中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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cAMP对人骨髓瘤细胞的IL-6信号转导功能及细胞增殖的抑制作用
目的 研究PKA途径激活(或胞内cAMP水平升高)后对人骨髓瘤细胞的IL-6信号转导功能及细胞生长的影响.方法 采用PKA途径激动剂Foskolin(FK)和cAMP类似物8-Br-cAMP刺激人骨髓瘤细胞系--Sko-007,分别通过MTT方法和凝胶阻滞电泳(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法检测FK和8-Br-cAMP对Sko细胞的生长及其IL-6信号转导功能的影响.结果 FK和8-Br-cAMP可对Sko细胞的生长及其IL-6的Jak/STAT信号途径的活化起双重抑制作用,但对另一条IL-6信号途径--Ras/NF-IL-6途径的活化无显著影响.结论 1.PKA途径的激活可调控骨髓瘤细胞系中IL-6的Jak/STAT信号转导途径;2.Sko细胞中PKA途径激活所介导的细胞增殖抑制作用与IL-6的Jak/STAT信号途径的活化抑制作用相关.
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用生物传感器测定重组人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的亲和力及抗原识别表位
目的 测定重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体的抗原识别表位及其亲和常数.方法 借助于生物传感器技术进行抗原抗体相互作用的动力学分析.结果 10株TNF-α单抗的亲和常数介于105～107 M-1之间,其中所测的5株抗体识别肿瘤坏死因子上3种不同的抗原表位.结论 生物传感器在研究抗原抗体相互作用中确为一个理想的工具,适合于抗原抗体结合与解离的动力学分析及预测表位的构象关系.
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编码人分化抗原5C5全长cDNA的克隆及功能初探
目的 编码5C5分化抗原全长cDNA的克隆及功能探索.方法 构建人活化B细胞株3D5细胞的λgt11 cDNA文库,以核苷酸杂交法从cDNA文库中筛选阳性克隆,作核苷酸序列分析,编码蛋白质氨基酸序列的亲疏水分析,Northern blot测5C5 mRNA转录本长度,用RT-PCR检测5C5 mRNA在不同细胞株的表达,观察单抗5C5-G1对3D5细胞增殖的影响.结果 从人活化B细胞株3D5的λgt11 cDNA文库筛选到长905bp的5C5-1 cDNA及754bp的5C5-2 cDNA.5C5-1 cDNA序列内有1个开放阅读框架(19～537bp),编码179个aa的蛋白质.此蛋白质内有一穿膜螺旋结构(94～114aa),其N端在胞内.5C5-2 cDNA从163到459为开放阅读框架,编码99个aa的蛋白质.从Northern blot见0.9kb左右和0.7kb左右2条杂交带.由RT-PCR见5C5 mRNA在3D5细胞强表达,在Daudi细胞表达次之,在Jurkat细胞表达弱.单抗5C5-G1有增强cpBCGF诱导3D5细胞增殖的作用.结论 长905bp的5C5-1 cDNA为1个全长cDNA.编码1个膜蛋白,可能参与3D5细胞的增殖反应.
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慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Fas/FasL的表达
我们应用逆转录-PCR方法,对21例慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Fas/FasL的表达进行检测,初步探讨其在慢性乙型肝炎患者活化诱导的淋巴细胞凋亡中的作用.
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双歧杆菌的全肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞游离Ca2+离子水平的影响
双歧杆菌是人体肠道内主要的生理性有益菌,其细胞壁中的全肽聚糖(Whole peptidoglycan, WPG)保持了全菌的一些重要的生理功能,如抗感染和延缓衰老等.此外WPG亦能激活巨噬细胞.本文以Fluo-3/AM为荧光染料,用激光共聚焦显微镜动态观察了分叉双歧杆菌的WPG刺激小鼠腹腔巨噬细胞后游离Ca2+离子的浓度变化.
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阴道加德纳菌ITS-23S rRNA部分基因克隆及序列分析
目的 分析深圳地区阴道加德纳菌(G.vag)ITS(internal transcribed spacer)-23S rRNA部分基因序列.方法 设计特异性引物,建立检测G.vag的PCR方法,对临床病人阴道分泌物标本进行检测,并对分离出的4株PCR产物进行分子克隆和序列分析.结果 分离出的4株G.vagITS-23S rRNA基因的核苷酸同源性在99.5%以上,与Belkum报道株同源性在98%以上.结论 深圳地区G.vag与国外报道的菌株在ITS-23S rRNA基因区变异不大,可能属同一基因型.
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致肾盂肾炎大肠杆菌papA基因的克隆及序列分析
目的 对致肾盂肾炎大肠杆菌(UPEC)132株的papA基因进行克隆和序列分析.方法 根据F13型papA基因序列设计引物,并在二引物5′端加上限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ的酶切位点.采用此引物扩增132菌株p菌毛粘附基因群的papA基因,扩增产物克隆入质粒,选取阳性重组质粒进行核苷酸序列分析.结果 UPEC132株经PCR法扩增获得约700bp的papA片段,经克隆获得阳性重组质粒pCT20,对其进行序列分析显示papA 编码184个氨基酸多肽,与UPEC J96株papA相比较同源性达98%以上,于+43位和+73 位的错义突变对该菌毛的免疫学特性没有影响,保守的信号肽序列-16位出现同义突变,-3位缺失三联体密码使-1,-3位切割三联体由ANN变为ANV.结论 papA信号肽序列变异可能影响其正确的切割,致使132株(Mr为16.6×103)和J96株(Mr为19.6×103)p菌毛蛋白的相对分子质量不同.
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重组分枝杆菌噬菌体检测分枝杆菌活力的研究
重组的可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体,由于可特异地感染宿主菌--分枝杆菌并在宿主菌中快速增殖,同时表达荧光素酶,因此通过检测荧光素酶的浓度即可快速检测分枝杆菌的活力.
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部分钩体病患者早期血清阳性结果分析
1977～1992年我们在钩体病调查研究中,对9947例疑似患者作实验诊断,85%以上病例的同一份血样作了病原培养和血清显凝试验两项检诊,确诊为钩体病患者874例,总阳性率为8.79%.
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从一例多细菌协同性坏疽的标本中分离到罕见芽孢杆菌
目的 确定从一例多细菌协同性坏疽患者临床标本中分离的、使用常规方法不能够鉴定的YP菌株的分类学位置.方法 使用16S rRNA序列分析和同源性检索方法,及细菌的形态学和生化反应鉴定方法.结果 YP菌株为革兰氏阳性杆菌,可在厌氧和有氧条件下生长,在LB琼脂上有氧条件下培养48h后产生端生芽孢.触酶阳性,无动力,硝酸盐还原.在PYG肉汤中的代谢产物主要为乙酸、乳酸以及少量的琥珀酸和异戊酸.G+C mol%为33.16S rRNA 序列分析和同源性检索发现YP 和芽孢杆菌一些种的同源性较高,可达96%.但和已经发表的芽孢杆菌属的细菌种有明显区别.结论 YP菌株在分类学上应该属于芽孢杆菌属,但是和芽孢杆菌属已经发表的种都不相同,可能是一个新种.
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伤寒沙门菌DNA旋转酶gyrA及拓扑异构酶Ⅳ parC基因与耐喹诺酮类关系研究
目的 研究DNA旋转酶、拓扑异构酶Ⅳ在伤寒沙门菌耐喹诺酮类药物的作用.方法 对临床分离喹诺酮类敏感伤寒沙门菌275及其自发耐药变异菌RG1的gyrA、parC基因喹诺酮类耐性决定区进行PCR DNA直接测序分析.结果 表明伤寒沙门菌275 gyrA、parC与大肠埃希菌相应DNA序列分别有92.51%与97.01%同源性,推定氨基酸序列仅有3与6个的差异.伤寒沙门菌gyrA及parC也有较好同源性,相应区段氨基酸有60.92 %相同.伤寒沙门菌RG1与275相比,gyrA第247位T→G变异,致Ser 83 Ala氨基酸替换,两者parC完全相同.喹诺酮类药物对RG1 MIC较对伤寒沙门菌275上升32倍或以上.结论 DNA旋转酶、拓扑异构酶Ⅳ为喹诺酮类药物作用靶位,但以DNA旋转酶为主,该酶变异为伤寒沙门菌耐药的主要原因.
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白色念珠菌可能具有荚膜结构
白色念珠菌(Candida albicans)又称白假丝酵母,是常见的条件致病性真菌.传统认为白色念珠菌无荚膜,我们在试验中曾发现似有荚膜结构,为此,进一步进行白色念珠菌是否具有荚膜的试验.
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1998年肠道致病性弧菌感染调查及耐药性分析
对我院肠道门诊1998年4～10月份1724例急性腹泻病患者的粪便标本进行了增菌培养,对分离出的致病性弧菌做了16种抗菌药物的敏感性试验.结果经统计分析表明,在检出致病性弧菌的患者中,男性(59.1%)高于女性,青壮年(83.7%)高于中老年,稀便标本检出的致病性弧菌占47.5%,高于其它性状标本.
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人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的基因克隆及序列分析
目的 获取人幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A亚单位(HspA)的DNA(hspA),并将它克隆到质粒PinPointTMXa-3中进行核苷酸序列分析.方法 利用PCR技术扩增HspA的DNA,并将其定向插入PinPointTMXa-3载体中通过4种荧光染料标记,激光检测的方法进行核苷酸序列分析.结果 DNA序列分析表明,所克隆的HspA DNA序列与GenBank公布的一致.结论 本研究获得了序列正确的HspA基因,为其重组表达及相关研究奠定了良好基础.
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重组幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位在大肠杆菌中的表达及免疫学分析
世界卫生组织已把幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)列为与胃癌发生有关的病原体,热休克蛋白(heat shock protein, Hsp)是其致病因子之一.我们将Hp HspA亚单位基因克隆,并对其在大肠杆菌中的表达及免疫原性进行了研究.
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从6例血友病患者分离的TT病毒基因克隆及序列测定
目的 了解血友病人的输血传播病毒(TTV)基因型及其在个体内存在状况.方法 对6例血友病人血清中分离的TTV进行基因克隆,从每例病人的标本随机选多个克隆进行测序,比较其核苷酸和氨基酸序列.结果 除1例病人的5个克隆TTV DNA序列基本相同外,其余病人所测的TTV DNA克隆序列均不完全相同.根据同源性分析,该6例病人的TTV DNA主要可分为3组:G1a、G1b和G2基因型.结论 同一病人可混合感染不同TTV毒株.
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登革2型病毒04株基因组全序列的测定
目的 对我国登革2型病毒04株(D2-04)基因组进行全序测定及分析,为了解其基因组结构与生物功能的关系及研究开发登革病毒新型疫苗奠定基础.方法 根据登革2型国际标准株NGC的序列,设计13对重叠引物,通过RT-PCR扩增出D2-04株不同的cDNA片段,分别克隆到pGEM-T载体,转化受体菌DH5α,挑取阳性克隆进行PCR、酶切鉴定及序列测定.结果 D2-04株的基因组全长10723个碱基,从97到10269位为一个长的开放读码框,编码3391个氨基酸.将它与其它登革2型病毒株NGC、JAM、PR159 (S1)、16681及它的候选疫苗株PDK-53进行比较,其核酸序列同源性分别为95.0%、 97.6%、 89.8%、 93.8%和 93.7%,氨基酸序列的类似性分别为97.8%、 98.6%、 96.7%、 97.6% 和 97.5%.结论 我国D2-04株的基因组全序列基本类似于已发表的其它登革2型病毒株.在比较的5株登革2型病毒株中,D2-04株更类似于JAM株,其次是NGC株,与S1株的类似性略低.比较的结果表明,D2-04株与JAM株紧密相关,它们可能属于同一拓扑型.D2-04株全序的测定,对分析我国毒株来源及研制适于我国人群的登革疫苗具有一定意义.
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柯萨奇B3病毒引起心肌细胞凋亡的初步探索
目的 以病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)细胞感染模型为基础,研究柯萨奇B3病毒(Coxsackie B3 virus,CVB3)感染与心肌细胞凋亡的关系.方法 在嗜鼠心肌柯萨奇B3病毒(CVB3m)感染心肌细胞后24h电镜观察细胞超微结构的改变,同时取细胞悬液以流式细胞仪检测"凋亡峰",了解细胞凋亡率,并采用酶联免疫分析法(ELISA)定量测定CVB3m病毒感染后1、2、4、7、24h心肌细胞胞浆内组蛋白伴随DNA片段(单核小体和寡核小体)的多少,进一步了解凋亡程度.结果 电镜观察CVB3m感染的心肌细胞的超微结构符合凋亡改变,流式细胞仪DNA倍体分析检出凋亡峰,ELISA法检测提示病毒感染后出现心肌细胞凋亡,且在一定时段内凋亡程度随时间延长而增高.结论 CVB3m病毒感染可诱发心肌细胞凋亡,且随时间延长,凋亡量增多,凋亡程度加重,凋亡可能参与VMC的病理过程.
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汉滩病毒Z10株G1糖蛋白编码区克隆及序列分析
目的 汉滩病毒浙10(Z10)株G1糖蛋白编码区的克隆、核苷酸序列分析,提供我国应用为广泛的肾综合征出血热(HFRS)疫苗株序列资料.方法 反转录PCR法扩增G1基因片段,克隆入pGEM-T载体,双脱氧链终止法测定核苷酸序列.结果 测定1449个核苷酸,可编码483个氨基酸.与Ⅰ型76/118、Lee、Hojo株比较核苷酸同源性分别为87%、86%、86%,与Ⅱ型R22株同源性为67%.比较氨基酸序列Z10株与Ⅰ型、Ⅱ型病毒的同源性分别为(94～95)%,(77～80)%.Z10与76/118 G1编码的氨基酸变异多发生于N′端,大的变异区是第84～93位氨基酸的10个连续变异.结论 Z10株病毒和其它汉滩病毒在核苷酸序列虽有较大差异,但在氨基酸水平上的同源性仍较高,可能是Z10株沙鼠肾疫苗具有较好免疫保护作用的原因.
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pPIC3.5-HPV16L1重组质粒在酵母菌中表达L1蛋白的初步结果
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)能引起人类多种良性皮肤和粘膜乳头状瘤或疣,且许多型别可导致癌变.诸多研究表明,HPV16型与宫颈癌等癌症发生密切相关,所以预防HPV感染对防止宫颈癌的发生具有重大意义.
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HIV-1 p24抗原不同位区的抗体应答
HIV-1病毒编码3种结构蛋白,即核心区(gag区)、包膜区(env)及酶区(pol).在病毒感染机体后,体内的免疫系统对不同的编码蛋白产生应答,目前研究较多的为抗体应答[1].
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吸毒人群中HGV和HBV的同步检测
HBV、HCV和HGV有共同的感染途径,HBV为DNA病毒,HGV为RNA病毒.我们建立了HGV-HBV PCR同步检测法,并用该方法和ELISA法检测血清中HGV RNA、HBV DNA、HBsAg和抗HCV-IgG以及谷丙转氨酶(ALT)水平,调查武汉市第一戒毒所106名吸毒者HGV与HBV、HCV感染情况.
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转基因小鼠研究进展
转基因动物是指用实验的方法将外源基因导入早期胚胎细胞,使之整合于细胞基因组中而建立的动物品系.早建立成功的转基因动物是转基因小鼠(transgenic mice).由于转基因小鼠的建立比其它大型转基因哺乳动物的建立要省时、省力,因此转基因小鼠作为生命科学研究的一个新体系已经得到越来越广泛的应用.
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幽门螺杆菌HspA和UreB双价侯选疫苗株的构建
目的 构建表达幽门螺杆菌的组成成分热休克蛋白A亚单位(HspA)和尿素酶B亚单位(UreB)的重组蛋白质的侯选菌株.方法 用PCR方法从幽门螺杆菌的染色体DNA上分别扩增出HspA和UreB基因片段,将它们融合插入原核表达载体pET-22b(+)中,并在BL21(DE3)大肠杆菌表达.结果 经测序,HspA-UreB(HU)融合基因片段由2061bp组成,为编码687个氨基酸残基的多肽.SDS-PAGE和免疫印迹分析检测发现,融合基因表达的蛋白相对分子质量约为78×103,并证实该重组蛋白可以被幽门螺杆菌感染阳性患者的血清所识别,其免疫小鼠所得血清抗体可与纯化的HspA和UreB重组蛋白单体或融合体发生特异性的结合反应.同时观察到HspA的存在可使融合蛋白的尿素酶活性增加2倍以上.结论 HspA-UreB融合蛋白有可能作为一种有效的蛋白质疫苗用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗.
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霍乱弧菌以thyA基因为选择压力的染色体-质粒致死平衡系统的构建
目的 为构建霍乱弧菌口服活疫苗提供稳定实用的载体系统.方法 在改良MM基本培养基的基础上,建立了霍乱弧菌thyA基因突变菌株的筛选方法,继而用PCR插入法克隆了大肠杆菌thyA基因全序列(pXXB106),并电击转化入霍乱弧菌thyA基因缺陷株(PL102),使后者在MM改良培养基上的生长恢复为野生状态.结果 选育出的thyA基因突变的霍乱弧菌IEM101菌株PL102突变性状及生物学性状基本稳定.进而构建了以thyA基因为选择压力的霍乱弧菌染色体-质粒致死平衡系统.结论 构建成的抗原呈递系统作为构建肠道疫苗的受体菌株是稳定的,也是适用的.
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抗伤寒沙门菌SOD血清的制备及其免疫保护作用的研究
目的 制备抗伤寒沙门菌Fe-SOD血清,研究其免疫保护作用,探讨SOD与沙门菌毒力的关系.方法 用纯化的伤寒沙门菌(Stw1)Fe-SOD免疫家兔制备兔抗Fe-SOD血清.利用ELISA法检测抗血清的效价.免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析抗血清的特性.用不同浓度的抗血清预先处理Stw1,然后进行小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬杀菌试验,并利用鼠伤寒沙门菌感染小鼠模型证明抗SOD血清的被动免疫保护作用.结果 抗血清的ELISA效价为1∶10240,免疫电泳结果显示纯化的Fe-SOD及伤寒沙门菌无细胞溶解物与抗Fe-SOD血清在相同位置各形成一条沉淀线.双向琼脂扩散试验结果显示该抗血清与牛红细胞SOD不形成沉淀线,抗血清对酶活性抑制试验结果显示抗血清可抑制伤寒沙门菌及鼠伤寒沙门菌无细胞溶解物中部分SOD活性,对牛红细胞SOD的抑制率较低.小鼠腹腔吞噬细胞对伤寒沙门菌的吞噬杀菌试验结果显示,经中浓度的抗血清处理的细菌在60min、120min时和经高浓度抗血清处理的细菌在30min、60min及120min时CFU值明显低于对照组(P＜0.01).经抗血清处理过的5LD50鼠伤寒沙门菌攻击的小鼠3d和7d的存活率分别为90%和60%,均明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 抗伤寒沙门菌SOD血清可促进小鼠腹腔吞噬细胞对伤寒沙门菌的杀灭,也能提高鼠伤寒沙门菌攻击小鼠的存活率,说明此抗血清具有免疫保护作用,提示SOD可能是沙门菌共同的保护性抗原,间接说明了伤寒沙门菌的SOD与其毒力有关.
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明胶微球乙肝疫苗动物免疫效果研究
目的 研究并优化微球乙型肝炎疫苗的配方,观察微球乙肝疫苗对温度的稳定性.方法 用明胶包裹HBs制备微球,设计不同配方及不同粒径微球乙肝疫苗、冻干微球乙肝疫苗于不同温度放置一定时间,免疫动物观察免疫效果.结果 微球疫苗HBs包裹率＞90%,微球疫苗的免疫效果受佐剂配方及制备程序等因素影响,＜10μm的微球(5.6μm)免疫效果明显优于＞10μm的微球(25.4μm)(P＜0.02)及铝佐剂组(P＜0.01).接种动物后可维持高水平抗-HBs IgG抗体(220～280mIU/ml)12个月以上;含铝佐剂的微球疫苗免疫效果优于不含铝的微球疫苗(P＜0.05);单纯明胶微球与HBs混合后免疫可增强抗-HBs反应,稍低于包裹HBs的微球组.冻干HBs微球对温度稳定性优于铝佐剂吸附HBs.结论 ＜10μm的微球疫苗和含铝佐剂的微球疫苗可产生佳的免疫效果;冻干微球疫苗可望解决铝佐剂吸附乙肝疫苗需要冷链的问题.
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多发性硬化病中3种疱疹病毒DNA的检测
多发性硬化症(MS)与病毒感染的关系颇受国内外学者重视.MS患者血中同时检测出Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1),EB病毒(EBV)、人类巨细胞病毒(HCMV)DNA,国内目前尚未见报道.我们采用PCR方法检测MS患者血中3种疱疹病毒DNA,以探讨MS的发病与病毒的关系.
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肠道致病菌PCR检测与鉴定研究
目的 为了实现对腹泻等病原菌的快速、准确检测与鉴定,对引起感染性腹泻的暴发与流行的常见肠道致病菌进行检测与鉴定方法研究.方法 将常规PCR与半套式PCR及随机引物扩增DNA多态性分析(RAPD)等技术相结合,对常见肠道致病菌,如志贺菌、沙门菌和致病性大肠杆菌O157∶H7等进行检测与鉴定.结果 uidA引物可特异扩增沙门菌、志贺菌及大肠杆菌,而3种特异性引物则只扩增相应的致病菌;第一次PCR敏感性为30～50CFU,半套式PCR的敏感性可达3～5CFU.结论 该技术特异性强、敏感性高、操作简便、快速,是环境样品及临床腹泻等病原学检测与诊断的有效方法之一.
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产超广谱β内酰胺酶大肠杆菌的检测及其耐药表型和基因型
目的 研究临床分离的产超广谱β内酰胺酶(extended spectrum β lactamases,ESBLs)大肠杆菌对常用抗生素的耐药性及其基因类型.方法 应用双纸片扩散法及E test检测ESBLs;微量稀释法测定产ESBLs大肠杆菌对临床常用抗生素的耐药性;全自动核型分析和脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)研究产ESBLs大肠杆菌的基因型.结果 23株产ESBLs大肠杆菌共有12种耐药表型,4种核型及9种脉冲场凝胶电泳分型.耐药表型中,以对庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、四环素及TMP/SMZ同时耐药组合常见,占39.1%;基因分型中,核型/PFGE型:242-5/2 与242-5/4各4株分别分离自肝胆外科和血液科,3株880-1/1a分离自高级病房,其余基因型呈散在分布于多个病房.结论 产ESBLs大肠杆菌对常用抗生素具有多种耐药表型;核型分析及脉冲场凝胶电泳是进行产ESBLs细菌引起医院感染流行病学研究的有效手段.
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cagA和cagM在中国人群感染幽门螺杆菌中的检测
cag致病岛(cag pathogenicity island)为新近在cagA表达阳性的幽门螺杆菌(Hp)菌株中发现的又一致病相关的基因群,其编码蛋白被认为是毒素及毒素转运机能相关的分泌系统.cag致病岛被认为是由水平转移的方式来源于质粒或噬菌体,具有部分或全部丢失等不稳定性表现.
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聚合酶链式反应鉴定肺炎链球菌
肺炎链球菌是一种致病率较高的病原菌.所采集临床标本中的细菌早期鉴定对疾病诊断至关重要.
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HLA-A匹配的人胃癌细胞系诱生胃癌特异性T淋巴细胞
目的 用HLA-A匹配的人胃癌细胞系诱导对胃癌细胞具有特异性杀伤作用的T淋巴细胞.方法 分离胃癌患者及正常人外周血淋巴细胞(PBL),用HLAⅠ类型别已知、经照射的异体胃癌细胞系刺激,进行筛选性的混合淋巴细胞肿瘤细胞培养(MLTC),初步获得HLA-A可能匹配的淋巴细胞供体,血清法测定其HLA-A、B分子确认匹配后,进一步进行MLTC,3H掺入法评估其增殖能力,直接免疫荧光法分析其细胞表型,51Cr释放试验检测效应细胞的杀伤效应.结果 从9例(共分离11次)胃癌患者及10例(共分离16次)正常人PBL中,初筛发现有2例胃癌患者及1例正常人PBL得以大量增殖,检测出其中1例胃癌患者及正常人的HLA-A抗原均为HLA-A2、A24,与用作刺激的异体胃癌细胞系相匹配,1例则不相匹配.对匹配的PBL进一步实施MLTC,经3～4次刺激后,CD3+淋巴细胞达到98%,其对HLA-A匹配胃癌细胞的杀伤表现出明显的特异性.结论 利用HLA-A2(A24)匹配的异体胃癌细胞系作为刺激细胞反复诱导胃癌患者或健康人PBL,有可能产生胃癌特异性的CTL.推测在刺激及培养条件适宜时,人外周血中较少的CTL前体细胞(CTLp)是可能捕捉到的.
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肿瘤抗原p185蛋白免疫鼠脾细胞的抗瘤效应研究
目的 研究肿瘤抗原p185蛋白作为肿瘤疫苗所诱导的抗肿瘤效应.方法 亲和层析纯化的p185蛋白皮下注射正常BALB/c小鼠,取脾细胞分别与p185蛋白、3T3-neu细胞体外共培养,以单独佐剂注射组的小鼠脾细胞为对照,观察其培养上清中IFN-γ和TNF-α活性.将免疫鼠脾淋巴细胞经p185抗原和低剂量的IL-2体外培养1周后,再用CD3抗体刺激扩增,用流式细胞仪分析其细胞表型.3T3-neu和3T3细胞分别接种于裸鼠腋窝皮下验证其致瘤性.选择具有致瘤性的3T3-neu细胞与经抗CD3抗体扩增的免疫鼠脾细胞体外混合后(19)接种于裸鼠腋窝皮下,以3T3-neu细胞单独或与CD3抗体活化的正常鼠脾细胞(CD3-AK)混合后,同法接种于裸鼠腋窝皮下观察其成瘤时间和带瘤宿主的存活期.结果 免疫鼠脾细胞培养上清中IFN-γ活性为40.27±9.6U/ml,也具有产生较高TNF-α能力.对照组未能检测出有IFN-γ活性,其TNF-α活性也较低.裸鼠体内实验证实,2.5×105的3T3-neu细胞在裸鼠体内即可成瘤,而对照组的3T3细胞无致瘤性.3T3-neu细胞与体外扩增的免疫鼠脾细胞混合后接种裸鼠,瘤结节形成时间平均为52.5 d,存活期平均为55.3 d(其中5只动物至60 d尚未成瘤,按60 d计算),而对照组瘤结节形成时间平均分别为12.5和9.2 d,存活期平均为27.8和25.6 d.表明p185蛋白免疫鼠脾细胞有相对特异的抗瘤活性.结论 肿瘤抗原p185蛋白作为肿瘤疫苗可诱导一定的抗肿瘤效应.
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脂质体-腺相关病毒质粒复合物介导基因联合抗小鼠肝癌的研究
目前肝癌主要采用手术、放疗、化疗和局部治疗为主的综合疗法,但治疗效果多不满意,有必要探索新的治疗方法.IL-2和IFN-γ是目前研究较多、疗效较为肯定的2个肿瘤基因治疗用细胞因子基因,并已应用于临床.
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单克隆抗体:从80年代的魔弹到当今临床应用的主流——第七届国际人抗体和杂交瘤会议简介
新型单克隆抗体的治疗性试验及开发的新方法构成了1999年9月8日～10日在英国爱丁堡召开的第七届国际人抗体和杂交瘤会议上讨论的核心问题.大会分新兴的抗体工程技术、分子生物学、自体免疫/变态反应性疾病、肿瘤、感染性疾病和临床应用等六个方面进行了专题报告.
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