中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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髓鞘碱性蛋白(MBP)特异的Wistar大鼠T细胞系的建立
目的建立特异的大鼠T细胞系,为T细胞疫苗的研制打下基础. 方法采用足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)-福氏完全佐剂(CFA)混合乳剂和百日咳疫苗,诱导Wistar大鼠EAE模型.腹股沟淋巴结细胞经豚鼠髓鞘碱性蛋白(GPMBP)反复刺激,3H-TdR掺入法筛选针对GPMBP特异增殖的T细胞.FACS检测T细胞表型.RT-PCR测定T细胞的细胞因子格局. 结果一次性足垫皮内注射GPSCH-CFA混合乳剂可诱导Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,并证实了同时注射百日咳疫苗能提高发病率和发病程度.EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色见大量淋巴细胞浸润,在血管周围形成淋巴鞘,但未见脱髓鞘改变.T细胞对GPMBP呈特异性增殖,为CD4+表型.RT-PCR结果显示T细胞IL-2和IFN-γ mRNA表达水平较高,TNF-α亦低水平表达. 结论 Wistar大鼠可用于制备EAE动物模型.GPMBP特异性T细胞系为CD4+表型,呈TH1类细胞因子格局.
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BJAB细胞在转导6A8 α-甘露糖苷酶的反义DNA后发生oncosis样死亡
目的采用形态学和分子生物学方法,分析转导6A8 α-甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质. 方法用Giemsa染色、annexin-Ⅴ荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法,分析细胞死亡的性质;应用Con A结合试验,检测转基因细胞6A8 α-甘露糖苷酶活性的改变;应用Fluo-3探针测定细胞胞浆[Ca2+]i. 结果用重组腺相关病毒(rAAV)颗粒成功地将反义6A8 DNA转导入了EB病毒转化的B细胞株BJAB.在克隆中,转导反义6A8 DNA的BJAB细胞在生长到3～10个细胞时死亡,而野生型、转导空载或转导正义6A8 DNA的BJAB细胞生长良好.转导反义6A8 DNA的BJAB细胞呈聚集状生长,且有大量细胞肿胀,终死亡.Giemsa染色光镜观察、annexin-Ⅴ荧光染色、梯形DNA电泳及透射电镜观察结果表明,这种死亡是一种oncosis(肿胀死)样死亡.Con A结合试验表明,BJAB细胞在转导反义6A8 DNA后的结合率升高,而转导正义6A8 DNA后的结合率则下降.另外,转导反义6A8 DNA的细胞胞浆[Ca2+]i升高. 结论转导反义6A8 DNA引起BJAB细胞发生oncosis样死亡,这种死亡可能与6A8 α-甘露糖苷酶表达被抑制有关.
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两种CpG基序能高度活化人免疫细胞
目的筛选活化人免疫细胞的CpG基序(CpG motif),设计对人免疫细胞有强免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN). 方法设计合成含有5′-CG-3′二核苷酸、长度为12个碱基的硫代修饰CpG-ODN,并利用体外培养的人外周血单个核细胞(PBMC),以培养上清中的IgM水平为指标,筛选能够活化人免疫细胞的CpG基序.根据筛选获得的活性CpG基序,设计一组含有2～6拷贝CpG基序、长度为15～30个碱基的CpG-ODN,从中筛选对人免疫细胞有强免疫刺激活性的序列. 结果发现了多个活性CpG基序,其中5′-GACGTT-3′,5′-GACGTC-3′,5′-GGCGTT-3′和5′-GGCGTC-3′等4个基序对人B细胞有中度免疫刺激活性,和已发表的小鼠CpG基序完全一致;5′-GTCGTT-3′和5′-GTCGTC-3′ 2个基序对人B细胞有高度免疫刺激活性,第二位碱基均为“T”,而在小鼠CpG基序中该位碱基为“G”或“A”.根据后2个CpG基序,设计了多个对人免疫细胞有高度免疫刺激活性的CpG-ODN. 结论人免疫细胞中存在有高度免疫刺激活性的CpG基序和CpG-ODN.
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液-质联用分析肝癌细胞HLA-A2类分子递呈的抗原肽
目的寻找MHCⅠ类分子递呈的、T淋巴细胞识别的肝癌抗原肽. 方法人肝癌细胞系hHCC以枸橼酸-磷酸盐(pH3.3)液洗脱,洗脱物经粗分离,得到相对分子质量(Mr)＜5?000的各种多肽组分混合液;取各组分多肽分离液分别与抗原加工缺陷细胞(T2,HLA-A2)进行细胞表位重建,加入特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),51Cr释放法测杀伤活性;选活性值高的抗原肽组分进行反相高效液相色谱-质谱(RP-HPLC-MS)检测,对活性峰手工读谱分析其一级结构;后进行氨基酸同源性分析. 结果酸洗1010hHCC细胞,样品蛋白质浓度2mg/ml;通过RP-HPLC-MS检测,其质谱图经手工解析,氨基酸序列为SXXVHXNEV,X=1或L;氨基酸同源性分析证明SXXVHXNEV为SLIVHLNEV,是肝细胞生长因子受体的第1?075～1?083肽段,第1?080位点发生突变,由F变为L,由HLA-A2分子递呈. 结论细胞膜温和酸洗技术结合RP-HPLC-MS联用技术,是寻找肝癌抗原肽的有效方法,尚未见相同研究报道.发现的肝癌抗原肽SLIVHLNEV是肝细胞生长因子受体的突变物,可能具有重要生物学意义.
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流式细胞仪检测TH1及TH2细胞时PMA对CD4分子表达的影响
应用流式细胞仪结合胞浆内染色技术检测辅助性T淋巴细胞(TH)胞浆内细胞因子分泌以区分TH1/TH2细胞是近年来新建立的一种方法,我们发现目前广泛使用的丝裂原PMA(Phorbol 12-myristate 13-Acetate)对TH细胞表面CD4分子表达有明显下调作用,现报道如下.
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垂体生长激素的调节激素对人B淋巴母细胞系IM-9中生长激素基因启动子活性的影响
目的通过观察生长激素释放激素(GHRH)、山德定、生长激素(GH)和胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对IM-9细胞中GH基因启动子活性的影响,以了解这些激素对B淋巴细胞中GH表达的调节作用. 方法把人外周血淋巴细胞GH基因上游-484～+2bp调控序列克隆到荧光素酶报告基因质粒中,然后把克隆得到的质粒转染到IM-9细胞内,通过测量荧光素酶的活性观察垂体GH的各种调节激素对GH基因启动子活性的影响. 结果 0.001nmol/L的人GHRH能够显著抑制荧光素酶在IM-9细胞中的表达(P＜0.002),但0.1nmol/L和10nmol/L的GHRH对荧光素酶的抑制作用反而减弱.人IGF-Ⅰ(1、10和100nmol/L)可增强荧光素酶的表达(均P＜0.05).GH(1.0ng/ml)可显著增加荧光素酶的表达,但作用的强度不大.不同浓度的生长抑素类似物山德定对IM-9细胞中荧光素酶的表达均无显著影响. 结论 GHRH、IGF-Ⅰ和GH对IM-9细胞中GH启动子的活性有一定的调节作用,说明调节垂体GH分泌的GHRH、IGF-Ⅰ和GH等能够调节B淋巴细胞内irGH的表达.
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铜绿假单胞菌粘附对肠上皮细胞膜生物物理特性的影响
严重烧(创)伤后肠道细菌移位并致感染这一现象已被公认.细菌移位的第一步是其粘附于肠粘膜上皮细胞,进而定植于肠粘膜表面,随后侵入肠系膜淋巴结,终播及全身.铜绿假单胞菌是肠道细菌移位的主要菌群之一.为了更好的了解铜绿假单胞菌粘附于肠上皮细胞表面后细胞膜的一系列变化,本研究拟从体外铜绿假单胞菌粘附肠上皮细胞模型入手,探索粘附后细胞膜生物物理特性的变化规律及可能的机制.
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免疫功能低下Wistar大鼠白念珠菌肺炎模型的建立
目的建立用于免疫干预研究的免疫功能低下白念珠菌肺炎Wistar大鼠模型. 方法醋酸考的松皮下注射制成大鼠免疫功能低下模型,并于第14天气管内灌注白念珠菌,制成免疫功能低下合并白念珠菌肺炎模型.检测免疫功能低下组,免疫功能低下+白念珠菌1、3、7?d组,正常组,正常+白念珠菌1、3、7?d组大鼠肺泡巨噬细胞的吞噬及杀菌功能;抗原提呈功能;培养上清中TNF-α活性和IL-1β、IL-6水平;血淋巴细胞杀伤功能;血清IFN-γ活性、IL-1β、IL-6水平;免疫功能低下+白念珠菌1、7?d组和正常+白念珠菌1、7?d组肺组织IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6表达;并于第7天进行左肺白念珠菌培养计数. 结果免疫功能低下的大鼠肺泡巨噬细胞的吞噬和杀菌功能,抗原提呈功能,以及分泌TNF-α、IL-1β、IL-6的功能均明显低于免疫功能正常的大鼠;免疫功能低下的大鼠血中淋巴细胞的细胞毒作用明显低于免疫功能正常的大鼠;免疫功能低下的大鼠血清IFN-γ活性和IL-1β、IL-6水平明显低于免疫功能正常的大鼠.免疫功能低下合并白念珠菌肺炎大鼠肺组织IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6表达灌菌后第1天均低于白念珠菌肺炎大鼠,第7天均高于白念珠菌肺炎大鼠.免疫功能低下的大鼠左肺白念珠菌培养计数6.50×108CFU,免疫功能正常的大鼠左肺白念珠菌培养未见白念珠菌生长. 结论该模型是免疫功能低下宿主肺部感染研究的适宜模型.
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O139霍乱弧菌中存在编码霍乱毒素的质粒
长期以来,由于霍乱弧菌有丰富的外泌DNA酶等原因,使得质粒在霍乱弧菌中的转化效率非常之低;前人对霍乱菌株质粒进行过广泛深入的研究,但未见报道携带有霍乱毒素基因的霍乱质粒,这使研究者们渐渐倾向于认为,质粒在霍乱毒素基因的水平转移过程中很难发挥作用.本文首次报道了在O139霍乱弧菌中存在编码霍乱毒素的质粒.
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利用16S rRNA的PCR法鉴定双歧杆菌
随着以双歧杆菌为主的微生态制剂在医疗、保健、食品等行业的广泛应用,建立特异、灵敏、快速、简易的双歧杆菌分类鉴定方法日益引起人们的关注.荧光原位杂交[1]、PCR[2]等已被引入双歧杆菌的鉴定.
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幽门螺杆菌vacA基因变异性研究
目的探索幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, 简称Hp)vacA基因(vacuolating cytotoxin gene A)的变异性及其与产生空泡毒素活性的关系. 方法用自行设计的两两配对的4条引物对17株Hp的vacA基因进行PCR扩增. 结果每株细菌均可扩增出包括vacA基因不同区域的4条产物,但每种产物在不同菌株间长度有差异;对产毒株与非产毒株的扩增产物长度比较,未发现与产毒有关的区域. 结论 Hp vacA基因的变异性相当大,变异部位不仅仅局限于某一区域,尚不能确定与产毒有关的基因区域.推测Hp表达VacA活性与否可能与分泌的量有关.
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霍乱弧菌O1群和O139群NhaA基因的克隆和变异性研究
霍乱弧菌是一种嗜盐性细菌,可在较宽盐浓度和pH值范围内生长,Na+/H+离子交换泵与此密切相关.NhaA基因所编码的NhaA蛋白是维持该离子交换泵必需的功能蛋白.NhaA基因的变异可使霍乱弧菌适应不同的外环境而得以生存.为了解我国霍乱弧菌O1群和O139群NhaA基因的变异性与致病性的关系,我们采用PCR和序列分析的方法,对来源于我国广东省和内地部分省份的40株霍乱弧菌(包括O1群和O139群)NhaA基因进行克隆和序列比较分析.
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利用抑制消减杂交技术研究钩端螺旋体致病相关基因
目的利用抑制消减杂交技术(SSH), 比较致病与非致病钩端螺旋体(简称钩体)之间基因组差异,筛选致病钩体特有的基因片段. 方法以赖型017株为tester,非致病性patocⅠ株为driver,选择合适的四碱基内切酶将基因组酶切,连接特殊设计的adaptor进行消减杂交和PCR,得到消减混合物,与T/A克隆载体连接,转化JM109建立差异消减文库,经PCR和Southern blot筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析. 结果 AluⅠ适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段; 经SSH筛选鉴定得到30个片段大小为200～1?300bp的阳性克隆, 部分已测序的片段中1个与硫胺素合成蛋白高度同源,4个与GenBank无明显同源性,可能为赖型致病钩体所特有而非致病钩体缺失的基因片段,已被GenBank收录,收录号分别为 AF300873～300877. 结论 SSH是一种有效、灵敏、高特异的比较分析基因组差异的方法,对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义.
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深圳地区小儿肠道病毒感染的核酸检测分析
为了解深圳地区肠道病毒(EV)的感染流行情况和病毒分型特征,我们采用检测EV的套式逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR)方法进行EV感染检测,并对临床分离株5′端非编码区(5′UTR)基因序列进行分子进化树分析.
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以单引物同时扩增新疆出血热病毒M和S基因
克里米亚-刚果出血热(Crimean-Congo hemorrhagic fever, CCHF)的病原是经蜱传播的克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV),曾于1945年在前苏联的克里米亚半岛导致首次病例.该病在中国称新疆出血热(XHF),于1965年首次诊断于南部新疆,后在北疆及新疆以外的地区,如青海、云南等地的人群和动物中查出抗体.由于病毒的生态圈既包括蜱之间的垂直传播又包括蜱与脊椎动物(野生动物、家畜及鸟类)之间的水平传播,CCHFV现已呈世界范围分布.病毒的人-人之间的传播曾引起多次牧场散发和医院内暴发流行.CCHFV属于布尼亚病毒科(Bunyaviridae)内罗病毒属(Nairovirus).基因组有小(S)、中(M)、大(L)3个负链RNA片段,分别编码核蛋白(NP)、糖蛋白(GP)及RNA聚合酶(RNA-dependentpolymerase)[1,2].目前尚未见到M基因研究报道(只是在GenBank中有CCHFV原型株10200的序列).为研究M基因的结构及其编码GP的功能,本文报道一种改进的RT-PCR方法,使用单一引物准确地同时扩增出XHFV近5.4kb的M基因和约1.7kb长的S基因.
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人巨细胞病毒PP150蛋白C端多肽与gp52蛋白片段的融合表达
目的将人巨细胞病毒PP150蛋白C端多肽与gp52蛋白片段融合, 构建表达该融合蛋白的工程菌. 方法合成PP150蛋白C端25个氨基酸的基因片段,并选用细菌偏爱的密码子.用PCR方法扩增gp52蛋白基因片段.将这2个基因片段分别克隆至同一质粒pET28a(+)内的NcoⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/EcoRⅠ位点,使两者串联在一起, 并且翻译框架一致,可表达1个融合蛋白.将重组质粒转化大肠杆菌,用酶切及SDS-PAGE等方法筛选表达融合蛋白的工程菌. 结果构建成功了高效表达PP150 C端多肽与gp52蛋白片段的融合蛋白工程菌,表达量为35%左右.初步纯化获得了表达的融合蛋白. 结论初步纯化的融合蛋白能与已知的抗gp52-IgM阳性血清和抗PP150-IgM阳性血清反应,说明融合蛋白C端的gp52蛋白保持较好的抗原性,融合蛋白N端的PP150 C端多肽也显示有抗原性.
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中国人类嗜T细胞病毒Ⅰ型汕头株前病毒核苷酸序列分析
目的了解中国人类嗜T细胞病毒Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)的基因特点,寻找其传播及流行的原因,为进行 HTLV-Ⅰ诊断试剂及疫苗的研制等提供基础资料. 方法设计22条引物,用PCR扩增出中国HTLV-I汕头株(命名为HTLV-ⅠWHP)的前病毒基因进行测序、分析. 结果获得HTLV-ⅠWHP前病毒的核苷酸全序列,共9?034bp.将HTLV-ⅠWHP与HTLV-Ⅰ的原型ATK进行比较,其LTR、gag、pol、env、tax、rex区的核苷酸变异率分别为:2.4%、1.2%、1.1%、2.0%、0.19%、0.79%.进化树的分析结果表明,HTLV-ⅠWHP与来自日本、加勒比海、台湾以及金门岛的部分毒株接近,同属于世界群a 亚型. 结论 HTLV-ⅠWHP基因结构保守,来自于亚洲东北部沿海地区的HTLV-Ⅰ毒株可能具有共同的起源.
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重组杆状病毒表达HEV ORF2抗原片段
目的用重组杆状病毒表达戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV) ORF2基因片段,并对其免疫学特性进行研究. 方法与中间转染载体pVL1393相连构建重组质粒,在Lipofectin介导下将其与杆状病毒线性DNA(BaculoGoldTM)共转染Sf9昆虫细胞得到重组病毒,用免疫荧光,Western blot等方法对表达产物进行免疫学特性初步研究,并进行动物免疫试验. 结果含ORF2结构基因片段的重组杆状病毒在Sf9昆虫细胞中获得了高效表达,经免疫荧光,Western blot,动物免疫试验证实该重组蛋白为HEV特异性蛋白,可刺激机体产生相应抗体. 结论重组杆状病毒能有效表达HEV抗原基因,所表达的ORF2重组蛋白具有HEV抗体识别的抗原表位,具有较好的抗原性和免疫原性.
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不同抗原性甲3 (H3N2) 亚型流感病毒的鉴定及分子生物学研究
目的对不能用当年标准血清进行鉴定的甲3 (H3N2)亚型流感病毒进行抗原性分析及分子生物学研究. 方法用交互血凝抑制试验对毒株进行抗原性分析,提取病毒RNA,用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HA1(血凝素重链区)基因片段,产物纯化后测序并分析结果. 结果发现两株从鸡胚分离到的甲3(H3N2)亚型“D”相毒株与2株从MDCK细胞分离到的“O”相毒株抗原性已明显不同;其中1999年分离的“D”相与“O”相2毒株的抗原比大于256,氨基酸序列同源性为93%,抗原决定簇A区和B区氨基酸位点相差分别为50%及35%;受体结合部位(RBS)有6个氨基酸位点发生变异(左侧壁1个、前壁3个、右壁2个). 结论人群中存在没有发生“O”相变异的甲3(H3N2)亚型“D”相毒株,其抗原性与当前流行的“O”相变异株已明显不同,提示今后在鉴定甲3(H3N2)亚型毒株时,需根据毒株的来源和相特性选择适合的标准血清进行鉴定.
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乌鲁木齐市部分高危人群庚型肝炎病毒感染现状及5′ UTR区基因序列分析
新疆地处我国西部边陲,存在着各型肝炎散发流行的危险因素,庚型肝炎病毒在乌鲁木齐市的流行现状尚未见报道.在新疆医科大学第一附院收集了267份各类人群的血清,用酶标法检测血清中庚型肝炎病毒抗体(抗-HGV),再以庚型肝炎病毒NS3区为引物运用RT-PCR法对抗-HGV(阳性)血清进行庚型肝炎病毒核酸(HGV RNA)的扩增检测,阳性扩增产物为83bp.后,选择该病毒5′非编码区为引物对第一次RT-PCR扩增HGV RNA(阳性)血清,再次进行
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腺相关病毒载体pAGX(+)的构建
目的构建腺相关病毒(AAV)载体并进行鉴定,以介导真核细胞的基因传递和表达. 方法以基因重组技术构建AAV载体,用Southern杂交、狭缝杂交以及激光共聚焦显微镜等鉴定构建的AAV载体. 结果成功地获得了重组AAV表达载体pAGX(+),藉报告基因EYFP鉴定pAGX(+),见pAEYFP经包装的重组AAV储存液的感染滴度达1.39×107 TU(transmission unit)/ml、复制滴度达1.94×1011颗粒/ml.Southern杂交表明EYFP基因获得成功拯救.rAAV/EYFP颗粒成功转导COS 7细胞,EYFP获得表达,并整合入COS 7细胞基因组,而藉质粒载体pEYFPCMV介导的转移,EYFP未能整合. 结论成功地构建了一个AAV载体,并成功地介导了基因的转移、表达和整合.
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IL-12对慢性乙型肝炎患者TH1/TH2类细胞应答作用与血清HBV DNA含量相关性研究
为观察慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA含量是否影响IL-12对TH1/TH2类细胞的调节作用,我们选择50例慢性乙型肝炎患者,分别与PHA,HBcAg、HBeAg单独或联合IL-12培养其外周血单个核细胞,ELISA法检测培养上清液细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平,结合血清HBV DNA含量进行分析比较,探讨血清HBV DNA含量对IL-12诱导TH1/TH2类细胞应答效应的影响.
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肾移植长期存活受者细胞表型的检测及意义
在肾移植长期存活受者中,有些受者免疫抑制剂维持量很小或药物浓度很低而肾功能仍然良好.为了探讨该部分受者长期低剂量用药的免疫学基础,本研究对该部分受者淋巴细胞表型进行检测,并与常规剂量用药受者和慢性移植肾失功受者比较,分析细胞表型与移植效果和临床用药的关系,以期发现该类受者的某些免疫学特征,作为调整用药量时参考.
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PCR-SSCP分析急性淋巴细胞白血病TCR基因寡/亚克隆重排及临床意义
目的为研究急性淋巴细胞白血病(ALL)TCR基因寡/亚克隆重排及与临床关系. 方法采用PCR-SSCP技术分析81例ALL TCR VγⅠ-Jγ基因重排. 结果 65例(80.2%)ALL病人存在TCR VγⅠ-Jγ基因重排,8例(8.6%)病人存在寡/亚克隆重排;寡/亚克隆ALL的白细胞计数显著高于非寡/亚克隆ALL(P<0.01);寡/亚克隆ALL的完全缓解率为37.5%,显著低于非寡/亚克隆ALL(80.7%)(P<0.005). 结论应用PCR-SSCP方法可确定ALL的寡/亚克隆性,ALL病人寡/亚克隆检测有助于预测疗效和预后判断.
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自身免疫性甲状腺疾病患者外周血淋巴细胞端粒长度的研究
目的研究自身免疫性甲状腺疾病(ATD)患者外周血淋巴细胞端粒长度的变化. 方法用流式原位杂交法检测38例ATD患者和48例健康对照者外周血淋巴细胞的端粒长度.结果患者组外周血淋巴细胞端粒长度明显短于健康对照组(P＜0.001),端粒长度与病程、发病时间、甲状腺激素水平不相关.健康对照组端粒长度随年龄增加而变短,病人组端粒长度与年龄不相关. 结论ATD病人的外周血淋巴细胞端粒长度比正常人短,且与年龄不相关,提示其外周血淋巴细胞复制、分裂增多及凋亡异常.
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HLA-DQA1*0301及*0103与腔隙性脑梗死和原发性高血压的遗传易感性研究
目的针对腔隙性脑梗死(lacunar stroke, LS)和原发性高血压(essential hypertension, EH)及多基因致病特点,进行 HLA-DQA1 位点的基因分型,分析其遗传易感性. 方法采用PCR-SSP方法对62例LS、52例EH和64例正常对照进行HLA-DQA1位点的基因分型. 结果① HLA-DQA1*0301等位基因与LS及EH呈显著正相关.② HLA-DQA1*0103等位基因与LS及EH呈显著负相关. 结论 HLA-DQA1*0301等位基因与LS及EH的发病有一定的关联,而HLA-DQA1*0103等位基因可能是LS及EH的保护性基因.
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移植受者术后CMV感染的早期诊断
巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV)感染是移植受者术后常见的并发症之一,建立早期、敏感的巨细胞病毒检测方法,对减少移植受者术后巨细胞病毒感染的发生有重要意义.本文通过检测血清中巨细胞病毒抗体(CMV-Ab),巨细胞病毒抗原(CMV-Ag)及巨细胞病毒核酸(CMV-DNA),研究移植受者术后巨细胞病毒感染状况,探讨早期诊断CMV的方法及意义.
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格林-巴利综合征与HLA-A、-B基因关联的研究
目的研究急性运动性轴索型神经病(AMAN)的易感性与HLA-A、-B等位基因分型的关系,探讨AMAN患者免疫遗传的特点. 方法用改良快速盐析法自研究对象静脉血中抽提基因组DNA,采用聚合酶链反应-顺序特异性引物法(PCR-SSP)对33例AMAN患者和132例健康人进行HLA-A、-B位点等位基因分型. 结果发现AMAN组HLA-B15、-B35频率升高,RR(relative risk)值分别为4.09和7.08.Pc分别为0.015和0.0008. 结论 HLA-B15、-B35与AMAN的易感性可能有关联.
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NF-κB在川崎病血管内皮损伤中的作用机理初探
川崎病(Kawasaki disease, KD)是一种原因不明的儿童常见的自身免疫性血管炎综合征,可留下严重的冠状动脉并发症.本研究建立人脐静脉体外内皮细胞培养模型,进一步探讨相关细胞因子及NF-κB在川崎病血管免疫损伤中的作用.
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川崎病TH1/TH2功能状态的研究
川崎病(Kawasaki disease,KD)是一种急性弥漫性血管炎,婴幼儿发病多见,至今,该病病因及发病机理不明,从病人的流行病学特征推测可能与病原体感染或毒素超抗原引起免疫学异常有关.本研究通过对KD患儿急性期、恢复期PPD皮试的观察以及外周血血清IgE的变化、外周血CD4 T细胞CD30表达和外周血单个核细胞(PBMC)培养上清IL-4、IFN-γ水平的测定,了解KD急性期TH1/TH2功能平衡状态及免疫发病机理.
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双价痢疾工程疫苗经粘膜免疫动物的实验研究
目的探讨不同粘膜免疫途径对2株痢疾工程疫苗免疫效果的影响. 方法用FSM-2117或FS-5416以4×107CFU/只分别经滴鼻、灌胃和小肠内免疫小鼠,3次免疫后7?d分离小鼠脾、派伊尔结(PP)、肠系膜中心淋巴结(MLN)、小肠淋巴细胞固有层(LPL)、鼻通道(NP)及NALT淋巴细胞,用BA-ELISASPOT法检测其特异性抗FSM-2117或FS-5416全菌抗原的IgA、IgG-ASC(抗体分泌细胞)数量. 结果 2株疫苗经鼻内免疫都诱发了鼻粘膜相关淋巴组织、胃肠粘膜相关淋巴组织以及代表系统免疫反应的脾淋巴细胞全菌抗原特异性IgA、IgG-ASC的显著增加(P＜0.05和0.01).小肠内免疫后,可有效诱发肠粘膜局部以及脾淋巴细胞全菌抗原特异性IgA、IgG-ASC的显著增加(P＜0.01),但不能刺激鼻粘膜局部淋巴细胞的特异性ASC反应. 结论 2株疫苗经鼻粘膜免疫均可诱导NALT和GALT及系统免疫反应的发生,是一个可行的免疫途径.
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免疫途径及侵袭蛋白表达对痢疾疫苗免疫效果影响的实验研究
目的探讨免疫途径及侵袭蛋白表达对2株痢疾疫苗免疫效果的影响. 方法 FSM-2117或FS-5416以4×107CFU/只分别经滴鼻、灌胃、肠内注射3种途径免疫小鼠,三免后7?d收集血清、小肠、鼻咽、肺、阴道冲洗液,ELISA法检测其中特异性福氏、宋内LPS IgA和IgG抗体(Ab)水平. 结果滴鼻和肠内免疫都能够诱生血清中双价IgA、IgG Ab显著升高,但仅滴鼻免疫组Ipa+株较Ipa-株升高显著(P＜0.01).滴鼻免疫组同时诱生鼻咽、肺、小肠内特异性抗体升高,尤其是生殖道冲洗液内抗体升高极为明显;而肠内免疫组诱生小肠、肺冲洗液内特异性抗体升高,但鼻咽及生殖道冲洗液内抗体未见明显升高. 结论鼻粘膜免疫不仅诱导多个粘膜部位(特别是生殖道)的抗体反应,且能诱导系统免疫反应.是一个安全有效的免疫途径.研究中发现侵袭蛋白表达在鼻粘膜部位能够显著加强系统特异性抗体生成,但在胃肠粘膜却无此作用.
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恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面抗原2基因在M.smegmatis mc2155中的表达
目的研究裂殖子表面抗原2 (merozoite surface antigen 2,MSA2)基因重组BCG疫苗的保护作用. 方法采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG/MSA2导入耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)mc2 155中,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组M.smegmatis mc2 155培养于middlebrook 7H9 broth (M7H9) 培养基,并添加10% M7H9 enrichment ADC 和0.05% Tween80,48～72?h后于45℃进行30?min的诱导表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot分析. 结果 SDS-PAGE及Western blot分析结果均显示在相对分子质量(Mr)约31×103的位置上可见明显的蛋白条带,并与MSA2基因编码序列推断的Mr相符. 结论恶性疟原虫裂殖子表面抗原2可在M.smegmatis中表达,这些结果将为恶性疟原虫多价BCG疫苗的研制提供有用的资料.
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结核杆菌Ag85B DNA疫苗的制备及其免疫效应初探
将结核杆菌抗原Ag85B基因克隆到真核表达质粒pcDNA3中,构建成重组pcDNA3-Ag85B,作为抗结核的DNA疫苗,观察其对小鼠免疫应答的能力,为进一步研制抗结核疫苗提供依据.
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乙型脑炎病毒减毒活疫苗生产株SA14-14-2基因组全序列的测定
目的对乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2生产株进行全序列测定和分析,为进一步了解其基因组结构与疫苗减毒机制的关系及研究疫苗生产的遗传学质控标准奠定基础. 方法根据已发表的SA14-14-2株及SA14株的序列,设计6对相互重叠片段的引物,通过RT-PCR扩增出SA14-14-2疫苗生产株的cDNA片段,分别克隆到pGEM-T载体,转化至TG1受体菌中,挑取阳性克隆进行鉴定后测定全序列. 结果 SA14-14-2生产株基因组全序列长10?976个核苷酸,96到10?394为一个长开放读码框,编码3?432个氨基酸.与国外测定的SA14和SA14-14-2株的核苷酸序列和氨基酸序列相比,同源性均在99%以上,突变位点分散于各个区域,以往推测的7个可能与减毒相关的位点均未发生改变.1?296～1?506间有4个突变位点,有可能作为疫苗质控的遗传学标记. 结论乙脑减毒活疫苗生产株的基因组全序列基本类似于已发表的序列,若干不同位点产生的原因可能在于病毒株的不同传代.全序列的测定对于研究疫苗株的减毒机理及疫苗的遗传学质控标准具有一定意义.
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猪囊尾蚴保护性抗原cC1的疫苗研究
囊虫病是由猪带绦虫幼虫-囊尾蚴寄生于人和猪体引起的人、畜共患病,在我国囊虫病也有广泛的流行区域.抗原cC1是以囊虫病患者、病猪血清为探针从猪囊尾蚴cDNA文库中筛选出的具有高度特异性的人、猪共同抗原[1].以抗原cC1为目的基因构建了含有全长cC1 cDNA的重组质粒p3-cC1,同时制备并纯化了重组抗原cC1,以p3-cC1为DNA疫苗,cC1蛋白加弗氏佐剂为抗原佐剂疫苗,用这两种不同形式的疫苗免疫接种小鼠观察免疫应答.
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哮喘患者诱导痰中GM-CSF mRNA表达的研究
目的利用非创伤方法获取样本的方法,在细胞和分子水平上探讨哮喘气道炎症的指标. 方法 3%高渗盐水诱导痰液,利用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测哮喘患者治疗前后诱导痰中炎性细胞粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)信使核糖核酸(mRNA)表达和各种炎性细胞的变化. 结果哮喘组15例,痰中嗜酸细胞百分数为(33.4±6.7)%,与慢性支气管炎(慢支炎)组(15例)的(2.1±0.4)%和对照组(10例)的(0.8±0.3)%比较,差异有显著性(P＜0.05);哮喘组诱导痰中的炎性细胞GM-CSF mRNA为0.32±0.05,与慢支炎组的0.19±0.02和对照组0.06±0.03比较,差异有显著性(P＜0.05),慢支炎组与对照组比较,差异有显著性(P＜0.05).哮喘患者(7例)治疗后诱导痰中嗜酸细胞为(32.6±11.9)%,与治疗前(29.6±8.7)%比较,差异无显著性(P＞0.05);诱导痰中炎性细胞GM-CSF mRNA表达为0.42±0.12,与治疗前的0.66±0.26相比,差异有显著性(P＜0.05). 结论诱导痰中炎性细胞GM-CSF mRNA表达增高是一较特异的气道炎症指标.
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雷公藤抑制致敏小鼠T细胞IL-5 mRNA的表达及核因子NFAT活性
目的探讨雷公藤内酯醇(TP)对致敏小鼠T淋巴细胞IL-5 mRNA表达的影响及其机制. 方法采用卵蛋白(OVA)致敏的方法建立模型;运用原位杂交染色法(ISH)观察TP对T淋巴细胞IL-5 mRNA表达的影响;通过凝胶电泳迁移率实验(EMSA)对CD4+T淋巴细胞核转录因子NFAT的DNA结合活性进行检测,同时就TP的作用与地塞米松(DM)相比较. 结果致敏小鼠T淋巴细胞IL-5 mRNA表达显著高于正常对照组(P＜0.01),经TP、DM处理后,其IL-5 mRNA表达显著低于致敏组(P＜0.01).致敏小鼠CD4+T淋巴细胞体外经刀豆蛋白A(ConA)刺激后,NFAT的DNA结合活性与正常对照组比较显著增强,并呈时间依赖关系,经TP、DM处理后,NFAT的DNA结合活性显著减弱. 结论 TP抑制IL-5基因转录的分子机制可能与其抑制NFAT的DNA结合活性有关.
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γ IP-10和Mig 通过趋化因子CXC受体3激活嗜酸性粒细胞的NFAT
目的研究γ IP-10和Mig通过趋化因子CXC受体3(CXCR3)激活嗜酸性粒细胞的活化细胞核因子(nuclear factor of activated T lymphocytes,NFAT)作用. 方法嗜酸性粒细胞的纯化技术、流式细胞术、实时定量逆转录PCR (RT-PCR)、核提取物和电泳移动性转变测定等方法进行测定与分析. 结果 CXCR3大量在嗜酸性粒细胞上表达.通过流式细胞仪及实时定量RT-PCR技术检测证明,IL-2和IL-10上调或下调嗜酸性粒细胞上CXCR3的蛋白和mRNA表达水平.其配体γ IP-10和Mig可以引起嗜酸性粒细胞中的NFAT复合体的核易位而激活NFAT1和NFAT4. 结论 CXCR3-γ IP-10和-Mig受体-配体以及IL-2和IL-10对CXCR3表达的调节作用可能在过敏炎症过程(包括启动、发展和结局的病理生理过程)的细胞因子/趋化因子环境中发挥特别重要的作用.
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内毒素解毒物质研究进展
内毒素是G-细菌细胞壁外膜的LPS成分,可激活单核/巨噬细胞、肝Kupffer细胞、血管内皮细胞等,并诱生TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8等炎性细胞因子及氧自由基等化学介质的释放,诱发全身炎症反应综合征(包括感染性休克)和肝脏等组织器官的严重损伤[1].人体内也有多种蛋白质分子是人或动物体内天然存在的内毒素解毒物质,能直接或间接地拮抗LPS的毒性作用,具有十分重要的免疫防御意义.本文对相关研究概况介绍如下.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
