急性期川崎病患者p300-TIP60/Sirt1与Foxp3蛋白乙酰化的相关性研究

目的：探讨p300-TIP60/Sirt1对急性期川崎病( KD) Foxp3蛋白乙酰化的影响及其在KD免疫发病机制中的作用。方法急性期KD患儿38例,正常同年龄对照组32例,KD患儿分别于丙种球蛋白( IVIG)治疗前、后直接取血备检。采用免疫共沉淀-印迹法检测外周血CD4+T细胞Foxp3蛋白乙酰化及p300、TIP60和Sirt1结合水平；流式细胞术检测外周血CD4+CD25highFoxp3+细胞(Treg)比例及Foxp3、pAMPK、p300、TIP60、Sirt1蛋白表达水平；实时荧光定量PCR检测Treg细胞细胞毒T淋巴细胞相关抗原4( CTLA-4)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体( GITR )、IL-10、肝激酶 B1(LKB1)、烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)、早期生长应答因子-1(EGR-1)、转化生长因子β受体-1(TGF-βRⅠ) mRNA表达；ELISA检测外周血血浆中TGF-β浓度。结果(1)急性期KD患儿Treg细胞比例、抑制功能相关分子表达( CTLA-4、GITR、IL-10)、Foxp3蛋白及乙酰化水平显著降低( P<0.05),其中KD合并冠状动脉损伤组(KD-CAL+)前述各项均低于无冠状动脉损伤组(KD-CAL-,P<0.05),经IVIG治疗后明显恢复(P<0.05)。(2)急性期KD患儿Treg细胞乙酰化酶p300、TIP60表达及Foxp3结合水平显著下调(P<0.05),而去乙酰化酶 Sirt1表达及 Foxp3结合水平明显增加(P<0.05),且p300/Sirt1、TIP60/Sirt1表达比值与Foxp3蛋白乙酰化水平呈正相关关系(r=0.52、0.46； P<0.05),经IVIG治疗后均明显恢复(P<0.05)。其中KD-CAL+组p300、TIP60表达及Foxp3结合水平明显低于KD-CAL-组(P<0.05),而Sirt1表达及Foxp3结合水平则明显高于后者(P<0.05)。(3)急性期KD患儿血浆TGF-β及Treg细胞TGF-βRⅠ、EGR-1表达显著下调(P<0.05),而LKB1、pAMPK、NAMPT表达明显增加(P<0.05),其中KD-CAL+组前3项明显低于KD-CAL-组(P<0.05),而LKB1、pAMPK、NAMPT表达明显高于KD-CAL-组(P<0.05),经IVIG治疗后均有不同程度恢复(P<0.05)。结论 p300-TIP60/Sirt1表达失衡所导致的Foxp3蛋白乙酰化水平低下可能与急性期KD患儿免疫功能紊乱有关。

钩端螺旋体脂多糖诱生炎性细胞因子及小鼠感染组织中单核-巨噬细胞浸润

目的：了解问号钩端螺旋体脂多糖( L-LPS)诱导人单核细胞或小鼠单核-巨噬细胞产生炎性细胞因子的作用以及问号钩端螺旋体感染后小鼠内脏组织中外周血单核-巨噬细胞浸润情况。方法采用酚水法提取问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株L-LPS并用鲎试验测定其内毒素活性。采用细胞因子抗体芯片，检测L-LPS作用或问号钩端螺旋体赖株感染后人THP-1单核细胞株或小鼠J774A.1单核-巨噬细胞产生细胞因子情况。分别采用HRP标记外周血单核-巨噬细胞特异性CD68抗体免疫组化法和细胞因子抗体芯片，分别检测问号钩端螺旋体赖株感染C3H/HeJ小鼠肺、肝、肾组织中单核-巨噬细胞浸润情况以及血清细胞因子水平。结果 L-LPS凝固鲎试剂活性约为大肠埃希菌脂多糖(E-LPS)的1/5。 L-LPS作用后THP-1或J774A.1细胞分别有29和9种细胞因子水平明显升高(P<0.05或P<0.01)，其中主要促炎细胞因子为IL-6和TNF-α，同时包含多种单核-巨噬细胞趋化因子表达增强。问号钩端螺旋体感染细胞上清或感染小鼠血清中细胞因子检测结果与L-LPS作用细胞相似。问号钩端螺旋体赖株感染小鼠后，肺、肝、肾组织中出现大量外周血单核-巨噬细胞浸润。结论 L-LPS具有很强的诱导单核-巨噬细胞上调多种促炎细胞因子和单核-巨噬细胞趋化因子表达的作用，单核-巨噬细胞是问号钩端螺旋体感染小鼠内脏组织中浸润的主要炎症细胞。

肥胖对猪螺杆菌感染后胃黏膜相关淋巴样组织形成的影响

目的：研究高脂饮食诱导的肥胖对猪螺杆菌( Helicobacter suis, H. suis)感染后小鼠胃黏膜相关淋巴样组织( mucosa associated lymphoid tissue,MALT)形成的影响及其可能的机制。方法将40只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,每组10只,即正常对照组(NC组)、高脂饮食组(HFD组)、H. suis感染组( HS组)和H. suis感染+高脂饮食组( HS+HFD组)。 NC组与HS组给予普通饮食,HFD组与HS+HFD组自感染后第3周开始给予高脂饮食；差异性饮食24周后处死小鼠,取其胃组织行HE染色检测各组小鼠胃黏膜淋巴滤泡的数量与大小；real-time PCR检测各组小鼠胃黏膜瘦素( leptin)及其受体Ob-R、炎症因子IFN-γ与趋化因子CXCL13、CCL2的mRNA表达水平。结果 H. suis感染可诱导小鼠胃黏膜滤泡的形成；与HS组相比,HS+HFD组小鼠胃黏膜淋巴滤泡的数量与大小明显增加,胃黏膜leptin及其受体Ob-R,IFN-γ、CXCL13、CCL2的mRNA表达水平亦明显增加。结论高脂饮食诱导的肥胖可促进H. suis感染后胃MALT的形成,其机制可能与肥胖时脂肪因子leptin及相关炎症因子与趋化因子的表达上调有关。

创伤弧菌溶细胞素对小鼠脾脏和肺脏T细胞细胞毒活性的差异性影响

目的：研究重组创伤弧菌溶细胞素( rVvhA)对小鼠脾脏和肺脏T细胞亚群细胞毒活性作用及其组织差异性，了解其对脾脏和肺脏CD4+初始T细胞和效应T细胞存活率的影响。方法利用大肠杆菌表达系统重组表达创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)，体外作用于C57BL/6小鼠的脾脏和肺脏单细胞悬液，采用流式细胞术结合CD45.2、CD4、CD8、CD44、CD62L和Live/Dead等荧光抗体(或探针)检测分析rVvhA对CD4+T细胞和CD8+T细胞的存活率及组织差异性的影响。结果 rVvhA体外作用于脾脏和肺脏的单细胞悬液6 h后，小鼠脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞的存活率下降且CD4+T细胞对rVvhA的细胞毒性更为敏感，小鼠肺脏CD4+T细胞存活率轻微下降而CD8+T细胞的存活率无明显变化，此外，脾脏CD4+初始T细胞和效应T细胞的存活率均下降，而肺脏CD4+初始T细胞和效应T细胞的存活率均未有明显下降。结论 rVvhA对脾脏和肺脏T细胞亚群细胞毒活性存在组织差异性，而这种差异性可能与组织间的CD4+初始T细胞有关。

重组沙门菌C78-1△crp（pEGFP-WAP-HNP-3）的构建及生物学特性研究

目的：构建大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控下的人防御素3(HNP-3)的重组减毒猪霍乱沙门菌C78-1△crp(pEGFP-WAP-HNP-3),并对其生物学特性进行研究。方法将质粒pEGFP-WAP-HNP-3电转到减毒猪霍乱沙门菌C78-1△crp感受态,构建重组沙门菌C78-1△crp( pEGFP-WAP-HNP-3),并进一步研究其生物学特性。结果 PCR和测序结果表明C78-1△crp(pEGFP-WAP-HNP-3)构建成功。进行生物学特性分析表明,重组菌与亲本株C78-1相比失去了利用麦芽糖、鼠李糖等的能力,生长速度显著减慢,能够稳定遗传所携带的HNP-3基因,重组菌株的毒力约是亲本株C78-1的1/300,且重组菌注射到兔乳腺后的分泌乳中能够检测到HNP-3融合蛋白条带。结论重组菌C78-1△crp(pEGFP-WAP-HNP-3)构建成功,并能够分泌HNP-3融合蛋白,为进一步研究重组菌的功能提供基础资料。

宫颈鳞癌患者放疗前后外周血中MDSC和调节性T细胞含量变化及其与放疗敏感性的关系

目的：探讨宫颈鳞癌患者在放疗前后其外周血中髓系抑制性细胞( MDSC)和调节性T细胞( Treg)含量变化及其与临床病理特征、放疗敏感性之间的关系。方法临床收集自2011年3月至2015年3月病理诊断为宫颈鳞癌的患者65例,收集其放疗前、中、后7 d的外周血。利用流式细胞术检测患者经放疗前后外周血中MDSC和Treg细胞含量变化,并分析MDSC和Treg细胞含量变化与宫颈鳞癌患者临床病理间的关系、对放疗敏感性的影响及其相关性。结果宫颈鳞癌患者外周血中MDSC和Treg细胞含量显著高于健康人(P<0.05)；而与放疗前相比,放疗中、后期宫颈鳞癌患者外周血中MDSC和Treg细胞含量逐渐降低(P<0.05)；宫颈鳞癌患者放疗后外周血中MDSC含量与肿瘤分化程度、淋巴转移性、肿瘤大小、间质浸润深度、血管浸润性均相关(P<0.05)；而Treg细胞含量变化也与肿瘤分化程度、淋巴转移性、间质浸润深度、血管浸润性相关(P<0.05)；放疗敏感组宫颈鳞癌患者在放疗前、中、后外周血中MDSC和Treg细胞含量均显著低于不敏感组(P<0.05)；宫颈鳞癌患者放疗前、中、后外周血中MDSC和Treg细胞含量变化具有相关性(r=0.695,0.677,0.595,P<0.05)。结论放疗能够降低宫颈鳞癌患者外周血中MDSC和Treg细胞含量,而MDSC和Treg细胞含量变化影响宫颈鳞癌患者放疗疗效和敏感性,它们可作为检测宫颈鳞癌患者放疗敏感性的生物指标之一。

MBL基因多态性与青海藏族肺结核病易感性的相关性研究

目的：探讨甘露糖结合凝聚素( mannose-binding lectin,MBL )基因多态性与青海地区藏族肺结核病易感性的相关性。方法以青海地区藏族肺结核患者(n=99)为实验组,青海地区藏族健康者(n=89)为对照组。启动区-550H/L(rs11003125)、+4P/Q(rs7095891)、-221X/Y(rs7096206)以及结构区的外显子1密码子52的 D ( rs5030737)、密码子54的 B ( rs1800450)、密码子57的 C (1800451),通过TaqMan探针实时定量聚合酶链反应(TaqMan探针法)检测出各位点的基因型。应用SPSS20.0统计软件,组间比较采用χ2检验,检验水准α=0.05。结果通过TaqMan探针法检测MBL基因的6个SNP位点中rs1800450、rs7095891和rs7096206位点两组间基因型比较差异有统计学意义(P<0.05)；rs1800451和rsrs11003125位点两组间基因型比较无差异(P>0.05)。结论 MBL基因的rs1800450、rs7096206和rs7095891位点多态性可能与青海地区藏族肺结核病易感性相关。

非结核分枝杆菌的基因组学

非结核分枝杆菌( nontuberculous mycobacteria, NTM)广泛存在于自然界中,约三分之一是机会性致病菌,可能引起NTM病。虽然已对越来越多的NTM菌株进行了基因组测序,但基因组中何种基因更为重要及基因调控机制尚不清楚。近年来,分子生物学技术的快速进展为了解基因组学特征提供了有利的工具,比较基因组学的研究尤其受益于基因信息的不断扩充。对基因组信息的分析、比较也有利于开展基因功能和调节机制的研究。人们对于NTM的遗传多样性、毒力及耐药特性等都有了更深入的认识。本文对目前已得到基因组测序资料的NTM菌株(鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌)的基因组学特点进行了综述,同时对分子分型方法如何有助于在实验室中分离鉴定不同的NTM菌株进行了探讨。

新疆出血热病毒多表位基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

目的：原核表达纯化新疆出血热病毒( XHFV) YL04057株的多表位肽,以其为抗原建立检测动物血清抗XHFV抗体的间接ELISA方法。方法依照对XHFV YL04057株核蛋白和糖蛋白氨基酸序列的亲水性和抗原决定簇位点分析,设计包含有保守性强的共6个优势B细胞表位的多表位基因片段,经串联重复成为双拷贝多表位基因 MEPX2,采用化学法合成后构建原核表达质粒pET-32a(+)-MEPX2,经诱导表达和镍柱亲和层析纯化获得重组rMEPX2多表位肽,Western blot检测其抗原性,以其作为包被抗原采用方阵滴定法建立间接ELISA方法检测动物血清,并与商品化试剂盒检测结果进行比较。结果经双酶切鉴定和测序证实构建的重组表达质粒pET-32a(+)-MEPX2正确,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定证实rMEPX2表达正确,相对分子质量约为49×103,能被His-tag单抗及天然感染XHFV的羊血清特异性识别。以纯化的rMEPX2为抗原建立了检测XHFV IgG抗体的间接ELISA方法,用此法对108份绵羊血清样品进行检测,并与双抗原夹心法商品化试剂盒检测比较,结果显示基于rMEPX2建立的检测方法具有较高的特异性。结论成功获得抗原性强的重组多表位肽rMEPX2,以其为抗原建立的间接ELISA方法可用于XHFV特异性抗体的检测。

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制EV71复制

目的：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对肠道病毒71型(EV71)的特定基因进行编辑，评价其抑制EV71复制的效应。方法针对EV71的VP4区设计CRISPR/Cas9表达质粒pCas-Guide-GFP-G1及含PAM序列的DNA片段并转染Vero细胞株。采用噻唑蓝( MTT)法测定细胞毒性，转染后接种病毒观察细胞病变作用( CPE)，荧光定量RT-PCR法检测EV71含量，免疫共沉淀结合荧光定量RT-PCR法测定 Cas9-gRNA 在细胞内与 EV71 RNA 特异性结合的能力。结果成功构建pCas-Guide-GFP-G1表达质粒；转染细胞后未见明显细胞毒性效应；细胞转染后接种病毒发现pCas-Guide-GFP-G1+PAM1组细胞病变明显少于其他对照组；培养上清中 EV71含量较对照组降低了40.4%(P=0.056)，细胞中 EV71含量较对照组降低了52.8%(P=0.014)；pCas-Guide-GFP-G1+PAM1组在细胞内与 EV71 RNA 特异性结合能力高。结论针对 EV71的 VP4基因设计的CRISPR/Cas9表达质粒在特定PAM存在下能通过对EV71基因组的剪切实现抑制EV71病毒复制的作用，可以为EV71治疗提供新的途径。

合并神经症状的手足口病病原学和流行病学特征

目的：了解合并神经症状手足口病病例的病原构成及其流行病学特征。方法采集合并神经症状的手足口病病例的临床标本,荧光RT-PCR方法检测病原,包括EV71、CA16和其他肠道病毒。收集病例的临床及流行病学信息,采用SPSS软件进行统计分析。结果肠道病毒核酸阳性病例133例,主要集中在3岁以下儿童(89.4%)。不同年龄组之间其他肠道病毒构成比差异有统计学意义(P<0.05),3岁及以上年龄组其他肠道病毒的构成比占45.5%；不足1岁组CA16病毒所致病例占38.5%,3岁及以上年龄段无CA16病毒感染,不同年龄组之间CA16构成比差异有统计学意义(P<0.05)；EV71病毒在所有年龄组中都是主要病原,其构成比在1~3岁患儿间高(84.4%),不同年龄组之间构成比差异有统计学意义(P<0.05)。其他肠道病毒感染的病例相对于EV71/CA16感染的病例出现皮疹和颈项强直的比例差异有统计学意义(P<0.05)。结论合并神经症状的手足口病病例的病原构成在不同年龄组间存在差异,其他肠道病毒较EV71/CA16感染的病例出现皮疹概率低,出现颈项强直的比例高。

20μg重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）在≥16岁人群中的免疫原性研究

目的：评价A公司生产的20μg重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)上市后在≥16岁人群中的免疫原性。方法选择4636名乙肝病毒表面抗原阴性、抗乙肝病毒表面抗原抗体( antibody to HBsAg, anti-HBs)<100 mIU/ml的≥16岁的健康人群为观察对象,按0、1、6月免疫程序接种3剂20μg重组乙肝疫苗。采用化学微粒子发光法检测anti-HBs。结果免疫10 mIU/ml≤anti-HBs<100 mIU/ml人群接种1剂和2剂20μg乙肝疫苗后anti-HBs免疫成功率和几何平均浓度分别为90.24%(703/779)、97.82%(449/459)和1314.35 mIU/ml、2065.96 mIU/ml；免疫前anti-HBs<10 mIU/ml人群接种1剂、2剂和3剂20μg乙肝疫苗后anti-HBs免疫阳转率和高应答率( anti-HBs≥100 mIU/ml)分别为69.16%(74/107)、86.13%(1975/2293)、98.72%(1844/1868)和50.47%(54/107)、56.43%(1294/2293)、87.53%(1635/1868),anti-HBs几何平均浓度分别为47.68 mIU/ml、147.94 mIU/ml、649.15 mIU/ml。结论≥16岁的健康人群按照0、1、6免疫程序接种3剂20μg/ml重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)具有良好的免疫原性。

芜湖地区2006-2015年流行性腮腺炎流行病学特征分析

近10年来,我国流行性腮腺炎(流腮)总体发病率仍处于较高水平。2007年开始全国各地陆续将麻腮风( MMR)三联疫苗纳入常规免疫范围,但由于多数地区存在疫苗免疫时间较短和免疫规划不完善等因素的限制,MMR三联疫苗对流腮的保护作用尚未取得理想的效果。

2016中国生物制品年会在珠海胜利召开

由中国医药企业发展促进会、中国药学会生物药品与质量研究专业委员会、中华预防医学会生物制品分会、中国医药生物技术协会疫苗专业委员会、珠海市食品药品检验所、珠海市医药行业协会共同主办的“2016中国生物制品年会暨第十六次全国生物制品学术研讨会暨珠海市生物医药产业发展合作会议”于11月18日-19日在珠海成功召开。本次年会群英荟萃，亮点纷呈。大会组委会精心准备了54场生物医药研发的专题报告，涉及生物制药领域的新进展、国内外相关领域的新研究成果以及我国生物医药研发政策等。来自国内外384家单位的1500余名代表出席会议。

作者投稿说明

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本刊使用的医学缩略语

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远程投稿系统作者常见问题

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《中华微生物学和免疫学杂志》书写规范

1.根据GB/T 7408-94《数据元和交换格式信息交换日期和时间表示法》，由特定起点与终点定界的时间段的表示，起点与终点之间以一字线为分隔符，而不再用波纹线。

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