中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位: 中国科学技术协会
- 主办单位: 中华医学会
- 影响因子: 0.59
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 0254-5101
- 国内刊号: 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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IL-15通过ERK1/2信号途径对NK细胞活性的调节
目的阐明IL-15在NK细胞功能调节中的作用及信号转导途径的活化. 方法直接免疫荧光证实NK-92细胞膜表面表达IL-15Rα链,制备NK-92细胞的全细胞提取物进行Western blot检测IL-15诱导的信号转导途径,MTT方法评价IL-15对NK细胞增殖和细胞毒能力的调节作用. 结果 NK-92细胞表面存在IL-15Rα链的表达,构成IL-15与NK相互作用的分子基础.在IL-2依赖性NK细胞系NK-92中,较低剂量的IL-15(25~100U/ml)可以完全替代IL-2以维持NK细胞的杀伤活性并对NK细胞的生长起促进作用.免疫印迹显示IL-15迅速活化ERK1/2(extracellular regulated kinase 1 and 2)信号途径,而其它信号分子(STAT1、STAT3、STAT6、P38 MAPK、PI-3K、NF-κB)并不被IL-15活化,提示ERK1/2是IL-15调节NK细胞功能中重要的信号分子. 结论 IL-15对NK细胞具有强大的调节作用,IL-15通过ERK1/2信号途径完成对NK细胞活性的调节.
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河豚毒素的免疫保护试验
河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是目前已知的毒性强的非蛋白毒素之一,存在于河豚鱼和其它有毒海洋生物,因阻滞钠离子通道,阻断神经肌肉传导,引起肌肉麻痹和呼吸麻痹,导致人畜死亡.我国沿海中毒事件屡有发生,病死率在30%~60%.鉴于TTX的潜在军事意义以及我国为河豚中毒多发区,我们开展了河豚中毒的免疫抗毒研究.
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髓样造血抑制因子(MPIF)存在一种新的mRNA剪切变异体
目的克隆并原核表达趋化因子,研究其结构与功能. 方法 RT-PCR技术,DNA测序和计算机网上比对,DNA重组及原核表达技术,离子交换层析技术,半固体骨髓集落培养. 结果在利用RT-PCR扩增趋化因子MPIF-1的过程中发现存在一种新的变异体形式.该变异体比MPIF-1多51个碱基,编码的蛋白质比MPIF-1长17个氨基酸,基因定位于人类第17号染色体上,其序列符合内含子和外显子的剪切规律,因而很可能为MPIF-1的mRNA不同剪切形式,将其命名为MPIF-1β.应用DNA重组技术构建原核表达质粒PKPL-MPIF-1β,转化大肠杆菌,诱导表达,获得重组蛋白.SDS-PAGE表明MPIF-1β的表达效率达15%,相对分子质量(Mr)约为(14~15)×103.功能研究表明,MPIF-1β有抑制小鼠骨髓集落形成的作用. 结论 MPIF-1β是与MPIF-1功能类似的新变异体.
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血管内皮细胞生长因子促进成年小鼠胸腺细胞的增殖与分化
目的研究血管内皮生长因子(VEGF121)在免疫系统的表达及其对小鼠胸腺细胞的作用,为了解VEGF在免疫系统中的功能提供实验依据. 方法构建pCDI-VEGF真核表达载体,转染COS-7细胞,收获上清检测其对小鼠胸腺细胞的促增殖效应和CD4、CD8分子表达,用抗VEGF单克隆抗体及不同信号转导抑制剂进行阻断实验.通过RT-PCR方法检测人VEGF mRNA在胸腺、脾脏等免疫器官的表达. 结果实验证明VEGF mRNA可以在多种免疫组织中表达.VEGF121真核表达蛋白可明显促进小鼠胸腺细胞增殖和分化,此作用可被VEGF的单克隆抗体所封闭;不同的信号转导抑制剂具有不同的效应. 结论 VEGF参与了免疫系统的功能,对小鼠胸腺细胞的增殖分化有促进作用,可能是内源性的免疫系统的调节因子.
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PI3K在TCR和CD28协同激发的γδT细胞活化信号转导中的作用
目的探讨CD28协同结核杆菌(M.tb)低分子多肽激活人外周血γδ+ T细胞时,其胞内信号的传递经过磷酸肌醇3激酶(PI3K)的介导作用. 方法用激发型抗CD28单抗模拟第二信号,与M.tb抗原一起刺激纯化的T细胞,同时用特异性PI3K抑制剂LY294002阻断PI3K的活性,用流式细胞仪分析γδ+ T细胞上CD69分子的表达及γδ+ T细胞的增殖效应. 结果随着LY294002浓度的增加,γδ+ T细胞表面CD69分子的表达率降低,其增殖效应亦被不同程度地阻断. 结论抗CD28单抗可协同M.tb抗原激活γδ+ T细胞,其活化信号在γδ+ T细胞内的转导经过PI3K的介导.
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小鼠胸腺树突样细胞系与胸腺树突状细胞抗原提呈能力的比较研究
目的 MTSC4(小鼠胸腺树突样细胞系)能诱导胸腺细胞阴性选择,为阐明该功能是否与其抗原提呈能力有关,对MTSC4 与新鲜胸腺树突状细胞(T-DC)的抗原提呈能力进行了比较研究. 方法应用MLR实验系统进行抗原提呈能力的比较分析;利用抗体阻断实验研究CD11c分子在抗原提呈中的作用. 结果 T-DC的抗原提呈能力分别是MTSC4、MTSC4-10(MTSC4 的10号克隆)、MTEC1(小鼠胸腺上皮细胞系1)的64、58、73倍,MTSC4、MTSC4-10、MTEC1之间APC能力无显著性差异.在联合细胞因子GM-CSF,IL-4,IFN-γ和anti-CD40 McAb诱导下,MTSC4-10的表型变化显著,其MHC classⅠ、MHC classⅡ、B7.1表达阳性率分别由10%、阴性、10%上调到95%、44.7%、52.7%;MTSC4-10表型改变伴随抗原提呈能力增加,但仍只有T-DC的1/23.T-DC 与MTSC4-10的表型,抗原提呈能力的差异提示我们关注CD11c的作用,并首次证实anti-CD11c单抗(N418)能明显阻断新鲜分离T-DC的抗原提呈作用,anti-B7.2单抗对其抗体阻断有协同作用. 结论 MTSC4的抗原提呈能力大大弱于T-DC;高表达于T-DC的CD11c分子在抗原提呈中可能有重要作用.
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反义CⅡTA基因转移对MHCⅡ类分子表达的抑制作用
主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子可将外源性抗原提呈给T辅助细胞.MHCⅡ类的组成型表达仅限于"专职性"抗原提呈细胞,但细胞因子如IFN-γ可引起诱导型Ⅱ类分子表达.无论是组成型还是诱导型Ⅱ类分子表达,MHCⅡ类分子转录活化因子(CⅡTA)都是绝对必需的.
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冠心病患者口腔菌群分布状况的初步研究
近几年研究表明,细菌和病毒感染引起的炎症反应与冠心病发病有很大关系,而口腔感染是其中重要的组成部分.为此,我们对冠心病患者口腔中菌群分布的特点作了研究.
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mSemcap2对HeLa细胞骨架及福氏志贺菌入侵HeLa细胞的影响
目的研究mSemcap2对HeLa细胞骨架的影响及其对福氏志贺菌(F2a)入侵HeLa细胞的影响,以了解mSemcap2的功能. 方法利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察转染重组质粒的HeLa细胞和野生HeLa细胞系微丝及微管的含量及分布;利用普通光学显微镜及激光共聚焦显微镜观察F2a对2种细胞入侵的差别. 结果转染mSemcap2后的HeLa细胞,其F-actin呈解聚状态,荧光强度减弱,actin在细胞核周集中分布的现象消失;转染mSemcap2的HeLa,其F2a入侵率明显高于野生HeLa细胞. 结论 mSemcap2可以通过细胞骨架的重排来促进细菌对上皮细胞的入侵.
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幽门螺杆菌空泡毒素基因克隆、表达及其重组蛋白免疫学特性的鉴定
已发现幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)疫苗具有预防和治疗Hp感染的效果[1].大多数Hp菌株均能产生空泡毒素(vacuolating cytotoxin, vacA),其前体蛋白在分泌过程中只有相对分子质量(Mr)约87×103的VacA被转运到细胞外,Mr为4×103氨基末端信号肽和50×103羧基末端多肽分别留于细菌内、外膜中[2].Hp感染者血清中可出现VacA抗体,重组VacA在Hp SS1株小鼠感染模型中有80%的保护率[3].我们构建了vacA原核表达系统,所表达的重组VacA可作为Hp基因工程疫苗的候选抗原.
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大肠杆菌β-半乳糖苷酶EA、ED融合蛋白的表达
大肠杆菌β-半乳糖苷酶(E.C.3.2.1.23)是由四个相同亚基组成的四聚体,相对分子质量(Mr)为540000,通过溴化氰裂解或基因重组技术可得到一系列无酶活性的突变肽段,其中有些突变体在体外能重新聚合成全酶活性的四聚体,这一现象被称为α-互补[1].β-半乳糖苷酶的这种α-互补性已被用于分子生物学、蛋白质与蛋白质相互作用的监控、克隆酶供体免疫分析技术(CEDIA)、表达免疫分析等[2,3].通常具有α-互补活性缺失大部分C端氨基酸的小片段突变体如CNBr2被称为α-供体或酶供体(ED);而缺失N端约40个氨基酸的大片段突变体如M15蛋白被称为α-受体或酶受体(EA).为了进一步研究β-半乳糖苷酶的α-互补特性并促进其应用,我们通过DNA重组技术构建了一对编码β-半乳糖苷酶突变体EA、ED的质粒,并以融合蛋白的方式进行表达制备.
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浙江地区幽门螺杆菌cagA、vacA、iceA基因型别分析
据初步统计,全世界超过50%的人群有幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)感染.其中西方国家的感染率为25%~50%,发展中国家有的高达90%[1].然而, 只有少数感染者发展成消化性溃疡或胃癌,其中的原因尚不清楚.有研究表明,Hp的cagA、vacA、iceA基因可能与疾病的发生有关.有关cagA、vacA与疾病的关系我国也有报道[2].本文研究了浙江地区Hp菌株的cagA、vacA、iceA基因型别并分析了与疾病的关系.
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boxA及上游序列缺失突变对λ噬菌体抗转录终止功能的影响
目的研究λ噬菌体表达调控机理,阐明PL操纵子boxA及邻近序列突变对抗转录终止作用的影响. 方法利用体内同源重组技术,使大肠杆菌染色体DNA上携带了CI857,PL,nutL[boxA*(*代表不同的boxA及临近序列缺失突变)、boxB],N-lacZ,ttt,galK单拷贝基因,构建了含boxA及邻近序列突变(boxA*)的一系列新菌株,模拟了λ噬菌体感染宿主菌后的生理状态,利用抗转录终止报道基因galK分析研究了boxA及临近序列突变对PL操纵子抗转录终止作用的影响. 结果证明在缺失了boxA及部分上游序列的情况下,大肠杆菌RNA聚合酶不能通读转录终止子. 结论λ噬菌体左向操纵子具有与右向操纵子不同的转录调控现象.
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霍乱弧菌在离体人胆汁中长期存活及L型变异的研究
霍乱弧菌流行株对温度较为敏感,在每年寒冷季节中不能从外环境中发现其存在,构成了所谓病原体的隐蔽性特点.以往认为人是霍乱弧菌的唯一宿主,其慢性带菌者至今长报道为10年.我们以离体人胆汁方式进一步探讨了其带菌期限与有关机制.
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IL-12表达水平变化及其免疫活性对病毒性心肌炎的影响
目的探讨在小鼠急性病毒性心肌炎(VM)发病过程中白细胞介素12(IL-12) mRNA表达水平和蛋白浓度变化,及其免疫学活性对心肌炎的影响. 方法 135只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组(n=25)、心肌炎对照组(n=50)、rIL-12组(n=40)、IL-12抗体组(n=20),后3组经腹腔接种柯萨奇病毒(CVB3m)诱发急性心肌炎,rIL-12组于病毒接种后4h皮下注射重组IL-12,10ng/0.1ml,心肌炎组注射等量PBS,均连续用5d(0~4d),抗体组于0~1d经腹腔注射IL-12中和抗体0.1mg/0.1ml,共2次,分别于接种后1、3、5、7d各组随机取若干只小鼠采血后处死,留取心脏、脾等标本. 结果小鼠感染CVB3m后,其心肌组织中IL-12 mRNA的表达水平增高,同时体内IL-12、IFN-γ的蛋白含量也增高;在投入rIL-12后,IFN-γ的蛋白含量升高更明显,NK细胞活力增强,同时小鼠心肌组织中病毒滴度降低,心肌损害减轻,小鼠生存率提高(分别为66%和85%);而在IL-12抗体投入组结果则相反,且小鼠生存率降低(50%),但与心肌炎组相比差异无显著性. 结论在VM早期小鼠体内rIL-12能减轻心肌损害,提高感染小鼠的存活率,起到保护性的作用.
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人类巨细胞病毒UL145基因在临床低传代分离株中的多态性
有研究表明人巨细胞病毒(HCMV)在体内存在不同的细胞嗜性,提示来自于不同临床症状患儿的HCMV分离株的基因结构可能存在差异.我们曾报道过HCMV UL144基因多态性[1].本文着重研究了HCMV UL145序列在临床患儿低传代分离株中的多态性.
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免疫低下因素在轮状病毒全身扩散中的作用
我们试图通过制作免疫低下小鼠模型,对轮状病毒(RV)病毒血症患儿免疫等因素的初步分析,了解免疫低下因素在诱发RV肠道外扩散中的作用与地位,为临床的预防及治疗提供参考.
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建立产生gfp报道基因重组EB病毒细胞株
目的建立产生带有gfp报道基因的重组EB病毒株. 方法构建一个有EBV DNA BamHⅠ的C和H片段、gfp报道基因和puromycin选择基因的真核细胞穿梭质粒(pGFPUROEB);采用电穿孔法将其转染于B95-8细胞中,并用荧光显微镜和流式细胞仪检测gfp的表达,PCR及Southern blot检测重组gfp EB病毒基因. 结果经puromycin的长期筛选,建立80%以上表达gfp的B95-8细胞株(称gfpB95-8),PCR检测有gfp基因;经Southern blot检测证实gfpB95-8可产生重组gfp的EB病毒. 结论构建了gfp报道基因和puromycin选择基因的真核细胞穿梭质粒;并成功建立产生带有gfp报道基因的重组EB病毒株.
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乙肝病毒前C基因/C启动子变异与不同症状乙型肝炎患者的相关性
乙型肝炎的病情与宿主及病毒均有关.乙型肝炎病毒(HBV)C区编码HBcAg及HBeAg,其调控序列位于前C区及C基因启动子(CP) ,HBV前C/CP区变异可以通过阻止或减少HBeAg合成和分泌来影响宿主的免疫应答.我们采用聚合酶链反应(PCR)直接测序法,测定45例慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者血清HBV前C/CP区核苷酸序列,以探明HBV前C/CP基因区变异的临床意义.
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重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒的免疫原性分析
目的研究重组人乳头瘤病毒6型(human papillomavirus type 6, HPV-6)病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)的免疫原性. 方法重组杆状病毒在昆虫细胞中表达制备的HPV-6 L1 VLP(L1-VLP)和HPV-6 L1+L2 VLP(L1+2-VLP)经鉴定后,用于免疫BALB/c小鼠,对诱导的体液免疫和细胞免疫反应进行了检测. 结果电镜观察显示L1-VLP和L1+2-VLP二者形态上无明显差异,为圆形颗粒,直径约50nm,SDS-PAGE和Western blot分析表明,L1+2-VLP中L1和L2蛋白摩尔比例为4∶1.用ELISA法测定免疫小鼠血清抗体滴度,加佐剂L1-VLP免疫组和加佐剂L1+2-VLP免疫组血清针对HPV-6 L1 VLP的滴度在1∶10000以上,高于未加佐剂组免疫血清滴度(1∶2000),L1+2-VLP免疫诱导出了特异于L2抗原的抗体.血清抗体主要识别HPV-6构象依赖性抗原表位,与HPV-11抗原显示出一定的交叉反应,而与HPV-16无明显交叉反应.免疫小鼠脾淋巴细胞体外经HPV-6 L1 VLP再激活后出现了特异性增殖反应,3H-TdR掺入值与未免疫组之间差异有显著性(P<0.01),L1-VLP和L1+2-VLP两组间差异无显著性(P>0.05),L1-VLP和L1+2-VLP免疫组刺激指数(SI)分别为6.4和6.2,阴性对照组SI为1.1.HPV-6 L1 VLP再刺激特异地诱导免疫组脾淋巴细胞IL-2和IL-10分泌显著增加,与未免疫组之间差异有显著性(P<0.01),但未检测到IFN-γ分泌的明显增加. 结论制备的HPV-6 VLP具有良好的免疫原性,在免疫小鼠体内同时诱导了细胞免疫和体液免疫反应,可以用于研制HPV预防性疫苗.
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人IL-4基因修饰诱导肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的研究
目的研究人白细胞介素4(IL-4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制. 方法以逆转录病毒为载体将人IL-4基因导入人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞.台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL-4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c-fos、c-jun、c-myc 表达的变化.流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染色法及间接免疫荧光染色法检测凋亡细胞及凋亡调控基因p53、bcl-2的蛋白表达. 结果 (1) 人IL-4基因修饰较空载体修饰及野生型HepG2细胞的细胞周期发生G0/G1期阻滞,甲胎蛋白分泌量及原癌基因c-fos、c-jun、c-myc表达降低(P<0.001).细胞在形态及功能上趋向正常肝细胞转化;(2) 较空载体修饰及野生型HepG2细胞,IL-4基因修饰后部分细胞形态上出现核固缩等典型凋亡细胞的特征,流式细胞仪亦检测到18.5%±4.7%的凋亡细胞;(3) 人IL-4基因修饰增加p53而抑制bcl-2表达(P<0.05). 结论人IL-4 基因修饰可诱导肝母细胞的凋亡及分化,诱导凋亡细胞可能与上调p53蛋白及抑制bcl-2蛋白表达有关.
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蒙汉族儿童过敏性紫癜多器官损害与HLA-DRB1基因的关联性
分别选择蒙、汉族儿童过敏性紫癜(AP)57例和74例,于关节、胃肠、肾、心、肝、肺和脑中有2个或2个以上器官同时受累的多器官损害者,蒙古族24例、汉族54例.对照组蒙古族102名,汉族108名.组间年龄和性别差异无显著性(P>0.05).所有研究对象居住内蒙,无血缘关系、异族通婚史及其他风湿性疾病史和家族史.AP诊断和器官损害标准参考<诸福棠实用儿科学>中所述方法.以改良酚/氯仿法从静脉血提取DNA.参考熊平等建立的PCR-SSP技术作HLA-DRB1基因型别分析(免疫学杂志,1996,258~261页).
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解脲支原体对胎儿输卵管粘膜上皮细胞的粘附作用
解脲支原体(Ureaplasma Urealyticum, UU)是泌尿生殖道感染的重要致病因子,为了解UU是否对人输卵管粘膜上皮具有粘附作用,从而探讨UU对人输卵管粘膜的致病作用,采用人输卵管粘膜上皮体外粘附模型进行评价.
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重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达及活性研究
目的表达、分离、纯化重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(recombinant human collagen type Ⅱ peptide 250-270,rhCⅡ250-270)并研究其对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)和关节滑液单个核细胞(SFMC)中特异性T细胞的活化作用. 方法利用DNA合成、聚合酶链式反应、重组DNA等基因工程的方法构建含有人Ⅱ型胶原功能性多肽CⅡ250-270多聚基因的表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli BL21,融合表达目的蛋白,经Glutathione Sepharose○R 4B亲和层析柱分离纯化,12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶薄层扫描测量其相对分子质量(Mr)和纯度.以不同浓度(0.1、1.0、10、100、1000μg/ml)的6聚rhCⅡ2 50-270和化学合成的CⅡ250-270刺激体外培养的RA患者PBMC和SFMC,等浓度的GST蛋白和PBS作为阴性对照,流式细胞仪测定刺激前后2组培养细胞中T细胞CD69的表达率,以分析其对特异性T细胞的活化作用. 结果融合表达的目的产物经SDS-PAGE分析,相对分子质量(Mr)大小约为43×103,与预期相符.分离纯化的6聚rhCⅡ250-270经SDS-PAGE凝胶薄层扫描,纯度为89%,浓度为2.1mg/ml.FACS分析:经100μg/ml浓度的6×rhCⅡ250-270刺激3d后,RA(9例)患者PBMC和SFMC T细胞中CD69+细胞率分别为(18.05±4.34)%和(25.17±4.89)%,显著高于同型对照GST组水平[(1.02±0.48)%,(1.25±0.23)%,(P<0.01)],而与化学合成的CⅡ250-270组无统计学差异.进一步分析表明,同组患者滑液中CD69的表达显著高于外周血(P<0.01). 结论纯化的6聚rhCⅡ250-270多肽经初步验证具有活化RA患者特异性T细胞的特性.
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蕈样肉芽肿皮损和外周血T细胞受体-γ基因重排的研究
蕈样肉芽肿(MF)是一种低度恶性的皮肤T细胞淋巴瘤.应用PCR方法我们已经证明MF及可疑MF皮损中存在T细胞受体-γ基因重排(TCR-γ).但血液的T细胞单克隆性的存在与皮损的T细胞单克隆性存在的关系,及与预后的关系尚不十分清楚.
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汉族HLA-A等位基因与银屑病患者相关性研究
目的探讨HLA-A等位基因与汉族人银屑病遗传易感性. 方法利用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法,对200例银屑病患者和204例健康人的HLA-A等位基因进行检测. 结果 HLA-A*2601-05等位基因与汉族人银屑病呈正相关性(20.25% vs 12.25%,RR=1.65,χ2=11.76,P=0.0006,Pc=0.0066).HLA-A*0201-17等位基因与汉族人银屑病呈负相关(4.25% vs 9.80%,RR=0.43,χ2=10.26,P=0.0013,Pc=0.0143).HLA-A*2601-05等位基因仅与有家族史银屑病呈正相关(RR=2.04,χ2=12.49,P=0.0004,Pc=0.0044).HLA-A*2601-05等位基因与Ⅰ型银屑病呈正相关(RR=1.68,χ2=11.67,P=0.0006,Pc=0.0066). 结论 HLA-A*2601-05可能是银屑病的易感基因或与易感基因相连锁.HLA-A*2601-05仅为有家族史银屑病和Ⅰ型银屑病的危险基因.
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使用磁性细菌粒子分离浓缩和检测癌胚抗原
磁性细菌为厌氧性螺旋状菌,呈革兰阴性,多发现于海底的淤泥之中;磁性细菌有沿着磁力线朝N极或S极泳动的走磁性,细菌体内约有10~20颗粒径(50~100nm)的磁性细菌粒子呈串状排列其中.电子线回折等的分析表明磁性细菌粒子的主成份为磁性Fe3O4,磁性细菌在含有铁离子的培养液中,常温常压状态下可以大量繁殖,生成的磁性细菌粒子成本低廉[1,2].磁性细菌粒子表面全面覆盖着一层含有磷脂酰乙醇胺的脂质有机薄膜,与人工合成的磁石粒子相比磁性细菌粒子具有表面有机膜厚度均一且稳定牢固、有机膜表面抗体接种容易、形成的磁性抗体对外磁场的磁性应答强及在溶液中分散性良好等的特点[2,3].Tadashi Matsunaga等将多种食品生产相关的生物酶分别接种固定于磁石粒子表面,形成可用外磁场进行控制的磁性酶.20世纪70年代有报道菌体内含有磁石微粒子的磁性细菌,作为一种纳米新材料,日本的学者们对磁性细菌生成的磁性细菌粒子进行了大量的应用性基础研究,在多项工业化应用开发[2]及DNA[4]、胰岛素[5]、抗体[3,6]的高感度检测实验中获得成功.
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供体骨髓细胞输注促进小鼠皮肤移植耐受及其机理的研究
目的探索"细胞+环磷酰胺(cyclophosphamide, CP)"系统联合抗H-2b单克隆抗体、供体骨髓细胞输注诱导移植耐受的作用及其机制. 方法第0天,经尾静脉给C57BL/6(H-2b,B6)小鼠注入108 BALB/c(H-2d,B/c)来源的脾细胞,第2天,腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,第3、5天,分别经尾静脉注入抗H-2b单抗,剂量为400μg/0.5ml,第8天进行皮肤移植.皮肤移植后1周(第15天),输入2×107供体BALB/c来源的骨髓细胞.观察皮肤移植物存活时间,并于第30天对耐受B6小鼠作混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR),迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity, DTH)等确定耐受的状态.并通过过继转移实验、嵌合体检查及脾细胞中细胞因子mRNA的表达情况,进一步探讨耐受形成的机制. 结果采用此诱导方案,B6小鼠对BALB/c小鼠的皮肤移植物长期存活.耐受可以被过继转移;耐受小鼠胸腺内的嵌合程度与耐受的维持密切相关;TH1型细胞因子在耐受小鼠中明显降低,而TH2型细胞因子明显升高. 结论 "细胞+CP"系统联合H-2b单克隆抗体、供体骨髓细胞输注能够诱导异基因小鼠皮肤移植耐受.耐受机制与胸腺嵌合体的存在密切相关.克隆无能(anergy)、抑制细胞和TH1/TH2偏移在耐受中也起作用.
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修饰CⅡTA基因抑制异种器官移植中供体猪SLA的表达
目的构建可抑制猪MHC(SLA)Ⅱ类分子表达的MHCⅡ类分子反式激活因子(CⅡTA)突变体,抑制人CD4+ T细胞对猪细胞株的免疫应答,为异种器官的应用研究奠定基础. 方法用PCR、人工合成寡核苷酸、限制性内切酶等技术构建不含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA2、含起始密码子的pcDNA3mCⅡTA3突变体.用脂质体转染法将上述2种突变体及pcDNA3空载体转入猪细胞株PIEC细胞和L23细胞.用流式细胞术和RT-PCR法观察它们对PIEC/L23细胞SLA-DR/DQ分子的诱导性和组成性表达的影响.通过混合淋巴细胞反应观察人CD4+ T细胞对转入突变体及空载体后的猪细胞的免疫应答强度的变化. 结果在细胞和分子水平证实pcDNA3mCⅡTA3对PIEC/L23细胞SLA-DR/DQ的表达起明显抑制作用,而pcDNA3mCⅡTA2和pcDNA3空载体无此作用.SLAⅡ类分子受抑制的猪细胞已基本丧失了对人CD4+ T细胞的刺激能力. 结论转染能抑制SLAⅡ类分子表达的突变体使PIEC细胞丧失了对人CD4+ T细胞的刺激能力,为异种器官的修饰提供了新的思路.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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