DC-CIK 联合索拉菲尼对肺腺癌细胞的抗瘤效应及机制研究

目的：研究树突状细胞共培养的细胞因子诱导的杀伤细胞（dendritic cell co-cultured cytokine-induced killer cells，DC-CIK）联合索拉菲尼对肺腺癌细胞 A549（KRAS 基因突变型）和 PC-9（EGFR 基因突变型）的抗瘤效应及其机制。方法从肺癌患者外周血单个核细胞（PBMC）中常规诱导 DC 与 CIK，1周后共培养，收集第7天 DC-CIK，流式细胞术（FCM）分析其表型。MTT 法检测索拉菲尼对肿瘤细胞的半数抑制浓度（IC50）。以 DC-CIK 和/或索拉菲尼处理肿瘤细胞，CCK-8法和实时无标记细胞分析技术（real-time cellular analysis，RTCA）分别检测和动态监测肿瘤细胞的增殖情况；Annexin-V/ PI 双染法检测凋亡率。实时荧光定量 PCR 及 FCM 分别检测索拉菲尼作用24 h 后自然杀伤细胞活化性配体（NKG2DLs）的 mRNA 和蛋白表达。结果索拉菲尼对 A549和 PC-9作用24 h 的IC50差异无统计学意义（P﹥0.05）。联合组中的增殖抑制率和总凋亡率显著高于单一因素组，且增殖抑制率随效靶比增加而提高（P﹤0.05）；而联合组中的标准化细胞指数明显低于单一因素组。NKG2D封闭可以减弱 DC-CIK 的增殖抑制作用（P﹤0.05）。5μmol/ L 索拉菲尼作用24 h 后，肿瘤细胞中NKG2DLs（ULBP1、UBLP2、ULBP3）的 mRNA 和蛋白质的表达量均有不同程度增加。结论索拉菲尼对 KRAS 基因突变型和 EGFR 基因突变型肺腺癌细胞的增殖抑制作用差异无统计学意义；DC-CIK 联合索拉菲尼对肿瘤细胞的抗瘤作用明显优于单一因素，可能是通过调节 NKG2D-NKG2DLs 通路和凋亡诱导作用实现的。

乙型肝炎患者外周血趋化因子 CXCL13表达水平与 Tfh 细胞亚群分布的相互关系及其临床意义

目的：研究滤泡性辅助性 T 细胞（follicular helper T cells，Tfh）各亚群在不同免疫分期的乙型肝炎患者中的分布以及 CXCL13与 Tfh 亚群分布之间的关系。方法流式细胞术检测 Tfh 细胞各个亚群在乙型肝炎患者中的分布。ELISA 检测乙型肝炎患者血清中 CXCL13的含量。RT-PCR 及 Western blot 检测 CXCL13在 HepG2和 HepG2.2.1.5细胞中的表达水平。结果在乙型肝炎免疫激活期内，Tfh1细胞比例明显升高；在乙型肝炎免疫耐受期内，Tfh2细胞比例明显升高；Tfh17细胞比例在免疫耐受期和免疫激活期之间无明显差异，但均高于血清 HBsAg 转归患者（RP）组和健康对照组。CXCL13水平与 Tfh2细胞比例呈正相关，同时，乙型肝炎病毒（HBV）能够上调 CXCL13的表达量。结论 HBV 可能通过上调CXCL13的表达量从而诱导 Tfh2细胞比例升高，导致机体免疫耐受的发生。通过阐明 Tfh1、Tfh2和 Tfh17各自的功能，以了解三者之间的型别转换对进一步研究 HBV 诱导的免疫抑制效应具有重要意义。

海洋弧菌鉴定方法学评价

近年来，由海洋细菌导致的感染越来越常见，弧菌是海洋细菌中常见的类群之一，可引起人类腹泻、菌血症及外伤感染，严重时可导致死亡。目前，对海洋弧菌尚缺乏快速可靠的鉴定方法。16S rRNA 序列分析目前被公认为细菌鉴定的金标准。然而由于海洋细菌进化缓慢，且基因具有高同源性，16S rRNA 测序并不能对海洋弧菌进行可靠鉴定。编码 RNA 聚合酶β亚基的基因 rpoB 为序列较长的单拷贝基因，可以克服16S rRNA 的高度保守性。至今为止，许多研究已经证明 rpoB 基因可用于各种细菌的分类，包括芽孢杆菌、军团菌、分枝杆菌、葡萄球菌等［1］。基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（ matrix-assisted laser desorption / ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF/ TOF MS）技术是近年发展起来的一种全新的用于微生物快速鉴定的技术，具有快速、稳定、准确、重复性好的特点。为促进海洋弧菌的快速可靠鉴定，本研究利用16S rRNA 测序、rpoB 测序和MALDI- TOF/ TOF MS 3种技术对128株海洋弧菌同时进行鉴定，对比分析检测结果并进行方法学评估。

杭州地区产 KPC 酶大肠埃希菌耐药性及流行性分析

目的：了解产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）大肠埃希菌的流行情况，加强医院感染控制及防止多重耐药菌大范围播散。方法收集2012年7月至2014年1月杭州市中医院、浙江大学医学院附属第一医院、浙江省中医院和浙江省人民医院共25株碳青霉烯类抗生素耐药大肠埃希菌。利用 K-B 纸片法测试所有菌株对22种常用抗菌药物的敏感性；PCR 扩增确认 blaKPC 基因，改良Hodge 试验确认菌株是否产碳青霉烯酶；脉冲场凝胶电泳（PFGE）及多位点序列分型（MLST）技术进行菌株同源性分析。结果25株大肠埃希菌均产 KPC 酶，编码 blaKPC-2基因。这些产 KPC 酶菌株对抗菌药物的耐药率较高，尤其对几乎所有β-内酰胺类药物耐药。PFGE 分型将25株菌株分为3个主要同源克隆群，克隆群 A（4株）、克隆群 B（5株）和克隆群 C（2株），其余14株为散发克隆。MLST 分型则分为8个 ST 型，其中以 ST131型为主，共有14株（占56%），另外还包括 ST167型3株，ST2003型3株，其余 ST 型各有1株，这些 ST 型之间同源性相距较远。PFGE 分型和 MLST 分型结果基本一致。结论目前我国杭州地区产 KPC 酶大肠埃希菌以 ST131型为主，呈多重耐药性，并且在多家医院检出。耐药菌株的流行具有一定的病区集中性，如重症监护室、急诊科，其余多为散发菌株。

2型登革病毒对原代人肝窦内皮细胞凋亡、自噬以及相关基因表达的影响

目的：研究2型登革病毒（DENV-2）感染原代人肝窦内皮细胞（HHSECs）后，HHSECs的凋亡、自噬，细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及 Beclin-1 mRNA 水平的表达，分析 DENV-2致病过程中可能的作用机制。方法用 DENV-2（MOI=1）作用于 HHSECs，Real-time PCR 动态检测 DENV-2 NS1部分序列；CCK-8法动态检测 DENV-2对 HHSECs 的毒性作用。real-time PCR 动态检测被感染 HH-SECs 的 ICAM-1、Beclin-1 mRNA 的表达水平。流式细胞术检测被感染 HHSECs 的细胞凋亡率，以及LC3B 和 ICAM-1的表达。结果被 DENV-2作用后的 HHSECs 有 NS1部分基因序列的表达。DENV-2感染细胞后，CCK-8法检测细胞的抑制率分别为（10.90±1.24）%（12 h）、（16.40±0.42）%（24 h）、（17.00±0.46）%（36 h）、（29.60±0.26）%（48 h）。Real-time PCR 检测 HHSECs 中 Beclin-1及 ICAM-1 mRNA 的表达，以未感染组为对照，2-△△Ct值于24 h 达峰值，分别为46.77±2.55和40.97±4.91。流式细胞术动态观察被 DENV-2感染的 HHSECs 的凋亡，于12 h 较明显，凋亡率为13.17%；36 h 时LC3B 的表达率（35.50%）达到峰值；ICAM-1的表达率分别为9.17%（12 h）、14.7%（24 h）、12.7%（36 h）、11.6%（48 h）。结论 HHSECs对 DENV-2易感。DENV-2可激活 HHSECs，诱导 ICAM-1上调；可促进自噬的发生，于早期诱导 HHSECs 细胞凋亡。

人类免疫缺陷病毒-1 CRF01 AE 毒株在我国的分子传播网络分析

目的：构建我国 HIV-1 CRF01 AE 毒株分子传播网络，并分析网络特征。方法从洛斯阿拉莫斯国家实验室 HIV 基因数据库（Los Alamos database）下载中国地区的 CRF01 AE pol 区基因序列并进行人口学信息核对。通过构建系统进化树、提取传播簇、小基因距离选择及传播网络可视化4个步骤构建传播网络。运用卡方检验分析不同人群参与网络形成的比例和网络中度的分布。描述性分析不同人群和不同地区之间的传播关联。结果2419条序列共形成250个大小介于2~25的传播网络，包括847个节点和610条边。度≥2的个体虽然只占网络中个体总数的26.4%（224/847），但与66.5%（563/847）的个体存在关联。男男同性性行为者（ MSM）、男性异性性行为者、静脉药瘾者（IDUs）及女性异性性行为者参与网络形成的比例分别为37.6%（669/1781）、28.4%（102/359）、16.1%（10/62）和30.4%（66/217），差异有统计学意义（χ2=23.774，P﹤0.001）。MSM 人群中度≥2的比例（10.8%，193/1781）显著高于男性异性性行为者（5.6%，20/359）和女性异性性行为者（4.6%，10/217）（P 值分别为0.002和0.004）。网络中绝大多数（95.5%，639/669）MSM 与其他MSM 之间存在传播关联，仅有2.4%（16/669）的个体与女性异性性行为者之间存在传播关联，但有15.1%（10/66）的女性异性性行为者与 MSM 之间存在传播关联。男性异性性行为者与女性异性性行为者之间存在传播关联的比例为35.3%（36/102），与 MSM 之间具有传播关联的比例为9.8%（10/102）。网络中20.9%（177/847）的个体与其他省份之间存在传播关联。结论较少比例的超级传播者在 CRF01 AE 毒株的分子传播网络形成中起到了核心作用，不同人群和不同地区之间的毒株进行着活跃的传播。

EV68中国分离株 VP1基因高变区的特征分析

目的：了解肠道病毒68（EV68）中国流行株 VP1基因序列的特征。方法通过Clustal W 法与多个国家 EV68的 VP1核酸序列进行比对，邻接法（Neighbor-Joining）构建系统进化树，与标准株 Fermon 相比，对该段区域编码的氨基酸序列进行分析。结果截至2015年底，中国已经分离出80株 EV68。在进化上，突变主要发生在 BC 和 DE 环中，中国分离株 VP1突变位置在83、89、91、94、96、97、98、102、109、139、141、142、143、144、147。并且大多数分离株 VP1编码的氨基酸序列在140位置发生缺失。由进化树可以得出位于 B、C 进化分支的中国分离株分别为53株和21株。结论与标准株 Fermon 相比，发现在 BC-loop 和 DE-loop 发生了很大变化，然而 BC-loop 和 DE-loop 这两个区域与病毒的抗原性和毒力有关。中国 EV68分离株位于 B 和 C 分支上。

《中华微生物学和免疫学杂志》第七届编辑委员会组成人员名单

引起病毒性脑炎 Echo25型肠道病毒龙岩分离株基因特征分析

目的：对从龙岩市病毒性脑炎患者脑脊液（CSF）标本中分离的 Echo25型 VP1区序列进行分析。方法收集龙岩市某医院2012年诊断为病毒性脑炎或中枢神经系统感染的住院病例CSF 标本进行肠道病毒（EV）的分离鉴定，4株经血清中和鉴定为 Echo25型 EV，测定4株分离株的VP1编码区序列，与 GenBank 上已发表的 Echo25型病毒 VP1区进行同源性比较及遗传进化分析。结果4株龙岩分离株 VP1区片段核苷酸序列长度为498 bp，编码166个氨基酸。同源性分析的结果显示，4株龙岩分离株中的3株 VP1区核苷酸相似性为100%，另一株与其他3株相似性为97%。与2010年的北京分离株 KJ957190和2008年的河南分离株 HM031189相似性较高。遗传进化分析显示，4株 Echo25毒株均为 B1基因亚型。结论 Echo25是2012年龙岩市病毒性脑炎病原之一，且出现了不同传播链，提示应加强 EV 的监测，及时掌握 Echo25病毒的遗传变异情况，为相关疾病的防控提供科学依据。

2010-2015年广州市23价肺炎球菌多糖疫苗接种情况及安全性分析

目的：分析广州市23价肺炎球菌多糖疫苗（23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine，PPV23）大规模人群应用情况及接种反应的被动监测结果，评价 PPV23的使用情况及安全性。方法通过广州市生物制品管理信息系统和免疫规划信息系统获得广州市2010—2015年 PPV23预防接种资料；通过疑似预防接种异常反应（adverse event following immunization，AEFI）信息管理系统，收集接种 PPV23后报告的 AEFI 个案；采用描述性流行病学方法分析相关信息。结果2010—2015年广州市共接种 PPV23621059剂，接种主要集中在﹤10岁年龄组，占79.44%；60岁以上年龄组占9.38%。报告 AEFI 243例，发生率为39.13/10万剂。一般反应199例，发生率为32.04/10万剂；异常反应25例，发生率为4.03/10万剂；偶合症16例，发生率为2.58/10万剂；心因性反应3例，发生率为0.48/10万剂；未发现罕见和极罕见不良反应。结论广州市 PPV23的接种人群主要是儿童，老年人群接种率较低，被动监测数据未发现不同于其他疫苗的不良反应，PPV23的接种是安全的。

建立中国广西壮族健康人群外周血T淋巴细胞亚群正常范围值：性别、年龄和民族影响因素的分析

目的：研究和分析不同性别、不同年龄段的广西壮族健康人群外周血中 T 淋巴细胞亚群绝对计数，建立该地区 T 淋巴细胞亚群的实验室参考范围，为免疫缺陷疾病、病毒感染及相关科研等临床诊断和疗效评估提供科学依据。方法使用四色荧光抗体染色和流式细胞仪单平台检测405名来自广西壮族健康人外周血（82名青少年与323名成年人；男性196人与女性209人）T 淋巴细胞亚群（CD45＋、CD3＋、CD4＋、CD8＋）数值。结果广西壮族健康人群（14~59岁）T 淋巴细胞亚群数值正常范围值：CD45＋：2377±696，CD3＋：1503±459，CD4＋：802±253，CD8＋：581±243，CD4＋/ CD8＋：1.52±0.57。未成年人与成年人的 CD45＋、CD3＋、CD8＋细胞计数均值比较差异均有统计学意义（ t =0.000，P﹤0.01），而 CD4＋在两组间比较差异无统计学意义（t=0.373，P﹥0.05）；男女间比较，CD8＋计数差异有统计学意义（t=0.036，P﹤0.05），其他指标差异无统计学意义；与其他少数民族或国家的 T淋巴细胞亚群计数比较差异也有统计学意义；T 淋巴细胞亚群计数随着年龄增长呈明显下降趋势。结论 T 淋巴细胞亚群数值随着年龄增长而下降，不同的民族、年龄和性别有所差异，因此建立当地健康人群 T 淋巴细胞亚群在不同性别和年龄的正常范围值是准确评估当地患者免疫系统状况和免疫缺陷疾病治疗效果的必需工具。

深圳市2014年登革热流行病学和病原学特征研究

目的：研究深圳市2014年登革热疫情的流行病学特征，分析流行毒株的分子进化特征，为今后登革热的防控提供科学指导。方法采用描述性流行病学方法分析2014年深圳市登革热疫情，分别采用胶体金免疫层析法和荧光 PCR 检测疑似登革热患者血清中的特异性 IgM、IgG 抗体和病毒核酸，并用 C6/36细胞对急性期血清进行病毒分离，采用荧光 PCR 方法对其进行型别鉴定。同时扩增病毒 E 基因后进行序列测定，并与不同国家和地区的登革热毒株进行同源性比较和进化树分析。结果2014年深圳市累计报告登革热病例454例，以本地病例为主（占76.21%），输入病例以东南亚国家及周边城市为主（占23.79%）。发病高峰为9—11月（占97.14%）。发病人群以20~50岁青壮年人群为主，占病例总数的76.73%，男女比为1.43∶1。对332份病毒核酸阳性标本进行分型检测，共检出270例，型别以1型登革病毒（DENV-1）为主（占87.41%），其次为 DENV-2（占8.89%）。进化分析发现深圳地区流行的 DENV-1分布在两个分支上，其一为基因Ⅰ亚型，与深圳市2010年首次本地暴发疫情流行株同源性较高；其二为基因Ⅴ亚型，为深圳市首次报道。DENV-2核苷酸序列的差异相对较小，均为基因Ⅳ亚型。结论2014年深圳市报告登革热病例达到历年高峰，其流行具有输入病例与本地传播并存特点，主要是 DENV-1流行，同时今年新出现 DENV-2型病例明显增多，推测主要流行株由东南亚国家及周边城市输入，是否具有地方性登革热流行趋势还需进一步研究。

《中华微生物学和免疫学杂志》书写规范

1.根据 GB/ T 7408-94《数据元和交换格式信息交换日期和时间表示法》，由特定起点与终点定界的时间段的表示，起点与终点之间以一字线为分隔符，而不再用波纹线。示例如下：
　　2001—2004年，而不再表示为2001~2004年，但“~”可以用“至”取代。
　　注意：除了上述时间段之外的其他计数、计量范围的表示，仍然用波纹线“~”表示，如：2~8 kg。

本刊使用的医学缩略语

《中华微生物学和免疫学杂志》征订启事

登革热疫苗研发的机遇与挑战

登革病毒是黄病毒科的单链 RNA 包膜病毒，是导致登革热、登革出血热及登革休克综合征的病原体。登革病毒主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊在全球热带和亚热带地区广泛传播。目前已有数个登革疫苗进入临床试验阶段，赛诺菲巴斯德（Sanofi Pasteur）的四价重组疫苗（CYD）是现在唯一已在部分南亚和美洲国家上市的登革疫苗产品。但该疫苗仍有免疫保护不平衡、增加5岁以下儿童的重症率等缺陷。因此研究可诱导均衡持久的抗登革病毒保护性免疫应答的疫苗仍是我们现在所面临的挑战。本文就登革病毒的免疫机制及疫苗研发过程中遇到的机遇与挑战做一简要综述并对开发新型登革疫苗做出展望。

JC 病毒检测方法研究进展及对比

JC 病毒（John Cunningham virus，JCV）属于乳多空病毒科（Papovaviridae）多瘤病毒属（Orthopolyomavirus），1971年从进行性多灶性白质脑病（ progressive multifocal leukoencephalopathy， PML）患者的脑中分离并以该患者名字命名，普通人群血清阳性检测率为40%~60%，因 AIDS 并发PML 的患者致死率约为50%，对于免疫力缺陷和免疫力低下的既往感染者，还会引起多瘤病毒相关性肾病（polyomavirus-associated nephropathy，PVAN）、病毒血症等相关疾病，并与胃癌、肺癌、食管癌等癌症的发生密切相关，但其致病机理尚未阐明。由于目前无特异的预防和治疗方法，因此在病毒感染早期的准确检测对疾病的诊断和治疗十分关键，尤其在免疫低下的人群中实现高效、精准、及时的检测至关重要。本文对现有 JC 病毒的检测技术进行了分析与总结，一些新兴技术的涌现将为实现临床上快速、高效的检测提供参考。

埃博拉病毒及治疗药物和疫苗的研究进展

埃博拉出血热是由埃博拉病毒（EBOV）引起的一种急性传染病，病死率高达90%。由于埃博拉病毒高传染率和高死亡率，严重危害公共卫生安全，被世界卫生组织定义为高生物安全威胁病毒；但迄今尚未找到高效的应对措施和有效的治疗手段。针对埃博拉病毒的疫苗和药物正在加紧研发，并有部分已经进入临床试验，如治疗性药物 ZMapp、BCX-4430、GS-5734和 DNA 疫苗、腺病毒载体疫苗等。2014年底，美国国立卫生研究院（National Institutes of Health，NIH）宣布其研发的一种疫苗已成功通过临床试验，而我国首个抗埃博拉病毒药物亦已获批，但仅限于紧急情况下使用。本文重点对 EBOV 的治疗性药物和疫苗的研究进展进行综述。

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