC的特异性抗原提呈作用;其作用机制可能是通过调节DC细胞内STAT1、4、6以及SOCS1、3等信号蛋白的表达.
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特发性扩张型心肌病CTLA-4基因3'非翻译区(AT)n微卫星多态性研究
目的特发性扩张型心肌病(idiopathic dilated cardiomyopathy, IDC)的发病机制与T细胞免疫应答密切相关.细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4, CTLA-4)主要在已激活的T细胞上表达,通过与CD28竞争结合B7,抑制T细胞过度激活,维持免疫系统内环境稳定.CTLA-4 基因3'非翻译区(AT)n微卫星多态性影响CTLA-4功能.本研究旨在探讨外周血单个核细胞(PBMC)CTLA-4表达状况及3'非翻译区(AT)n微卫星基因多态性与IDC的相关性.方法分别用原位杂交、免疫组化、序列特异性引物PCR等方法检测38例无血缘关系的北方汉族IDC患者以及50例正常对照者的CTLA-4 mRNA、蛋白质表达、CTLA-4基因外显子3'末端非翻译区(AT)n重复序列多态性,并对PCR扩增产物进行序列分析.结果 IDC组与对照组相比,PBMC经金黄色葡萄球菌肠毒素B刺激后CTLA-4 mRNA、蛋白质表达强度显著减弱,且无一定规律;3'末端非翻译区共发现18种CTLA-4等位基因,与对照组比较,106 bp等位基因频率在IDC患者中显著增高[22.22% vs 1%, P=0.0002, OR=23.56, 95%可信区间(CI): 9.65~83.74].结论 IDC患者CTLA-4基因转录和表达缺陷,该缺陷与CTLA-4基因3'末端非翻译区(AT)n重复序列多态性存在关联.
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系统性红斑狼疮患者PDCD-1表达及其与发病相关性的研究
程序性细胞死亡-1(programmed cell death-1, PDCD-1)分子,是相对分子质量(Mr)55×103的免疫球蛋白超家族Ⅰ型跨膜糖蛋白,是一种重要的下调型共刺激因子,共刺激信号的平衡在保持自身免疫耐受中起到了重要的作用.系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是自身免疫疾病的原型,机体丧失了正常的免疫耐受平衡,淋巴细胞异常活化,不能正确识别自身组织导致疾病发生.在对瑞典和冰岛SLE家族易感基因研究中发现编码PDCD-1的2q37.3位点与SLE发病有很强的相关性[1].
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小剂量长时间口服罗红霉素治疗常年性变应性鼻炎对患者血清IL-5、IL-8水平的影响
为了评价罗红霉素(roxithromycin, RXM)对常年性变应性鼻炎 (perennial allergic rhinitis, PAR)的疗效和对患者血清细胞因子IL-5和IL-8水平的影响,我们进行了本次临床观察,以探讨RXM对PAR的治疗作用.
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体外阻断CD134对LN患者外周血单个核细胞TH1/TH2细胞因子表达的影响
目的探讨CD134/CD134L共刺激分子对TH1/TH2细胞因子表达的影响及在狼疮性肾炎(LN)发病机制中的可能作用.方法活动期LN患者10例,分别采取外周静脉血,用密度梯度离心法制备新鲜PBMC,分成6组:(1)对照培养组;(2)单纯刺激组;(3)抗CD134组;(4)抗IL-4组;(5)rhCD134∶Fc组;(6)地塞米松(Dex)组.另选取10例健康体检者作为健康对照组.采用ELISA法分别测定培养液上清中IFN-γ、IL-4、IL-10表达水平.结果 (1)在抗CD3ε单抗/rIL-2刺激前,活动期LN患者PBMC培养液上清分泌的IFN-γ、IL-4和IL-10水平都明显高于健康对照组;(2)在抗CD3ε单抗/rIL-2刺激下,活动期LN患者PBMC分泌的IFN-γ、IL-4和IL-10又较刺激前明显增加;(3)抗IL-4单抗、抗CD134单抗均可使经抗CD3ε单抗/rIL-2刺激的LN患者PBMC分泌IL-4、IL-10水平显著下降,导致IFN-γ水平显著增高,免疫应答朝TH1方向偏离;(4)Dex能显著抑制抗CD3ε单抗/rIL-2刺激的原代培养PBMC中IL-4、IFN-γ的分泌水平,但对IL-10的产生并没有明显的抑制或促进作用;(5)rhCD134∶Fc能显著降低抗CD3ε单抗/rIL-2刺激的原代培养PBMC中IFN-γ及IL-4、IL-10的分泌水平,对TH1和TH2细胞因子的产生都有显著抑制作用.结论糖皮质激素的抗炎机制具有多重性,对TH1、TH2细胞因子的作用并不均衡;抗CD134单抗对减轻LN患者PBMC的异常活化有一定作用;CD134-IgG融合蛋白与抗CD134单抗相比,抑制作用更明显,对急性期LN有更好的治疗作用.
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SARS病人的免疫应答
机体抵御SARS-CoV的免疫应答包括非特异性和特异性两类.非特异性免疫应答主要包括细胞因子和NK细胞对病毒的抑制和杀伤作用等.特异性免疫反应包括体液免疫和细胞免疫.体液免疫反应是指当SARS-CoV感染机体后,引起B淋巴细胞的活化,其中一些细胞迅速分化为浆细胞,分泌IgM;而另一些细胞在T细胞和细胞因子的辅助下,发生类型转换,分泌IgG和IgA,并形成记忆性B细胞.记忆性B细胞和浆细胞维持着长期的免疫记忆.
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SARS-CoV S DNA疫苗诱导特异性T细胞及相关细胞因子的特性研究
目的小鼠经皮下SARS-CoV S DNA疫苗免疫后,研究其特异性T细胞及相关细胞因子的特性.方法 SARS-CoV S DNA疫苗免疫BALB/c小鼠后,获取淋巴细胞悬液.经S抗原多肽刺激后,采用ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ的水平,利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ和IL-2的表达及其关系.结果当S混合多肽刺激后,DNA疫苗免疫小鼠的淋巴细胞产生大量的IFN-γ,与对照鼠相比差异有统计学意义(P<0.01).细胞亚群分析的结果表明,IFN-γ+和IL-2+的CD4+ T细胞百分率明显高于CD8+ T细胞.单独产生IL-2的细胞占大多数,其次为IFN-γ和IL-2双阳性细胞,只产生IFN-γ的细胞很少.结论 SARS-CoV S DNA疫苗免疫小鼠后可以诱导抗原特异性CD4+和CD8+ T细胞的产生.
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MAGE1纳米蛋白疫苗的研制及其抗肿瘤效应
目的制备纳米乳剂包裹基因工程MAGE1(melanoma antigen 1)抗原,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应.方法采用界面聚合法,制备包裹MAGE1抗原的纳米乳剂(NE MAGE1),测量粒径、包裹率、载药量.检测乳剂包裹对小鼠DC摄取抗原能力的影响.用NE MAGE1免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测NE MAGE1激活机体细胞免疫反应的状况,并观察纳米蛋白疫苗对荷瘤小鼠的治疗作用.结果成功制备粒径为(15±5) nm的纳米乳剂,包裹率为91%,载药量0.091 g/L,4℃放置6个月后性质稳定.DC摄取NE MAGE1的能力明显强于对游离蛋白抗原的摄取.ELISPOT和细胞毒性杀伤实验显示,NE MAGE1可以诱导机体产生针对MAGE1的CTL,特异性杀伤表达MAGE1的肿瘤细胞.荷瘤小鼠的治疗实验显示,NE MAGE1对表达MAGE1的肿瘤有明显疗效,其效果优于单独使用游离MAGE1蛋白.结论纳米乳剂具有较高包裹率和稳定性.纳米乳剂包裹的肿瘤特异性抗原可以有效激活机体产生抗肿瘤免疫效应,是具有临床应用前景的新型抗肿瘤疫苗.
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恶性疟原虫AMA1不同类型疫苗组合免疫接种研究
目的探索应用恶性疟原虫DNA疫苗、重组痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗进行组合免疫接种,诱导针对恶性疟原虫红内期抗原AMA1的保护性抗体.方法 PCR扩增云南株恶性疟原虫AMA1编码基因,构建和制备DNA免疫质粒VR1020/E(疫苗D)、重组改良安卡拉痘苗病毒rMVA/E(疫苗V)和重组原核表达AMA1胞外域蛋白E(疫苗P).用疫苗D单独或与小鼠GM-CSF表达质粒共同对小鼠进行初始免疫,用疫苗V和疫苗P进行单次或先后各一次追加强化.采用疫苗D-V组合方案免疫新西兰白兔.ELISA测定小鼠血清IgG及其亚类IgG1和IgG2a的水平,用免疫动物血清进行疟原虫裂殖子体外入侵抑制实验.结果在疫苗D初始免疫的基础上,采用疫苗V或疫苗P进行强化免疫可显著提高小鼠针对AMA1的抗体应答,小鼠血清特异性IgG平均增加15至137倍,GM-CSF表达质粒对疫苗D-V组合免疫小鼠的抗体应答有显著促进作用.采用疫苗D-V组合免疫在家兔可诱导明显的抗体应答.小鼠和家兔免疫血清在体外可显著抑制疟原虫裂殖子对RBC的入侵.结论将DNA疫苗、重组改良安卡拉痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗进行组合免疫接种是诱导疟疾红内期保护性抗体的有效方法.
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SARS冠状病毒S基因重组DNA诱导的体液免疫反应
目的以严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)密码子优化的S、S1和S2基因分别构建其真核表达质粒,免疫BALB/c小鼠,以初步评价其诱导特异性体液免疫的效果.方法将人工合成密码子优化的S、S1和S2基因克隆入pcDNA4/HisMax-TOPO表达载体,重组质粒转染293T细胞,Western blot和免疫组化检测其真核表达,重组质粒免疫BALB/c小鼠,酶联免疫(ELISA)检测抗S蛋白抗体,伪病毒中和试验、细胞融合抑制试验检测中和抗体.结果 3种重组质粒均可在真核细胞中获得表达,免疫小鼠后可诱导针对S蛋白的特异性抗体,抗体在12周观察期内呈持续上升趋势;其中,仅S和S1蛋白重组质粒能够诱导中和抗体的产生,以S蛋白的效价为高.结论密码子优化S和S1蛋白重组质粒可以有效诱导BALB/c小鼠产生中和抗体,其抗体可能具有阻断SARS-CoV侵袭易感细胞的能力.该结果为进一步研究SARS-CoV DNA疫苗提供了参考依据.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 |
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