中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
sOVA-linker-β2m融合蛋白构建表位特异的靶结构
目的构建融合基因sOVA-linker-β2m,探讨通过内源性途径递呈的肽在细胞表面形成MHCⅠ类分子复合物的情况. 方法构建了真核表达载体pcDNA3/sOVA-linker-β2m及不含有β2m基因的对照载体,以研究β2m是否能在此过程中起到辅助的作用. 结果 RT-PCR与原位杂交结果显示在各转导细胞中均有融合基因的正确表达,且二者的表达水平差异无显著性(P＞0.05).进一步对细胞内、细胞表面H-2Kb-OVA复合物的分布进行分析,表明各转导细胞中均有正确的蛋白质分子翻译合成,并能表达在细胞表面,但融合有β2m基因的EL4/eb2m细胞的表达量远远高于没有融合β2m基因的转导细胞EL4/OVA. 结论β2m基因与特异性抗原肽的融合,易于形成稳定的MHCⅠ类分子复合物,提高抗原呈递效率.
-
放线菌素D/TNF-α诱导大鼠肝干细胞凋亡及HGF的拮抗作用
目的研究TNF-α、肝细胞生长因子(HGF)在肝干细胞的增殖、分化调控及凋亡中的作用. 方法用大鼠肝干细胞系WB F-344细胞进行实验,用MTT法检测细胞毒作用;用DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot方法检测磷酸化MAPK及PI3K蛋白的表达. 结果发现TNF-α单独对WB F-344细胞无明显作用;而TNF-α对放线菌素D(ActD)致敏的WB F-344细胞有明显细胞毒作用.进一步,发现TNF-α能够诱导ActD致敏的WB F-344细胞发生凋亡,在作用9?h即出现细胞凋亡(13.60%),48?h达高峰(51%),并且这种凋亡呈剂量效应关系.我们还发现,HGF可以明显拮抗ActD/TNF-α诱导的WB F-344细胞凋亡,并且呈剂量效应关系.Western blot结果显示,HGF刺激后,磷酸化MAPK蛋白高表达,表明HGF激活了MAPK途径.我们进一步用PI3K特异的抑制剂WT阻断PI3K途径,发现HGF的抗凋亡作用被阻断;然而,用MAPK特异抑制剂U0126阻断MAPK途径后,却并不影响HGF的抗凋亡作用. 结论 TNF-α能诱导ActD致敏的肝干细胞发生凋亡,而HGF则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用;虽然HGF能够激活PI3K及MAPK 2条途径,但其抗凋亡作用是由PI3K途径传导的.
-
分化抗原5C5在人免疫细胞的表达
目的明确5C5蛋白为分化抗原,检测其在人免疫细胞的表达,以及它的信号传导作用. 方法用5C5蛋白免疫小鼠,制备抗5C5蛋白的单抗.用反义技术制备5C5蛋白表达抑制的3D5细胞.用免疫荧光染色和Western印迹确定5C5单抗的特异性.用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定其分化抗原的性质.用双色免疫荧光染色流式细胞术检测5C5分化抗原在多种人免疫细胞的表达.用Fura-3-AM试剂作探针,用激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2+浓度的变化. 结果制备了抗5C5蛋白的特异性单抗.用5C5单抗作探针,从3D5细胞膜免疫沉淀到1条相对分子质量(Mr)为19×103的蛋白带,并在活3D5细胞见阳性免疫荧光染色.5C5分化抗原在人周围血CD19+、CD14+、CD4+、CD8+和CD56+细胞的表达率分别为(33.47±7.9)%、(86.13±6.7)%、(15.79±7.1)%、(18.11±12.77)%和(11.76±7.47)%,在人免疫细胞株的表达率分别为58.0% (Nalm6)、72.7% (3D5)、53.6% (BJAB)、61.0% (Daudi)、6.9% (SKW6)、6.3% (Jurkat)、5.8%(Peer)、21.3% (K562)和39.1% (U937).3D5细胞在5C5单抗刺激下,胞内Ca2+浓度逐渐增高,可达2倍左右,对照小鼠Ig则无此作用. 结论5C5蛋白为一个分化抗原,在人周围血CD14+细胞的表达率高,其次为CD19+细胞,CD4+、CD8+和CD56+细胞的表达率很低.5C5分化抗原有信号传导作用.
-
应用抑制性消减杂交技术分析淋球菌染色体介导的耐药相关核苷酸序列
目的克隆耐药性淋病奈瑟球菌菌株与标准参考菌株之间的差异核苷酸序列. 方法应用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌与标准参考菌株差异DNA消减文库. 结果成功地构建了高特异性的淋球菌耐药菌株DNA消减文库.经对消减文库初步筛选,对其中5个克隆插入的DNA片段进行测序,经GenBank和淋球菌基因组序列库检索分析,证明5 个片段均为未知新序列. 结论淋球菌耐药性相关核苷酸序列的发现将为防治淋球菌感染和研究抗淋球菌抗生素提供新的实验工具.
-
流式细胞术用于细菌抗生素敏感性试验的初步探索
大肠埃希菌ATCC25922、临床分离头孢噻肟(CTX)敏感大肠埃希菌7771、7880、CTX耐药大肠埃希菌7992与浓度范围为(0.015～128)μl/ml的CTX于35℃孵育2?h后,用碘化丙啶(PI)标记上流式细胞仪检测.在一系列药物浓度作用下,各菌株的碘化丙啶荧光强度(MFI)随着药物浓度的升高呈现递增的变化趋势,但是,当抗生素浓度过高,如大于其小抑菌浓度(MIC) 8倍时,菌细胞门所占比例将明显减少,MFI值也会显著下降,表明在高浓度抗生素持续作用下,较多细菌死亡后,菌细胞被裂解.
-
聚类分析在大肠埃希菌耐药性研究中的应用
目的探讨聚类分析在大肠埃希菌临床分离株同类系株的分离及在耐药性监测中的实用价值. 方法用WHONET5E软件对收集的大肠埃希菌的监测数据进行处理,用SPSS10.0对收集到的药敏试验数据进行聚类分析. 结果 (1) 聚类分析可以将同类系菌株与非同类系菌株分成不同的类别,以树状图的形式可以直观地反映菌株间的相似性.(2) 变量的数量和种类的选择对聚类分析的结果会产生明显的影响. 结论利用大肠埃希菌的药物敏感试验数据进行聚类分析可以将产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌与普通株分开,对推断抗生素的临床疗效具有一定意义;同时可以辨别菌株间的相关性,为进行细菌基因同源性研究提供参考数据.
-
伤寒杆菌耐药质粒pRST98毒力基因的研究
目的研究多重耐药伤寒沙门菌耐药质粒pRST98是否具有沙门菌属其他致病菌毒力质粒上的保守基因spv. 方法用QIAGEN试剂盒提取pRST98,精确定量后选用8种限制性核酸内切酶消化,建立该质粒的酶切图谱.用spv特异引物的PCR扩增和spv探针Southern blot法分析pRST98的基因构成. 结果 pRST98酶切图谱显示BglⅡ、PstⅠ和SacⅡ作用后片段均一,是对该质粒进行分子生物学和分子流行病学研究的理想工具.PCR和Southern blot结果显示,伤寒杆菌耐药质粒pRST98上存在其他沙门菌毒力质粒上高度保守基因spv的同源序列. 结论从基因水平首次证实伤寒杆菌耐药质粒pRST98具有多效性,是既编码抗药性又编码细菌毒力的"嵌合型"质粒.
-
山东省部分HIV-1流行株的亚型分析和序列特征研究
目的对山东省HIV-1流行毒株进行亚型分析,并研究其变异特征. 方法采集26份HIV-1感染者的外周静脉抗凝血,提取前病毒DNA进行体外扩增,获得包膜蛋白(env)基因的核酸片段,并对其C2-V3及邻区的核苷酸进行测定和分析. 结果基因和氨基酸序列分析表明,26份标本中存在4种亚型和重组毒株(B′、C、A、A/E),其中B′ 17株,其组内基因距离为11.69±4.19.V3环顶端四肽有6种形式,多的是GPGQ(15株)、GPGR(6株).V3环第11、25位氨基酸出现变异,并有1株呈电荷双阳性. 结论山东省HIV-1流行株亚型较多,有重组毒株出现的可能,基因发生较大变异,HIV-1传播在山东省有加快的趋势.
-
利用新型表达载体一步获得HIV-1核壳蛋白p24纯品
目的利用新型原核表达载体获得人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核壳蛋白p24纯品. 方法采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出HIV-1 HXB2株gag开放阅读框架的内壳蛋白p24的基因片段,将目的基因片段插入到新型表达载体pTXB中构建成重组表达质粒pTXB-p24.表达产物的纯品通过几丁质珠(chitin beads)的亲和与柱上DTT的剪切而得到.用SDS-PAGE和HPLC分析所得纯品的大小和纯度,用Western blot和胶体金实验检测其抗原性. 结果构建的重组表达质粒pTXB-p24经IPTG诱导得到C端融合Intein-CBD的p24蛋白,该蛋白通过几丁质珠(chitin beads)的亲和与柱上DTT的剪切得到纯化的非融合的p24重组蛋白.HPLC分析表明其纯度可达96%,胶体金结果显示纯化的p24可与HIV-1阳性患者的血清反应,具良好的抗原性. 结论利用新型原核表达载体可一步获得纯度为96%的非融合p24抗原纯品,为大规模生产该蛋白提供了可靠的保证.
-
椒蒿提取物对病毒性心肌炎心肌保护作用的研究
椒蒿为菊科植物,民间常作为野菜采食,中药认为有抗风寒作用.本文所用的椒蒿提取物含茴香脑56%.用提取物对病毒性心肌炎的动物模型进行了研究,旨在探讨其心肌保护作用.
-
HIV-2 gp105-gag截短体在毕赤酵母中重组表达研究
目的实现HIV-2ROD gp105-gag截短体重组蛋白tgp105-gag的高效分泌表达,对其表达条件进行研究. 方法用PCR方法获得HIV-2ROD tgp105截短基因,将其与HIV-2ROD gag构建HIV-2ROD tgp105-gag嵌合基因并克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌型表达载体pPIC9中,转化GS115酵母菌,经MD/MM表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆,以甲醇诱导表达后进行SDS-PAGE分析及Western blot证实. 结果 HIV-2ROD tgp105-gag嵌合截短基因在Pichia pastoris酵母系统中获得了有效分泌表达,相对分子质量(Mr)约为140×103,表达量约为16%,表达产物可被HIV-2阳性血清识别.佳表达条件是大于85%的溶解氧,摇瓶转速240r/min,1.0%～1.5%甲醇诱导,培养时间3?d. 结论在Pichia pastoris表达系统中实现了HIV-2ROD tgp105-gag蛋白的有效分泌性表达,表达产物具有良好的抗原特异性.
-
HIV-1感染对NK细胞及其活化性受体CD226表达的影响
目的评价HIV-1感染对NK细胞以及CD226/PTA1表达的影响. 方法采用流式细胞术分析了27例HIV-1感染者以及16例健康献血员NK细胞相关膜抗原,用HIV-1SF33株体外感染外周血单个核细胞(PBMC),进行NK细胞活化表达CD226的动态观察. 结果 27例HIV-1感染者均处于无症状感染期,CD16+CD3-、CD8+CD3-细胞亚群百分率和绝对数均低于健康对照 (P＜0.05),CD16+CD3-和CD8+CD3-细胞中表达CD226的细胞比例显著高于对照 (P＜0.05).HIV-1和PHA均可体外诱导CD226在CD16+NK细胞表面高水平表达. 结论 CD226分子可能参与HIV-1感染诱导的NK细胞活化机制.
-
慢性乙型肝炎患者血清转化生长因子β1与T细胞亚群的关系
慢性乙型肝炎、肝硬化患者细胞免疫功能低下是乙肝病毒不能被清除体外的主要原因之一.我们采用酶联免疫吸附试验测定76例慢性乙肝、肝硬化患者(其中慢性轻度20例、中度20例、重度18例、肝硬化18例)血清TGF-β1和T淋巴细胞亚群(采用抗体致敏的红细胞花环试验).旨在探讨TGF-β1对慢性乙型肝炎细胞免疫功能的作用.
-
从SARS患者肺部病变的病理特点探讨SARS的损伤机理
目的根据严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome, SARS)患者肺部病变的病理特点探讨SARS的损伤机理. 方法在3?500例尸体解剖材料中,找出死亡时有肺部炎症的共842例.对其中病毒性肺炎16例、Good-Pasture综合征2例、自身免疫疾病2例、SARS 1例,共21例进行肺部病变的病理组织学的比较观察. 结果病毒性肺炎的肺部病变主要的病理变化表现为间质性肺炎;自身免疫性疾病病人的肺部病理变化有肺泡表面透明膜形成,肺泡腔内脱落的细胞团,肺泡腔内机化等;SARS病人尸体解剖的肺部病变主要为肺泡腔内细颗粒样或泡状肺水肿,脱屑性肺炎以及机化性肺炎的表现.同时,肺间质内的小动脉出现明显的结构改变,形态学上与自身免疫性疾病的肺损伤相似. 结论机体的变态反应可能是SARS的损伤机理之一.
-
血清sCR1变化与肝病肝功能损伤严重程度的相关性研究
补体系统被侵入的致病微生物激活,产生的C3a、C5a及C567等片段可趋化白细胞从贮存池进入血循环,使循环中的白细胞数量增加;补体C3b片段可粘附抗原物质并与血细胞上的C3b受体(CR1)结合,使吞噬细胞活化释放蛋白水解酶,将CR1连同粘附抗原颗粒水解进入血循环[1],终被肝脏所代谢.如果肝脏功能受到严重损伤,结合有CR1分子的抗原颗粒在血循环中积聚,其积聚的量与肝脏功能损伤的严重程度密切相关[2].
-
髓样细胞核分化抗原在强直性脊柱炎病人的表达
目的通过比较强直性脊柱炎(AS)患者和健康志愿者的基因表达谱,寻找与AS相关的新基因并探讨其在病因和发病机制中的意义. 方法用含588个基因的cDNA微阵列,检测AS和健康志愿者的外周血单个核细胞的基因表达谱,初步筛选出在AS中差异表达的基因,为了进一步验证cDNA微阵列差异表达基因结果,扩大各组病例数,再用RT-PCR技术同时检测、对比健康志愿者和AS患者外周血单个核细胞(PBMC)、关节液单个核细胞(SFMC)和关节滑膜细胞这些差异表达基因的变化. 结果和健康志愿者组的PBMC比较,AS病人骨髓样细胞核分化抗原(MNDA)、迁移抑制因子相关蛋白8(MRP8)和MRP14、粘附分子ICAM-1和integrin β1表达明显增高,其中MNDA和MRP8的变化相关系数为0.793.在AS的SFMC和关节滑膜细胞中,MNDA表达也显著增高(与健康志愿者组PBMC比较,P值分别为0.038和0.027);MNDA区别AS和健康志愿者的统计学鉴别准确率达1.AS病人在接受抗TNF-α单克隆抗体治疗3个月后,MNDA在关节滑膜细胞的表达水平显著下降(P=0.018). 结论 MNDA是AS发病过程中一个重要的并与单核/巨噬细胞致炎密切相关的免疫因子,其可能成为一种用于AS的诊断、治疗监控指标.
-
TH1型/TH2型细胞因子对滋养层及蜕膜内分泌功能的影响
目的探讨辅助T细胞(TH)1型/2型细胞因子对人绒毛组织及蜕膜组织内分泌功能的影响. 方法应用新鲜绒毛组织和蜕膜组织建立体外分泌人绒毛膜促性腺激素(hCG)及催乳素(PRL)的模型.hCG及PRL的分泌水平应用放免法(RIA)进行分析测定. 结果 TH1型细胞因子γ干扰素(IFN-γ)在一定的浓度范围内(10～1?000ng/ml)对绒毛组织分泌hCG有明显的抑制作用(P＜0.01);而TH2型细胞因子白细胞介素4(IL-4)(1～10ng/ml)则有明显的促进作用(P＜0.01).TH1型细胞因子IFN-γ低浓度时(1～10ng/ml)对蜕膜组织分泌PRL有刺激作用(P＜0.05),高浓度时(100～1?000ng/ml)则有抑制作用(P＜0.01);TH2型细胞因子IL-4对PRL分泌的调节作用与对hCG分泌的作用相类似. 结论 TH1型/TH2型细胞因子可能通过影响滋养层及蜕膜内分泌功能而在早期妊娠中起重要的免疫调节作用.
-
异丙酚和硫喷妥钠对胃癌患者围术期TNF-α、IL-6、IFN-α的影响
通过测定胃癌患者围术期血清TNF-α、IL-6、IFN-α浓度的变化,研究异丙酚和硫喷妥钠不同麻醉方法对其的影响.
-
Ⅱ型糖尿病患者红细胞天然免疫功能变化与CR1密度基因多态性的相关分析
目的研究Ⅱ型糖尿病(ⅡDM)患者的红细胞CR1密度基因多态性及红细胞免疫粘附功能,探讨ⅡDM患者红细胞免疫粘附功能低下的原因. 方法分ⅡDM组和健康对照组,用PCR-RELP方法测红细胞CR1密度基因多态性,红细胞天然免疫粘附活性用红细胞C3b受体花环率(EC3bRR)及免疫复合物花环率(ECICR)测定. 结果 (1) ECR1基因构成,ⅡDM组HH型为57.14%、HL型37.50%、LL型5.36%;对照组HH型为68.86%、HL型28.57%、LL型3.57%;ⅡDM组的基因缺陷率为42.86%,对照组为32.14%.两组相比基因构成及缺陷率差异均无显著性(P＞0.05).(2) 与对照组相比,ⅡDM组EC3bRR下降,ECICR上升(P＜0.01).(3) 两组组内比较,HH型的EC3bRR均明显高于HL型,ECICR均低于HL型. 结论ⅡDM患者红细胞CR1密度基因HH型比率下降不显著,但红细胞天然免疫功能低下程度与ECR1基因缺陷关系密切相关.不同ECR1基因型的人群红细胞免疫功能有差异,HH型的红细胞免疫粘附功能强于HL型.
-
哮喘大鼠肺组织p38蛋白激酶表达的变化及地塞米松对其影响
p38蛋白激酶(p38 MAPK)是新近发现的与炎症、应激反应密切相关的蛋白激酶,参与了肥大细胞、嗜酸性粒细胞的定位迁移和淋巴细胞的发育、分化、成熟和活化的全过程,提示p38 MAPK可能与支气管哮喘的气道炎症机制相关.为探讨p38 MAPK在哮喘发病机制中的作用,我们选择了雄性SD大鼠20只,体重220±40g,2～3月龄.随机分成3组:A组为正常对照组,以生理盐水代替抗原进行注射和雾化吸入;B组为阳性对照组,给予鸡卵清蛋白(OVA,美国Sigma公司)致敏和刺激复制哮喘模型;C组为地塞米松(DEX)干预组,每天予以OVA雾化吸入前分别给予5mg/kg体重的DEX(美国Sigma公司)腹腔注射.
-
严重急性呼吸道综合征(SARS)病人血清中SARS相关抗体的发现和分析
由SARS病毒感染所致的严重急性呼吸道综合征(SARS),今年在全球爆发流行[1-3].在SARS的发病过程中,越来越多的证据表明异常的免疫反应可能是导致SARS患者肺部免疫炎性病理损伤的主要原因.本研究在SARS患者血清中发现了一组抗肺组织相关抗体,其可能参与了导致肺组织损伤的免疫炎性反应.
-
肝门型童虫免疫血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库
近年来,血吸虫疫苗研究进展迅速,国内外学者克隆表达了一系列血吸虫抗原基因,但至今它们在动物宿主体内诱导的保护性免疫未达到降低虫荷40%或更多预期的研究目的[1].因此继续筛选新的血吸虫疫苗候选分子成为当前血吸虫病研究的热点之一.我们用日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原(SjHmAg)免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,以期发现特异的具有保护作用的日本血吸虫抗原基因,为血吸虫疫苗的研究提供新的候选分子.
-
IL-12对结构优化的HBV核心抗原DNA疫苗诱导免疫应答的影响
目的探讨IL-12对一种结构优化的HBV核心抗原(HBcAg)DNA疫苗免疫效果的影响. 方法将小鼠IL-12基因插入结构优化的DNA疫苗pST-HBc,构成pST-HBc/IL12,将pST-HBc/IL12转染COS7细胞,ELISA检测培养上清中的HBcAg和小鼠IL-12.分别将pST-HBc/IL12和pST-HBc肌肉注射接种BALB/c小鼠,检测小鼠的体液和细胞免疫应答. 结果 ELISA检测到培养上清液中的HBcAg和小鼠IL-12,pST-HBc/IL12诱导的抗-HBc总IgG阳转率和抗体水平不及pST-HBc,但其诱导的脾细胞增殖反应和细胞毒性T淋巴细胞反应均强于pST-HBc. 结论 IL-12可进一步增强这种HBcAg DNA疫苗诱导的细胞免疫应答.
-
含恶性疟原虫Pf70基因片段表达载体DNA的免疫学特性
目的研究恶性疟原虫Pf70 DNA片段作为DNA疫苗候选抗原基因的可能性. 方法应用PCR方法从含有恶性疟原虫Pf70基因DNA片段的质粒pGEX-Pf70中扩增出包含Pf70 DNA片段的长度为957bp的PCR产物.将其插入带有乙肝表面抗原基因的真核表达载体pCMV-S中,构建出重组质粒pCMV-S-Pf70.用提纯的重组质粒pCMV-S-Pf70作为DNA免疫制剂,以质粒pCMV-S DNA和经过谷胱甘肽亲和层析法纯化的融合蛋白GST-Pf70作为对照,免疫昆明种小白鼠.每隔14d加强免疫1次,加强免疫2次后第7天采小鼠全血,用流式细胞仪检测CD8+ T淋巴细胞和CD4+ T淋巴细胞的水平,以检测体液免疫和细胞免疫状况. 结果接种了重组质粒pCMV-S-Pf70小鼠CD8+ T淋巴细胞的绝对量增加,其百分比含量增加了39%;CD4+ T淋巴细胞的相对含量保持恒定,绝对量稍有增加.用ELISA法分别检测经重组质粒pCMV-S-Pf70免疫的小鼠和经融合蛋白GST-Pf70免疫的小鼠血清中抗Pf70蛋白质的抗体滴度,发现前者抗体滴度约为1∶800,远远低于后者的滴度(1∶5 000).研究结果证明,重组质粒pCMV-S-Pf70 DNA可以诱导小鼠产生很强的细胞免疫和相对于蛋白质免疫而言较弱的体液免疫;Pf70蛋白质可以诱导小鼠产生很强的体液免疫. 结论恶性疟原虫红内期Pf70 DNA片段是有前景的红内期DNA疫苗候选抗原基因片段.
-
血吸虫重组卡介苗--Sj26GST疫苗的有关毒性研究
由于BCG免疫效果不够理想,以及结核分枝杆菌耐药性的产生,促使人们开始研制新的结核病疫苗.利用BCG独特的安全性和免疫佐剂作用和日本血吸虫中相对分子量为26×103的谷光甘肽S转移酶(Sj26GST)的良好免疫原性,已经构建出了一种重组卡介苗--Sj26GST(rBG-Sj26GST).我们就这种疫苗对小鼠的毒性进行了研究,从而为疫苗的安全性提供实验依据.
-
戊型肝炎病毒Ⅰ型ORF3蛋白的表达、纯化及抗原性分析
目的表达戊型肝炎病毒(HEV)Ⅰ型ORF3全长基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析. 方法将Ⅰ型HEV ORF3基因连接到融合表达载体pThioHis B, IPTG诱导表达;Western blot分析表达产物的抗原活性;用经高效液相色谱纯化的表达产物作为抗原,制备血清抗-HEV IgG及抗-HEV IgM诊断试剂,用国家参考品进行考核;用所得抗原检测临床血清中抗-HEV抗体,比较其与Genelabs试剂盒检测结果的差异. 结果含有Ⅰ型pThioHis B/ORF3质粒的菌株表达了相对分子质量(Mr)为26×103的融合蛋白,免疫印迹表明其能与戊型肝炎患者恢复期血清发生特异性反应.国家参考品考核结果显示,用表达产物制备的抗HEV IgG诊断试剂阳性符合率为100%(10/10),阴性符合率为96.7%(29/30),总符合率为97.5%(39/40);制备的抗-HEV IgM诊断试剂阳性符合率为83.3%(10/12),阴性符合率为100%(20/20),总符合率为93.8%(30/32).与Genelabs公司试剂盒检测结果比较,抗-HEV IgG和抗-HEV IgM ELISA总符合率分别为94.5%和87.0%. 结论本实验所得全长ORF3基因工程表达产物具有良好的抗原性,可用于制备抗-HEV诊断试剂.
-
恙虫病东方体Sta56抗原的原核表达、纯化及其在间接ELISA中的应用
目的构建含恙虫病东方体sta56基因的重组表达质粒,在E.coli中表达Sta56重组抗原,纯化后用于间接ELISA检测恙虫病. 方法从含有恙虫病东方体Karp株sta56基因的重组质粒TOPO-sta56扩增出截短的sta56,定向插入pET30a载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE及Western blot进行分析;采用电洗脱方法纯化重组抗原并应用于间接ELISA检测恙虫病. 结果以截短的sta56基因片段构建了重组表达质粒pETOt957,重组的Sta56抗原可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达,SDS-PAGE显示了一条相对分子质量(Mr)为40.3×103的蛋白表达带,Western blot证实该融合蛋白能被恙虫病患者阳性血清所识别.电洗脱纯化的重组抗原应用于间接法ELISA检测恙虫病,与间接免疫荧光法IFAT比较,其敏感性和特异性分别为91.7%和76.5%. 结论在大肠杆菌中表达的Sta56重组抗原具有免疫反应性,纯化后可用作免疫诊断试剂.
-
人GL50转基因细胞的建立
ICOS/GL50是CD28/B7家族的一对新成员,GL50组成性表达在B细胞、巨噬细胞上.GL50-Ig能显著上调IL-4、IL-10、IFN-γ等细胞因子的表达,但对IL-2的产生没有影响,ICOS/GL50主要在T细胞的效应阶段发挥重要的调节作用.为了进一步研究其功能,我们利用逆转录病毒载体系统有效介导了基因转移.
-
李斯特菌细胞溶解素在疫苗研制中的应用
李斯特菌细胞溶解素(Listeriolysin O, LLO)是单核细胞增生症李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)hly基因表达的一种结合胆固醇、活化巯基的细胞溶解素.LLO是Lm的主要致病因素,它通过溶解细胞吞噬体膜而使Lm逃离吞噬体[1].LLO的N末端具有富含P(脯氨酸)、E(谷氨酸)、S(丝氨酸)和T(苏氨酸)的PEST样区[2,3].蛋白质PEST区的主要作用是使蛋白质磷酸化并进入泛素蛋白酶降解途径.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
