中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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抗死亡受体DR5抗体对大鼠佐剂型关节炎的作用机理探讨
目的 研究抗-DR5 McAb对大鼠佐剂型关节炎(AA)的作用及其免疫机理.方法 注射弗式完全佐剂建立AA大鼠模型,尾静脉注射抗-DR5 McAb,观察大鼠关节肿胀度、血清和滑膜液中炎症细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平的变化.RT-PCR检测各组织器官、滑膜和淋巴细胞中DR5mRNA水平的表达,Westem blot分析各组织器官中凋亡相关因子caspase-8、Bcl-2蛋白的表达.结果 抗-DR5 McAb能缓解AA病情,使关节肿胀度降低;血液和滑膜组织细胞产生IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平下降,抑制滑膜细胞和淋巴细胞的过度增殖.各组织器官中caspase-8蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下调.结论 抗-DR5 McAb能用于大鼠AA的治疗,其治疗机制与细胞表面DR5 mRNA的表达、细胞因子IL-β、TNF-α、IFN-γ水平和caspase-8、Bcl-2蛋白表达相关.
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人类B细胞转化为抗体分泌浆细胞的体外研究
目的 体外示踪不同刺激条件下人类B细胞转化为抗体分泌浆细胞的能力.方法 对5名健康自愿者采用B细胞阴性选择磁珠分离法分离和体外培养B细胞,观察4种培养条件下(培养液对照组、PWM组、细胞因子组及PWM+细胞因子组)、不同时间点B细胞转化为抗体分泌浆细胞的能力.采用双荧光标记(FTTC-CD27、PE-CD38)流式细胞技术监测B细胞4种表面标志物的动态变化;采用酶联免疫法(ELISA)测定不同时间点培养上清液中Ig浓度;采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)测定不同时间点抗体分泌B细胞数.结果 B细胞产生抗体浓度明显与培养条件有关.PWM刺激的B细胞培养上清液中Ig浓度高(P=0.003);PWM+细胞因子组次之;细胞因子组与对照组差异无统计学意义.流式细胞分析结果显示,培养第7天浆细胞前体达峰,第10天浆细胞百分率达峰.活细胞数以细胞因子组多,培养10 d后仍呈增殖状态;而PWM组很快下降.ELISPOT法测定的Ig分泌B细胞数也以PWM组佳,:PWM+细胞因子组次之.结论 从Ig产生能力看,以PWM组佳;从细胞增殖和浆细胞的存活来看,以细胞因子组佳.表明体外诱导B细胞产生抗体不仅需要有效的刺激原,同时还需要必需的细胞因子信号促使细胞增殖和维持细胞的存活.
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HMGB1对淋巴细胞增殖、凋亡及TH和TC亚群的影响
新近研究发现高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)可作为晚期细胞因子,参与致死性全身炎症反应及其他局部炎症.
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HLA-Cw基因的高分辨分型在造血干细胞移植中意义的初步探讨
目的 研究HLA-Cw基因的高分辨分型在急性白血病非亲缘性造血干细胞移植中的意义.方法 对中国造血干细胞捐献者资料库中提供的76例白血病患者(AIL 21例、CML 32例、AML23例),采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)联合序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)方法进行HLA高分辨分型.结果 ALL患者中HLA-Cw高分辨分型的常见位点:Cw*0102、Cw*0304、Cw*0302、Cw*0702、Cw*0801;表型频率分别为0.57、0.33、0.19、0.14、0.14.ALL患者与志愿者相比其Cw*0102、Cw*0304的表型频率差异有统计学意义,P＜0.05;而Cw*0302、Cw*0702、Cw*0801的表型频率无统计学意义,P＞0.05.7例ALL患者与供者HLA的10个位点全相合,占33.3%,HLA-Cw全相合常见的基因亚位点为Cw*0102(4/7),次之为Cw*0702(2/7).CML患者中HLA-Cw高分辨分型的常见位点:Cw*0702、Cw*0102、Cw*0304、Cw*0801、Cw*0401、Cw*0303;表型频率分别为0.41、0.34、0.22、O.19、O.16、0.13,这些基因位点与志愿者相比其表型频率均无统计学意义,P＞0.05.8例患者与供者的10个位点全相合,占25.0%,HLA-Cw全相合常见的基因亚位点为Cw*0702(5/8),次之为Cw*0304(3/8).在23例AML患者中4例与供者HLA的10个位点全相合患者均为M2型.结论在ALL患者中其Cw*0102和Cw*0304基因表型频率明显增高,有利于ALL患者寻找到相合位点的供体.HLA-Cw基因是造成移植物抗宿主病(GVHD)发生和影响移植效果的重要因素,在非亲缘性和单倍体移植中必须进行HLA-Cw基因的高分辨检测.
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新等位基因HLA-A*240212的认定
目的 发现和认定1个HLA新等位基因.方法 应用PCR-SSO基因分型技术筛选可能的HLA新等位基因,PCR产物测序,确认与同源HLA等位基因序列的差异.结果 发现一个样品的HLA-A位点结果异常.其序列与已知所有HLA-A等位基因序列不一致,与同源性高等位基因A*24020101的差异只是在第2外显子区域中的230位碱基发生了C→T碱基的替换,但并未改变第77密码子编码的氨基酸.结论 该等位基因为HLA-A位点的1个新等位基因,已被WHO HLA因子命名委员会于2006年8月23日正式命名为HLA-A*240212.
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前MRSA的检测及mec复合体分析
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的mecA 基因的表达受到多种因素的影响,mecR1-mec Ⅰ-mecA调控系统发挥重要的作用.
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肺炎链球菌pbp2B基因突变与耐药表型关系的研究
肺炎链球菌主要通过青霉素结合蛋白基因突变,从而改变细胞壁上高相对分子质量青霉素结合蛋白(PBP)的结构,降低了其对抗生素分子的亲和性而产生对青霉素等β内酰胺类抗生素的耐药性.
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大肠杆菌O120 O-抗原基因簇的破译及特异分子标识的鉴定
目的 完成产志贺毒素大肠杆菌O120 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定检测用特异分子标识.方法 利用鸟枪法进行O-抗原基因簇序列的测定,进行生物信息学方法分析发现基因并预测基因功能,利用PCR方法筛选针对大肠杆菌O120特异基因和特异引物,利用基因芯片方法筛选特异探针.结果 O-抗原基因簇序列全长12 485 bp,共含有10个基因: dTDP-鼠李糖合成途径基因(rmlB、rmlD、rmlA和rmlC),O-抗原转运酶基因(wzx),O-抗原聚合酶基因(wzy),3个糖基转移酶基因和1个功能未确定的基因.另外筛选和鉴定了2个特异基因、4对特异引物和6条特异探针,在模拟样品的鉴定中得到验证.结论 多种特异分子标识可从样品中特异地检测出大肠杆菌O120,具有快速、灵敏和准确进行分子分型的优点.
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在MRSA中鉴定出变异型SCCmec遗传元件
近年来,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)所致感染的发生率无论在医院内或社区中都有很快的上升,给临床治疗带来极大的困难.
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幽门螺杆菌过氧化氢酶对SW480细胞中NF-κB和ERK通路的影响
目的 观察重组幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)过氧化氢酶(catalase,CAT)对SW480细胞内核转录因子(nuclear factor,NF)κB和细胞外信号调节激酶(extrocellular-signal regulated protein kinase,ERK)通路的影响.方法 用脂多糖(LPS)刺激SW480细胞,再用CAT预孵育和处理;采用免疫组织化学方法检测细胞内NF-κKB的表达水平,应用Western blot方法检测细胞质内IκB的蛋白表达量,电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)观察NFκB的激活;应用激光共聚焦显微镜和Western blot方法观察ERK的核内外易位及磷酸化.结果 重组Hp CAT与商品化CAT的作用相同,预孵后,NF-κB的表达和激活较LPS组和处理组明显减少,ERK核内易位和磷酸化亦明显减少,但较正常对照组仍明显增加.结论 Hp CAT能够抑制NF-κB和ERK通路.
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结核杆菌Rv0309重组蛋白的免疫原性研究
Rv0309重组蛋白可引导重组蛋白进入抗原提呈细胞,本文进行了免疫原性的观察.
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人嗜酸乳杆菌拮抗幽门螺杆菌及其对模拟胃肠道环境抗性的体外研究
目前临床上多采用含铋制剂或抑酸剂(一般为PPI类药物)加上两种抗生素的三联、四联疗法根除幽门螺杆菌(Hp)感染,但随着抗生素的广泛应用以及同类药物交叉使用,除不良反应外,人群耐药性也不断增加.
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金黄色葡萄球菌RAP重组蛋白的高效表达及其免疫原性初步研究
金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)所产生的一系列毒素由agr 基因所编码并受细胞内的调节因子RNAⅢ调控,RNAⅢ的转录由细菌本身分泌的RNAⅢ激活蛋白(RNAⅢ-activating protein,RAP)诱导激活[1].
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人源抗呼吸道合胞病毒基因工程单克隆抗体Fab段基因的筛选和表达
目的 采用噬菌体表面呈现和重组抗体技术构建人噬菌体抗体基因库,筛选获得人源抗呼吸道合胞病毒(RSV)Fab段基因并在原核细胞中表达.为研制安全、有效的预防和治疗RSV感染的制剂奠定基础.方法 从RSV感染患儿恢复期外周血淋巴细胞中提取细胞总RNA,用一组人IgG Fab特异性引物,通过RT-PCR扩增得到一组轻链(κ和λ)和重链Fab段基因,并将此轻链和重链基因片段克隆于pComb3噬菌体载体,电转化XL1-Blu菌构建成抗RSV噬菌体抗体基因库.用纯化病毒颗粒作抗原对此抗体库进行了富集筛选,得到了特异性针对RSV的人源单克隆抗体Fab段基因,并在大肠杆菌中获得有效表达.用ELJSA方法检测了此Fab抗体的抗原特异性,并对阳性克隆进行了基因序列分析.结果 所构建的抗体库库容为108,从此抗体库中筛选得到的阳性克隆所表达的Fab抗体能与RSV纯化抗原特异性结合,保留了对RSV的抗原特异性.核苷酸序列分析证实,所获得的阳性克隆基因为人源IgG基因.结论 本实验获得了特异性抗RSV Fab抗体基因并在大肠杆菌中获得表达,表达产物能与RSV抗原特异性结合.
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人、猪、禽戊型肝炎病毒血清学关系的研究
目的 研究人、猪、禽戊型肝炎病毒(HEV)的血清学关系.方法 应用ELISA分别以人、猪、禽HEV ORF2重组蛋白p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清及其他标本中抗-HEV IgG,用SAS软件进行统计学分析,同时进行序列同源性比较.结果 p166human和p166swine对HEV实验感染动物血清、HEV ORF2重组蛋白免疫血清和单克隆抗体均呈阳性反应,而p268avian均呈阴性反应.以p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清抗.HEV 1gG,戊型肝炎患者血清检出率分别为98.5%、97.7%和1.5%,正常人血清为10.0%、10.0%和4.0%,猪血清为26.9%、25.6%和1.3%,鸡血清为4.3%、2.2%和33.3%.p268avian与p166human或p166swine的检出率差异有统计学意义(P＜0.001).相关性分析表明,p166human和p166swine对不同样本的检测均呈直线正相关,而p268avian与p166human或p166swine无直线相关性.人和猪HEV pORF2的序列同源性在88.2%～99.2%,而禽HEV与人、猪HEV pORF2的同源性仅为45.5%～46.1%,其中含有多个插入和缺失突变.结论 人和猪HEV血清学关系密切,而禽HEV与人、猪HEV抗原性差异有统计学意义,无血清学相关性.因此禽HEV与人、猪HEV的关系应予进一步考证.
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一株致普通棉耳狨猴严重下呼吸道感染的副粘病毒种系进化分析
目的 探讨副粘病毒Tianjin株的种系进化地位.方法 将副粘病毒Tianjin株HN核苷酸、氨基酸序列与GenBank发布的副粘病毒相应序列进行比较,构建种系进化树,阐明副粘病毒Tianjin株在副粘病毒科中的分类地位.结果 基于HN核苷酸序列的种系进化分析表明,副粘病毒Tianjin株属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、呼吸道病毒属,与仙台病毒亲缘关系近.Tianjin株与仙台病毒BB1株HN核苷酸、氨基酸序列同源性分别为94.8%、95.1%,与其他仙台病毒,在84.8%～88.7%和89.6%～91.7%之间.Tianjin株与BB1株HN核苷酸序列的差异明显大于同一进化分支内的仙台病毒之间的差异.Tianjin株HN蛋白存在18个独特的氨基酸残基变异.结论 结合种系进化分析结果、病毒的宿主来源和致病特点,提示副粘病毒Tianjin株不属于仙台病毒现有的3个进化分支而自成独立的一支.
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人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞时NF-κB的表达及意义
研究表明人巨细胞病毒(HCMV)感染能激活核转录因子NF-κB出,该因子在病毒完成复制和生活周期中起重要作用.
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表达HPV-16结构蛋白的重组痘苗病毒疫苗免疫效果研究
目的 研究表达HPV-16结构蛋白L1和L2的重组痘苗病毒(rVVL1L2)的免疫效果.方法 以重组痘苗病毒rVVL1L2免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫(ELISA)和酶联免疫斑点(ELISPOT)方法检测重组痘苗病毒诱发小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平;利用C3肿瘤细胞在C57BL/6小鼠中的成瘤模型,观察重组痘苗病毒在抗肿瘤移植实验和肿瘤生长抑制实验中对小鼠的免疫保护效果.结果 重组痘苗病毒rVVL1L2免疫的小鼠,可以检测到针对L1和L2特异的抗体、L1165～173肽特异性的、分泌IFN-γ的T细胞;同时可以观察到免疫后的C57BL/6小鼠,可以有效预防HPV-16相关肿瘤细胞(1.5×105 C3细胞)的攻击;对已产生的肿瘤,可以延缓肿瘤细胞的生长速度.结论 重组痘苗病毒rVVL1L2可以有效诱发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,为研究预防和治疗HPV-16感染的疫苗提供了实验资料.
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TLR4在慢性重型肝炎患者中的表达及意义
Toll样受体4(TLR4)是细胞壁脂多糖(LPS)的特异性受体,可通过特定的细胞信号转导途径介导细胞免疫,以造成机体的损伤.本研究通过检测慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞(淋巴细胞、单核细胞)表面的TLR4表达水平,探讨其在慢性重型肝炎中的意义及作用机制.
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一氧化氮供体和他汀对B组柯萨奇病毒感染的实验研究
目的 研究硝酸酯类和他汀类等一氧化氮(NO)供体的抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用及其特点和机制.方法 用TCID50和空斑形成实验测定CVB3的毒力;MTT法确定NO供体药物的无毒性浓度;利用细胞病变效应(CPE)抑制实验和空斑形成抑制实验分析NO供体药物对CVB3在HeLa细胞和ECV-304细胞中增殖的抑制作用;并分析硝酸甘油(GTN)不同给药次数、NO浓度变化以及NO浓度与GTN对CVB3抑制效应问的相关性.结果 硝酸酯类药物GTN、硝酸异山梨酯可明显抑制CVB3所致的CPE及空斑形成(P＜0.05),他汀类药辛伐他汀、洛伐他汀均未显示抑制CVB3所致的CPE(P＞0.05);CVB3接种前预先与GTN作用、CVB3接种同时加入GTN两种条件下CPE抑制率差异无统计学意义(P＞0.05);CVB3攻击后多次给予GTN的组间CPE抑制率差异无统计学意义(P＞0.05),但在CVB3攻击前不同时间点给予GTN的组间CPE抑制率差异有统计学意义(P＜0,05);NO浓度与不同时间点给予GTN的CPE抑制结果呈正相关(r=0.97,P＜0.01).结论 NO供体类药物硝酸酯类具有明确的抗CVB3感染作用,其抗CVB3增殖的作用与NO浓度呈正相关;他汀类药物在本实验条件下未观察到抗CVB3增殖作用,原因可能是细胞类型与他汀不匹配.
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快速检测副溶血弧菌及其毒力株方法的建立
目的 利用实时PCR技术,建立检测副溶血弧菌及其毒力株的方法.方法 根据副溶血弧菌的跨膜转录激活蛋白toxR基因序列设计引物和改良分子信标(ROX标记),建立检测所有副溶血弧菌菌株的方法.通过与文献报道的检测直接耐热溶血素(TDH)基因的实时PCR体系合并,建立了同时检测副溶血弧菌及其毒力株的双重实时PCR方法.结果 通过对9个属的101株菌株进行试验,所有的52株副溶血弧菌均产生ROX阳性信号(toxR+),其余菌株均检测为阴性,其中46.2%(24/52)的副溶血弧菌产生HEX阳性信号(tdh+).检测toxR基因的实时PCR体系DNA灵敏度为10～100 fg/PCR体系,菌液灵敏度为59.2～592 CFU/ml或2.96～29.6 CFU/PCR体系.另外成功构建了双重实时PCR体系,能同时对副溶血弧菌的toxR和tdh基因进行检测.结论 建立的双重实时PCR体系能同时检测副溶血弧菌及其毒力株,从而为食品的安全检疫提供有效手段.
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鸭乙型肝炎病毒cccDNA Taq Man荧光定量PCR的建立
目的 建立鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA TaqMan荧光定量PCR方法.方法 用pUCm-T载体和PCR纯化产物连接,转染TOP10菌,筛选阳性菌落,提取质粒,制作外标准品;在DHBV基因组负链两侧设计一对引物,并在引物问设计和荧光标记一段TaqMan探针,严格优化反应物的组成和扩增条件,建立了DHBV cccDNA TaqMan荧光定量PCR方法.结果 低可检出104拷贝/ml;批内误差为0.2%～3.14%,批问误差为2.22%～4.43%;在105～102拷贝/ml之间与Ct值具有很好的线性[Ct=-2.8361ln(χ)+41.45,r=-0.9985].结论 该法是一种灵敏度高、特异性强、较为简便的DHBV cccDNA定量检测技术.
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肝细胞癌标志物GPC3表位肽抗体制备及其特性测定
目的 研制针对肝细胞癌标志物磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)的高特异抗体.方法 用Biosun软件预测和分析GPC3的抗原表位肽,人工合成选定的表位肽,与载体蛋白KLH偶联后免疫新西兰大白兔制备抗血清.以抗原亲和层析法制取高纯抗GPC3抗体,对肝癌细胞株HepG2和胎盘组织进行Westem blot印迹及对肝癌组织切片进行免疫组化染色,并用夹心ELISA对肝癌患者的血清进行了检测.结果 选定并合成两条抗原表位肽(命名为GPC3-P1和GPC3-P2),取得高效价抗血清(分别为1:204 800和1:409 600).两种抗GPC3抗体纯度均达到95%以上,在Western blot印迹能特异性地检测到GPC3;在免疫组化染色中均与肿瘤组织GPC3特异性结合,在正常组织中没有染色;夹心ELISA可以检测到肝癌患者血清中的GPC3.结论 该两种抗GPC3不同表位的高特异抗体可用于研制相关肿瘤检测试剂盒.
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斑点金免疫渗滤试验同步检测抗梅毒螺旋体IgM和IgG抗体的研究
目的 探求一种可用于梅毒诊断及疗效考核的简便、快速、可靠的方法.方法 建立检测抗梅毒螺旋体抗体的斑点金免疫渗滤试验(DIGFA),平行检测梅毒患者血清中IgM和IgG抗体,对患者在治疗前和治疗后血清中特异抗体水平的动态变化进行研究;以梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)法为金标准,对临床上疑为梅毒患者的360份血清进行TPHA法和DIGFA法检测对比.结果 用DIGFA法对已确诊为Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期梅毒患者治疗前血清中特异IgM抗体的检出率分别为82.61%(38/46)、100.00%(24/24)和77.78%(14/18);IgG抗体的检出率分别为60.87%(28/46)、91.67%(22/24)和88.89%(16/18);在Ⅰ期梅毒患者血清中特异IgM抗体的阳性率高于1gG抗体(P＜0.05),在Ⅱ期和Ⅲ期梅毒患者血清中,两类抗体的阳性率均较高,且差异无统计学意义(P均＞0.05).58例两类抗体均阳性的梅毒患者经有效药物治疗后3个月、6个月、1年、1.5年、2年连续采血,经DIGFA检测连续观察的结果表明,IgM抗体出现较早,阴转较为明显和迅速,治疗后3个月的阴转率就达31.03%(18/58),1年的阴转率可达93.10%(54/58);而IgG抗体出现较晚,阴转缓慢,治疗后1年的阴转率仅为34.48%(20/54).结论 DIGFA是检测抗梅毒螺旋体抗体的有效方法,早期梅毒的诊断和疗效考核可检测IgM抗体,而IgG抗体的检测则主要用于回忆性诊断,不适用于判断是否治愈或再感染.
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产超广谱β-内酰胺酶和质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型检测
通过PCR基因测序分析两种酶的基因类型,用接合转移试验了解肺炎克雷伯菌耐药基因转移方式,并用纸片扩散试验和微量稀释法测定细菌对17种抗生素的敏感性,现报道如下.
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实时定量PCR快速检测O1群和O139群霍乱弧菌
根据O抗原的不同,霍乱弧菌可分成200多个血清群,其中仅O1群和O139群能引起暴发流行[1-2].
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宁夏回族自治区HIV-1感染者抗病毒治疗前免疫学与病毒学指标调查
目的 了解该地区部分HIV-1感染者抗病毒治疗前CD4 T淋巴细胞、病毒载量分布及耐药性毒株存在情况.方法 利用流式细胞技术对CD4+ T淋巴细胞计数,使用NASBA方法测定病毒载量,利用RT-PCR获得目的基因序列,登陆http://hivdb.stanford.edu分析耐药突变位点.结果 该地区感染人群中66.66%的患者CD4+ T淋巴细胞数＞350个/mm3,患者病毒载量对数平均值为3.784±1.048,检测样本中有2例出现耐药性.结论 该地区HIV-1感染者目前多为无症状期,但病毒拷贝数较高,耐药性毒株流行水平较低.应在该地区加强抗病毒治疗的宣传.
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黑龙江省17例HIV/AIDS患者的病毒亚型及基因序列特征分析
目的 了解黑龙江省内部分人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的亚型及基因序列特征.方法 用巢式聚合酶链反应(nested-PCR),对黑龙江省内17份HIV-1感染者外周血单个核细胞(PBMc)中前病毒脱氧核糖核酸的膜蛋白(env)基因进行扩增,并对C2-V3的核苷酸序列进行测定和分析.结果 系统树分析显示,17份样本中病毒与HIV泰国B(B')亚型聚在一起,基因离散率为(6.94±1.01)%,与欧美B亚型基因离散率为(12.94±2.19)%,与其他亚型的离散率大于20%.对于其V3环四肽序列的分析表明,具有GPGQ的8例,占47.06%;具有GPGR的7例,占41.18%;1例为GQGR;1例为GPGH.通过序列分析预测,大部分利用CCR5辅助受体.结论 所检测的黑龙江省17例HIV-1均为B'亚型,提示黑龙江省的HIV-1流行株可能以B'亚型为主,其V3环顶端四肽序列特征以GPGQ和GPGR为主.
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HIV-1 gag基因p17+24重组抗原表达、纯化及抗原性分析
目的 获得HIV-1型gag基因p17+24重组抗原,分析其免疫原性和探讨开发诊断试剂的可能性.方法 采用PCR技术扩增HIV-1 gag基因p17+p24核酸片段,并克隆入pTrcHis2A表达质粒,在大肠杆菌BL21(DK3)株中表达.用Ni-NTA金属螯合层析法纯化目的蛋白,并用免疫印迹法分析纯化蛋白的抗原特异性.结果 重组质粒在BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导表达一个相对分子质量(Mr)约为51×103的融合重组蛋白,重组蛋白经HIV-1 p17、p24抗原单克隆抗体鉴定,具有抗原特异性.25份HIV阳性血清、180份HIV阴性血清标本初步经临床验证,具有较高的检出敏感性和特异性.结论 成功构建HIV-1型gag基因p17+24抗原表达载体,表达纯化的p17+24重组抗原具有较好的抗原性,可用于诊断试剂的开发.
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DC-SIGN在树突状细胞传播HIV-1中作用的实验研究
目的 探讨DC-SIGN在树突状细胞(DC)传播HIV-1中的作用.方法 用M嗜性或T嗜性HIV-1原代分离株分别刺激未成熟DC(immature DC,iDC))和成熟DC(mature DC,mDC),数量与DC相同的CD4+ T细胞作为对照组,与活化的CD4+ T细胞共培养,用ELISA方法定量检测第4、7、10、14天共培养上清中p24抗原,观察DC在传播HIV-1的作用.预先加入抗DC-SIGN McAb和/或抗ICAM-3 McAb,观察抗DC-SIGN McAb和抗ICAM-3 McAb对DC传播HIV-1作用的影响.结果 用M嗜性HIV-1刺激的iDC以及用M和T嗜性HIV-1刺激的mDC的共培养上清中p24含量均随培养时间延长逐渐增加,显著高于对照组(P=0.001).加入抗DC-SIGN McAb后,共培养上清p24抗原明显降低;加入抗ICAM-3 McAb后上清中p24抗原并不减少.用T嗜性HIV-1刺激的iDC共培养上清中p24含量不随培养时间延长逐渐增加,与对照组相比差异无统计学意义.结论 iDC具有传播M嗜性HIV-1的作用,但不具有传播T嗜性HIV-1的作用;mDC既能将M嗜性也能将T嗜性HIV-1传播给CD4+ T细胞.抗DC-SIGN McAb能够抑制DC传播HIV-1的作用,提示DC-SIGN在DC向T细胞播散HIV-1过程中可能发挥重要作用.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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